我们忽视了非结核分枝杆菌作为实验室污染物吗?是时候重新评估事情了

抽象的

目标．Nonfululous的分枝杆菌（NTM）发病率是全球崛起的，包括结核病流行区域。它们应该迅速鉴定到物种水平，并且应仔细地分化为污染，殖民化或疾病。本研究旨在确定患有患病病例的患病率和临床病变概况。材料和方法．在液体和固体培养基上进行培养物。通过聚合酶链反应（PCR）限制性分析（PRA）和基因测序鉴定NTM。使用EPI-INFO 7分析数据。结果．在1042个加工标本外，16％的肺结核复合物为阳性，临床上显着的NTM为1.2％。M.细胞内是孤立的最常见的物种。NTM主要在室外（92％）进行治疗（92％），涉及更多的胶质系统（62％）和41-60岁的较高年龄（69％）。没有显着因素被视为临床，放射性地，并与NTM感染生物化学相关。结论．我们的研究突出了结核分枝杆菌和NTM之间的早期诊断和分化的重要性，因此这些NTM仅仅是环境或实验室污染物的常规诊断程序。

1.介绍

结核以外的分枝杆菌(MOTT)又称非结核分枝杆菌(NTM)和非典型分枝杆菌，是一种通常存在于环境土壤和水中的生物[1］．自20世纪50年代以来，他们被认为是人类疾病的原因。那时，NTMS分离罕见，几乎完全发现患有潜在疾病的患者[2］．最近的报道表明，即使在健康的人中也是在崛起的肌电子。NTM的分布是非均匀，似乎在地理上或环境依赖性，但仍然仍然定义不足。Hoefsloot等人全面地研究了NTM分布的地理差异。在欧洲，美国，澳大利亚和亚洲大陆的几个部分[3.］．

由NTM引起的疾病是不可通报的。NTM是重要的病原菌，因为其抗结核药物(ATT)耐药性高[4，5］．认识到自20世纪80年代以来，在未被识别的人群中报告的病例以来，识别疾病和流行病学的变化模式，我们开始研究了我们区域中这种疾病的负担[6，7］．

NTM难以根据分枝杆菌复合体（MTBC）的临床介绍来区分;因此，有必要鉴定NTM，因为特别是来自肺命点的分离并没有建立诊断。呼吸样品随访呼吸样品与临床症状相关，使得可以制定具体治疗[5］．The aims of our study were (1) to determine isolation rate from pulmonary versus extrapulmonary sites, (2) to determine the patients’ demographic characteristics and risk factors, (3) to determine effect of liquid versus solid culture on the isolation rate of NTM, and (4) to assess the disease incidence, the mycobacterial species involved, and the clinical conditions they caused.

2.材料和方法

这项前瞻性研究是在2013年7月至2014年6月的一年时间里，在印度喜马偕尔邦西姆拉三级护理医院对疑似肺部和肺外分枝杆菌感染患者的临床样本进行的。

２．１．研究的定义

对于肺部标本，根据ATS 2007指南对定植和疾病进行了区分[5］．在外肺样本中，从无菌位点以及从非贫瘠位点分离的单一分离以及临床关联的两次或更多次的分离，以及临床相关性被视为确认疾病[8］．

2．2．入选标准

本研究纳入临床怀疑肺部和肺外分枝杆菌感染的住院患者(IPD)或门诊患者(OPD)的样本。

2．3．样品收集和运输

痰，支气管肺泡灌洗（BAL），体液和吸气（腹水龙头，胸腔龙头，滑膜，漏斗，脓液放电，胃吸出生物和脑脊液（CSF）和脑膜液（CSF）连续三天收集三天的清晨整个尿液样本在实验室中收到无菌宽口螺钉盖上封盖容器。

2．4．样品处理

收到的样品按照标准方案进行消解、去污和浓缩处理[9］．将浓缩样品分为四个部分。(我)第一部分：将该部分接种到MgIT 960管中，后制造商的说明书和管进入仪器[10］．从正管中，为Ziehl-Neelsen（Zn）和克的染色制备涂片。如果抗酸杆菌(AFB)阳性，则报告为仪器阳性和AFB阳性。然后用免疫层析法(TBcID)筛选生产MPT 64抗原[11］．发现MPT 64抗原阳性的那些被标记为MTBC，并将那些阴性标记为NTM，并通过聚合酶链反应（PCR）限制性分析（PRA）进一步鉴定。PRA的协议是由Theresa B，泰勒和同事描述的协议[12］．用Tb 11和Tb 12引物扩增hsp65区域。hsp-65 PCR产物进行酶切Bsteii和有III酶。PRA算法用于识别隔离物。通过在研究生后医学教育和研究所测序，Chandigarh研究所进一步证实代表性标本。如果存在除抗酸杆菌外的微生物，则报告为仪器阳性、afb阴性和污染。如果在涂片上没有存在微生物，则将管子重新入到仪器中。在42天后，将阴性培养物除以“出议定书”。（ii）第二部分:接种于Lowenstein-Jensen (LJ)培养基，37℃培养。在最初的5-7天里每天检查瓶子，然后每周检查一次，直到8周。如果发现有任何生长，涂片，热固定和锌染色确认AFB。(3)第三部分:它被接种到血液琼脂板中，以排除任何污染。（iv）第四部分：涂片，热固定，锌染色，油浸检测。

2．5．统计分析

数据已在电子表格上输入。使用统计软件EPI-Info版本7（7.1.1.0）完成了利息变量的交叉表格。

3.结果

在本研究的1042个样本中，18.6% (n=194)的样本中分离到AFB。MTBC占总分离株的87% (168)，NTM占总分离株的13%(26)。

ZN、LJ和MGIT-960对NTM的敏感性分别为52%、17%和97%。

从肺部位分离的NTM为M。骨髓内切术(5) 62.5%, M。Flavescens.(1) 12.5%, M。Genavense.12.5% (1);Gordonae.12.5%(1)。

肺外NTM分离物有6.5% (5)M。intracellulare,2.6%(2)。脓肿,1.3%(1)。Avium，1.3%(1)。mucogenicum,1.3%(1)。austroafricanum，10.4％（8）米gordonae。

有临床意义的NTM分离株占实验室全部NTM分离株的50%(13)。它们汇总在表中1．在有意义的肺分离菌中，62.5%(5)符合标准，即4支痰液和1例BAL病例。在肺外病例中，滑膜液分离物(1)、胸膜液分离物(2)和尿分离物(5)有临床意义。所有患者对人类免疫缺陷病毒(HIV)无反应。

NTM主要在室外进行治疗[92％（12）]，涉及外肺系统更多[62％（8）]，受影响的高龄组[41-60岁（69％）]。结核病的历史存在于31％（4）中，在60％的病例中观察到上肺叶的放射性特征（表2）。

女性占41%(8)，患者主要表现为发热和局部疼痛[46%(6)]。农民占54%(7)。红细胞沉降率(ESR)提高54%(7例)，白细胞总数(TLC)均正常，淋巴细胞增多1例(8%)。

4。讨论

结核流行地区分枝杆菌感染呈上升趋势，且对常用抗结核药物具有耐药性[13］．在我们的研究中接受的标本中，临床意义显著的NTM患病率为1.2%。由于诊断不足和认识不足，分枝杆菌病的负担仍然不明确。发展中国家缺乏设施和专门知识，经常忽视外围水平的这些感染。

我们观察到NTM对肺外系统的累及程度高于肺系统，但其他研究人员主要发现肺系统累及程度更高[14- - - - - -17］．在我们的研究中，最常见的NTM患者年龄为41-60岁(69%)。其他作者发现平均年龄在43岁到59岁之间[15- - - - - -17］．据推测，免疫衰老导致老年人免疫反应减弱，从而增加了感染的易感性，包括分枝杆菌病[18，19］．

NTM作为条件致病菌引起感染的倾向较小。在Dirac等人的一项研究中，免疫抑制和既往肺部疾病是分枝杆菌病的相关危险因素[20.］．但我们研究中的所有患者都是HIV不反应。在我们研究中肺组织病例中发现的最常见的危险因素在我们的研究中预先存在于结核病历史上的共用肺部条件。未发现烟草或酒精使用统计学与分枝杆菌病相关。在早期的研究中报道了患者患者患者患者患者的高危NTM感染的风险较早，支持我们现在的观察[14，16］．如前所述，分支杆菌病在健康个体中并不罕见[16］．没有识别出危险因素的病例可能有独特的遗传易感性或NTM环境暴露[21］．因此，治疗医师应在免疫活性人的鉴别诊断中保持菌杀症。

Costa等也观察到NTM的肺部感染主要累及肺上叶[22］．因此很难将这种情况与肺结核区分开来，因为肺结核累及肺叶较多。NTM感染者住院率较低。这可能是因为NTM的致病性较轻。虽然ESR在NTM感染的诊断中是一个非常模糊的标准，但可以作为一个有贡献的研究。NTM感染患者血细胞计数既不增加也不减少。因此，很难将血液学实验室参数与NTM感染联系起来。

这项研究有很少的限制。首先，NTM分离物的患者的数量很小，以得出统计差异。其次，正如这是基于三级护理医院的研究，结果可能无法代表无法参加此医疗保健设施的人口的结果。因此，结果可能不会推广到社区。

结论

医生有必要了解适当的NTM诊断。NTM应区分定殖和疾病。通过快速分子生物学方法，我们可以区分NTM和MTBC，从而帮助临床医生在早期机构特异性治疗。PRA具有成本效益，可以在单一实验中识别许多分枝杆菌种类。在实验室中，这些分离物通常作为环境污染物而被忽视。人们应该意识到，即使在免疫功能良好的患者中，这些感染的范围也在不断扩大，应该进行更多的研究来评估这些分离物的重要性和相关性。

数据可用性

支持本研究结果的数据可根据要求从通讯作者处获得。

利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

参考

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