文摘

本研究试图揭示il - 6在乳头状甲状腺癌的意义通过确定其循环水平,tumoral蛋白质,信使rna表达。与健康人相比,血清il - 6明显高于良性患者甲状腺疾病和PTC。进一步,其水平明显高于PTC患者比良性甲状腺疾病患者。ROC曲线还证实良好的歧视性功效健康个体之间的血清il - 6和良性甲状腺疾病患者和PTC。与贫穷相关的循环il - 6明显PTC患者的总生存期。PTC患者il - 6免疫反应性明显高而良性甲状腺疾病患者。明显高于白介素mRNA表达也观察到的主要肿瘤组织PTC病人比邻近的正常组织。蛋白表达的il - 6在循环和组织水平与疾病侵略性PTC的病人。此外,观察il - 6之间显著正相关蛋白质和PTC的主要肿瘤患者的mRNA的表达。最后在结论中,il - 6在甲状腺癌发展有着重要的作用。 Thus targeting IL-6 signalling can help in clinical management of thyroid carcinoma patients.

1。介绍

细胞因子il - 6是apleiotropic拥有一个核心作用在炎症和免疫反应的规定1]。它是由不同的细胞包括巨噬细胞、分泌T和B淋巴细胞,成纤维细胞、内皮细胞和肿瘤细胞2]。它于1986年被克隆b细胞分化因子(3]。

il - 6已经知道通过其受体结合发挥其生物活性,并进一步导致激活信号转导通过各种途径如:janus激酶/转录信号传感器和催化剂(JAK / STAT)、磷脂酰肌醇3′激酶/ Akt (PI3K / Akt),和有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径4]。大量研究表明,il - 6及其相关信号通路已经被确认为增殖,迁移和入侵各种肿瘤细胞(5- - - - - -9)和它的表达与预后不良相关在许多类型的癌症10- - - - - -12]。此外,il - 6的生理作用不仅可以促进肿瘤增殖,而且转移和恶病质的症状6,13,14]。增加il - 6的表达一直在报道不同类型的癌症和高血清il - 6水平与转移和不利预后相关(2,15- - - - - -17]。此外,可能参与抵抗化疗和放疗的il - 6信号已经被记载在一些研究[18- - - - - -20.]。关于其治疗作用,il - 6的封锁在各种自体免疫和炎性疾病,叫,一个人性化的反(人类IL-6R)单克隆抗体,证明改善类风湿性关节炎的症状,Castleman病、系统性青少年特发性关节炎(21]。il - 6信号也被调查了几种类型的癌症疗法作为一个潜在的目标(22,23]。

甲状腺癌是最常见的,慢慢地进步内分泌恶性肿瘤,占恶性肿瘤诊断的不到1%。虽然生存一般好,死亡率高于所有其他内分泌器官癌症。据估计,每100万人死于因甲状腺癌。约85%的甲状腺癌乳头状甲状腺癌(PTC)。尽管高生存率、局部复发和转移可能发生在一些患者,这可能需要一个更积极的手术治疗24]。此外,甲状腺癌之间的关联和良性疾病的潜在的炎症的历史条件已经明显的文学。除此之外,通常,病理学家面临区分良性和恶性的甲状腺病变可能相当困难,因此,决定支持一个或另一个临床后果,意味着不同的治疗方法。因此,提出,il - 6,促炎细胞因子,其中一个主要组件潜在的炎症条件下,可能有助于鉴别诊断甲状腺疾病。

因此,本研究的目的是审查的角色在良性和乳头状甲状腺癌患者il - 6和关联结果与临床病理参数和PTC病人疾病的结果。为了实现这一目标,我们评估了循环水平的il - 6在良性甲状腺疾病患者和PTC与健康人相比。我们进一步研究蛋白质表达的il - 6在PTC的主要肿瘤患者的良性组织并确定其mRNA表达的主要肿瘤以及邻近正常组织的组织学证实PTC的病人。

2。材料和方法

2.1。病人

六十七例良性甲状腺疾病和83年病理证实PTC患者纳入本研究。这个病人组及其临床病理的特性见表1是前面提到的一样25]。45 67我们研究所的良性甲状腺疾病患者接受手术,包括免疫组织化学分析。世卫组织分类和与/ UICC TNM分期系统被用来组织病理学分类阶段的肿瘤和甲状腺癌症患者,分别。因此,患者分为年轻(45岁以下)和老年(≥45岁)组。所有患者随访一段4年或直到死亡。完成后续细节中获得92% (76/83)PTC患者,包括总生存期(OS)分析。百分之九(7/76)的患者在这些有持久的疾病,因此并不包括无病生存(DFS)的分析。因此,PTC DFS分析患者包括69/76。il - 6 mRNA决心在原发性肿瘤邻近正常组织60 PTC的病人。对il - 6 mRNA表达,DFS评价54/60 PTC其余的六个病人疾病的患者,因此不在DFS的分析,而包含的所有60例进行系统分析。

2.2。样品收集

已经认可了这个研究机构的科学和伦理委员会和知情同意之前就从所有患者获得样本集合。检测循环的il - 6水平,pretherapeutic血液样本收集来自所有患者以及67名健康的个人。血清后离心分离,不惜−80°C到分析。患者的主要组织样本收集在冰上直接从操作剧院。选择邻近的正常组织和肿瘤病理学家和分为两部分。提交一分常规组织病理学评价和其他部分保存在液氮快速冻结,总RNA提取的−80°C。免疫组织化学,所有患者的石蜡包埋组织块(手术)从组织病理学部门检索我们的研究所。患者的临床和组织病理学细节指出从案例文件维护医疗记录部门研究所。

2.3。循环的il - 6水平的酶联免疫吸附测定(ELISA)

循环的il - 6水平估计从血清样本使用商用酶联免疫试剂盒Krishgen生物系统制造商的指示。未知浓度标准曲线生成的解释Graphpad棱镜5软件。

2.4。Tumoral il - 6蛋白表达的免疫组织化学(包含IHC)

进行免疫组织化学染色检测tumoral表达il - 6在PTC的主要肿瘤患者和患者的良性甲状腺疾病。简单地说,3 - 5μ米厚的部分被削减的福尔马林固定石蜡包埋组织块使用徕卡切片机和安装在猿镀膜玻璃幻灯片。免疫组织化学染色法是使用主要鼠单克隆抗体从研发系统(MAB2061)和il - 6 MACH4普遍HRP-Polymer检测系统从Biocare体格检查,建议美国,按照制造商的协议。抗原性被加热部分检索在10毫米柠檬酸钠缓冲(pH值6.0)20分钟在压力锅之前,应用程序的主要抗体。所有的部分都得分由两个人独立观察员蒙蔽的方式。一种半定量的免疫反应性的得分(IRS) Remmele和Stegner[方法26)根据染色积极性和染色强度实施。染色积极性得分为0没有染色的细胞,1在1%到10%的细胞染色,染色的2 11%到50%的细胞,3在50%到80%的细胞染色,染色的和4 > 80%的细胞。没有染色的染色强度得分为0,1为弱/微弱的染色,2为温和的染色,3强烈/深色染色。国税局获得的分数然后乘以染色积极性和染色强度,因此,理论上的分数可以从0到12。进行统计评价,中位数国税局在两个子组的患者被用作截止值将患者分为低(≤值国税局)和高(>中值IRS)表达式组,分别。

2.5。il - 6 mRNA表达反转录酶-聚合酶链反应(rt - pcr)

胍thiocyanate-phenol-chloroform提取的总RNA提取方法修改,通过Chomczynski和萨基27在260 nm和280 nm)和量化spectrophotometrically(赫利俄斯α英国热液体)。证实了RNA的完整性在1.4%琼脂糖凝胶。使用OneStep rt - pcr进行rt - pcr试剂盒(美国试剂盒)放大白介素mRNA。引物5′atg标签20 CCC CAC ACA GA-3′(意义)和5′gca太极拳ATC TTT TTC AGC猫颈- 3′(反义)被用来放大il - 6的191个基点片段具体。管家GAPDH信使rna是作为内部控制。引物5′CGG AGT CAA CGG ATT TGG TCG TAT-3′(意义)和5′agc CTT CTC猫GGT GGT棉酚GAC-3′(反义)被用来放大306个基点片段GAPDH具体。1μg总RNA的添加/反应。rt - pcr进行Mastercycler梯度(埃普多夫,德国)使用下列条件:il - 6: 60°C 30分钟,95°C的15分钟,后面36个周期94°C的45秒,58.1°C 45秒,和72°C 1分钟和最后扩展在72°C 10分钟;和GAPDH: 60°C 30分钟,95°C的15分钟,其次是36周期为45秒94°C, 45秒60°C, 72°C 1分钟和最后在72°C扩展了10分钟。放大产品运行在2%琼脂糖凝胶和产品的强度测量计数/毫米²在凝胶和集成文档系统(美国阿尔法Innotech)使用光密度分析。

2.6。统计分析

数据统计分析使用社会科学统计软件包(SPSS)软件版本16 (SPSS Inc .)、美国)。独立样本以及被用来比较两组之间的循环水平的受试者也评估协会与甲状腺癌患者的临床病理参数分析物。接收器的操作特征(ROC)曲线构造确定识别功效健康个体之间的循环il - 6和甲状腺疾病患者。双尾测试是用来比较tumoral蛋白表达在良性和癌患者并确定蛋白表达之间的联系和癌患者临床病理参数。在不到五个病人在2×2的细胞表、橡胶树的连续性校正价值及其双尾意义被考虑。魏克森讯号等级测试两个相关样本比较被处决的mRNA表达癌患者的恶性和相应的邻近的正常组织,而mRNA表达与临床病理参数的相关性分析了曼惠特尼以及。两个参数之间的相关性是斯皮尔曼相关系数的计算)方法。单变量生存分析评估使用kaplan meier和日志等级测试方法被用来分析不同生存曲线和评估预后DFS和操作系统的重要性。多元生存分析竣工使用Cox向前步进式回归模型。值≤0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。循环水平、Tumoral蛋白和il - 6的mRNA表达

循环水平被表示为平均值±标准错误(M±SE)。与健康人相比,血清il - 6均明显高于良性患者甲状腺疾病()和PTC ()。进一步,水平也明显高于PTC患者比良性甲状腺疾病患者()(表2)。

中华民国曲线还证实,血清il - 6表现出良好的健康个体之间的歧视性的功效和良性甲状腺疾病患者(AUC = 0.598,)(图1(一))和健康的个人和PTC患者之间也(AUC = 0.708,)(图1 (b))。此外,循环il - 6水平也显著区分PTC病人从良性甲状腺疾病患者(AUC = 0.643,)(图1 (c))。

il - 6蛋白的表达在甲状腺滤泡细胞的细胞质本地化。表达检测在87%(39/45)的患者甲状腺良性疾病和IRS-4分数中值,而在PTC病人在96%(80/83)的肿瘤检测与国税局值中值8。代表染色的il - 6蛋白表达在良性甲状腺和PTC病变数据所示2(一个)和2 (b),分别。免疫反应性的发生率相当高的il - 6的PTC病人比良性甲状腺疾病患者。指出,il - 6表达是更高的PTC在52%(43/83)患者,相比之下只有29%(13/45)的良性的甲状腺疾病患者表现出更高的表达式(il - 6:= 6.228,,)(表2,图3)。

在PTC患者()、il - 6 M±SE mRNA表达在肿瘤及其邻近的正常组织计数/毫米²和计数/毫米²,分别。使用非参数魏克森讯号等级测试两个相关样本,统计显著差异在il - 6 mRNA表达相应肿瘤与邻近正常组织与主显示肿瘤组织表达il - 6的mRNA大大高于邻近正常组织()(表2)。PTC患者il - 6 mRNA表达是描绘在图4(一)。GAPDH是用作看家基因和图4 (b)是代表GAPDH mRNA表达的照片PTC的病人。

3.2。PTC患者il - 6与临床病理参数的相关性

如表所示3发现,循环il - 6水平明显高于男性患者()和PTC患者有大的肿瘤大小(),存在转移()和extrathyroidal延长肿瘤()相比,它们各自的同行。此外,il - 6蛋白表达的患者被发现明显高于大肿瘤大小(;;),在PTC病人显示肿瘤的荚膜入侵(;;),在那些拥有extrathyroidal延长肿瘤(;;)与各自的同行。此外,曼惠特尼以及显示il - 6 mRNA表达主要肿瘤没有任何明显的联系的研究临床病理的特点。另一方面,il - 6 mRNA表达对应的相邻正常组织明显高于中较小的肿瘤大小()和残留病的患者()比那些大的肿瘤大小和患者显示没有残留病,分别。

3.3。协会的il - 6与无病和PTC患者的总生存期

kaplan meier生存分析是评估在PTC病人DFS和操作系统。中位数的值il - 6水平传播,国税局得分中值tumoral蛋白表达,和il - 6的中值价值mRNA表达被用作截止值将PTC患者分为低(≤值)和高(>中值)表达组,分别。生存曲线的差异进行了分析使用日志等级测试。循环il - 6是重要的预言者操作系统(日志等级= 4.77;df = 1;)(表4(b),图5),而不能够预测DFS的PTC的病人。此外,kaplan meier生存分析和日志等级测试显示,无论是tumoral蛋白表达和il - 6 mRNA表达在初级肿瘤或邻近的正常组织能够预测DFS PTC病人(表或操作系统4(一)和4(b))。

3.4。组间关联之间循环的il - 6水平,其蛋白表达,mRNA表达PTC的病人

在PTC患者中,il - 6的循环水平没有显著相关性的tumoral蛋白表达(,)或与原发性肿瘤的mRNA表达(,)或邻近的正常组织(,)。此外,非参数枪兵的相关性显示显著正相关,il - 6蛋白表达与il - 6在PTC的主要肿瘤患者(mRNA表达,观察),而没有这样的协会与il - 6 mRNA表达在邻近的正常组织(,)(表5)。

4所示。讨论

il - 6是一种最广泛研究细胞因子在各种疾病包括癌症。作为甲状腺关心它的作用,目前的研究表明显著高于良性的循环il - 6水平以及PTC患者比健康的人。这一发现进一步支持的ROC曲线表明,il - 6可能是一个潜在的标记区分良性甲状腺疾病患者,PTC病人健康的人。此外,它还可以有效区分良性甲状腺疾病患者和PTC。类似于现在的发现,Bartalena等人报道增加血清il - 6在多结节甲状腺肿和他们认为它作为一个标记的甲状腺破坏性炎症过程28]。最近,Provatopoulou等人也显著高于良性甲状腺患者的血清il - 6水平条件下,甲状腺癌,与健康对照组相比(29日]。也也发现升高血清il - 6水平在慢性肝病患者包括肝硬化和肝细胞癌(30.]。Giannitrapani等人报道,肝细胞癌患者il - 6水平显著高于肝硬化患者(31日]。这和当前的结果相似,中山教授等人也表明增加结直肠癌的血清il - 6水平与腺瘤患者(32]虽然Szkaradkiewicz等人表明,il - 6水平升高在炎症性肠病和结肠直肠癌患者(33]。多项研究一直报道,与健康对照组相比,循环的il - 6水平明显高于在不同恶性血液病患者结直肠癌(33- - - - - -36],乳腺癌[37- - - - - -40[],胰腺癌41),胃食管肿瘤(42),胃癌43),而非小细胞肺癌(44]。此外,太阳等人也发现,il - 6能够促进鼻咽癌扩散(45]。

进一步说,在目前的研究中,当血清il - 6与PTC患者的各种临床病理的参数,它是指出,il - 6水平呈显著正相关与大的肿瘤大小、出现远处转移的诊断、肿瘤和extrathyroidal扩展。此外,男性患者比女性患者主要是更高水平的il - 6。在他们的研究中,萨尔加多et al .,他et al .,: Dethlefsen et al ., Tripsianis et al ., Sanguinetti等人表明,il - 6的upregulation假定一个角色在乳腺癌细胞恶性特征,高血清il - 6水平与乳腺癌患者的不良预后[40,46- - - - - -49]。数据从流行病学研究也支持提升的贡献作用的积累循环在晚期肿瘤患者il - 6阶段,各种癌症的积极行为,如非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌和肾细胞癌(11,35,39,50- - - - - -54]。il - 6已涉及作为自分泌促进肿瘤生长等多种人类癌症胆道上皮癌症、多发性骨髓瘤,和前列腺癌55,56]。Knupfer和Preiss显示更高的il - 6水平明显与肿瘤大小有关,转移阶段,和减少结直肠癌患者的生存34]和艾哈迈德等人已经证明了其与肿瘤大小在乳腺癌患者37]。可以通过这些观察结果表明,循环il - 6可能是来源于溢出il - 6产生的肿瘤协会特此解释高il - 6水平与大的肿瘤大小和extrathyroidal延长肿瘤的存在。

目前的研究还表明,高循环的il - 6水平明显与贫穷有关操作系统在PTC的病人。中岛美嘉等人报道il - 6在前列腺癌患者独立与生存相关(57]。其作为一个独立的淋巴瘤患者预后的负面因素已经被El证实远et al。58,赖昌星等人报道,il - 6可能是患者预后标记霍奇金病或B-chronic淋巴细胞性白血病(59]。舒尔茨等人已经证明了循环il - 6作为一个独立的预后的生物标志物,操作系统在局部晚期或转移性胰腺癌患者60]。il - 6扮演重要角色甚至预后因子在胃癌侵袭转移和高水平的循环预测短生存(61年,62年]。研究人员已经观察到血清il - 6浓度与进展相关,组织学分级和肠壁入侵63年,64年)以及肿瘤大小和短生存期结直肠癌的65年]。最近,陆等人建议使用血清中il - 6浓度作为结直肠癌复发的可能性的指标(66年]。

进一步说,当前的研究观察到显著更高的细胞质表达il - 6蛋白的PTC的主要肿瘤患者比良性甲状腺疾病患者的病人。超表达的il - 6在PTC患者显著线性相关和大肿瘤大小、荚膜入侵和extrathyroidal肿瘤的延伸。符合目前的发现,il - 6表达的胞质染色模式也观察到在卵巢癌67年),肾细胞癌(68年),结肠直肠癌(50),和胃癌61年]。il - 6的表达也被观察到在原发性肿瘤组织中高于邻近的正常组织在前列腺癌(69年],乳腺癌[70年),食管鳞状细胞癌(71年,72年)以及胃癌(62年,73年]。此外,德普纳等人发现,il - 6表达强烈调节从良性肿瘤高度恶性发展,转移的人类皮肤鳞状细胞癌(74年]。il - 6的表达增加免疫反应性更频繁地在口腔鳞状细胞癌患者中观察到高级阶段,颈部淋巴结转移或远处转移(75年]。此外,il - 6表达显著增加在晚期胃癌的早期阶段相比(73年[]和结直肠癌患者50]。然而,Paule等人没有发现显著差异在肾细胞癌肿瘤大小或年级有或没有的表达il - 6 (68年]。而且在目前的研究中,il - 6蛋白的表达并没有一个明确的角色在PTC(列车自动控制系统)患者的预后。类似于目前的观察,il - 6表达的主要肿瘤卵巢癌和胆囊癌症患者未能显示与预后显著相关性(67年,76年]。矛盾,il - 6表达被发现与OSCC患者的不良预后显著相关(75年,77年),食管鳞状细胞癌(72年),结肠直肠癌(50)和卵巢癌23]。在研究结直肠癌涌et al .,组织il - 6的表达没有与血清il - 6水平,这是与目前的发现(50]。

此外,在目前的研究中,il - 6 mRNA在PTC的主要肿瘤组织高表达患者比对应的相邻正常组织。类似的结果在食管鳞状细胞癌(已报告71年)和结肠直肠癌32,66年]。此外,Sanguinetti等人表明,从节点mammospheres浸润性乳腺癌组织表达il - 6的mRNA水平高于mammospheres从匹配非肿瘤引起的乳腺(49]。在目前的研究中,主要肿瘤的mRNA水平并没有与任何相关临床病理参数或PTC患者的预后,但其水平在相应的邻近正常组织明显高于在PTC病人有较小的肿瘤大小和手术后残留病的存在。这可能是因为尽管显然看起来正常,生理上可能会有一些恶性变化相邻正常组织这样的病人和字段癌化的概念可能会效仿。此外,观察il - 6之间显著正相关蛋白质和PTC的主要肿瘤患者的mRNA的表达。Basolo等人报道的数据和最近等人的支持,组织il - 6表达与攻击性在PTC (78年,79年]。此外,Basolo等人il - 6表达的差别表明,对这些可能代表未分化甲状腺癌的标志(78年]。此外,它也表明,某些多态性基因编码il - 6与PTC的风险相关(80年]。目前,人源化抗il - 6受体单克隆抗体叫已经采用一线生物治疗治疗严重类风湿性关节炎和Castleman病。

5。结论

从目前的研究中,可以明显,il - 6在甲状腺癌进展有一个重要的角色,针对il - 6信号可以有助于甲状腺癌患者的临床管理更具侵略性肿瘤的特征。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作是财务支持的古吉拉特邦癌症协会(GCS),这是GCRI / GCS伦理委员会批准。