发病率和危险因素刚地弓形虫感染家猫从墨西哥热带地区使用血清学和分子测试

文摘

本研究的目的是确定患病率和相关危险因素刚地弓形虫感染家猫使用indirect-ELISA (IgM和免疫球蛋白)和PCR。样品收集从220只猫梅里达,尤卡坦半岛,墨西哥,进行了分析。急性或慢性病例报道。情况下积极IgM和免疫球蛋白和PCR被认为是慢性感染复发。危险因素(性别、年龄、身体条件、饮食进入狩猎,和家里的猫数量)与多变量分析进行评估,75.5%(166/220)的猫(202/220)IgG-seropositive IgM和91.8%和79%是pcr阳性(173/220)。猫的数量每个家庭和低体况评分与激活有关慢性感染()。得出弓形虫分散在研究人口与几个时间的再感染,因此与卵囊感染存在环境污染和猫有内在关联的因素,增加感染的风险。

1。介绍

弓形体病是世界范围内分布的主要寄生虫人畜共患病细胞内引起的原生动物刚地弓形虫。猫科动物,特别是国内的猫,在疾病的流行病学有一个重要的角色,因为有性和无性繁殖发生在他们,他们排出大量的抗感染和环境卵囊(1,2]。这种寄生虫感染大多数哺乳动物(包括人类)和鸟类中间宿主。在脊椎动物中,食用动物尤其重要,因为他们仅供人类食用3,4]。猫主要摄取时就会感染中间宿主的组织包绕的囊肿啮齿动物和鸟类。人类感染时摄取形成孢子卵囊从土壤中,污染水源,组织囊肿从生的或未煮熟的肉类,或经2,5]。猫经常发生亚临床或无症状感染疾病和非常罕见的发展明显临床症状(6]。弓形体病猫是报道全球seroprevalences从60到90%。这可能是由于不同的诊断技术中使用的每个研究报道,每个地区的文化因素和环境促进感染性卵囊的持久性(2,7]。在墨西哥,报告的猫弓形虫病患病率从9.3%变化到70.8%8- - - - - -11根据该地区]。相关感染的危险因素包括与生肉喂猫(8,10),年龄和性别10),以及获得狩猎(12]。在墨西哥人类弓形虫病的seroprevalence估计为25%13]。在尤卡坦半岛,墨西哥,没有猫弓形虫病的流行病学信息是可用的,尽管存在感染人类,seroprevalence 57.5% (14)和悲剧性的后果与艾滋病患者弓形体病(15]。

有几个确定感染的诊断方法弓形虫。使用最广泛的血清学检测弓形虫病的诊断是间接ELISA (IgM和免疫球蛋白)。此外,聚合酶链反应(PCR)是一个分子的测试可以检测疟原虫的DNA;这是高度特异、敏感和非常有用的血清学测试区分长期一起,急性或重新激活感染。PCR也是一个重要的诊断方法,当病人的免疫系统受损或当抗体滴度没有达到阈值水平的检测16,17]。家猫,几种疾病可能影响整体健康和导致免疫抑制等感染巴尔通氏体属种虫害猫免疫缺陷病毒(fip)和猫白血病病毒(FeLV) [18,19),可能会增加急性弓形虫病的影响(20.,21]。

弓形体病的患病率在猫上的信息是有用的评估环境污染与原生动物和评估它对公共卫生风险。本研究的目的是评估弓形体病的患病率在梅里达家猫,尤卡坦半岛,墨西哥,使用血清学和分子方法,并确定可能的风险因素(性别、年龄、饮食、狩猎、身体条件,和猫的数量/家庭)。

2。材料和方法

2.1。研究区域和人口

进行横断面研究的梅里达,尤卡坦半岛,(19°30′,北纬21°35′,30′87°和90°24′西经)。这个城市的气候特点是温暖半湿润气候的夏季降水和平均气温26°C。相对湿度最高83%,最低61%的高海拔6米(22]。感兴趣的人口是猫(猫属silvestri卡图斯生活在梅里达)。入选标准是注册的猫,任何种族或性别,年龄超过3个月的年龄。

2.2。样本大小

一个试点研究40猫测量特定的抗体免疫球蛋白弓形虫使用一种间接ELISA试验显示seroprevalence 82.5%作为预期的患病率在样本大小的计算。它被认为是无限的猫,置信水平为95%,绝对的准确性为5%,计算样本大小为222只猫(23]。

2.3。收集的样本

231(1 - 3毫升)的血液标本通过刺穿颈静脉和存入两个真空采血管管,没有抗凝,第一个PCR试验和血清学测试的第二个。DNA提取进行商业套件DNeasy血液和组织(试剂盒,猫没有。69 506)。在提取之前,血液进行建议的prelysis塔拉et al。24]。从每个猫DNA提取的平均体积是100μl .样本存储在−20°C,直到进一步的PCR检测。从收集到的样本,11没有可行的诊断测试(负样本为β球蛋白组成型基因PCR)和被丢弃的总共220个样本。

2.4。风险因素

每个所有者,通过问卷调查获得的信息来评估以下风险因素。

的年龄。年龄是决定基于动物的审查或基于他们的牙齿25,26]。动物被认为是在两组:≤1年> 1,直到7年。

性。男性还是女性。

类型的饮食。两类被认为是:猫喂猫只有商业食品喂与商业食品和/或生肉。

进入狩猎。如果猫有打猎。

每个家庭猫的数量。分为一个或多于一个猫在家里。

身体条件。这是分为两组:猫有良好的身体条件和身体条件定期坏(27]。

2.5。间接ELISA试验

特定的IgM和免疫球蛋白抗体的存在弓形虫分别确定了用间接ELISA测试(Human-GmbH,威斯巴登,蒙古包),描述的技术是适应,菲格罗亚等。(28),但使用anti-IgM抗体和免疫球蛋白的猫用辣根过氧化物酶标记(合)(美国CA圣克鲁斯Inc .) 96孔板上涂上用的个寄生虫蛋白质弓形虫。血清样本稀释的比例1:100年磷酸盐(PBS;pH值7.2)。二级山羊anti-IgG和anti-IgM猫合标记抗体的稀释1:5000。从猫展示anti-IgG抗体效价高血清ELISA(1: 1024)和PCR对积极的结果弓形虫被用作积极控制和血清池从10健康猫之前测试通过与ELISA IgM一式三份,免疫球蛋白和PCR作为消极的控制。间接ELISA结果的基础上,受试者被诊断为阳性/阴性为特定的免疫球蛋白和IgM抗体弓形虫。光密度(OD)测定在450 nm分光光度计(Multiskan Multisoft主要EIA)和用于计算百分比积极性(PP)使用公式意味着OD(样本或负控制)除以平均OD值正控制乘以100。积极性百分比15%以上被认为是积极的。

2.6。聚合酶链反应

PCR进行描述(24]。一号(引物5′-AAAAATGTGGGAATGAAAGAG-3′)和Tg2 (5′-ACGAATCAACGGAACTGTAAT-3′),放大的一个片段469 B1基因的碱基对(bp)弓形虫被使用。每个PCR反应进行了最后一个核苷酸浓度的0.4毫米,2.5μ每个引物的摩尔,1.5毫米MgCl²,1 u GoTaq (PROMEGA) DNA聚合酶与其相应的无色缓冲区(1 x) 3μL的DNA从每个猫评估使用,反应完成后在最后一卷25μl .放大条件95°C变性10分钟,其次是35周期为1分钟94°C, 52°C 30秒和72°C 1分钟,和最后一个扩展周期为7分钟72°C。PCR分析了产品在琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭沾1.8%。作为一个积极的PCR控制一个质粒克隆pMOSBlue /弓形虫469/3,包含一个序列469 pb,放大一号及产品Tg2引物使用的寄生虫基因组。

2.7。统计分析

为每个血清学流行或分子及其组合估计结果。由于小数量的情况下,卡方检验和二项逻辑回归进行了IgM,免疫球蛋白和PCR阳性病例。重大风险因素,根据卡方测试,进一步研究使用二项逻辑回归。值被认为是重要的时候。比值比(或)和95%可信区间(CI)也估计。使用SPSS统计分析进行了包17.0 v(美国SPSS Inc .,芝加哥,Il)。

3所示。结果

3.1。患病率

血清学流行弓形虫免疫球蛋白和IgM分别是91.8%和75.5%。一百七十三个样本的DNA测试(79%)放大469个基点片段对应的预期大小B1基因序列具体弓形虫。放大图所示的一个例子1。结果不同的血清学、分子和组合的积极的和消极的情况下表所示1。病例分为急性时只有PCR阳性病人显示IgM + PCR阳性滴度。慢性病例被认为是当患者免疫球蛋白阳性,免疫球蛋白g + PCR阳性,IgM +免疫球蛋白阳性,或IgM +免疫球蛋白g + PCR阳性。积极IgM +免疫球蛋白g + PCR病例(61.4%)、积极IgM +免疫球蛋白g(11.8%)和积极的免疫球蛋白g + PCR(13.2%)最常见的情况。

3.2。风险因素

猫的二项逻辑回归积极IgM +免疫球蛋白g + PCR病例显示与身体条件(fair-poor)和多的存在(表一只猫在家里2)。然而,没有性的变量和类型的饮食协会猫感染弓形虫。也初步卡方测试显示不是猫协会的因素获得狩猎和弓形虫病感染。

4所示。讨论

这项研究的结果表明高感染的猫弓形虫,这表明高环境污染与感染性卵囊。有广泛报道猫弓形虫病患病率的变化,这可能是由于环境、文化、和多样性的分子诊断技术和类型的测量在每个研究(IgM, IgA免疫球蛋白,基因组,等等)。在热带国家如哥伦比亚、泰国和巴西,报道免疫球蛋白seroprevalences弓形体病的猫是45.2%29日),11.0% (30.),40% (31日),分别。在一些地区的墨西哥猫报道阳性率下降28.8%,科利马(9在墨西哥城),21.9% (10在瓜达拉哈拉)和70.8% (8]。本研究记录了seroprevalence最高(91.8%)的免疫球蛋白抗体弓形虫在猫,甚至高于发现在德黑兰,伊朗,一个总体患病率为63% (猫)的报道和野猫感染(90%32]。巴西巴拉那,据报道,84.4%的猫是血清反应阳性的免疫球蛋白(33),这是接近这一研究获得的结果。炎热的夏季的降水和亚热带气候条件巴拉那河类似梅里达市的热带气候,有利于维护可行的卵囊在环境很长一段时间。

在这项研究的流行猫IgM的血清反应阳性的为75.5%。在一项由Kodym et al。34据报道,IgM抗体弓形虫为12 - 18个月可能仍在流通,所以,IgM的浓度不能自己最近感染的指标,相反是信了。在我们的研究中,IgM和免疫球蛋白血清学地位是补充和分子研究更好地确定感染状况。

急性弓形虫病病例的比例在本研究发现(5.9%)只考虑PCR阳性病例(1.8%)+ IgM PCR阳性病例(4.1%)低于8.3%发现Galvan et al。8在瓜达拉哈拉,墨西哥,只考虑IgM抗体。急性病例是在调查研究中不常见的(35)和他们的存在表明持续动态的疾病和高危接触与原生动物的猫。这个流行的病例定义为急性可能取决于猫的机会接触感染中青旅通过受感染的猎物狩猎或食物提供给他们的主人,因此猫的重要性考虑足够的食物。Early-acute病例是那些被PCR在生产任何积极的免疫反应。在这项研究中79%的猫都受到牙病PCR是积极的,但只有1.81%的人在感染初期没有生产的抗体(36)或那些可能的猫免疫系统。Suh和Joo37]报道5.3%的猫都受到牙病PCR阳性弓形虫。然而,李et al。38)最近报道47.2%的积极的猫用嵌套PCR在韩国的条件。

大量的慢性病例应在研究猫的数量。传统上,猫为免疫球蛋白被认为是血清反应阳性的慢性感染(6]。在这项研究中91.9%的猫都受到牙病感染在慢性阶段,但与不同的血清学和/或分子状态。当考虑一个常数暴露在原生动物的免疫反应和循环热可能不同的基因组给结果的各种诊断的情况报告。

当猫是免疫球蛋白与高水平的IgM阳性,但复苏的指标(21]。但他们也可能表明从IgM转向免疫球蛋白周后感染。复活在慢性感染阶段涉及到复活的囊肿和转换bradyzoites个和不一定涉及一个新的enteroepitelial阶段和排泄卵囊的6]。然而,IgM不一定表明近期感染但不同抗体的结合的结果可能是有用的和分子的研究来证实慢性激活阶段;这种寄生虫的再循环血液和血清学测试表明,先前的免疫反应。

大多数猫在慢性阶段在本研究发现IgM +免疫球蛋白g + PCR阳性和提出了命名为慢性激活情况下;这意味着不仅寄生虫传播环境中生产不断接触猫,但有时间的再活化有或没有排泄卵囊的根据其免疫系统。在慢性感染宿主组织囊肿,这些可能破裂并释放bradyzoites循环(39),最终被感染的免疫活性的主机或重新激活免疫抑制动物(40]。

预计猫获得街上更有可能感染和狩猎弓形虫。然而,在目前的研究没有发现协会之间的猫获得比保持室内街道和狩猎。夜间的壁虎Hemidactylus frenatus通常被发现在所有家庭领域的研究由猫和早十感染;这些在一定程度上可以解释结果成立。

在慢性激活的情况下,一个重要的保护协会每户有超过一只猫被发现。这个结果很难解释;然而,这表明,当与其他猫生活,他们不太可能会感染和感染弓形虫类似的报道,猫从墨西哥城这表明环境条件的变化和不同免疫状态的猫住在一起10]。

身体条件作为营养不良的指标用于小动物因此削弱免疫状态,增加对疾病的易感性和更长时间引起的寄生虫血症包括原生动物(40,41]。在当下研究regular-to-poor身体条件明显伴有慢性激活情况下,表示一定程度的释放和循环弓形虫卵囊。猫与免疫抑制疾病,贫穷的身体条件是那些痛苦的时期弓形虫重新激活(42,43]。

最后,它预计,随着年龄的增长,接触的风险代理和感染发生,但从目前的研究结果表明,猫感染早期在他们的生活。

得出弓形虫广泛在国内拥有广泛的猫从梅里达城人口与不同时期的再感染,因此有一个高环境污染与感染性卵囊。猫在一岁,身体条件差,增加感染的风险弓形虫。

确认

作者欣然承认PROMEP(项目Mejoramiento del Profesorado)对金融支持。他们也承认CONACYT (Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologia)的金融支持参与者的学生。

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