同时鼻咽癌运输两种茎肺炎球菌序列与血清型3表型

文摘

肺炎球菌病的流行病学的知识在玻利维亚是稀疏,茎和序列输入(MLST)隔离以前没有可能的。贝尼省国家直到最近一直是玻利维亚亚马逊盆地的地理上孤立的区域,是一个地区重要的贫困。在2007年6月和7月,肺炎球菌运输研究招募超过600学生在贝尼省的两个城镇的状态。在这里,我们描述的独特识别同时鼻咽癌运输两个与血清型肺炎球菌茎序列类型3表型在单一主题。

1。介绍

茎序列输入(MLST)是一个在国际上使用的分子分类的方法链球菌引起的肺炎(肺炎球菌)(1]。肺炎双球菌为主的殖民人类鼻咽和在绝大多数情况下不进步引起侵袭性疾病。在生命的头两年,95%的儿童可以与肺炎双球菌和殖民73%可以获得至少两个不同的血清型,尽管这些在不同的场合进行。涉及多个殖民化的数据是有限的;然而,多个殖民当研究可能显著不同的范围从1.3%降至30%。重要的是要注意,许多不同的因素可能会影响,包括地理位置,社会和经济因素,样本技术(2- - - - - -4]。鼻咽殖民可以开始早在出生的那一天。马车特定血清型的持续时间通常是2.5到4.5个月,和减少运输的时间连续的肺炎链球菌血清型。这个运输时间与年龄呈负相关(4]随着肺炎球菌马车下降随着孩子年龄的增长5]。虽然能够很好的证明,多个不同血清型肺炎双球菌(因此多个序列类型)可能会同时进行鼻咽的,我们不知道任何的描述多个序列类型相同的血清型同时被发现在这个网站。

作为研究的一部分,学生之间的肺炎球菌马车从玻利维亚的贝尼省地区在2007年6月和7月,肺炎球菌运输研究招募超过600学生在贝尼省的两个城镇的状态。在这里,我们描述的独特识别同时鼻咽癌运输两个与血清型肺炎球菌茎序列类型3表型在单一主题。

2。材料和方法

这项研究的目的是按照标准方法的世卫组织工作小组(6)和拉丁美洲的方法设计了早些时候,泛美卫生组织上下文http://www.paho.org/Spanish/ad/ths/ev/LABS-manual-vigilancia-serotipos.pdf2008年10月10日}{访问。涤纶polyester-tipped拭子(英国医疗线和设备)快递从英国为鼻咽抽汲脱脂牛奶胰蛋白胨葡萄糖甘油(STGG)肉汤媒体(7)被制造,消毒和质量控制为1毫升整除的苏格兰嗜血杆菌、军团菌、脑膜炎球菌、肺炎球菌参考实验室(SHLMPRL) cryotubes (Sarstedt AG) & Co .)、德国)作为一个短期的传输媒体和存储媒体−20°C。

马血琼脂百分之五(E & O媒体服务有限公司,英国)是快递从英国奥普托欣光盘(英国Oxoid)和Transwabs(英国TSCswabs)。的使用与庆大霉素(5%马血液而不是血琼脂8)、colistin-nalidixic酸或colistin-oxolinic酸是一个必要的偏差从发布的标准方法6]。

鼻咽拭子是由一个有经验的耳鼻喉科专家(Santana-Hernandez博士)。如果不能容忍鼻咽抽汲或不可能在年幼的儿童,口咽拭子进行。拭子被切断的技巧和存储在STGG镀到5%马血琼脂在同一天或储存在−20°C到培养。孵化后,α溶血的殖民地亚文化到奥普托欣马血琼脂5%敏感性测试。孵化了37°C碳dioxide-enriched大气中使用蜡烛罐laboratorio菜,特立尼达,玻利维亚。

纯粹的文化假定肺炎双球菌被储存在室温下Transwabs(英国TSCswabs),直到准备运输SHLMPRL空运(9]。

血清学分型设施在拉丁美洲是稀疏的10),它是不可能执行MLST在玻利维亚。交通隔离从特立尼达,玻利维亚到格拉斯哥,英国花了42天Transwabs不是环境可控的条件下。

血琼脂与新霉素(英国Oxoid)是用于SHLMPRL文化隔离收到Transwabs在厌氧条件下48小时。隔离交通进一步亚文化5%后,马血琼脂和储存在−80°保护珠(TSC有限公司、英国)。

血清型的菌株进行的整个过程SHLMPRL使用coagglutination方法(11)从史泰登利用血清血清研究所,丹麦。

MLST进行这些隔离如前所述12- - - - - -14]。简单地说,从七管家基因片段,aroE,国民幸福指数,金长科国际,recP,spi,xpt材料,和ddl被放大的肺炎球菌与引物溶解产物被Enright,索兰托(13)通过使用一个单一PCR反应。放大DNA如前所述[打扫干净了12,15]。然后清洗放大DNA测序引物相同的设置使用DYEnamic ET终结者测序工具包(Amersham生物科学,小都,英国)。后续的测序DNA如前所述[打扫干净了12,15]。这些过程液体处理机器人平台上进行(MWG-Biotech米尔顿凯恩斯,英国)和1000 MegaBACE DNA测序仪(Amersham生物科学)。序列数据的分析和后续任务序列的类型(ST)进行如前所述[16]。进一步分析这之间的关系和其他肺炎球菌STs都使用了破裂(基于相关序列类型)项目(17]。

3所示。结果

这种肺炎球菌运输研究从玻利维亚贝尼省地区的学龄儿童,在这项研究中我们发现了一个9岁的女孩与黏液状的肺炎双球菌出现在鼻咽。这个单一的殖民地黏液状的表现型一致被确认为3使用coagglutination方法[血清型11]。MLST进行两个独立殖民地形态都无法区分和确定一个序列类型ST1989 180 (ST180)和其他。这些序列类型不同的两个七管家基因用于MLST方案。序列1989型(ST1989)和ST180作为double-locus变异存在在同一克隆复杂。ST1989可能出现来自ST180 ST2311可能出现。单核苷酸多态性(snp)xpt材料和国民幸福指数等位基因占这些序列类型的差异。

4所示。讨论

3个血清型肺炎双球菌形态有别于其他血清型肺炎双球菌的由于粘液囊(18]。重复的决定cap3A基因3型胶囊轨迹与高频相位变化(19]与荚膜和acapsular(粗糙)相变体(20.]。

这类黏蛋白血清型急性中耳炎(也是一个常见的原因20.,21],特别是ST180 [22),污垢共存的形成可能是重要的发病机制的表现。同时,血清型3肺炎双球菌引起急性结膜炎,假定这个血清型具有毒性的因素使它容易粘膜网站(21]。此外,血清型3是与相对风险增加有关死亡的侵入性肺炎球菌病在瑞典成人(23),但在儿童血清型3 ST180肺炎双球菌已确定为侵袭性的几率只有0.1的运输与无症状显著相关(24]。由于数据有限,新发现的优势比圣- 1989是未知的。二分法,3个血清型肺炎双球菌可以导致一些人相关的死亡率高的疾病,无害地放在别人的鼻咽自20世纪初期以来一直承认(25]。一个血清型之间的联系3肺炎双球菌引起疾病在老年人更常见的儿童也是一个建立观察(25]。血清型3隔离不同的基因型也可能有不同的毒性对小鼠(26,27]。

我们认为,这一发现双位点变异的人口同时表达血清型3胶囊在人类宿主暗示许多不同的事件。多个自发突变可能导致单核苷酸多态性自然发生在鼻咽的肺炎双球菌,在自然生物膜的环境中,可能会导致遗传多样性和遗传交换体内。这可能导致改变3个血清型肺炎球菌数量和宿主之间的相互作用这取决于基因型是主要的,它是可能的,这可能影响疾病表现和结果。此外,它是可能的,这些变异分化从单个基因源之前收购该主机和随后的隔离和表征。因此,尽管这些发现很有价值的上下文中这样一个独特的地理位置和社会和经济环境,这些数据是有限的和后续研究需要进一步支持这些发现。

确认

作者希望承认个人和组织的援助和慷慨没有他们这个项目是不可能的。太太,这包括工作人员Fundacion Totai Adelina laboratorio的菜菜,SHLMPRL的员工,员工的脑膜炎球菌参考实验室,马德里和Inbolpak狭义相对论L协助交通隔离的苏格兰,苏格兰脑膜炎协会资助,医疗线&设备捐赠的鼻咽拭子。

引用

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