同时测定芦丁,毛地黄黄酮、槲皮素和桦木酸的提取Disporopsis pernyi UPLC (Hua)一昼夜的

文摘

Disporopsis pernyi(华)一昼夜的,属于属Disporopsis已被广泛用于治疗异常出汗,慢性咳嗽,等等。超高效液相色谱(UPLC)分析了芦丁的决心,毛地黄黄酮、槲皮素、桦木酸Disporopsis pernyi(华)一昼夜的根源。UPLC分析是由使用Shim-pack XR-ODS列与流动相梯度洗脱的乙腈和水含0.1%甲酸和0.2毫升/分钟的流量,发现在210年,254和280海里。该方法精确,相对标准偏差< 2.0%。这四个组件的复苏Disporopsis pernyi(华)一昼夜的100.9%和98.5之间。芦丁的平均含量,毛地黄黄酮、槲皮素和桦木酸根分别为5.63,2.51,3.87和2.41μ分别g / g。该方法准确、重现性好,它可以提供一个定量的质量控制的基础Disporopsis pernyi(华)一昼夜的。

1。介绍

Disporopsis pernyi(华)一昼夜的,这属于Disporopsis属百合科的家庭,主要生长在南亚地区如越南、老挝、泰国和中国的长江流域。这是一个众所周知的传统中药已广泛用于治疗异常出汗,慢性咳嗽,妇女产后虚弱和不规则的月经周期,等等(1]。的药用价值Disporopsis属植物没有得到太多的关注,直到21世纪的开端。植物的根中富含生物活性物质可能有很大的药用价值,可用于高血压咳嗽、炎症和肿瘤。研究表明,总共4的多酚类化合物中提取芦丁、木樨草素、槲皮素、桦木酸和酚类化合物的贡献显著的抗氧化和抗菌活动(2,3]。芦丁具有抗高血压效应和糖尿病效应(4,5]。毛地黄黄酮具有抗炎、抗菌、抗癌特性已被用于镇咳和祛痰。此外,它具有潜在的抗艾滋病病毒效果(6,7]。槲皮素可用于镇咳化痰和高血压和高血压;同时,它具有神经保护和抗增殖活动(8,9]。桦木酸可以杀死人类黑色素瘤细胞在不伤害健康细胞和抑制hiv - 1感染。此外,最近的研究表明,它还cerebroma和leukocythemia[的抑制效应10,11]。

这四个化合物是主要的生物活性提取物的组成Disporopsis pernyi(华)一昼夜的根源。到目前为止,没有报告的内容4的多酚类化合物Disporopsis pernyi(华)一昼夜的。因此,重要的是要确定四个组件的内容。这四个组件被超高效液相色谱量化(UPLC)。UPLC工具是一个简单和快速定量测定的生物活性成分在制药行业12- - - - - -14]。毛地黄黄酮芦丁,槲皮素,桦木酸是强大的生色团,这使得紫外线检测简单和可行的15- - - - - -18]。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

HPLC-grade甲醇和乙腈买来卡列登(加拿大)和甲酸是来自迪玛公司(中国,北京)。水是中国从杭州娃哈哈公司购买。毛地黄黄酮芦丁,槲皮素,桦木酸购买国家研究所的控制在中国的制药和生物制品。标准化合物的纯度是≧98%;它们的化学结构如图1。Disporopsis pernyi(华)一昼夜的收集来自松桃苗族是中国的贵州省。

2.2。制备标准样本股票的解决方案和解决方案

芦丁的标准股票的解决方案,毛地黄黄酮、槲皮素和桦木酸溶解在甲醇,在1.0毫克/毫升的浓度。标准的解决方案都是透过0.22μm注射器过滤器。

粉的提取进行了使用5.0 g的根源。这是溶解在50毫升的70%乙醇溶液和回流60分钟。过滤和旋转蒸发后没有乙醇气味,50毫升乙酸乙酯加入和提取做了三次。提取和洗涤液和过滤,然后蒸发干燥相结合旋转蒸发器减压。干提取是溶解在甲醇和5毫升容量瓶稀释。示例解决方案都是透过0.22μm注射器过滤器。

2.3。色谱条件

是岛津制作所使用的高效液相色谱系统Nexera X2 UPLC(日本京都)色谱仪配备了溶剂交付单位(LC-30AD),一个autosampler (SIL-30AC),一个列烤箱(CTO-20A),一个脱气器(DGU-20A5R),和一个光电二极管阵列检测器(SPD-M20A)。分离是进行Shim-pack XR-ODS列(2.0×75毫米,1.6μm;日本岛津公司合作,日本)。列温度设定为30°C。水的流动相由含0.1%甲酸(A)和乙腈(B)流动相的组成为5%。(B) 0 - 2分钟,5% - -10%为2 - 4.5分钟(B), 10% - -40%为4.5 -11分钟(B), (B) 11 - 13分钟40% - -60%,60% - -70%为13 - 14分钟(B), (B) 14 - 16分钟70% - -80%,80% - -90%为16 - 17分钟(B), 90% (B) 17 - 20分钟,3分钟,然后举行reequilibrated 5% (B)直到最后的分析。流量为0.2毫升/分钟和注射量是5μl .所有标准和样本的检测波长的紫外线在210,254和280海里。

2.4。方法验证

2.4.1。线性

4标准化合物准确称重和溶解在甲醇准备股票的解决方案在1.0毫克/毫升的浓度。股票的解决方案的化合物连续稀释构造校正曲线。化合物绘制的稀释浓度与峰面积校正曲线和线性相关系数的测量。

2.4.2。LOD和定量限

一式三份空白样品进行了分析和噪声峰的面积计算的响应。LOD和计算定量限LOD = 3.3×SD /年代和定量限= 10×SD /年代,SD响应的标准偏差年代校准曲线的斜率。

2.4.3。精度

精度计算通过分析样本提取含有低和高浓度的化合物。精度是由相对标准偏差(RSD),这是使用方程计算RSD =(标准偏差/意味着)×100。精度测量三次在一天之内(盘中精度)和连续超过三天(interday精度)。

2.4.4。复苏

方法的准确性是通过恢复测试评估。低和高浓度的化合物添加到样本。恢复计算如下:复苏(%)=((检测浓度−初始浓度)/飙升浓度)×100。

3所示。结果与讨论

3.1。色谱条件的优化

在这个实验中,我们使用PDA检测器可以选择每个波长的色谱图。在我们的研究中,我们考虑了这个问题,大多数组件我们研究也有很好的吸收波长350 nm和370 nm (15,17]。通过对比分辨率和响应在不同波长,结果表明,该决议和反应的四个组件在350 nm和370 nm不如波长210,254和280海里我们选择。同时,我们选择210海里检测桦木酸因其良好的反应。结合文献报道,甲醇-水、acetonitrile-water和methanol-acetonitrile-water检查流动相以及类型(甲酸、冰醋酸)和浓度(0.01%,0.05%,0.1%)的酸。一个Shim-pack XR-ODS列用于同时测定的4个化合物,因为它一直是最常用的化学分析技术通过UPLC草药。结果表明,acetonitrile-water最小干预。峰的分辨率和形状的化合物被认为是更好的指标在0.1%甲酸作为修饰符。峰的形状、分离度、对称因素,和其他因素考虑,乙腈- 0.1%甲酸水溶液被确定为梯度洗脱过程。典型UPLC色谱图所示2。

(一)

(b)

(c)

3.2。方法验证

3.2.1之上。线性回归、LOD和定量限

校准曲线的线性相关系数测量的),它的值从0.9992到0.9997不等,每个化合物。LOD和定量限0.137 - -0.264μ克/毫升-0.881和0.456μ分别为g / mL(表1)。


复合	紫外线的波长	回归斜率	方程的截距	线性范围(g / mL)		LOD (g / mL)	(定量限g / mL)

芦丁	254海里	34.63	−23.36	45.10 - -451.00	0.9992	0.221	0.729
毛地黄黄酮	280海里	45.32	10.61	62.81 - -439.60	0.9997	0.264	0.879
槲皮素	254海里	14.47	−24.34	27.58 - -275.80	0.9993	0.267	0.881
桦木酸	210海里	53.39	8.372	48.34 - -338.10	0.9992	0.137	0.456

3.2.2。精度和恢复

内部和interday精度,所代表的相对标准偏差值,RSD < 2.0%。4化合物的回收率在96.2% - -102.6%,RSD < 2.0%(表2)。结果表明,开发的分析方法是准确和精确的分析4个化合物Disporopsis pernyi(华)一昼夜的。


复合	背景(g / mL)	添加(g / mL)	发现(g / mL)	恢复(%)	相对标准偏差(%)

芦丁	5.63	2.56	8.32	101.6	1.31
		5.13	10.71	99.5	1.58
		7.70	13.55	101.6	0.89
毛地黄黄酮	2.51	1.44	3.94	99.7	1.22
		2.89	5.54	102.6	1.68
		4.34	6.59	96.2	1.06
槲皮素	3.87	1.73	5.42	96.8	1.65
		3.55	7.38	99.5	1.48
		5.19	9.24	102.0	1.37
桦木酸	2.41	1.26	3.58	97.5	0.94
		2.52	4.78	97.0	1.89
		3.78	6.25	101.0	1.78

3.3。量化的4个化合物Disporopsis pernyi(华)一昼夜的

我们开发的方法是应用于确定4个化合物Disporopsis pernyi(华)一昼夜的成功。5.63的计算内容四个化合物μ2.51 g / g为芦丁,μ毛地黄黄酮,3.87 g / gμ2.41 g / g为槲皮素,μ桦木酸g / g。UPLC法更简单、重复和有效比高效液相色谱方法。

4所示。结论

这里提到UPLC法代表一个优秀的技术同时测定芦丁,毛地黄黄酮、槲皮素、桦木酸的提取Disporopsis pernyi(华)一昼夜的根,具有良好的灵敏度、精度和重现性。方法给出了一个决议在四个组件分析时间(25分钟)。此外,该方法可作为质量控制的多酚类化合物Disporopsis pernyi(华)一昼夜的根部,将起到参考作用的多酚类化合物的测定在其他药用植物或制剂。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

承认

这项工作是财务支持的“国家在基础科学人才培养基金”(没有。J1103606)。

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分析方法在化学杂志》上

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