营养状况和体液免疫应答疟原虫疟原虫在孩子6-59个月大

抽象的

疟疾是非洲发病率和死亡率的主要原因。孩子们主要暴露于这种疾病;许多研究研究了儿童营养不良与疟疾发病率或感染之间的关系。少数研究证明了儿童营养不良和特定反的相互作用疟原虫疟原虫免疫反应。这项研究的目的是调查的营养状况和铁的总抗的影响疟原虫疟原虫生活在Gado-Badzéré难民营的儿童的IgG水平。2017年8月至11月期间，我们在喀麦隆东部地区的Gado-Badzéré难民营进行了一项横断面研究。从医疗中心招募6 - 59个月的发热儿童。采用标准化数据收集表记录数据，并采用SPSS和WHO Anthro软件进行分析。ELISA法检测总抗pf 3D7总IgG水平，比色法检测总铁水平。本研究共纳入83例6-59个月的患者。疟疾和营养不良的患病率分别为47%和31%。与感染儿童相比，未感染儿童急性营养不良的复发率在统计学上较低。感染倾向于对抗体水平有显著影响疟原虫疟原虫儿童的抗体。此外，营养状况和血清铁水平对儿童的抗-PF的IgG没有显著影响T水平。疟疾和营养不良留在加多-badzéré难民营真正的公共健康问题。人口的营养价值的知识将是非常有益的建立适当的健康计划。因此，我们建议进行更多的标准化研究，以突出营养和微量营养素对免疫状态的影响。

1.介绍

疟疾是由感染的雌性叮咬传播给人类的一种寄生虫病按蚊蚊子。在五个品种的疟原虫，疟原虫疟原虫在撒哈拉以南非洲地区最普遍的疟原虫，占估计疟疾病例99.7％在2018年[1］．世界卫生组织(世卫组织)的估计表明，2018年所有年龄组的新增疟疾病例超过2.28亿例，死亡40.5万人[1］．它是在撒哈拉以南非洲的发病率和死亡率的主要原因;全球的疟疾病例93％发生在撒哈拉以南非洲独，其次是东南亚地区（3.4％）和世卫组织东地中海地区（2.1％）1］．在喀麦隆，2017年疟疾流行率估计为27% [2］．疟疾是地方病区域贫血通过寄生的红血细胞的破坏的重要原因，增加的感染清除，并且由脾脏，细胞因子诱导的dyserythropoiesis未感染的红细胞，并可能降低膳食铁吸收[3.］．人们强调，铁水平通过与免疫系统和寄生虫的相互作用影响疟疾感染的外观和进化[4- - - - - -7］．许多研究已经调查了儿童营养不良和感染的任疟疾发病率或强度（4,5）之间的关系。相比之下，只有少数的研究探索了儿童营养不良和特异性抗之间的相互作用疟原虫疟原虫（抗PF）的免疫反应。此外，这些研究的结果相互矛盾[8］．考虑到Chiabi等人在2014年进行的调查结果，Gado-Badzéré难民营是疟疾流行率高(39%)的地区之一，营养不良也很高(15%)[9］．为了知道是否有营养状况和IgG生产这方面的关系，我们进行了一项研究，调查的营养状况对总抗的影响疟原虫疟原虫生活在Gado-Badzéré难民营的儿童的IgG水平。

2.方法

2．1．研究设计与人群

2017年11月至12月期间，我们在喀麦隆东部地区的Gado-Badzéré难民营医疗中心开展了一项横断面研究，该难民营位于距中非共和国边境75公里处的lome -et- djerem省。我们纳入了所有在Gado-badzéré医疗中心就诊的6 - 59个月发热儿童。本研究未采用任何非纳入或排除标准。抽样是使用方便的非概率技术进行的，只考虑那些符合上述标准的儿童。样本量估计公式如下(n = D（（Zα.+ Zβ）² ∗ (P1 (1−P1) + P2 (1−P2))/(P2–P1)²如Magnani(2001)所述[10.]，其中P₁代表疟疾在加多-badzéré难民营和P的估计患病率₂代表严重急性营养不良的本阵营估计患病率。

通过会诊期间收集的人体测量数据进行营养评估。体重测量使用婴儿秤(SECA，德国汉堡)，体重在16岁以下的儿童和电子秤(Téfal，法国巴黎)。对2岁以下的儿童进行横卧长度测量，而对超过该年龄的儿童进行站立高度测量。采用ANTHRO和ANTHRO PLUS程序计算体重指数(BMI)(11)。年龄z得分低于- 2的BMI被定义为营养不良。生长速度以厘米/年衡量，定义为12个月期间的最终高度和初始高度之间的差异。根据世界卫生组织各年龄层的标准，将每个人划分为发育充分或发育不充分[12.］．

2.2。收集和处理血液样本

为评估疟疾流行情况，收集了疟疾快速诊断试验(RDT)，并通过厚/薄涂片验血证实了阳性结果。

如Maketa等人所述，在承载患者识别码的相同载玻片上制备血液涂片。（2015）[13.］．铁浓度在使用Biolabo®装置套件（SFBC，法国）在现场收集并存储在不含抗凝剂的真空采血管静脉血的实验室测量。

２.３.培养的寄生虫

疟原虫疟原虫菌株3D7中培养，如先前描述的14.］．更准确地说，培养使用基础培养基:RPMI 1640 (1x)， 500 ml，含谷氨酰胺(0.5%)、葡萄糖(20%)和碳酸氢钠(20 mM)。完整的培养基由457.3 ml RPMI加入42.7 ml补体(12.5 ml HEPES 23 mM + 5ml hypoxantine1x + 200)组成μ.l庆大霉素50μ.g/ml + 25 ml albumax 10%). An equal volume of complete medium was added to the washed group O blood (RBC 50% RPMI). In parallel, the parasites thawed in the water bath were then transferred into a 15 ml falcon tube. Five to seven drops of 12% Nacl were added to this tube and then left to rest for five minutes and centrifuged at 2500 rpm for four minutes. Then, 4.5 ml of Nacl 0.9% glucose 20% was added, mixed, and centrifuged for four minutes at 2500 rpm. After this preparation of the parasite, 5 ml of complete medium was added, mixed, and transferred to a Petri dish. Finally, 300 μ.加RBC L 50% RPMI混合。孵化是在一个罐子里进行的。对培养菌进行监测，直到获得8-10%的寄生菌血症。

２.４.总蛋白的提取疟原虫疟原虫菌株3D7

This step consisted initially in centrifuging the culture at 3000 rpm for five minutes at 4°C and rejecting the supernatant. The tube was washed with 10 ml of PBS 1X. Then, we suspended again the product in a mixture of PBS 1X and a 0.1% saponin solution in the PBS with equal volume. This suspension was incubated for ten minutes at 4°C. After correctly homogenizing and vortexing, the mixture was centrifuged at 4500 rpm at 4°C for ten minutes. The supernatant obtained was discarded, and the pellet was washed three times with the refrigerated PBS. A preparation of parasite lysis buffer and protease inhibitor (10X) was added to the tube, five times the volume of the pellet. This mixture was carefully vortexed for three minutes and then centrifuged for 15 minutes at 40°C at 10,000 rpm. The supernatant containing the total proteins ofP. falciparum.3D7终于收集和量化。

2．5．总蛋白提取液ELISA测定疟原虫疟原虫菌株3D7

Each well of the plate has been fixed with 100 µl of total protein extract prediluted in CBS solution (carbonate coating buffer solution: 0.1 M; pH 8.5). The plate was incubated for 16 hours at 4°C after being covered with parafilm paper. The plate was then washed three times with PBS 1X and wrung out on paper. The plate was fortified with 250 μ.BSA / PBS 1X（pH 7.2）中的L和在室温下温育1小时，然后用250洗涤三次 μ.用100μL/孔的PBS吐温0.05％（500 μ.L的吐温20在1L的PBS 1X)。干燥后，培养皿中加入100μ.L/孔稀释血清(1/250)，PBS 1X/Tween 20 BSA (0.1%) (250 ml PBS1 X + 0.25 g BSA + 125)μ.吐温的L）。在室温温育一小时后，将板洗涤5次用250 μ.L/孔的PBS Tween 0.05%。放干培养皿后，我们用100μ.L/孔的1/1000预稀释过氧化物酶标记IgG溶液，PBS/TB (0.1%) (1μ.L conjugated IgG + 10 μ.L PBS /结核病)。室温孵育1小时后，用PBS/T洗涤5次。下一步是用100在黑暗中孵育10分钟μ.L/孔TMB底物溶液(2.2 '，5.5 ' -四甲基联苯胺)的揭示。反应在50秒时停止μ.2M（H的升₂所以₄）1/10硫酸（9 μ.l distilled water mixed with 1 ml of H₂所以₄）.最后用ELISA平板阅读器(Multiskan Microplaque Photometer)读板，测定450nm处的吸光度。

2.6。统计分析

使用Microsoft EXCEL 2010、SPSS version 20.0和WHO Anthro软件对收集的数据进行捕获、存储和分析。我们使用描述性统计来总结定量和定性变量的分布。采用广义线性模型强调营养状况和铁对总抗pf IgG水平的影响。结果用图表表示。这些观察结果被认为对a值< 0.05。

2.7。道德考虑因素

我们的研究从人文和难民署授权N°CMR由区域伦理研究委员会颁发的道德间隙N°0685 / CRERSHC / 2017年受益/ HRC / MGA用于我们融入加多-Badzéré/ 2017年/ 04难民营，以保证我们研究的透明度，避免学术不端行为。我们确保所收集信息的保密性和匿名性保持在数据收集和分析的时间。

3.结果

3.1。研究人群的一般特征

3.1.1。一般信息

共有83个例研究对象。女孩与男孩的45％相比，代表了我们人口的55％。从51到59个月以下的孩子在我们的研究群体中最有代表性的年龄组。我们观察到的儿童的，超过70％的发热（高温度高于37.5℃）（图1）.

3.1.2。该研究人群的营养状况评估

儿童的比例高了z评分<-2，分别为36.1％，20.5％，36.1％，34.9％，34.9％，28.9％，而28.9％，哈兹，Waz，Baz和Muacz。figure2显示了这些不同的分布z得分在人口根据世界卫生组织的标准。参考群体出现在绿色和红色调查人口。难民儿童不得不低于世界卫生组织标准的营养状态。急性（WAZ）和慢性（HAZ）营养不良是男生比女生有统计学更多复发（图3.）.无显著差异按年龄观察。

3.1.3。简介疟原虫疟原虫感染

疟疾患病率在我们的研究人口的47％。年龄和一些人体测量参数（WHZ，HAZ，HAZ，BAZ和MUACZ）对本病的发生无显著影响（ ）.另一方面，我们观察到，与感染儿童相比，未感染儿童的急性营养不良复发较少(图)4）.

3.1.4。总反疟原虫疟原虫免疫球蛋白水平

对于免疫球蛋白测定，共44个样品通过ELISA法进行分析，以确定总的抗疟原虫疟原虫IgG。抗的平均疟原虫疟原虫免疫球蛋白tended to be higher in children with WHZ and BAZ > −2, respectively, compared with those in whom these anthropometric parameters were <−2 (Table1）.表格2代表已知的营养或感染状态的儿童风险评估有低于估计的阈值的IgG。Children with WHZ, HAZ, WAZ, and BAZ scores > −2, respectively, were more likely to have anti-疟原虫疟原虫与这些参数<−2相比，IgG低于阈值。然而，MUACZ评分为> - 2的儿童和血清铁水平为>0.5的儿童更不可能有抗疟原虫疟原虫免疫球蛋白below the threshold value compared with those with a MUACZ score of < −2 and those with serum iron levels <0.5, respectively. However, these risks were not statistically significant ( > 0.05).疟原虫疟原虫感染倾向于降低患者产生抗IgG水平的风险疟原虫疟原虫低于阈值（RR 0.125; 95％CI 0.014-1.151;= 0.06)。

4。讨论

一共有83名儿童在我们的研究中招募。这项研究的主要限制是样品，这是不显著的大小。此外，我们承认，跨sectionalnature不是很合适提请我们的结论。纵向设计，与感染和营养状况的IgG变化趋势的评估会更合适。此外，补充孩子在学习中列入一个可能的混杂因素。在这项研究中招募的83名儿童中，女孩的比例是一样的男生。这一发现是类似于Chiabi等人。（2016），谁，在2014年，发现男孩在加多-Badzéré难民营在各种条件下咨询了536名儿童的女孩之间人数相等[9，10.］．在我们的研究人群中，疟疾患病率为47%;这略高于Chiabi等人(2016)(39%)在不同流行病学时期(6月)[9］．事实上，我们的研究是高雨季（11至12月），与六月份相比，高发期疟疾流行的这恰好是高患病率的另一期（4月至5月）结束，其标志期间进行。孩子们，以及人体测量参数，如WHZ，HAZ，BAZ和MUACZ的年龄，对本病的发生无显著影响。该结果证实了这些O'Brien等的。（2018），谁也发现了一些人体测量参数（HAZ，WAZ，WHZ和MUACZ）和疟疾感染[之间没有关联15.］．然而，我们注意到，急性营养不良（WAZ）孩子们似乎不太开发的疾病。这个结果与在人类中进行的，诸如通过Ndeba等人进行的一个一些研究提出的意见一致。（2008）在DRC，这表明和营养不良之间的逆关联疟疾感染率[16.］．然而，这种保护作用的确切机制仍难以解释。据O'Brien等。（2018），这种关系的潜在机制是双重的，即，通过母亲和看护者的保护有些营养不良的人的行为和生物通过营养状况的免疫调节作用或营养不良的儿童产生一定的细胞因子的能力增加响应于刺激由疟疾特异性抗原[15.］．在这项研究中，营养不良的难民儿童补充多种维生素可能会在其影响积极影响这些孩子的免疫系统。这些维生素补充剂刺激导致的保护作用在这些儿童免受疟疾观察到免疫系统。

感染Plamodium恶性疟原虫倾向于对抗抑郁水平有显著影响疟原虫疟原虫儿童的抗体。这一结果与Fillol等人(2009)的研究结果一致Plamodium恶性疟原虫与感染强度呈正相关[8］．事实上，免疫反应对抗疟原虫疟原虫感染可能与儿童的饮食没有密切关系。结果表明，人体测量参数(WAZ、HAZ、WHZ、WHZ、BAZ和MUACZ)对抗pf IgG均无显著影响T儿童的水平。营养状况和免疫反应之间的联系疟原虫疟原虫从一项研究到另一项研究都有很大的争议[8，17.，18.］．菲洛尔等。（2009）指出，只有生长迟缓（HAZ）的影响特定裂殖体IgG水平和重量损失对IgG的水平没有影响[8］．然而，没有协会被发现特异性抗体和慢性或急性营养不良之间的儿童在坦桑尼亚[18.］．从一项研究到另一项研究观察到的差异可能是由于在不同研究的设计中观察到的差异。

结论

由于这项工作，可以看到，疟疾和营养不良仍然是Gado-badzéré难民营真正的公共卫生问题。疟疾和营养不适率在这一人群中很高，统计上未受感染儿童的急性营养不良发生率低于受感染儿童。感染倾向于对抗体水平有显著影响疟原虫疟原虫儿童的抗体。了解人口的营养状况对制定适当的保健方案有很大的帮助。因此，我们建议进行更多的标准化研究，以突出营养和微量营养素对免疫状态的影响。

数据可用性

支持这一研究的结果的数据可从根据请求相应作者常数阿纳托利Pieme。

利益冲突

作者宣布没有利益冲突。

致谢

如果没有联合国难民署梅甘加分代表团团长MAKOUAKA Charles博士的参与和支持，这项工作就不可能完成，因为他在Gado-Badzéré难民营内给予了研究授权。作者感谢AMA MOOR Vicky教授的指导。他们还感谢非政府组织AHA、CPC免疫实验室、CIAB-EXACT、联合国难民署和BIABI A BITE Marie的所有工作人员的技术支持。

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