文摘
多酚类物质可以作为氧化剂在某些情况下,诱导redox-sensitive基因。我们研究了预曝光橄榄油多酚提取的影响(PFE)在肝氧化时间变化状态模型肝regeneration-a过程中氧化应激与代谢相关过载占早期爆发事件,导致肝脏自我修复。肝再生诱导的小鼠肝切除术三分之一。肝切除术前,小鼠腹腔给予要么pfizer(50毫克/公斤体重)或连续七天盐水,而各自控制仅接受车辆。蛋白质氧化还原state-regulating酶和硫醇Nrf2基因的mRNA水平和它的目标-glutamylcysteine合成酶和血红素oxygenase-1测定肝部分切除术后不同时间间隔。肝脏质量恢复计算评估肝再生。结果数据证明的有效性预曝光PFE在刺激肝脏再生模型中一个小组织的损失可能归因于氧化剂的瞬态增加负载在肝切除术后的第一个小时和诱导的应激反应相关基因的控制下Nrf2。
1。介绍
肝脏具有内生机制的自我修复,恢复器官损伤或手术切除后的功能。这种修复过程,称为肝再生,主要是分为两个不同阶段。第一阶段是启动阶段,在此期间,静止的肝细胞致敏细胞因子和激素和营养信号获取细胞周期的能力。第二阶段是增殖阶段,在此期间,细胞连续交通G1,年代,G2和M阶段,分裂,直到恢复原来的肝质量(1,2]。
肝切除仍然是一个常见的做法在肝细胞癌患者的管理3]。然而,肝再生不足仍然是发病率和死亡率的一个重要原因(4]。因此,兴趣高刺激的可能性这肝内源性的自我修复机制,可提高患者生存率和恢复遭受各种病因的肝脏损伤。部分肝切除术在啮齿动物中是常用的肝再生模型使得定量研究各种物质对肝脏修复的影响(5]。虽然膳食维生素和植物化合物,影响氧化还原蛋白质state-regulating酶和硫醇是一个成功的细胞周期进程和正常生长所必需的控制(6- - - - - -8),建立了冲突对肝脏再生的影响,包括两个受损(9,10)和钢筋再生反应(11]。最近,不同的植物多酚类,包括那些固有的橄榄油,可以调节repair-related过程在几个伤口愈合模型(12- - - - - -15]。此外,最近的事态发展在肿瘤手术建议使用腹腔内化疗治疗人类癌症的(16,17]。此外,腹腔内政府一直以前用于动物模型(18,19]和槲皮素腹腔内接种总槲皮素水平增加肿瘤组织比口服槲皮素(20.]。考虑到橄榄油的报道影响饲养和管理填喂法在抗氧化防御系统和肝再生之前描述(21,22),我们旨在探讨腹腔内管理的多酚提取的影响肝切除术前橄榄油。橄榄油的基础乳剂明显改善肝切除术后肝再生,减少氧化损伤。虽然强调,这种效果是由于抗氧化剂的影响存在于橄榄油、多酚类物质的贡献内源性抗氧化保护系统和愈合过程还有待确定。
茶多酚的功效在伤口愈合可能归因于他们的所谓的抗氧化性能,这是假定在清除的能力不同生理有关激进的物种和螯合过渡金属离子参与的生成活性氧(ROS) (23- - - - - -25]。然而,编译的证据表明保护作用的膳食抗氧化剂活性氧诱导损伤直接抗氧化活性并不相关,而是由于他们的交互与信号转导网络的特定方面的最终结果内源性抗氧化防御系统的调制26- - - - - -29日]。
Redox-sensitive转录因子核factor-erythroid两个相关因子(Nrf2)是基因的协调表达的核心编码抗氧化和解毒酶,异型生物质转运蛋白,和许多其他蛋白参与细胞周期的调控和细胞死亡30.- - - - - -32]。Nrf2-deficient小鼠研究显示减少肝部分切除术后ROS-detoxifying酶的表达,导致细胞内氧化应激,提高肝细胞凋亡,延缓肝切除术后肝再生(33]。在人类肺癌细胞系,Nrf2生长抑制特性的缺陷已被归因于诱导细胞周期阻滞在G1期34),在初级上皮培养细胞、基因中断Nrf2受损GSH-induced氧化还原信号和阻止细胞周期的进展,通过G2进入有丝分裂期(35]。细胞周期调控以来机械诱导的肝切除术与Nrf2信号机械,有可能redox-active物质多酚可能会影响肝氧化状态导致不同的肝脏再生。
在这种潜在的酚醛树脂,我们获得的多酚提取(PFE)橄榄油和检查其影响抗氧化状态三分之一肝切除术后肝再生过程中老鼠。尽管众所周知,抗氧化剂酶是诱导Nrf2核易位,(36- - - - - -38)我们也评估可能调制mRNA的表达。为此,氧化还原state-regulating酶的变化,硫醇蛋白质,和Nrf2基因签名,协调自适应压力反应测定在0(控制),1、3、6、12、24、48小时后肝切除术。
2。材料和方法
2.1。准备橄榄油多酚提取物(PFE)
橄榄油多酚的提取制备所得的混合橄榄品种生长在岛上Krk和从个体生产者购买石油。石油是由一个连续离心萃取的过程分三个阶段,并保存在深色玻璃瓶在阴凉的地方,直到分析。多酚类物质被孤立于橄榄油液液萃取使用甲醇-水混合物(60:40;据情郎,希利斯(v / v)39]。总多酚含量测定与Folin-Ciocalteu试剂(丙烯酰胺、书、瑞士)根据Gutfinger [40],钼酸钠溶液(丙烯酰胺、书、瑞士)是用于建立的内容昊图公司-diphenols所描述的马特奥et al。41]。
动物实验,甲醇-水相蒸发干燥在减压下一个旋转真空蒸发器(Buchie与Buchie真空控制器b r - 3000 - 720,瑞士)在40°C,在氮气流。干渣溶解在生理盐水(氯化钠0.9%)。结果pfizer是存储在整除−20°C和按要求使用。
2.2。动物实验
雄性C57BL / 6小鼠,2 - 3个月大的时候,重量能力,获得繁殖集落的医学院,大学里耶卡。动物们被安置在丙烯笼子和维护在无菌环境中,在12小时光/暗周期和恒定的温度(°C)和湿度(%),免费的自来水和一个标准的啮齿动物的饮食(颗粒、类型4 rf21 GLP, Mucedola,意大利)。所有试验程序进行符合赫尔辛基宣言的原则和伦理委员会批准的医学院,大学里耶卡。
实验动物随机分为四组,每组六个动物如下:PSS + pHx-mice前用生理盐水溶液预处理部分肝切除术,pfizer + pHx-mice对待橄榄油多酚提取之后,部分肝切除术,PSS,独自和PFE-mice接收车辆(控制),也就是说,生理盐水或橄榄油多酚提取。
生理溶液(0.1毫升每10克体重)和50毫克的剂量pfizer每公斤体重(50毫克/公斤顺便说一句)腹腔内(i.p)注射每日连续七天。橄榄油的剂量茶多酚提取用于动物实验的基础上选择我们的先前的研究42根据剂量水平)和报告oleuropein [43和它的导数hydroxytyrosol44,45),这是最普遍的酚类化合物在橄榄油和最具代表性的橄榄油昊图公司-diphenols [46]。
在第八天动物独自接收车辆接受牺牲动物的第一和第二组受到适当1/3肝切除术在乙醚麻醉和符合无菌的规则。1/3肝切除术是通过通过midabdominal切口去除肝脏叶中值,根据啤酒et al。描述的方法(47]。为了避免昼夜节律的潜在影响,所有操作在同一时间进行,8.00点和9.00点之间。实验动物被允许恢复在37°C温暖的板,然后接受牺牲1、3、6、12、24、48小时后手术。在所有实验动物组颈椎脱位牺牲的乙醚麻醉。
在牺牲之前,血液采样乙醚麻醉下轨道鼻窦穿刺。全血样品离开在25°C站了两个小时,然后离心机在2.000 g×20分钟。获得血清是储存在−80°C,以备后续分析的谷胱甘肽年代转移酶α。
在表示时间牺牲后,肝脏被反复清洗在磷酸缓冲盐(PBS,σ,圣路易斯,MQ,美国)清除血栓,肝脏和总重量(控制)和肝脏的重量遗迹。部分肝组织群众高达100毫克免除了RNA提取,其余组织用于抗氧化酶活动的分析,TBARS水平和总谷胱甘肽的浓度。组织样本立即重,在液氮速冻,储存在−80°C,直到进一步的处理。
2.3。血清谷胱甘肽年代转移酶α(销售税)级别
血清水平销售税测量spectrophotometrically使用标准夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)(牛津大学生物医学研究公司,牛津,美国)在Bio-Tek ELx808超微型板块读者(美国BioTek乐器,Winooski VT)后,制造商的指示。绑定到酶免疫吸附的数量为450 nm,结果表示为毫微克每毫升的血清(ng / mL)。
2.4。肝脏抗氧化状态
脂质过氧化反应中检测出25%的肝组织匀浆在PBS通过监测pink-colored加合物在534海里,与硫代巴比土酸形成的反应(稍后通知,σ,圣路易斯,MQ、美国)在高温下(95°C)和酸性条件(pH = 3.5)48]。肝脂质过氧化作用是表示为TBARS内容和计算每毫克蛋白nanomoles根据标准曲线(nmol /毫克)准备从1,1,3,3-tetraethoxypropane(美国σ,圣路易斯,MQ)。
总谷胱甘肽浓度测定肝组织溶解产物,由组织均匀化5%元磷酸酸(w / v) (Taufkirchen, ACS, Sigma-Aldrich GmbH德国)使用商用HT谷胱甘肽分析工具包(美国马里兰州盖瑟斯堡Trevigen, Helgerman Ct),根据制造商的指示。谷胱甘肽的量建立了优化酶回收方法与谷胱甘肽还原酶在405 nm Bio-Tek ELx808超微型板块读者(美国BioTek乐器,Winooski VT)。结果表示为nanomoles GSSG(相当于总谷胱甘肽)每克肝组织(nmol / g)。
超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及谷胱甘肽还原酶(GR)活动是衡量从Trevigen商用设备(美国马里兰州盖瑟斯堡Helgerman Ct)。开曼化学公司工具包(美国安阿伯市MI)是用于过氧化氢酶(CAT)活性测定。酶活性测定在Bio-Tek ELx808超微型板块读者(美国BioTek乐器,Winooski VT)根据制造商的协议。
SOD活性(SOD2代表SOD1的活动,SOD3同功酶)测定胞质组织提取物抑制百分比的速度形成四唑盐在超氧化物阴离子自由基生成黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统,并监控通过测量吸光度值的减少在450海里。结果给出了单位每毫克的蛋白质(U /草皮μg),一个单位被定义为样本的数量,抑制率增加,吸光度由于四唑盐形成了50%。
猫活动以组织匀浆通过监控吸光度下降在540 nm由于过氧化氢消费。结果给出了单位每毫克的蛋白质(U /猫μ克)。一个单位被定义为酶的数量会导致形成1.0 nmol甲醛每分钟25°C。
GPx活性测量组织匀浆,加上谷胱甘肽还原酶反应通过监测吸光度下降在340海里。结果表示在单位GPx /毫克的蛋白质(U /毫克)。一个单位的谷胱甘肽过氧化物酶被定义为酶的数量会导致氧化1 nmole NADPH辅酶ii+每分钟25°C。
GR活性决定在胞质组织中提取通过测量NADPH氧化的速率。相应的吸光度下降在340 nm监控。结果表示为milliunits GPx /毫克的蛋白质(μ/毫克)。一个单位的谷胱甘肽还原酶氧化1μ摩尔的NADPH每分钟25°C, pH值7.5。
蛋白质含量是由布拉德福德的估计方法,与牛血清白蛋白(美国σ,圣路易斯,MQ)作为标准(49]。
2.5。RNA提取
完整的肝总RNA提取使用三试剂溶液(应用生物系统公司/ Ambion,促进城市、钙、美国)和孤立的RNA是纯化RNeasy迷你包(试剂盒、德国)所描述的是制造商。总RNA浓度测量是基于价值。RNA在每个样品的纯度被确定验证比率。RNA分子的完整性以及分离效率1% agarose-formaldehyde证实了凝胶电泳,溴化乙锭染色。有清晰可见的样本核糖体乐队,28日和18个年代,与上层的比率(28)和低(18岁)群约:1,没有明显的污染的基因组DNA被用于进一步分析。
2.6。实时定量PCR检测
长串5的互补脱氧核糖核酸合成μ50 g的总RNAμL协议后的反应体积高容量cDNA逆转录装备与核糖核酸酶抑制剂(美国应用生物系统公司)。排除污染与基因组DNA -控制的逆转录酶换成水被使用和接受类似的程序和条件。定量实时聚合酶链反应(qPCR)是使用电力SYBR绿色PCR主执行混合(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)和优化寡核苷酸引物。引物的特定的鼠标Nrf2基因,HO-1 GCSc, 18 s RNA。引物是商用QuantiTect底漆试验(Mm_Nfe2l2_1_SG Nrf2, Mm_Hmox1_1-SG HO-1, Mm_Gclc_1_SG GCSc, Mm_Rn18s_2_SG 18 s RNA,试剂盒,德国)。每个反应进行了使用稀释25倍cDNA产品25μL反应体积。两个复制的反应进行。PCR扩增进行实时PCR 7300(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)和放大条件50°C 2分钟,1周期;10分钟95°C, 1周期;15秒95°C, 40周期;1分钟和60°C。特异性扩增子是验证了一阶导数为每一对引物融化曲线分析。基因的表达水平正常化的管家基因,18 s RNA,并使用标准的计算方法。记录的数量表示在时刻0(车辆控制)被用作校准器样本。
2.7。计算肝脏修复质量
手术导致的约占总数的1/3肝质量而剩下的2/3肝脏产生补偿性增长。再生的强度组老鼠接受术前生理盐水或多酚提取(实验组)被表示为一个百分比的复苏切除肝脏重量与估计肝脏重量在操作和肝部分切除术后作为时间的函数。肝脏修复质量的计算是根据以下公式:(肝遗迹的实际质量在给定的时间−预期肝脏残余肝切除后的质量)/ (prehepatectomy肝质量)×100。预期的质量肝脏遗迹切除后被计算为[(实验组肝遗迹的实际质量)/(实验组体重)]/[(对照组肝质量)/(对照组体重)]。Prehepatectomy肝质量量化如下:[(对照组肝质量)/(对照组体重)]×在实验组(体重)。
2.8。统计分析
数据分析使用StatSoft STATISTICA 12版本的软件。正常的数据分布评估Kolmogorov-Smirnov正常测试。合格的常态分布测试,所以测试应用参数。为对比组,未配对的学生的以及(在只有两个比较的情况下)或方差分析(ANOVA)使用。费舍尔事后测试是应用在整个集团中,方差相等时,和Dunnett事后测试时使用方差不相等。方差平等被列文统计分析测试。结果表示为平均值±标准偏差(SD)。差异与被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。提取成分
总多酚含量毫克/公斤表示为没食子酸当量和昊图公司-diphenols内容毫克/公斤表示为咖啡酸的等价物。
3.2。肝脂质过氧化作用
TBARS决心的数量评估脂质过氧化水平。最初,未经处理的动物表现出更高水平的TBARS(图1(一)),但在这两个实验小组记录大量的脂质过氧化反应增强,在手术后12小时到达顶峰。然而,多酚诱导TBARS水平显著增加,早期肝切除术后(3个小时)。TBARS的内容虽然没有恢复到初始水平处理的实验组的实验时间,时间间隔6小时后肝切除术后通过一个小,但意义重大,衰减多酚治疗,切除肝脏脂质过氧化的老鼠和老鼠只进行肝切除术。
(一)
(b)
(c)
3.3。肝脏谷胱甘肽含量
氧化损伤是由肝阻力评估总肝脏谷胱甘肽含量(包括减少谷胱甘肽和氧化GSSG形式)。部分肝切除术本身并不引起总肝脏谷胱甘肽含量的显著改变(图1 (b)),直到手术后12小时时显示显著增加的初始值是保留肝部分切除术后长达24小时。尽管最初更高的价值,pfizer治疗促进急剧下降总谷胱甘肽肝部分切除术后3小时比未经处理的小鼠切除肝脏和相对于初始值,反映增加氧化剂负载。虽然总谷胱甘肽的浓度显示增加课程在随后的时间间隔PFE治疗,切除肝脏的老鼠,这个非酶的抗氧化剂的水平仍显著降低相比治疗组肝部分切除术后24小时。
3.4。血清销售税水平
确定解毒的脂质过氧化的能力最终产品和各种亲电子分子再生肝脏、血清销售税水平评估。的水平销售税(图1 (c))实验组均明显升高,尽管在PFE对待动物肝切除术后(3小时)早些时候达到顶峰,并迅速减少级但不显著改变与未经治疗的动物,除了在术后12小时,反映出较低的氧化剂/亲电子负载在老鼠身上接收pfizer比未经处理的动物。尽管在最大后时期销售税水平趋于下降,再生肝脏解毒的要求仍然保持着较高的实验小组,因为水平销售税是没有完全恢复,直到结束的实验周期的初始值相比各自的对照组。
3.5。硫醇调节酶的活动(GPx GR)和抗氧化剂酶(SOD, CAT)
除了谷胱甘肽,我们确定的功能glutathione-dependent酶和其他抗氧化酶组成的第一和第二行防御活性氧与亲电试剂的细胞毒性。
图2(一个)表示在SOD活性逐渐增加,在两个实验组,每组的肝组织,反映了超氧化物阴离子解毒更大的要求。然而,多酚类物质转移活动最大的更早的时间(肝部分切除术后3小时),也伴随着细胞谷胱甘肽的耗竭,脂质过氧化增加产品,亲电试剂的一代。瞬态SOD活性下降后,治疗组的早些时候开始,SOD活动两个实验小组的关系变化,显示更明显增加参与切除肝脏组织。然而,肝切除术后48小时,没有显著差异在切除肝脏SOD活性小鼠接受pfizer接收车辆和老鼠。
(一)
(b)
(c)
(d)
过氧化氢的细胞毒性,生成的催化循环中SOD,抵消了猫和GPx活动。这些酶的特点是不同的价值观的衬底,其活动显示在处理与未经处理的小鼠成反比关系。治疗组的老鼠,猫活动(图2 (b))接近初始值,直到实验结束的时期。猫低活动反映了低浓度的过氧化氢。在这种情况下,这个nonradical活性氧GPx解毒。GPx活性(图2 (c))显示一个持续的上升趋势在治疗组和肝切除术后仍高企,直到结束的监测期肝切除术后(48小时)。另一方面,多酚治疗猫活动反映在增加(图2 (b)),肝切除术后在第三个小时达到顶峰。在这个时间点,SOD活性显示最大值和谷胱甘肽明显减少,表明氧化应激的更大程度的再生肝治疗小鼠相比,未经处理的小鼠接受手术过程。这显著增加是紧随其后的是一个暂时的下降,在术后12小时活动正常化。在随后的时间间隔PFE预处理小鼠SOD活性增加和显示值明显降低肝部分切除术后在24小时内与未经处理的老鼠。与此同时,GPx活性(图2 (c))没有明显改变了初始值相比,除了在肝切除术后6小时,它显示了一个增加时,最有可能弥补减少猫活动(图2 (b))来抵消过氧化物的形成,但在48小时GPx活性显示活动减少(图2 (c))。此外,pfizer预处理明显减少GPx活动未经处理的小鼠相比,时间从12肝切除术后48小时。
谷胱甘肽利用过程导致其氧化GSSG形式的形成。确定容量的谷胱甘肽循环回减少形式,GR是评估。GR活性(图2 (d))没有明显改变再生肝组织的实验小组,除了在两组术后3小时,GR低活动表示谷胱甘肽循环处理和未经处理的小鼠受损。然而,恢复肝脏谷胱甘肽再生能力在肝切除术后12小时,但只有在参与集团反映谷胱甘肽水平的增加。尽管GR活动表现出增加的趋势在多酚治疗肝切除术后24小时后,它仍然低于初始值但不治疗组相比明显不同。此外,显著降低GR活性观察到12和24小时pfizer治疗切除肝脏与未经处理的小鼠切除肝脏。
3.6。基因表达谱
为了建立在什么阶段pfizer发挥他们的谷胱甘肽增加活动,mRNA水平-glutamylcysteine合成酶催化亚基(GCSc)被定量PCR分析。-Glutamylcysteine合成酶的关键因素是总谷胱甘肽生物合成能力,催化病原反应步骤的代谢反应。酶是由重(催化),光(监管)单元,前者负责所有的催化活性,包括反馈抑制的谷胱甘肽(50]。直接肝切除术后早期(1小时),初始上升GCSc基因转录活动(图3(一个))在两个实验小组。在这一时期,mRNA水平GCSc基因治疗组的肝大约是两倍,一个半倍治疗组相比,各自的控制。之后逐渐下降GCSc水平的成绩单,拘留在治疗组的实验周期的结束,因此,建立提高谷胱甘肽的浓度不是其生物合成的增加能力的反映。相比之下,治疗组在术后12小时reinduction GCSc基因表达观察到徘徊直到实验结束的时期,与时间的增加在这群被发现谷胱甘肽的浓度。
(一)
(b)
(c)
另一个重要cytoprotective基因与细胞增殖中的作用是HO-1 [51]。因此,rt - pcr来确定pfizer预处理产生的感应HO-1在转录水平。pfizer再生肝组织的治疗组,显著增加和相对稳定的表达HO-1基因(图3 (b))在所有时间间隔肝切除术后完成,除了在48小时后手术。HO-1基因的转录活动未治疗组在所有时期被压抑了,但除了在3和手术后48小时内,当大约两倍半HO-1 mRNA转录水平相比,控制来完成。
GCSc和HO-1基因的启动子区域包含共识元素绑定Nrf2转录因子(52,53]。因此,我们接下来寻求检查pfizer预处理的影响在Nrf2感应在转录水平。使用Nrf2-specific rt - pcr引物,显示抑制Nrf2基因的转录活动(图3 (c)肝切除术后)在所有时间。相比之下,多酚治疗诱导Nrf2基因表达在肝切除术后1小时,当大约两倍Nrf2基因转录水平与对照组相比完成。三个小时手术后转录活动有点压抑,但在6小时开始增加,12日,24日,48小时内到达2 - 2.5倍的价值高于控制。
3.7。肝脏质量恢复
在这两个实验小组,恢复肝脏质量的逐渐增加是观察整个实验周期(图4)。然而,多酚治疗体现更高强度的再生肝部分切除术后各时间间隔。末尾的实验时间,大约15%再生率较高的残余肝组织在一群老鼠收到pfizer相比,那些只接受肝切除术。
4所示。讨论
几项研究解决多酚的作用在组织修复伤口愈合的潜力这些植物衍生化合物的抗氧化能力基于ROS的观察,组织损伤,产生阻碍或加剧愈合过程。我们研究了预处理的效果与pfizer hepatectomy-a引起的肝再生的过程中ROS占的早期信号参与发起组织大规模的修复。
本研究的结果表明,再生肝脏本身产生内在的氧化应激。预处理与pfizer另外提升整体氧化剂肝部分切除术后加载前三个小时内。这个阶段对应的启动阶段肝脏再生,从而增加肝细胞对生长因子的敏感性导致DNA复制和有丝分裂1]。初始氧化刺激引发多酚促进总谷胱甘肽的耗竭,的一个主要决定因素氧化损伤,肝的阻力和改变过程与谷胱甘肽通路有关。这些过程对受损的谷胱甘肽氧化还原循环由于GR活性下降,受损的谷胱甘肽生物合成的抑制GSCc转录活动,并增加谷胱甘肽通过GST-mediated利用反应。谷胱甘肽耗竭恰逢在酶的活性,第一次面对ROS的细胞毒性效应,也就是说,SOD和CAT,达到高峰值。这些抗氧化剂酶只提供部分保护过氧化氢,过氧化阴离子自由基和羟基自由基所指出的同时增加血清中脂质过氧化水平和高峰销售税酶。它已被证明销售税血清水平反映诱导肝销售税在老鼠喂食了二期酶诱导物(54]。感应消费税被描述为酚类共享1日2-diphenol结构(55),扮演着重要的角色在第一阶段所产生的亲电试剂的解毒酶和脂质过氧化作用最终产品。诱发消费税也基质的消费税,此外,能够提升组织谷胱甘肽水平(24]。这个角度证实在我们的模型中,一个普遍趋势向上指出在谷胱甘肽水平在pfizer预处理时间发病前DNA合成(肝部分切除术后6 - 24小时)。同时与谷胱甘肽含量的增加,销售税和脂质过氧化水平逐渐下降,而氧化还原状态的活动和硫醇调节酶回到按照假设的基础水平,减少氧化应激在细胞分裂之前(56]。然而,时间与复制的阶段(肝切除术后48小时)的特点是增加SOD活性在两个实验小组,这被认为是衡量抵御活性氧生成由于氧化代谢的增加在S期的细胞周期57]。这个时间点也是以减少GPx活性在老鼠身上接收pfizer,可能由于抑制GPx通过氧化氮(II)肝切除术后立刻上升,施加刺激对肝脏再生的影响(58]。
虽然脂质过氧化加上谷胱甘肽耗竭可以表示细胞毒性的机制之一,脂质过氧化反应的选择性增强可以作为潜在的早期再生能力中介通过唤起一般细胞反应涉及激活转录因子(10]。
在哺乳动物细胞中,低水平的氧化应激prosurvival启动激活转录因子Nrf2对于成功是必不可少的细胞周期进程和协调感应电池cytoprotective基因(30.,34,35),包括GCSc和HO-1 [52,53)是已知的控制与肝再生。
我们的研究结果表明,氧化应激引起的多酚预处理GCSc和HO-1基因mRNA的提升和增加Nrf2基因表达。
基于这样的观察:Nrf2目标基因的表达减少导致广泛的氧化应激和在Nrf2推迟肝脏再生−−/有缺陷的小鼠(33,59],似乎可以得出合理的结论,归纳GCSc和HO-1基因在多酚预处理相关细胞氧化应激适应和施加在肝再生刺激作用。
的能力多酚诱导GCSc和HO-1 mRNA表达在这两方面都已被证实在活的有机体内和在体外模型(8,26,60),这两个基因的调节来响应pfizer预处理。
GCSc基因的诱导pfizer伴随着总谷胱甘肽浓度不断增加,所需的刺激肝细胞增殖反应和进入S期的细胞周期50]。然而,尽管这些变化总谷胱甘肽的浓度仍低于未经处理的动物,可能由于增强谷胱甘肽排泄胆汁已经观察到发生由于Nrf2-induced销售税mRNA表达和酶活性(61年),以及HO-1诱导公司形成(62年]。HO-1及其代谢产物有限公司有一个关键的角色在切除术后肝再生。HO-1活化的肝细胞直接与释放不,小的气体信号转导分子提供防止细胞凋亡和细胞周期有利于发展到器官大小和功能恢复部分肝切除术后(58]。表达升高HO-1通常是与组织的生存适应和激活途径,提高肝移植肾功能和posttransplantation生存,主要由于凋亡和抗炎作用有限公司因血红素降解肝细胞(63年]。最近,它已经表明,公司增加胶质瘤生长因子分泌早期肝星状细胞,加速肝细胞增殖,可能通过Akt-cyclin-dependent通路(51]。
虽然橄榄油酚醛树脂通常被视为物质具有抗氧化活性,新兴证据建议大多数膳食抗氧化剂,除了维生素E,没有直接参与减少细胞内氧化剂(64年]。事实上,细胞培养的研究强调,最具代表性的橄榄油酚类,hydroxytyrosol,以及oleuropein高浓度(100μ米)有能力生产过氧化氢(65年),而酪醇强化氢过氧化物增加无论使用的浓度(10 - 250μ米)(25]。
广泛的肿瘤坏死因子信号和肝细胞代谢活动的增加来维持体内平衡增加活性氧的水平和氧化应激66年),将细胞内氧化还原状态向更加氧化状态的早期阶段再生(2]。在这种背景下,酚醛树脂,特别是1,2 - 1,4-diphenols,无所不在地出现在橄榄油,可以很容易地接受(汽车)生产半醌氧化或醌自由基,或者他们可以成为自由基反应与自由基(8,23),从而导致整个氧化剂/亲电子负载。在大多数情况下,多酚的prooxidant效应刺激的互动与过渡金属离子催化氧化昊图公司- - -帕拉对苯二酚相应的醌类和增加超氧化物阴离子自由基和过氧化氢的形成。后者可以加速高活性羟基自由基的生成通过芬顿化学(67年- - - - - -69年]。某些形式的醌自由基可以作为亲电试剂并形成与谷胱甘肽的轭合物从而降低供应细胞谷胱甘肽(68年]。最近,它已经表明,hydroxytyrosol和oleuropein低浓度参与由铜氧化低密度脂蛋白诱导的启动过程2 +离子(70年]。可能认为与过渡金属离子的相互作用可能是重要的肝切除术后的肝再生早期诱发再分配的铁从脾脏和胸腺的组织再生肝(71年),但也提高氧输送到细胞,必要的氧化酚醛物质通过氧化还原循环机制的激活。
新出现的证据表明,prooxidant属性和直接与redox-sensing蛋白质相互作用诱导抗氧化酶,提高底物,导致维护亲核的语气和抵御活性氧诱导损伤在生理条件下(64年]。监管的核心亲核的基调是Nrf2在生理条件下隐藏在细胞质中作为活性与阻遏蛋白Keap1复杂。已经提出,醌衍生物形成的氧化二元酚作为迈克尔受体激活,能够共价修改或氧化redox-sensitive半胱氨酸蛋白质Keap1硫醇的传感器。反过来,这导致Nrf2 / Keap1复杂和增加稳定性的破坏Nrf2及其积累在原子核可以transactivate / EpRE-driven目标基因(27- - - - - -29日]。
另外,通过降低细胞谷胱甘肽水平,活性多酚衍生品可能会暂时破坏细胞的氧化还原状态,引发上游激酶磷酸化Nrf2协助在其释放Keap1 [32]。Hydroxytyrosol,主要橄榄油二元酚已被证明通过PI3K / Akt激活Nrf2和ERK1 / ERK2通路在血管内皮细胞(72年]。同样,帕特尔和丸(27]建立了预处理的老鼠与聚合物红茶多酚提取Nrf2水平增加了转译后的修改涉及上游激酶在肝脏和肺细胞,但是没有观察到显著的改变转录水平。在这项研究中橄榄油提取政府与增加Nrf2 mRNA表达水平有关。这些差异可能表明不同植物提取物的作用方式的差异以及差异的机理Nrf2归纳不同细胞的条件下。本研究的一个限制是,我们没有测量Nrf2激活橄榄油多酚治疗之前。转录调制作为监管机制的相关性Nrf2的行动将被认为是在我们的未来的工作。
鉴于这些事实,我们建议增加氧化剂/亲电子负载在肝脏再生的早期阶段,通过多酚介导本身或者通过谷胱甘肽耗竭,可能代表的感应的信号机制依赖Nrf2基因签名可以实现,导致及时和适当的外观与肝再生相关的事件。详细的机械的研究需要改善抗氧化剂的理解或prooxidant橄榄油酚醛树脂在肝再生的影响。
5。结论
据我们所知,本研究首次表明,pfizer预曝光影响内源性的细胞防御机制通过应激反应相关基因hepatoprotection模型中肝再生诱导三分之一肝切除术。我们的研究结果表明,用工业的治疗肝切除术前,诱发亲电和氧化负载瞬态和早期增加,其次是增加在Nrf2 Nrf2-dependent基因表达,导致某些再生信号,导致肝脏质量恢复有效。Nrf2以来参与redox-homeostasis和调节细胞周期的维护,这是合理相信可能诱导Nrf2可以代表的基础分子事件导致cytoprotection快速复苏。这些发现支持了假设肝切除术不到40%,这通常表现为较慢的再生反应,可以有效地调节通过增加代谢负荷切除前(73年]。此外,我们表明,橄榄油多酚可以作为氧化剂在某些条件和启动保护机制的控制下redox-sensitive基因可能刺激有益健康反应在压力条件。具体来说,加强肝脏质量恢复的可能性多酚在小型组织赤字的情况下持有的承诺影响肝脏再生的发展情况过于小的肝脏和显示一个潜在的再生医学领域的应用。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
承认
这项工作是支持的克罗地亚科学,教育,体育,在格兰特没有。062-0621341-0061。