Alanylglutamine缓解哮喘症状通过调节肠道微生物群和派生的代谢物在老鼠身上

文摘

客观的。过敏性哮喘是一种慢性炎性疾病,严重影响患者的生活质量,尤其是孩子。Alanylglutamine营养补充与潜在的保护和抗炎作用,但其功能在过敏性哮喘仍然遥遥无期。在这项研究中,我们关注的角色和功能机制的调查Alanylglutamine的哮喘。方法。卵清蛋白(OVA)诱导建立小鼠哮喘模型。利用16 s rDNA测序进行比较肠道微生物的多样性在不同治疗方法。气相色谱法是利用屏幕肠道microbe-short-chain脂肪酸在凳子上。肺组织提取确定信号通路,包括AMPK, NF -κB mTOR STAT3 IKKβTGF -β,il - 1β通过免疫印迹或RT-qPCR。结果。是观察Alanylglutamine减少OVA-induced过敏性哮喘小鼠的细胞因子。)染色显示明显的肺炎症状哮喘组,而Alanylglutamine缓解炎症浸润。Alanylglutamine逆转OVA-induced过敏性哮喘小鼠肠道微生物群组成和增强丁酸水平。Alanylglutamine的保护作用可能与肠道有关microbiota-butyric acid-GPR43通路在哮喘小鼠。卵巢组相比,Alanylglutamine P-AMPK /蛋白表达的AMPK激活和抑制蛋白质表达P-mTOR / mTOR P-P65 / P65 P-STAT3 / STAT3 P-IKKβ/ IKKβTGF -β,il - 1β从丁酸,类似的效果。结论。结果表明,Alanylglutamine可能有利于哮喘,及其对微生物群的效果是通过监管和派生的代谢物。治疗效果可能与AMPK, NF -κB、mTOR和STAT3信号通路。这些发现将有助于确定有效的治疗方向缓解过敏性肺部和呼吸道的炎症。

1。介绍

也称为支气管哮喘,哮喘是一种呼吸道疾病,病因复杂,涉及许多不同的细胞和分子机制在肺部和航空公司1]。它是一种慢性炎性疾病,严重影响患者的生活质量,尤其是儿童(2]。根据最新的科学统计,全世界有超过3亿人罹患哮喘(3,4]。哮喘的总发生率为5岁以下儿童每年23/1,000,和4.4/1000从12岁至17岁的青少年3,5]。糖皮质激素抑制哮喘气道炎症,目前可用于哮喘治疗(6]。虽然是有效缓解急性症状,其不良反应,如毒性,导致越来越多的担忧,在长时间的治疗。除此之外,有越来越多的患者被认为是corticosteroid-resistant [7]。因此,迫切需要开发有效的和安全的药物来缓解哮喘症状。

Alanylglutamine营养补充谷酰胺和丙氨酸的氨基酸组成。这是一个稳定的水溶性二肽与潜在的保护和吸收促进活动。根据先前的研究,Alanylglutamine扮演着一个重要的角色在肺组织的炎性损伤。例如,Alanylglutamine可以改善急性肺损伤诱导内毒素(LPS)通过调节Th17 / Treg [8]。它还与LPS-induced炎症和缓解肠道上皮细胞屏障功能损害(9]。这是证实口服的自由氨基酸(丙氨酰谷氨酰胺)和二肽形式(Alanylglutamine)可以显著减轻LPS-induced炎症10]。过敏性哮喘是一种炎症性疾病,我们感兴趣的是Alanylglutamine能否发挥保护作用的哮喘症状。

近年来,累积的证据表明,肠道功能与肺粘膜免疫器官密切相关。Intestinal-pulmonary轴调节呼吸系统疾病中起着重要的作用。肠道微生物可能会影响肺部和呼吸道疾病,如肺部感染、哮喘和慢性阻塞性肺疾病(11]。有研究报道,植物移植到肠道可能会改变肠道微生态学,从而影响治疗效果的免疫和代谢功能(12]。在初步实验中,我们将Alanylglutamine在普通老鼠的植物移植到无菌小鼠和建立了卵清蛋白(OVA)模型,观察表型。结果发现,通过肠道菌群Alanylglutamine缓解哮喘症状。进一步的研究是必要的来识别他们的内在联系关于合并哮喘的治疗效果。

在这项研究中,我们打算验证关系Alanylglutamine二肽,肠道微生物群,派生的代谢物在卵巢哮喘模型。我们将检查肺部和气道过敏性炎症的不同治疗下Alanylglutamine从改善肠道微生物的角度。此外,我们将调查相关分子的表达,并讨论的可能性提高哮喘与相关药物的治疗。

2。材料和方法

2.1。动物和哮喘模型

本研究的实验动物使用后保持协议机构批准的动物保健和使用委员会第二湘雅医院。成年雄性BALB / c小鼠的8周大,重约20克,都从Well-bio购买(长沙,中国),分为三组:对照组,卵巢模型,Alanylglutamine治疗+卵子模型(Alanylglutamine) ( )。所有老鼠都放置在特定的病原体条件和维持在12 h光暗周期,与饮食的自由。在卵巢模型组,20μg卵子(美国Sigma-Aldrich)注入进行天1和8。根据先前的研究13,14],气溶胶(1%卵子在PBS)刺激了20分钟24天,25天,天26使用超声波喷雾器(欧姆龙,弗农)诱发过敏性哮喘小鼠模型。老鼠在Alanylglutamine组卵Alanylglutamine饮食含有0.15%。样本收集后48小时后,最后的治疗。

2.2。抗生素治疗

30只成年雄性BALB / c小鼠饮用水中使用抗生素治疗两周。抗生素含有1毫克/毫升硫酸链霉素、庆大霉素1毫克/毫升,1毫克/毫升青霉素,0.5毫克/毫升万古霉素。然后,水取代和老鼠进一步分为三组:对照组,卵巢模型,Alanylglutamine治疗+卵子模型(Alanylglutamine) ( )。卵子诱导和Alanylglutamine补充与上述相同的治疗。

2.3。丁酸钠(NaB)治疗

40岁成年雄性BALB / c小鼠分为4组:卵巢模型,卵子+ NaB,卵子+抗生素,卵子+抗生素+ NaB ( )。卵子诱导和抗生素治疗与上述相同的治疗。NaB摄入通过填喂法,剂量为200毫克/公斤/天。

2.4。白细胞计数在支气管肺泡灌洗液(BALF)

从小鼠肺部分离后,他们牺牲了戊巴比妥钠腹腔注射(150毫克/公斤),0.9毫升冷PBS 2毫米EDTA和2%胎牛血清的边后卫被灌输到他们。然后,球收集流体通过一个过程根据前面的研究(15]。BALF收购后灌洗和离心机在2000 g在4°C 5分钟。沉积物中resuspended 50μL PBS,使用血细胞计数器计算细胞的数量。收集到的BALF离心机在800 g,其上层清液用于分析细胞因子水平。

2.5。ELISA测定细胞因子

浓度的白细胞总数,干扰素-γ,il - 1β、il - 6、TNF -α,TGF -β1 BALF中衡量鼠cytokine-specific Quantikine ELISA试剂盒(eBioscience),按照制造商的说明。

2.6。免疫印迹

组织溶解产物在radioimmunoprecipitation试验(里帕)缓冲区包含25毫米Tris-HCl (pH值7.2),0.15 M氯化钠,0.1% SDS,特里同x - 100 1%, 1%钠脱氧胆酸盐,1毫米EDTA。测定蛋白质浓度由bicinchoninic酸测定工具包(皮尔斯)。在受到十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白质被转移到一家硝化纤维膜。总蛋白质或磷酸化检测使用一只山羊兔多克隆抗体阻断后或鼠标。蛋白质的乐队是量化使用数字成像系统(UVtec)。

2.7。RT-qPCR

试剂盒®试剂(英杰公司生命技术;热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)被用来提取总RNA。随后,一个PrimeScript™RT试剂盒(热费希尔科学)是利用反转录。我们进行了实时RNA量化ABI StepOne +检测系统(应用生物系统公司)使用电力SYBR绿色PCR反应混合液(应用生物系统公司)。设计在实验室和合成的引物序列由Sangon生物技术有限公司(上海,中国)。引物设计如下:AMPK, 5 - - - - - -CGGGGTCATTCTCTATGCTT-3 ,和反向,5 - - - - - -TTTAAACCACTCGTGTTCCCT-3 ;mTOR向前,5 - - - - - -ACCAACTATACCCGCTCCC-3 ,和反向,5 - - - - - -TAGTTGCCATCCAGACCCGTA-3 ;P65向前,5 - - - - - -TAGCCAGCGAATCCAGACCAACA-3 ,和反向,5 - - - - - -TGGGTCCCGCACTGTCACCT-3 ;STAT3向前,5 - - - - - -CAATACCATTGACCTGCCGAT-3 ,和反向,5 - - - - - -GAGCGACTCAAACTGCCCT-3 ;和β肌动蛋白,5 - - - - - -ACATCCGTAAAGACCTCTATGCC-3 ,和反向,5 - - - - - -TACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3 。

2.8。16 s rDNA测序

凳子上的细菌16 s rDNA基因进行了分析通过TIANamp粪便DNA提取工具(TIANGEN生物技术、中国)与核糖核酸酶(试剂盒,德国)。我们测量DNA的纯度和浓度通过NanoDrop 1000(热费希尔科学)。使用的引物序列如下:341 f底漆:5 - - - - - -CCTAYGGGRBGCASCAG-3 ,806 r底漆:5 - - - - - -GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3 。然后,我们构造了一个扩增子测序图书馆和执行排序使用Illumina公司HiSeq 2500 (Illumina公司、圣地亚哥、钙、美国)。数据过滤、检测和分离的二元序列实现了定量见解微生物生态学(QIIME)管道(2019.07)和UCHIME算法,分别。序列相似性大于97%被定义为相同的操作分类单位通过UPARSE (OTU)。Mothur和半导体存储器数据集的席尔瓦rRNA数据库申请物种注释信心阈值为0.8。测序数据的分析在α和β多样性满足了QIIME和r基因和基因组的京都百科全书(KEGG)基因函数谱数据,整个植物的代谢功能转换和计算,提出了为分化KEGG途径分析。

2.9。短链脂肪酸(SCFAs)测定在凳子上

SCFAs老鼠的粪便样本,包括乙酸、丙酸、丁酸、及其异构体异丁酸,使用气相色谱仪检测质量Spectrometer-QP2010 (gc - ms)(日本岛津公司、东京、日本)。每个粪便样本均质与50毫克/毫升甲醇通过涡10秒和治疗超声10分钟。接下来,在室温下混合样品在每组离心5分钟每分钟14000转。上层清液是用甲醇稀释10倍。注射后,1μL样品蒸发在230°C。分离的化合物通过安捷伦J&W熔融石英毛细管柱DB-FFAP(美国安捷伦,圣克拉拉,CA)。被电子轰击电离后在-70年电动汽车在200°C,通过四极质谱仪的样品进行了分析。每个SCFA被确认使用GCMSsolution软件(日本岛津公司、日本)。SCFAs是量化的浓度的峰值区域总离子电流。

2.10。免疫荧光分析

确定的表达GPR43嗜酸性粒细胞肺组织,我们对幻灯片进行免疫荧光染色石蜡包埋的肺部组织。幻灯片是孵化主要GPR43一夜之间抗体。随后,幻灯片被Alexa萤石培养488年和594年Alexa萤石二级抗体(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA) 1小时。然后,幻灯片被Vectashield安装与DAPI(向量实验室、美国)。LSM 510共焦显微镜(德国蔡司)是用于细胞摄影和计数。

2.11。他走时染色的肺

4%多聚甲醛固定后石蜡和嵌入式,4μ米小鼠肺组织的部分与苏木精和伊红染色(圆))(中国Beyotime)标准组织病理学检查。每一个光学显微镜下观察病理切片。代表图像病理分析被用来评估小鼠气道炎症细胞的浸润和血管周的肺泡细胞。

2.12。统计分析

实验的数据表示为 (SD)。统计学意义从不同组的老鼠被单向方差分析计算(> 2组)。值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。Alanylglutamine减少细胞因子产品和缓解炎症浸润OVA-Induced过敏性哮喘小鼠

在过敏性哮喘模型中,BALF的白细胞计数显著降低(图1(一)),而Alanylglutamine治疗逆转BALF白细胞浓度。它表明在OVA-induced Alanylglutamine过敏性哮喘小鼠的保护作用。炎症是广泛与哮喘症状有关,我们测量BALF的炎症指标,包括il - 1β(图1 (b)),il - 6(图1 (c))、肿瘤坏死因子-α(图1 (d)),TGF -β(图1 (e))和干扰素-γ(图1 (f))。OVA-treated老鼠,一个重要的炎症反应观察了il - 1增加β、il - 6、TNF -αTGF -β和干扰素-γ浓度( )。Alanylglutamine显示抗炎效果显著降低il - 1β、il - 6和TGF -β在BALF水平。与此同时,他走时染色显示明显的卵巢组肺炎症状,而Alanylglutamine缓解炎性浸润(图1 (g))。

3.2。Alanylglutamine逆转OVA-Induced过敏性哮喘小鼠肠道微生物群组成

粪便微生物群多样性和成分被16 s rDNA测序进一步测试。探讨微生物群α香农多样性,辣子鸡和辛普森,曹国伟,PD指标进行了分析。结果表明,卵治疗显著降低了细菌α多样性,减少水平的观察辣子鸡,香农指数和PD, Alanylglutamine治疗逆转观察辣子鸡和香农指数。同时,Chao1指数增加Alanylglutamine组与控制和卵巢组织数据2(一个)- - - - - -2 (e))。大便失调在OVA-induced过敏性哮喘小鼠,逆转Alanylglutamine组。

微生物群在门进一步分析(图2 (f))。它显示的主要类群是拟杆菌门和厚壁菌门,占95%。我们发现三个类群在这项研究中(数据发生了很大的变化2 (g)- - - - - -2(我))。虽然卵子治疗未能影响拟杆菌门和厚壁菌门丰富,Alanylglutamine明显减少拟杆菌门和厚壁菌门丰度增加,而卵巢组( )。同时,Tenericutes的相对丰度在OVA-challenged显著增强小鼠,由饮食Alanylglutamine逆转( )。微生物群在属级(前20名)也进行了分析。11属明显改变以应对卵巢或Alanylglutamine治疗(补充图1)。Odoribacter棒状杆菌,葡萄球菌,Turicibacter明显增强,Parabacteroides链球菌,Coprococcus,拟杆菌门,Allobaculum,和Sutterella减少OVA-challenged老鼠,与控制老鼠( )。然而,棒状杆菌的相对丰度、Parabacteroides Odoribacter, Coprococcus,拟杆菌门,Allobaculum显著逆转Alanylglutamine-fed老鼠( )。它表明Alanylglutamine可能改善哮喘通过调节Tenericutes,棒状杆菌,Parabacteroides等等。

PICRUSt被用来分析微生物群落的功能分析,包括氨基酸代谢、碳水化合物代谢、细胞活性、细胞过程和信号,能量代谢,酶家族,折叠,排序和退化,基因信息处理、多糖生物合成和代谢,脂质代谢、膜运输、代谢,代谢的代数余子式和维生素、核苷酸代谢,较差的特点,复制和修复、转录和翻译。

基于函数的预测和分析结果KEGG数据库路径,注释的基因通路数据库的总数量在所有样本统计,和一个条形图了。如图3(一)KEGG通路的基因数量分布级别1或2的直观地显示出来。横坐标显示信号通路的基因数量丰富的三组样品。纵坐标显示显著富集的信号通路。数据显示3(b) -3(f),卵子治疗显著降低细胞运动性,基因信息处理、核苷酸代谢,复制和修复( ),虽然Alanylglutamine显著增加细胞活性( )。与此同时,它也显示,Alanylglutamine增强折叠,排序和退化。

3.3。Alanylglutamine对细菌代谢物的影响在凳子OVA-Induced过敏性哮喘小鼠

细菌代谢产物如醋酸(图4(一)),丙酸(图4 (b)),丁酸(图4 (c)),异丁酸(图4 (d)),戊酸(图4 (e)),异戊酸(图4 (f)在凳子上进行了进一步的分析。卵子治疗显著降低粪便丁酸,异丁酸、戊酸浓度( )。然而,饮食补充Alanylglutamine增强丁酸水平( ),表明丁酸可能涉及在缓解在OVA-induced Alanylglutamine过敏性哮喘小鼠的作用。

3.4。Alanylglutamine治疗未能缓解OVA-Induced Antibiotic-Challenged小鼠过敏性哮喘

进一步调查协会与肠道微生物群Alanylglutamine哮喘,抗生素是用来消除微生物群。同样,BALF的白细胞显著降低(图5(一个))。il - 1的浓度β、il - 6、TNF -α,TGF -β在卵子和antibiotic-cotreated升高小鼠(数据吗5 (b)- - - - - -5 (f))。然而,Alanylglutamine未能影响白细胞,il - 1β、il - 6和TNF -α水平BALF,但缓解TGF -β浓度antibiotic-challenged老鼠。)染色还显示没有明显的缓解效应在Alanylglutamine炎性浸润和抗生素cotreatment(图5 (g))。总之,这些结果表明肠道微生物群可能涉及的角色Alanylglutamine OVA-induced过敏性哮喘。

SCFA大便中内容分析进行进一步调查Alanylglutamine治疗哮喘小鼠的影响用抗生素(数字6(一)- - - - - -6 (f))。丁酸和异戊酸的水平在哮喘小鼠显著下调(数字6 (c)和6 (f))。验证,丁酸可能有重要影响Alanylglutamine或肠道微生物的调控过程。因此,在接下来的实验中,丁酸直接添加到老鼠来检查它的确切功能机制。

3.5。丁酸OVA-Induced过敏性哮喘小鼠的影响

微生物及代谢产物分析表明,肠道微生物群和丁酸可能涉及的角色Alanylglutamine OVA-induced过敏性哮喘的老鼠。因此,NaB进一步管理识别的潜在机制。一个OVA-induced诱发过敏性哮喘模型有或没有抗生素。BALF细胞因子和白细胞进一步测试(数字7(一)- - - - - -7 (f))。结果表明,NaB治疗显著增强BALF白细胞的内容。卵巢+抗生素+ NaB组织还增强BALF白细胞的内容。它减少了il - 1β、il - 6、TNF -α,TGF -β水平OVA-induced过敏性哮喘不需抗生素和antibiotic-treated老鼠明显,表明OVA-induced过敏性哮喘模型中的抗炎作用。与模型组相比,NaB治疗显示减少的H&E-stained部分肺组织炎性浸润(图7 (g)),支持丁酸对白细胞计数的影响。上述结果表明,NaB和抗生素有一定的抗炎作用。NaB的抗炎治疗是比这更有效的抗生素,和他们的组合最有效的治疗方法。

考虑到GPR43担任丁酸的特定受体,肺组织收集分析GPR43表达式使用免疫荧光(图8)。哮喘模型(卵子),GPR43表达降低与对照组相比,虽然卵子+ Alanylglutamine和卵子的治疗+ NaB显著增强GPR43的表达(图8)。免疫荧光染色结果进一步证实了Alanylglutamine在哮喘小鼠的保护作用,这可能与肠道有关microbiota-butyric acid-GPR43途径。

3.6。Alanylglutamine抑制NF -κB通路和STAT3通路

澄清在OVA-induced Alanylglutamine过敏性哮喘的分子机制,我们进一步收集肺样本控制,卵子,Alanylglutamine-treated哮喘鼠标(卵+ Alanylglutamine)和NaB治疗组(卵+ NaB)。我们分析了蛋白质和mRNA的表达几个相对信号通路通过免疫印迹(数字9(一个)和9 (b))和RT-qPCR(图9 (c))。结果表明:Alanylglutamine和丁酸可能影响AMPK, NF -κB、mTOR和STAT3信号通路。卵巢组相比,Alanylglutamine P-AMPK / AMPK活性蛋白质表达式。它抑制了蛋白质表达P-mTOR / mTOR P-P65 / P65和P-STAT3 / STAT3丁酸(图类似的效果9(一个))。异常激活NF -κB通常IKK密切相关β磷酸化。因此,NF -的上游和下游通路蛋白κB被免疫印迹检测。与卵巢组相比,Alanylglutamine抑制P-IKK的蛋白表达β/ IKKβTGF -β,il - 1β(图9 (b))。RT-qPCR结果表明Alanylglutamine未能影响AMPK的mRNA表达,mTOR P65, STAT3(图9 (c))。总之,结果表明,Alanylglutamine激活AMPK途径和灭活mTOR P65, STAT3通路。

4所示。讨论

殖民的肠道微生物群目前公认为潜在的宿主免疫反应介质在不同的疾病。微生物群的重构导致不同的影响在肺部炎症。例如,它是证实肠道微生物群的明显改变。对过敏性哮喘的TH2模型也略有增加,围产期暴露于万古霉素,但不是链霉素16]。免疫调节的重要性共生的微生物群的呼吸道粘膜通过inflammasome激活也透露。Alanylglutamine据报道,减少肌肉萎缩的丙氨酸和谷氨酰胺在术后麻醉狗17]。在氧化强调Caco-2细胞,二肽可以持有PepT1-mediated运输(18]。肠道微生物群和免疫之间的关系的基础上,我们分析了角色的二肽Alanylglutamine OVA-induced哮喘与过敏性肺部炎症。政府Alanylglutamine喂养不同路线的肠外和肠内导致增强血浆谷氨酰胺的反应相对于基线(19]。在此,我们发现Alanylglutamine改变肠道微生物群的吸收,尤其是在OVA-induced哮喘模型。

益生菌用于修改肠道菌群,这有利于改善非酒精性脂肪肝病(NAFLD) ob / ob老鼠[20.]。非酒精性脂肪肝的特点是肠道细菌过度生长。因此,我们假定Alanylglutamine-mediated益生菌的变化通过肠道菌群可能改善炎症状态修改。确实改变肠道微生物群的短链脂肪酸的水平增加了高纤维饲料表现出有益的角色在食物过敏增加Treg分化(21]。SCFA是来自细菌发酵微生物代谢物作为肠道健康的迹象,这也被认为是调节慢性炎症疾病。SCFA-producing细菌是微生物群之间的联系功能和炎症的表观遗传调控机制(22]。SCFAs,如乙酸、丙酸和丁酸,膳食纤维发酵时产生的肠道微生物群。至于丁酸,据报道,丁酸钠能够诱导细胞凋亡在肿瘤细胞系23]。最近的研究公布,丁酸钠和其他短链脂肪酸可以防止结肠炎症疾病。丁酸在脑源性小胶质细胞在中枢神经系统抗炎。然而,它显示了proinflammation小胶质细胞系,这可能与丁酸的抗癌特性观察到肿瘤细胞(24]。在这项研究中,我们还发现Alanylglutamine介导SCFA在重构的肠道微生物群和防止哮喘等气道过敏。

在呼吸道,有协同抗肿瘤活性对肺癌细胞与洛伐他汀联合治疗和丁酸体外(25]。LPS-induced急性肺损伤也改善了丁酸钠与减少释放HMGB1 [26- - - - - -28]。在这项研究中,我们发现丁酸显示保护对哮喘的影响。化学物质的干预后,信号通路包括AMPK, mTOR, P65, STAT3也受到了影响。这是发现Alanylglutamine几乎相同的对哮喘的影响,而丁酸。AMPK的磷酸化调节明显,NF -κB, STAT3和Akt / mTOR信号Alanylglutamine治疗后显著下调。Alanylglutamine也抑制了IKK的磷酸化β的蛋白表达TGF -β和il - 1β。AMPK的分子信号通路的影响,mTOR, P65,和STAT3也与之前的研究一致,其中Plumbagin保护肝脏免受暴发性肝衰竭和慢性肝纤维化LX-2细胞(29日]。

虽然我们在几个信号通路进行分析,准确的分子途径参与各种疾病的发病机理和治疗非常复杂的和复杂的。在先前的研究中,科学家证明了饮食补充与黄芩苷可以减轻氧化应激和加强营养吸收deoxynivalenol-challenged猪。黄芩苷的影响可能与抑制NF -κB和mTOR通路的激活,这不同于我们的结果(30.- - - - - -33]。另一项研究表明,黄芩苷对动脉粥样硬化抗炎和抗氧化压力的影响可能与抑制NF -κB和p38 MAPK信号通路(33]。考虑到复杂的信号通路参与了从Alanylglutamine功能程序,我们计划进一步研究治疗哮喘的相关分子机制在未来的研究。

它建立了肠道菌群密切涉及发展的哮喘(34),通常伴有炎症反应。在哮喘患儿外周血,肠道菌群失调和肠胃不适症状的可能性增加,与海拔TNF -等炎症因子的水平α和il - 6 (35]。在先前的研究中,斯蒂芬妮等人表明TNF -α、IL-33 IL-13有着至关重要的作用在肥胖小鼠治疗哮喘,肠道微生物组的改变与控制老鼠(36]。在这项研究中,我们发现Alanylglutamine可以改变肠道菌群的变化和炎症因子,诱导了爱。由于资金和时间的限制,我们没有提供直接的分子证据肠道微生物群与症状之间的相关性。在未来的工作中,我们将在这方面进行深入分析,希望进一步加强哮喘与相关药物的治疗效果。

5。结论

我们建立的关系Alanylglutamine二肽、SCFA和抗生素在哮喘模型通过一系列的实验验证。我们的结果与Alanylglutamine可能有利于哮喘,及其对微生物群的效果是通过监管和丁酸的派生的代谢物。此外,治疗效果可能涉及调控AMPK, NF -κB、mTOR和STAT3信号通路。这些发现将有助于确定有效的治疗方向缓解过敏性肺部和呼吸道的炎症。

数据可用性

作者确认所有数据的结果是可用的。所有相关数据在纸或其补充材料。

伦理批准

在这项研究中使用的所有实验动物被维护在一个协议机构批准的动物保健和使用委员会第二湘雅医院。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

作者的贡献

SL进行实验和分析数据;LM, YY, XJ, WS, JD,求出BW, BX,生理,和PC数据收集和分析处理和编辑手稿;和XX监督整个研究,数据分析,和手稿准备。

确认

这项工作是支持的一般项目中国湖南省自然科学基金(2019 jj40453)。

补充材料

补充图1:微生物群在属级(前20名)进行了分析,包括棒状杆菌、Adlercreutzia,拟杆菌,Parabacteroides,普氏菌,Odoribacter,普氏菌,Sporosarcina,葡萄球菌、乳杆菌属、链球菌,Turicibacter, Dehalobacterium, Coprococcus, Dorea,瘤胃球菌属,Oscillospira Butyricimonas Allobaculum, Sutterella。11属明显改变以应对卵巢或Alanylglutamine治疗。 ; ;ns:不重要。(补充材料)

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