文摘

属革兰氏阴性的成员军团菌通常是发现在淡水环境中,除了吗l . longbeachae出现在混合堆肥和盆栽。当污染气溶胶吸入,军团病可能导致,通常更严重的肺炎军团病或严重流感样疾病庞蒂亚克热越少。据推测,属的物种军团菌能够导致人类疾病。军团病的临床前研究跟踪在泰国农村,当地土壤样本收集病例的家庭和工作场所和近端检测legionellae通过文化的存在。我们获得115隔离从22/39土壤样本和使用序列识别12种已知的方法军团菌由87隔离。

1。介绍

军团病通常是由于吸入污染气溶胶的人造水系统或,在的情况下军团菌longbeachae吸入污染的盆栽混合或堆肥(1- - - - - -3]。从2003年到2004年,积极对非典型细菌性呼吸道病原体进行以人群为基础的监测在Sa Kaeo,泰国,建立发病率(4]。免疫测试进行血清怀疑军团病病例的发现 成人(5%)例表现出增加4倍效价l . longbeachae间接免疫荧光法测定。l . longbeachae感染后典型的军团病人口,发生率最高的34岁以上的成年人中,随着年龄的增长,稳步增加和感染通过9月和10月达到顶峰。水稻农业泰国在这方面是相当普遍,农场工人的广泛接触潮湿的土壤将是一个合理的方式传输l . longbeachae(5]。这些发现,再加上有限的访问堆肥或处理的土壤,使我们调查legionellae的存在,特别是l . longbeachae在本土土壤和曝光由于Sa Kaeo农业实践。

2。材料和方法

2009年,39湿土壤样本收集从八个网站在Sa Kaeo省农村,军团病之前的实验室确认的病例都是确定并被运到亚特兰大疾病控制和预防中心文化(4]。文化进行使用修改过程用于从水文化legionellae [6]。5克的土壤的体重,并与50毫升无菌dH混合2o .滤液通过无菌纱布就紧张到50毫升锥形管。1:5滤液稀释了,和500年μL滤液稀释的酸治疗15分钟用一个平等的一部分氯化钾/盐酸酸(pH值2.3)。酸处理后,50μL是培养在一个盘缓冲木炭酵母提取物(BCYE)补充160 mg / L环己酰亚胺,另外两个板块补充与100000 U / L多粘菌素B和5 mg / L万古霉素(PCV)和两个板块进一步补充了2 g / L甘氨酸(GPCV)。板检查在4、7和14天检查的存在军团菌。任何样本与非杂草丛生军团菌生物与酸在十五分钟增量和recultured撤退,直到nonrelevant生物减少足以允许legionellae的识别。殖民地显示军团菌形态学检查了半胱氨酸在BCYE营养缺陷型双片提取l -半胱氨酸有或没有。殖民地需要半胱氨酸的增长被认为是假定的军团菌物种。

单克隆抗体(MAb)测试是用于识别退伍军人血清组1 (Lp1)如前所述7,8]。其他退伍军人种测定使用直接荧光抗体染色进行干燥,formalin-fixed悬浮液退伍军人serogroup-specific异硫氰酸荧光素标记抗体(9]。选择非退伍军人隔离被滑凝集试验(描述10]。

所有non-Lp1隔离被测序识别巨噬细胞传染性电位器(米兰理工大学管理学院)基因11]。由此产生的序列然后查询对国家生物技术信息中心(NCBI)基因库核苷酸数据库使用NCBI的对齐工具基本局部比对搜索工具(爆炸)12,13]。序列的身份到一个已知的95%军团菌物种被分配。这些序列只有不到95%的身份提交序列军团菌物种被认为是一个潜在的小说军团菌有机体。所有退伍军人隔离是使用的基因序列类型(SBT)流行病学类型计划建立的欧洲工作组军团菌感染(EWGLI)如前所述14,15]。eBURST分析观察土壤分离株的亲缘隔离来自其他国家之前提交给EWGLI SBT数据库(http://eburst.mlst.net/)。

3所示。结果与讨论

22(56%)的39个土壤样品收到阳性军团菌。总的来说,我们得到115隔离,其中87是已知物种,25潜在新物种,3不typable隔离米兰理工大学管理学院测序(表1)。九个物种的鉴定报告与人类疾病和代表获得的70%(80/115)的隔离16]。隔离的l . birminghamensis,l . lansingensis,退伍军人,l . rubrilucens,l . sainthelensi土壤样本中只发现了疑似病例的私人住宅。隔离的l . bozemanae,l . erythra,l . gormanii,l . quateirensis,l . quinlivanii、物种鉴定为潜在的小说军团菌sp。加入ST24644 (NCBI GU083740数量;孤立从冷却塔在泰国)只在工作场所的土壤样本发现疑似病例。没有隔离l . longbeachae被确定。最高的物种多样性( )被发现在土壤取自室外区域内洗涤在个人住宅和稻田。退伍军人血清组1中确定环境;然而,没有一个是阳性单克隆抗体MAb2,表型亚型负责65 - 100%的Lp1-caused军团病(17]。

表1
分离获得及其地理分布。

112年五隔离测试反应强烈l . longbeachae血清组1抗血清直接荧光抗体测试。然而,序列分析表明这些隔离l . bozemanae( ),军团菌sp。ST24644 ( nonfluorescent),一本小说军团菌物种( )。尽管这三个的物种米兰理工大学管理学院不能归类的隔离仍然未知,他们被确定为军团菌使用锅——种虫害军团菌实时PCR试验(18]。幻灯片凝集试验发现这些隔离l . geestiana,一个物种米兰理工大学管理学院基因是已知不放大使用的引物11]。

八个等位基因档案被SBT分析发现,七是小说概要文件(2010年11月2日)。发现小说的两个七序列类型识别与分离从社区和医院的情况下通过eBURST分析(截至2010年12月14日;数据未显示)。第八个等位基因轮廓匹配现有ST260已与社区相关的案件。

虽然本研究的主要目标是识别环境源(s)的怀疑病原体l . longbeachae在 怀疑肺炎病例,我们无法恢复这个物种从这些39个土壤样品。有趣的是,水饱和土壤收集并支持许多其他的生长军团菌这个土著物种不是以前的土壤类型。

这些发现表明,l . longbeachaeseropositive-pneumonia情况记录(i)由于在重提l . longbeachae不再或从不出现在这些环境或没有发现我们的有限数量的样品如前所述;(2)由于legionellae血清学交叉反应的压力;(3)与另一个病原血清学交叉反应;或(iv)阳性。大是一个固有问题的使用血清学鉴定,和本研究的结果进一步强调需要分子识别方法(19- - - - - -22]。在可能的情况下,临床分离是诊断怀疑非首选退伍军人情况下,因为非特异性和灵敏度不足瞭解legionellae抗血清(23]。

对于未来的研究,我们希望在Sa Kaeo开展前瞻性监测并获取legionellae隔离患者样本。临床分离序列识别将允许任何小说的病原体和检测物种负责泰国等呼吸道疾病在热带国家。并发环境采样将允许识别设置能够传送这些病原体易感宿主。虽然l . longbeachae被广泛接受为主要致病,土壤中物种的军团菌,legionellae在土壤的存在是有限的堆肥和盆栽混合生产。在这个研究结果表明原生土壤是一个可能的多个水库军团菌物种在区域地理和气候类似于Sa Kaeo并可能在人类疾病中发挥作用。

信息披露

这份报告中的发现和结论是作者的,不一定代表官方立场的疾病控制和预防中心。