文摘

PPAR -的消炎作用α在衰减高血压中扮演一个重要的角色。当前的研究确定了抗高血压和抗炎作用的PPAR -α受体激动剂在slow-pressor剂量的Angⅱ(400 ng /公斤/分钟)。男性PPAR - 10至12周大αKO小鼠及其WT控制植入遥测设备和充满Angⅱ12天。第二天12盎输液,地图上是PPAR -升高αKO小鼠相比WT ( 1 6 1 ± 4 毫米汞柱和 1 4 5 ± 4 毫米汞柱)和非诺贝特(145毫克/公斤/天)减少地图WT + Angⅱ小鼠( 1 3 4 ± 7 毫米汞柱)。血浆il - 6水平更高的PPAR -αAng II注入KO小鼠12天( 3 0 ± 4 与 8 ± 2 pg / mL)和非诺贝特减少血浆il - 6在Ang II-treated WT老鼠( 1 0 ± 3 pg / mL)。非诺贝特增加肾脏的表达CYP4A,恢复肾CYP2J表达,减少肾ICAM-1高程,MCP-1和cox - 2 WT + Angⅱ小鼠。我们的研究结果表明,激活PPAR -α变弱和II-induced高血压通过上调CYP4A CYP2J和炎症标记物,如血浆il - 6的衰减,肾MCP-1肾ICAM-1和cox - 2的表达。

1。介绍

过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARs)核激素受体,吸引了大量的注意力在炎症和血压调节(1- - - - - -3]。过氧物酶体proliferator-activatedα受体(PPAR -α)配体负调控白细胞介素- 6 (il - 6)启动子的激活4),和慢性非诺贝特治疗,PPAR -α受体激动剂,抑制IL-6-induced机制(5]。Devchand et al。6]表明,缺乏PPAR -α表达小鼠延长了炎症反应,这表明PPAR -α有消炎的作用[7,8]。先前的报道表明,PPAR -α配体、非诺贝特压制ICAM-1 [9]在小鼠的心脏组织和VCAM-1 [10]在内皮细胞表达。

除了PPAR -的抗炎作用α受体激动剂,最近的报告也表明,PPAR -α配体降低血压在不同的高血压模型(11- - - - - -13]。提出了几种机制来解释PPAR -的降压效果α受体激动剂如增加钠的排泄+通过减少钠+- k+腺苷三磷酸酶活性在近端小管144),增加细胞色素P450 (CYP4A)表达式15,增加肾小管20-HETE生产(12),这对利钠作用[11,16]。最近的一份报告表明,PPAR -从我们的实验室α受体激动剂非诺贝特降低平均动脉压和血浆il - 6在急性DOCA-salt高血压模型(17),这表明有一个相声PPAR -α和il - 6在调节血压。

血管紧张素ⅱ(Ang II)刺激促炎细胞因子,会使细胞色素P450 (CYP)派生的花生四烯酸(AA)的代谢产物,是肾血管张力的重要监管机构和管状函数(19]。血管紧张素ⅱ(Ang II)刺激的释放il - 6 (20.- - - - - -23),和以前的报告表明,Angⅱ高血压是减毒的il - 6基因敲除小鼠(24]。Angⅱ也上调许多促炎的基因,如细胞内粘连molecule-1 (ICAM-1)和单核细胞化学引诱物蛋白1 (MCP-1),通过几个胞内信号的激活机制,包括核因子-κβ(NF -κβ)[25]。Cyclooxgenase-2被认为是细胞因子诱导的环氧合酶(cox - 2) (26- - - - - -28NF -]κβ被证明能增加肾脏cox - 2 (29日],Angⅱ也已被证明能够刺激肾小球cox - 2蛋白表达(30.]。Angⅱ减少CYP4A表达与肾小管20-HETE, PPAR -而刺激α与非诺贝特会导致显著增加CYP4A和20-HETE生产期间和二世高血压(12]。除了管20-HETE的降压效果,epoxyeicosatrienoic酸(缺钱)是细胞色素的主要血管舒张药花生四烯酸代谢物P450年epoxygenase酶。主要特点是合成的epoxygenases CYP450家庭,包括2 c和2 j类(31日),非诺贝特也显示增加肾脏羟化酶酶以及epoxygenase蛋白表达(32]。减少CYP2J表达式与肠系膜动脉受损肾血管放松,也是报道的动物对待Angⅱ+高盐饮食(33,34]。当前研究的目的是确定是否PPAR -α激活期间缓慢加压的剂量的Angⅱ将减少促炎的机制涉及血浆il - 6、肾MCP-1肾ICAM-1和cox - 2的表达,同时刺激CYP4A和CYP2J减弱的表达增加血压。

2。方法

霍华德大学机构批准的程序涉及动物动物保健和使用委员会。血压发射器(数据科学、PA-C10圣保罗、锰、美国)植入年龄和体重匹配(10 - 12周,25 - 28克)男性PPAR -α击倒(−−)(B129S4 / SvJae - 1 / J)和野生型小鼠(+ / +)(B129S1 / SvImJ)从杰克逊实验室(美国我巴尔港)。动物使用异氟烷麻醉和生物遥测术发射机设备使用无菌技术植入。导管植入在左颈动脉通过一个切口在血管壁用不同形状27.5计针。发射机的身体上方的皮下隧道右肩,肩胛骨上方。切口渗透与1%利多卡因,老鼠被放置在温暖的笼子从手术中恢复过来。所有老鼠都是单独住在一个鞋盒笼和转移到光(12小时光/暗周期)和温度控制的房间在动物设施。食物和水都可以随意。7天的老鼠从手术中恢复过来之前基线平均动脉压(MAP)、心率和运动活动记录至少一个星期。使用异氟烷麻醉,渗透微型真空泵(美国CA Alzet Durect, Cupertino)被植入皮下注射12 - 14天交付车辆(生理盐水)或Angⅱ400 ng /公斤/分钟的速度。WT和PPAR -αKO小鼠也接受PPAR -α受体激动剂非诺贝特的剂量145毫克/公斤/天在玉米油,intragastrically (ig),三天前的植入和II渗透微型真空泵和整个Angⅱ高血压。四组老鼠用于记录地图,WT + Angⅱ( = 9 ),PPAR -αKO + Angⅱ( = 8 )、WT + Ang II +非诺贝特( = 9 ),PPAR -αKO + Ang II +非诺贝特( = 9 )。

2.1。分析方法

地图数据收集在500 Hz每分钟5秒,从下午3点到上午10点(即。19 h)。下午3点到6点期间和6点到10点在一起(7 h)分析了“天”地图,和下午6点到6点期间(12小时)是“夜晚”。

2.2。血浆il - 6浓度

在不同组的老鼠( = 8 每组),收集血液样本从WT, PPAR -αKO, WT + Ang II, PPAR -αKO + Angⅱ、WT + Ang II +非诺贝特,PPAR -αKO + Ang II +非诺贝特孤立等离子体。血浆il - 6浓度测定的酶免疫分析法(研发系统,明尼阿波利斯,美国)从终端股动脉血液样本获得12天的Angⅱ治疗。动物从所有组都包括在同一试验板控制interassay可变性。

2.3。免疫印迹

整个肾脏均质蛋白样品(50μg)被分开上述组( = 4 每组)钠十二烷基sulfate-polyacrylamide在10% Tris-glycine凝胶,凝胶电泳和蛋白质被electrophoretically PVDF膜。非特异性结合位点在一夜之间被孵化的屁股在4°C Tris-NaCl缓冲区(TBS)包含5%的脱脂奶粉和0.1%的渐变20。使用的主抗体是兔子CYP4A CYP2J (1: 2000;美国圣克鲁斯,CA)、cox - 2(1: 2000年,开曼群岛化工、MI、美国),和ICAM-1 (1: 1000 R & D, MN,美国)。这些墨迹被洗在tbs - 0.1%渐变和二次抗体孵育山羊anti-rabbit 1: 5000和山羊anti-mouse 1: 10000β肌动蛋白,结合辣根过氧化物酶1小时,洗净。检测是实现使用增强化学发光免疫印迹,和带强度测量densitometrically,是归一化的值β肌动蛋白。

2.4。肾MCP-1化验

肾单核细胞化学引诱物蛋白1 (MCP-1)也评估肾脏匀浆使用商业从R & D (MN),可用的工具和价值观被规范化毫克蛋白( = 5 )。

2.5。统计分析

平均动脉压数据意味着±标准错误。数据分析了双因素,重复测量方差分析。重要的F从方差分析测试 < 0 。 0 5 随后使用Newman-Keuls事后比较多个范围测试。单向方差分析是用来分析其他参数与Krusal-Wallis事后测试。意义被认为是在 < 0 。 0 5 。

3所示。结果

3.1。Angⅱ高血压

没有显著差异在基线血压PPAR -αWT KO小鼠。天,夜间平均为地图 1 1 3 ± 1 毫米汞柱, 1 3 1 ± 1 毫米汞柱,分别在PPAR -αWT老鼠和 1 1 1 ± 2 和 1 2 7 ± 1 毫米汞柱,分别在PPAR -αKO小鼠。在昼夜注入5到12盎II (400 ng /公斤/分钟),从基线PPAR -地图显著增加αWT ( 1 2 5 ± 2 毫米汞柱(天)和 1 4 4 ± 1 毫米汞柱(晚上))和PPAR -αKO小鼠( 1 4 0 ± 2 毫米汞柱(天)和 1 6 1 ± 2 毫米汞柱(晚上))。地图的增加在7 - 12日夜Angⅱ注入PPAR -高出很多α柯比PPAR -αWT(图1)。


图1
平均动脉压的PPAR -αKO小鼠(18)(•)和PPAR -αWT老鼠(9)(o)在控制天1-13和治疗和第二天1 - 12。地图是明显高于Ang II-treated PPAR -αKO和Ang II-treated WT老鼠(* < 0 。 0 5 )。

在一个单独的组WT KO小鼠,为期三天的预处理与非诺贝特(145毫克/公斤/天)就没有显著降低血压PPAR -αWT和PPAR -αKO小鼠(图2)。非诺贝特显著衰减地图Angⅱ7到12天期间高血压PPAR -αWT老鼠, 1 1 7 ± 6 毫米汞柱(天)和 1 3 2 ± 6 毫米汞柱(晚上)相比,PPAR -αWT + Angⅱ。平均PPAR -地图αKO小鼠在昼夜7到12非诺贝特+ Ang II治疗平均 1 4 0 ± 7 毫米汞柱(天)和 1 5 8 ± 7 毫米汞柱(晚上)(图2)。


图2
平均动脉压的PPAR -αKO小鼠(18)(•)和PPAR -αWT老鼠(91 - 7](o)在控制天,非诺贝特治疗1 - 3天,第二天1 - 12盎+非诺贝特治疗。地图在KO + Ang II +分明显高于与WT + Ang II +分(* < 0 。 0 5 )。

血浆il - 6水平测量控制,Ang II-treated, Ang II-treated +非诺贝特WT,和PPAR -αKO小鼠。在控制条件下,等离子体PPAR - il - 6水平相似αKO ( 7 ± 2 pg / mL)和PPAR -αWT ( 8 ± 2 pg / mL)老鼠。在12天的Angⅱ治疗,PPAR -血浆il - 6水平明显增加αKO ( 3 0 ± 4 pg / mL)和PPAR -αWT ( 1 8 ± 3 pg / mL)小鼠相比,控制条件;然而,这种增加是更高Ang II-treated PPAR -αKO和Ang II-treated WT老鼠。非诺贝特显著降低血浆il - 6在PPAR -αWT + Angⅱ小鼠( 1 0 ± 3 pg / mL)相比,PPAR -αWT + ANGⅱ,而非诺贝特治疗未能降低血浆il - 6水平PPAR -αKO +盎II-treated老鼠( 2 8 ± 4 pg / mL)(图3)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图3
血浆白细胞介素- 6的水平( = 8 每组)和肾MCP-1水平( = 5 每组)控制,Ang II-infused和Ang II-infused + fenofibrate-treated WT和PPAR -αKO小鼠。*表示显著增加WT与控制。λ表明显著增加和控制PPAR -αKO。__表明显著增加和Ang II-infused WT老鼠。≠显示明显降低与Ang II-infused WT或PPAR -αKO小鼠。

肾皮质MCP-1评估肾脏炎症的标志。没有差别的基底MCP-1 WT和PPAR -之间的水平αKO小鼠。注入Angⅱ水平显著增加肾MCP-1 WT和PPAR -αKO小鼠,非诺贝特治疗只减少肾MCP-1水平WT老鼠(图3)。

我们也评估肾脏炎症标志物的蛋白质表达整个肾脏匀浆WT和PPAR -αKO小鼠治疗和二世,有或没有非诺贝特。肾ICAM-1表达明显高于Ang II-treated WT老鼠相比,控制WT或PPAR -αKO小鼠。非诺贝特治疗明显减少肾的海拔ICAM-1表达只在Ang II-treated WT老鼠(图4)。肾cox - 2表达也显著升高和II-treated WT和PPAR -αKO小鼠和非诺贝特治疗显著降低肾cox - 2表达的海拔都Ang II-treated WT和PPAR -αKO小鼠(图4)。最后,我们确定肾表达CYP4A和CYP2J表明20-HETE和生产的特点,分别在所有组。我们的研究结果表明,非诺贝特治疗显著增加肾CYP4A表达Ang II-treated WT老鼠相比,所有其他组(图5)。肾CYP2J表达显著减少Ang II-treated WT老鼠相比WT控制和非诺贝特治疗恢复肾CYP2J表达Ang II-treated WT老鼠控制WT(图5)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图4
肾ICAM-1和cox - 2蛋白表达水平相对于β肌动蛋白在WT和PPAR肾脏炎症的标志αKO控制,Ang II-infused和Ang II-infused + fenofibrate-treated老鼠。*表示显著增加与WT老鼠和控制#表明显著增加和Ang II-infused WT老鼠( = 4 每组)。
(一)
(一)
(b)
(b)
图5
肾CYP4A CYP2J蛋白质表达水平相对于β肌动蛋白在WT和PPARαKO控制,Ang II-infused和Ang II-infused + fenofibrate-treated老鼠。*表示显著增加和控制WT老鼠( = 4 每组)。

4所示。讨论

本研究的主要发现:(1)PPAR -αKO小鼠有明显高于平均动脉压在7 - 12天的Angⅱ输液,(2)非诺贝特的地图在WT + PPAR - Angⅱ没有显著的影响αKO + Angⅱ小鼠,(3)PPAR -血浆il - 6水平明显增加αKO WT + Angⅱ小鼠相比,(4)非诺贝特显著降低血浆il - 6在WT + Angⅱ小鼠,(5)肾脏的表达CYP4A在WT + Ang II +非诺贝特显著增加小鼠,而MCP-1 ICAM-1,和cox - 2表达水平升高在WT + Angⅱ小鼠,(6)非诺贝特治疗显著降低肾MCP-1 ICAM-1, cox - 2表达和II-treated WT老鼠。

先前的研究表明,激活PPAR -α导致血压降低高血压的不同模型。非诺贝特已经证明,以防止老鼠和II-dependent高血压的发展(12]。非诺贝特的降压效果与肾CYP4A表达显著增加,Ang II-treated老鼠(12]。研究表明upregulation 20-HETE的肾小管可能导致血压的影响和非诺贝特治疗II-dependent高血压(12]。PPAR -安妥明α受体激动剂,政府还降低血压和诱导肾小管20-HETE生产减少钠潴留在去氧皮质酮(DOCA) -salt-hypertensive老鼠11]。PPAR -α兴奋剂WY14643和安妥明增加一氧化氮的生成和促进肾排泄的Na+通过减少钠+- k+腺苷三磷酸酶活性在近端小管14,35]。在目前的研究中,我们没有观察到肾减少CYP4A表达式仅在老鼠Angⅱ处理。CYP4A表达式结果可能差别可能涉及slow-pressor剂量的Angⅱ(400 ng /公斤/分钟)用于本研究和更高剂量的Angⅱ(60 ng /分钟)中使用的一项研究[19]。然而,在当前的研究中,非诺贝特并导致肾CYP4A表达显著增加和减毒地图在WT + Angⅱ老鼠。

PPAR -的抗炎作用α激活已被证明在先前的研究36,37]。Diep等人证明了非诺贝特造成显著降低心脏组织炎性标志物包括NFκB和ICAM-1 [9]。除了前面的研究中,PPAR -α活化剂,二十二碳六烯酸(DHA),废除高血压的发展,减少ICAM-1, VCAM-1,修正结构异常,并改善了内皮功能障碍引起的Angⅱ(9,18]。目前的研究表明PPAR -抗炎机制α激活还包括肾MCP-1减少,肾脏的表达ICAM-1, cox - 2,和血浆il - 6在Angⅱ高血压。减少肾PPAR - cox - 2的表达αKO + Ang II + fenofibrate-treated老鼠可能涉及与NF相关的炎症反应的抑制κB通路,似乎是独立于PPAR -α。减少cox - 2在PPAR -肾表达式αKO + Ang II +非诺贝特治疗小鼠并没有导致减少地图在Angⅱ高血压。未来的研究需要确定PPAR -α受体激动剂介导减少肾cox - 2表达对于降低血压和肾脏损害是很重要的。

目前的研究表明,PPAR -α是必要的对血浆il - 6的衰减,抗炎性质降低血压在盎II-induced高血压(24]。结果还表明,增加血浆il - 6与显著增加血压和II-treated PPAR -αKO小鼠。没有显著变化观察血浆il - 6的PPAR -αKO和WT在控制条件(图3)。目前的研究表明,激活PPAR -α降低平均动脉压在慢性Ang II-hypertension通过抗炎过程,涉及血浆il - 6的显著减少。

总之,这项研究表明PPAR -的激活α对降低血压很重要在慢性Angⅱ高血压。我们的研究结果表明,缺乏PPAR -α加剧了高程地图,血浆il - 6水平和肾MCP-1 cox - 2在Ang II-infused老鼠。我们证明PPAR -的降血压作用α受体激动剂在Angⅱ高血压涉及抗炎机制和细胞色素P450 upregulation代谢物影响肾血管张力和管式功能。未来的研究需要确定的相对贡献PPAR -抗炎和直接肾行动α激活降低血压。

确认

这项工作是由美国国立卫生研究院的支持(5 k01hl092593-04) d·l·李。