在体外评价抗菌功效的野生Macrofungus从原料和发酵提取获得,Lenzites quercina

文摘

最近时间,抗生素耐药性是一个主要的关注体现在一些病原微生物,这包括一个连续寻找天然抗菌产品。植物化学以及提取获得的抗菌活性Lenzites quercina被调查。分别提取和纯化分数测试指标生物使用琼脂扩散和阀瓣扩散的方法。植物化学物质的提取中发现的数量l . quercina范围从14.4至20.7毫克/克生物碱,为类固醇6.1至12.8毫克/克,4.5至10.6毫克/克皂苷、萜类化合物2.8至17.2毫克/克,0.41至17.1毫克/克类黄酮。气相色谱质量分光光度法(GCMS)提取的分析揭示了辛酸,硬脂酸、十四酸、油酸,4-methyl-2-propyl-1-pentanol methyl-11-octadecenoate。提取的l . quercina及其纯化分数表现出广泛的抑制(4毫米到26毫米)金黄色葡萄球菌(写明ATCC 29213),铜绿假单胞菌(写明ATCC 27853),大肠杆菌(写明ATCC 35218),甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)伤寒沙门氏菌、蜡样芽胞杆菌、粪肠球菌、白色念珠菌,黑曲霉。的抗菌效果l . quercina提取表明这种野生macrofungus包含大量的药物,可提取抑制致病菌的抗生素抗性的威胁。

1。介绍

当前的抵抗致病微生物对常见抗生素的严重关切,因此需要及时关注。种假单胞菌,大肠杆菌,粪肠球菌,金黄色葡萄球菌,痢疾,和伤寒沙门氏菌被称为多药耐药性微生物(1,2]。这些致病菌的致命的潜力和耐药模式在社区卫生环境令人担忧的是这些耐药细菌有能力水平基因转移,降低细胞渗透对对流的抗生素,和核糖体结合位点的改变3]。因此,抗生素耐药性的问题现在是一个全球性的挑战,以惊人的速度增长迅速但更不发达和发展中国家(4,5]。

除了抗生素的滥用,等情况下生产抗生素的活性成分较低,自我药疗,过期的销售抗生素导致抗生素耐药性的快速传播。为了遏制抗生素抗性的问题,从天然产物生物活性化合物的使用需要作进一步的探讨。药用蘑菇是天然次生代谢物的丰富来源,本质上是抗菌6]。次生代谢物的促进健康的益处来自药用蘑菇有极大的增加了机会获得新颖的和安全的抗菌化合物,将战斗和降低抗生素耐药性的发生率7]。

Lenzites quercina担子菌引起白色腐烂在树林里。这macrofungus在本质上是世界性的。然而,缺乏信息的植物化学和抗菌特性macrofungus采购在阿库雷,帕斯州,尼日利亚。因此,本研究旨在评估植物化学的成分和抗菌活性原料和发酵l . quercina提取物。

2。材料和方法

2.1。收集和子实体的识别

的样本Lenzites quercina收集2012年11月从农田,联邦理工大学附近的一个森林里阿库雷,尼日利亚(纬度07°14′N;经度5°11′E)。样本的子实体形态识别和确认分子工具使用内部转录间隔区(ITS) rDNA区域。

2.2。准备和产量比例提取

l . quercina样品被分成两部分。一分是准备作为原始样本,第二部分是坚定的在室温下发酵四天(27±1°C)。两个样本干和地面使用磨粉机(5657 HAAN Retsch GmbH)。的原料和发酵样品的粉末l . quercina(100克)每个顺序提取使用500毫升95%的石油醚、乙酸乙酯和乙醇分别。得到的滤液干使用旋转蒸发器(RE-52A,联合实验室,英国)和指定为齿槽,生的Lenzites quercina提取与pet-ether,意图,生Lenzites quercina用乙酸乙酯提取,受潮湿腐烂、生Lenzites quercina用乙醇提取,FPP发酵Lenzites quercina提取与pet-ether、有限元分析、发酵Lenzites quercina用乙酸乙酯提取,场效应晶体管,发酵Lenzites quercina与乙醇。在这项研究中使用的试剂都是良好的分析级。提取的百分比收益率计算如下:

2.3。生物的集合

微生物菌株,金黄色葡萄球菌(写明ATCC 29213),大肠杆菌(写明ATCC 35218),铜绿假单胞菌(写明ATCC 27853),弗氏志贺菌(ATCC12022),沙门氏菌血清(写明ATCC 33458),枯草芽孢杆菌(写明ATCC 6633)肠杆菌属aerogenes(写明ATCC 13048),弗氏志贺菌,伤寒沙门氏菌,铜绿假单胞菌,蜡样芽胞杆菌,粪肠球菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)白色念珠菌,黑曲霉,和黄曲霉,收集来自医学微生物学实验室,大学医院(排序),伊巴丹,欧州和帕斯州专家医院,阿库雷,帕斯托状态。前临床分离耐抗生素一些商业的历史。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药模式中使用的研究是根据标准的解释8]。生物体维持在4°C琼脂斜面和生化证实确定他们的纯洁。

2.4。评估中提取的植物化学的成分Lenzites quercina

定性和定量的植物化学成分的分析Lenzites quercina提取进行了评估类黄酮的存在,丹宁酸、皂苷、生物碱、phlobatannins,心脏苷、类固醇、萜类化合物使用的方法9,10]。提取部分纯化用列和薄层色谱法的方法11]。

2.5。的GC / MS分析Lenzites quercina提取

提取物的生物活性化合物被确定与援助的气相色谱质谱(QP2010 +日本岛津公司、日本),配备了分裂喷射器和离子阱质谱仪探测器一起熔融石英毛细管柱厚度1.00μ米,20 m×0.22毫米,尺寸和温度限制60°C到325°C。列温度设定在60°C和250°C 3.0毫升/分钟的速度100.2 kPa的压力。注入器和检测器的温度为250°C和200°C,分别。氦气作为载气流速的46.3厘米/秒。女士分析是基于比较保留时间,质量,使用计算机辅助和化合物的峰匹配未知的化合物与已知化合物的质谱库存储在数据库软件研究所的标准,华盛顿,美国有超过62000的模式作为参考数据库。这个库可以生成光谱的比较标准的便利使用基于概率匹配算法。气已经就一套自动化的内部效度项目的分析,包括保留时间的调整功能,扫描测量,从色谱和准确的复合识别的搜索是基于质谱相似性和其他质量保证或质量功能。的名称、分子量和结构测试的组件材料确定。

2.6。抗菌活性的提取和获得的分数Lenzites quercina

琼脂扩散法的(12)是采用评估提取物的抗菌活性。简单地说,生物进一步在营养肉汤培养37°C 24小时28°C 48小时内细菌和真菌,分别。培养液的大小调整到0.5麦克法兰浊度标准。无菌棉拭子无菌用来转移生物干表面的无菌穆勒辛顿琼脂板。软木钻孔机是用于制造孔6毫米和提取是无菌的。等商业抗生素环丙沙星、万古霉素和氟康唑作为积极的控制而无菌蒸馏水作为消极的控制。琼脂纸片扩散法(13)是应用于抗菌活性的评估分数获得最有效的提取。实验进行了一式三份和抑制区测量和记录在毫米。

2.7。确定最低抑制浓度(MIC)和MBC

提取物的浓度从3.125不一到50毫克/毫升和无菌营养肉汤拌0.1毫升的标准化培养液(0.5麦克法兰浊度标准)在试管13]。包含细菌分离株的管子在37°C耗氧孵化24小时,而真菌隔离在28°C 48小时孵化。包含生长培养基的试管,无菌蒸馏水,每个生物的培养液维持控制。提取生产的最低浓度没有明显增长(无浊度)相比,控制管被认为是麦克风。最低杀菌浓度(MBC)是由定量接种0.1毫升从试管穆勒辛顿琼脂(尼古拉斯)。这些盘子是孵化在37°C。MBC被定义为提取物,杀死细菌的最低浓度测试为99.9到100%。

2.8。统计分析

获得的数据进行了分析,方差分析的一种方法和手段比较通过邓肯多个测试范围(SPSS 17.0版)。差异被认为是重要的≤0.05。

3所示。结果

图1显示了提取获得的收益比例Lenzites quercina。乙酸乙酯和乙醇产量比例最高7.7%和7.8的发酵和生Lenzites quercina,分别。表1显示的结果中提取的植物化学的性质。获得的价值是14.4到20.7毫克/克生物碱,为类固醇6.1至12.8毫克/克,4.5至10.6毫克/克皂苷、萜类化合物2.8至17.2毫克/克,0.41至17.1毫克/克类黄酮。表2显示了生物活性化合物的提取的分数。GCMS分析提取了辛酸,硬脂酸、十四酸、油酸,4-methyl-2-propyl-1-pentanol methyl-11-octadecenoate。图2显示生物活性化合物的峰值出现在Lenzites quercina。表3和4显示提取物的抑制区和分数测试隔离。抑制区从4毫米到26毫米不等。表5和6显示的最小抑制浓度和最低杀菌浓度。MIC值的范围从3.125到50毫克/毫升和MBC范围从3.125到100毫克/毫升。

4所示。讨论

有数量可观的天然生物活性化合物的药用蘑菇。这些化合物可以分离和合成为新的药物来补充常用的抗生素。因此,需要探索药用势未开发的许多野生大型真菌,可以抑制病原微生物对抗生素的耐药性。本研究提供信息在植物化学的成分,具有生物活性的化合物,和抗菌的功效从野生macrofungus提取获得,Lenzites quercina。

提取物的定性和定量检测Lenzites quercina显示类黄酮的存在,萜类、皂苷、生物碱、丹宁酸。Maafi et al。14)早些时候曾报道这些植物化学物质等广泛使用,通常利用大型真菌侧耳属sp。灵芝,香菇。生物碱的量(6.1至12.8毫克/克)Lenzites quercina提取符合里贝罗et al。15)曾报道这样的范围,一些野生食用菌。

硬脂酸和油酸(表的存在2)的提取Lenzites quercina符合的结果Bisen et al。16)曾透露了一些脂肪酸香菇作为一个组件,负责其药理作用。提取的Lenzites quercina含有辛酸,被报道为天然脂肪酸与抗菌财产(17,18]。因此,这些脂肪酸的提取Lenzites quercina可能会导致其抗菌活性。脂肪酸具有强大的抗菌性能与广谱生物活动与阻力。这些酸的抗菌作用机制是通过影响细胞膜及其组件和干扰等毒性机制防止生物膜的形成和抑制毒素和酶的生产。因此,可以利用自由脂肪酸的抗菌性的保护易腐产品(19]。因此,Lenzites quercina可能是另一种脂肪酸的来源与防腐剂在食品和医药行业。

不同程度的抑制区观察到的提取和纯化分数Lenzites quercina可能是由于溶剂的极性。次生代谢产物的溶解度是高度依赖的极性溶剂(12]。ethanolic提取物的抑制潜力可能是由于活性抗菌成分的溶解度更高。这符合Ayyasamy et al。20.)也公布了较好的抑制ethanolic提取的潜力侧耳属佛罗里达。然而,在这项研究中获得的抑制区偏离Shikongo et al。21)观察没有抑制作用金黄色葡萄球菌、杆菌、粪产碱杆菌属和变形杆菌属寻常的ethanolic提取的灵芝但是苯、氯仿和乙酸乙酯提取物给更好的抑制生物测试。

乙酸乙酯提取物的抗菌作用进行微生物也偏离Rajesh和Dhanasekaran的结果22]报告更多的乙酸乙酯提取物的抑制区灵芝物种。

提取物的抗菌潜力获得Lenzites quercina可以归因于上面列出的植物化学物质的存在。黄酮类化合物是已知的增强抗菌活性通过创建与细胞外的可溶性蛋白质和多肽复合物微生物的细胞壁,将破坏微生物的细胞膜的功能(23]。抗菌财产的单宁由于其链氨基酸在蛋白质的能力,灭活粘连、酶和微生物的细胞膜转运蛋白(24]。皂苷也已知细胞毒性效应与细胞膜表面活性剂性质,协助破坏入侵的微生物(25]。因此,生物碱的存在Lenzites quercina提取大大抑制产权,因为它是一个已知的植物化学成分,具有抗菌活性(26]。

尽管选择性治疗选择收购致病菌由于内源性抗生素抗性基因,提取的Lenzites quercina表现出抑制一些已知的这些临床分离株对抗生素产生了耐药性。抑制区观察到的范围(4毫米到26毫米)在这项研究符合乔纳森和Awotona27Chowdhury]和et al。28)在他们的发现报道一些药用蘑菇提取物的抗菌潜力区3.7毫米和20.3毫米之间的抑制。Lenzites quercina提取物表现出抑制作用类型的文化;Al-Fatimi et al。29日从也门)还测试了许多药用蘑菇铜绿假单胞菌(写明ATCC 27853)和金黄色葡萄球菌(写明ATCC 29213)。因此,许多野生大型真菌的报道证明有效的抗菌活动(7]。提取的原料和发酵Lenzites quercina显示在测试隔离抑制作用。这表明,发酵过程不影响抗菌的质量Lenzites quercina。

5。结论

这是普遍观察到的提取获得的分数Lenzites quercina更有效对抗细菌和真菌进行测试。这可能是由于几乎纯自然的生物活性代理分数与多种化合物中提取的Lenzites quercina。一般来说,提取的Lenzites quercina显示的广谱抗菌作用,因此可以被视为一个选择治疗致病菌引起的常见疾病。

利益冲突

作者没有利益冲突声明。

确认

医学微生物学部门的员工,帕斯州专家医院,阿库雷,帕斯州,和大学医院(排序),伊巴丹,欧州,尼日利亚,是释放类型文化高度赞赏和临床分离株。

引用

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