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Zarna r . Dedania Ronak r . Dedania Navin r . Sheth情形b . Patel Bhavna帕特尔, ”散装稳定性表明高效液相色谱法测定利培酮药物和制药配方”,国际分析化学杂志》上, 卷。2011年, 文章的ID124917年, 6 页面, 2011年。 https://doi.org/10.1155/2011/124917
散装稳定性表明高效液相色谱法测定利培酮药物和制药配方
文摘
当前研究的目的是开发一个验证stability-indicating试验方法(暹罗)利培酮后让它强迫水解下分解,氧化、光解、和热应力条件。液相色谱分离实现isocratically对称C18柱(5μ米大小,250毫米×4.6毫米身份证。)使用含有甲醇的一个流动相:乙腈(80:20,v / v) 1毫升/分钟的流量在280 nm和紫外检测。利培酮被发现的保留时间。该方法的线性浓度范围60μ克/毫升极限的检测和定量的1.79和5.44μ分别g / mL。方法的准确性,特异性,灵敏度和精确度分析利培酮散装形式和制药剂型。降解产物产生的压力不会影响到利培酮的检测,研究和分析因此稳定性指示。
1。介绍
利培酮,4 - [2 - (4 - (6-fluorobenzo [d] isoxazol-3-yl) 1-piperidyl)乙基]3-methyl-2, 6-diazabicyclo 4.4.0 deca-1, 3-dien-5-one非典型抗精神病药物治疗精神分裂症、双相情感障碍相关的混合和躁狂状态,在自闭症儿童和易怒1]。封锁多巴胺D2受体的边缘系统缓解精神分裂症的阳性症状如幻觉、妄想,飘忽不定的行为和言论。封锁的血清素激活的52中皮层呼吸道导致过量的多巴胺的受体,导致增加多巴胺传输和核心阴性症状的消除。它有高亲和力的D2多巴胺受体。行动在几个5 - 5 -羟色胺受体亚型。这些都是与体重增加有关,,导致其抗精神病和救援的行动锥体束外的副作用有典型的经验通过行动精神安定剂。像其他5 -2拮抗剂,利培酮也在α(1)肾上腺素能受体结合,在较小程度上,在组胺H1和α(2)肾上腺素能受体(2]。几种分析方法已经在文献中报道的分析利培酮制药剂型。技术包括化学发光(3RP,高效液相色谱法(4),薄层色谱(5),可见分光光度法(6)等形式。有许多方法来量化生物流体和人血浆利培酮,包括高效液相色谱法结合毛细管电泳(7],HPLC-DAD [8),HPLC-MS /女士[9],rp - [10),但是有的/女士[11- - - - - -13)、亲和毛细管电泳和H1核磁共振光谱(14]。这些方法(11- - - - - -14)是复杂的,昂贵和耗时的简单HPLC-UV方法相比。目前,大多数的分离是由高效液相色谱法的鲁棒性和熟悉的原因与这种技术分析师。特异性的高效液相色谱方法,峰纯度测试表明,该分析物色谱峰可能是有用的不是由多个组件。前发表的方法不能直接适用于这个问题,需要更多的调查方法开发和验证。所以,一种方法是开发一个简单,精确、准确、具体,和鲁棒稳定性,表明HPLC-UV方法定量测定药品剂型和利培酮的应用于测定利培酮的平板电脑和散装形式。
2。实验
2.1。化学药品和试剂
利培酮纯度为99.98%的工作标准粉被Tripada药品请天才,艾哈迈达巴德,印度和使用前未经纯化。利培酮片包含2毫克利培酮按标签声称来自当地市场。甲醇、乙腈和水的高效液相色谱法,氢氧化钠,盐酸,过氧化氢均为分析纯从e·默克(印度)有限公司获得孟买。所有化学品都至少分析品位和作为收到。
2.2。高效液相色谱仪器和条件
目前的工作是进行权力平等主义的高压液相色谱和由泵(美国Cyberlab TM)与通用循环注入器(Rheodyne)的注入能力20l .探测器由光电二极管阵列检测器;使用的反相柱RP-C18 (5μ米大小,身份证)在环境温度。分离是通过使用一个流动相组成的甲醇:乙腈(80:20,v / v) 1毫升/分钟的流量。筛选了化合物在280 nm监控。列是保持在环境温度,注射量20L使用。流动相是0.45微米的过滤膜过滤和ultrasonicated 10分钟之前使用。对强制降解样品的分析,采用光电二极管阵列检测器在扫描模式下,扫描范围200 - 400 nm。峰同质性表达的峰纯度值,获得直接从光谱分析报告获得使用软件工具。
2.3。准备股票和标准的解决方案
1毫克/毫升原液的利培酮制备高效液相色谱级乙腈。Substock解决方案是准备从原液稀释10毫升标准储备溶液100毫升100克/毫升。整除的标准Substock利培酮溶液转移到10毫升容量的玻璃瓶和解决方案都是由与流动相体积给最终浓度的10,20、30、40、50、60克/毫升。每个20L标准溶液后注入列使用0.2微米的滤膜过滤。
2.4。平板电脑的准备试验
20片重,在研钵和研杵碎,混合。粉的部分相当于一片的重量是准确的称重和转移到10毫升容量瓶,与流动相体积和混合。六个这样的解决方案准备。容量的玻璃瓶是用20分钟影响完整的利培酮溶解,然后解决方案是由与流动相体积。合适的整除的解决方案是0.45微米的尼龙过滤器过滤。2毫升的过滤解决方案被转移到一个10毫升容量瓶和组成与流动相体积屈服40利培酮的浓度g / mL先前描述的线性范围。
2.5。强制降解研究的API
为了确定稳定性指示分析方法和分析,利培酮片和利培酮API粉是强调在各种条件下进行强制降解研究[15]。监管指导我Q2A、Q2B Q3B, FDA 21 CFR 211条款需要stability-indicating力量的发展和验证分析。不幸的是,当前的指导文件不显示详细的降解条件压力测试。然而,强制降解条件下,压力剂浓度、时间和压力的选择基于试验和错误的方法,所以最好是毒品仍然是10%的退化和完全退化。利培酮是几乎不溶于水,很容易溶于甲醇,甲醇在所有研究作为助溶剂。利培酮强制降解研究中使用的所有解决方案都准备最终浓度为20克/毫升。
2.5.1。酸降解的研究
100毫克的利培酮样本被带进一个100毫升圆底烧瓶,10毫升的0.1 M盐酸溶液添加,和内容是混合好,保存在室温下不断搅拌12小时。2毫升的这个解决方案是在100毫升容量瓶和0.2毫升的0.1 M氢氧化钠中和,然后用稀释剂稀释至100毫升。
2.5.2。碱降解研究
100毫克的利培酮样本被带进一个100毫升圆底烧瓶,10毫升的0.1 M氢氧化钠溶液添加,和内容混得很好,继续为36小时在室温下不断搅拌。2毫升的这个解决方案是在100毫升容量瓶和中和0.2毫升的0.1 M盐酸,然后用稀释剂稀释至100毫升。
2.5.3。氧化
100毫克的利培酮样品摄于100毫升圆底烧瓶,10毫升的3%过氧化氢溶液添加,在室温下和内容混得很好。4小时后,2毫升的这个解决方案是用稀释剂稀释至100毫升。
2.5.4。温度应力研究
1 g的利培酮样本被带进petridish并保持24小时在烤箱80°C。10毫克的样本被带进一个100毫升容量瓶,溶解在稀释剂和稀释剂稀释至体积。2毫升的这个解决方案是在10毫升容量瓶,然后用稀释剂稀释至10毫升。
2.5.5。耐光性
1 g petridish和利培酮样本的保存在耐光性室200 Wh / m2在紫外线和120万年在可见光下了36小时。10毫克的样本是在100毫升容量瓶,稀释剂溶解,用稀释剂稀释至体积。2毫升的这个解决方案是在10毫升容量瓶,然后用稀释剂稀释至10毫升。
3所示。结果与讨论
3.1。高效液相色谱方法开发和优化
RP-C18列(身份证。,5μ米颗粒大小)保持在环境温度(25°C)是用于分离和测定的方法验证利培酮制药剂型。最初流动相组成的正己烷:乙醇:甲醇(50:35:15,v / v / v)是尝试,但不能解决分析物在20分钟运行时间。然后不同的流动相组成0.1%甲酸:乙腈(40:60,v / v);磷酸二氢钠buffer-acetonitrile (55: 45, v / v)调整pH值6.0 1.5毫升/分钟流量都试过了,但可怜的决议。所以在上面流动相乙腈和甲醇组成的流动相:乙腈:磷酸二氢钾的pH值0.05米7 (65:25:10 v / v)为1.5毫升/分钟流量试过但满意的峰没有被观察到。然后缓冲溶液取代有机溶剂来简化移动的沉闷的准备阶段。流动相甲醇:乙腈(60:40,v / v)尝试和解决的峰值分析物和降解。改善峰形状和对称是通过改变不同的比例和甲醇的流量:乙腈:水。令人满意的分离和峰对称性得到了药物及其降解产物与流动相组成的甲醇,乙腈(80:20,v / v) 1毫升/分钟流量和环境温度。
3.2。验证
验证该方法对参数包括线性、定量限度(定量限),检测极限(LOD),精度、准确性、特异性、健壮性、溶液稳定性和系统适用性。
3.2.1之上。线性
利培酮的校准曲线构造线性浓度范围的60克/毫升。峰地区的利培酮是策划与利培酮浓度和线性回归分析进行合成曲线。通常情况下,校准曲线的回归方程被发现0.999相关系数。
3.2.2。定量限和LOD
确定定量限和LOD基于信噪比,使用一个分析响应10和背景噪音的3倍,分别为(16]。定量限和LOD被发现是5.44和1.79克/毫升分别g / mL。
3.2.3。精度
表1提供数据获得的精度实验。盘中的R.S.D.值和interday精度< 1.04%,< 1.22%,分别,从而表明该方法足够精确。类似的定性分离获得的药物甚至在分析不同的色谱系统在不同的一天,表明该方法具有足够的中间精密度。
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3.2.4。精度
复苏百分比计算从差异峰地区获得了强化和unfortified解决方案。从表中的数据如图所示2,优秀的复苏在每个添加药物的浓度。
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| *意味着±% SD三决定。 |
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3.2.5。特异性
特异性的能力方法测量分析物的反应其降解产物的存在。该方法被发现特定的药物。特异性建立了测定药物纯度的峰值使用PDA探测器。同时,药物峰的分辨率是决定对最近的解决高峰。
3.2.6。鲁棒性
说明了鲁棒性得到了保留时间,当流动相流速(±0.2 mL / min),有机溶剂比(±5%),和列温度(±2°C)是故意各不相同。
3.2.7。溶液的稳定性
利培酮的溶液稳定性在稀释剂是由0.1毫克/毫升样品溶液在室温下严格限制容量瓶48小时和测量数量每6小时。利培酮的溶液稳定性试验(稀释剂)是由离开0.1毫克/毫升利培酮溶液在室温下在严格限制容量的玻璃瓶48小时期间,他们每隔6小时化验和比较的结果与从刚做好的解决方案。流动相是准备在研究期间的开始和在实验中没有改变。%相对标准偏差值计算溶液稳定性实验,发现1.36%和1.45%的纯度和测定方法,分别。所有的样品被发现是稳定的48小时。
3.2.8。系统适用性
色谱系统适用性测试应用于代表检查各种参数如列效率、分辨率、精度、尾矿峰值。获得的结果如表所示3。所有这些参数进行评估与监管要求的背景下,这表明良好的色谱条件。
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3.3。稳定性研究
所有强调样品在固体和溶液状态保持无色。高效液相色谱法研究利培酮在不同压力条件下使用甲醇:乙腈(80:20,v / v)作为溶剂系统提出以下如图降解行为1。退化的总结表所示4。
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(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
3.3.1。酸性条件下
药物逐渐减少回流的时间为0.1 M盐酸在12小时在室温下,形成4.20 RRT的降解产物。最后24小时,观察药物峰面积下降26.89%左右,而面对观察分析物的峰。
3.3.2。在碱降解
这种药物被发现相对稳定的碱性水解。在0.1 M氢氧化钠回流药物36小时,大约17.53%的药物只有退化。降解产品是出现在RRT 2.62。
3.3.3。氧化条件下
毒品是高度不稳定的过氧化氢在室温下(3%)。4小时后,观察药物峰面积陡降。主要降解产品出现在RRT 2.67,利培酮是退化的高达68.54%。最后6小时,观察几乎完全降解的药物主要降解峰相应的上升。
3.3.4。热降解
固态研究表明,利培酮是相对稳定温度的影响。药物粉末时暴露在80°C干热退化观察24小时30.09%与相应的上升到2.75 RRT降解产品。
3.3.5。光解的条件
没有观察到的主要降解产物后接触的固体药物保存在紫外线。轻微降解产品RRT下降2.76和26.62%利培酮后36小时。
3.3.6。分析
该方法应用于测定利培酮在利培酮。一个典型的色谱分析后获得利培酮片在图中进行了描述2。这些化验的结果产生了99.88%标签要求的平板电脑。
(一)
(b)
4所示。结论
一个验证stability-indicating高效液相色谱分析方法测定了利培酮的API。压力测试的结果进行根据国际协调会议(我)指南显示,该方法选择性和稳定性指示。该方法简单、准确、精确、具体,且有能力单独降解产物的药物和辅料片剂剂型。方法适用于利培酮的常规分析大部分API粉或制药剂型。的简单方法允许在实验室中的应用缺乏先进的分析工具,如质或气。这些方法是复杂的和昂贵的,而不是一个简单的HPLC-UV方法。
确认
作者感谢Veerayatan药学研究所Jakhania Saurashtra大学Rajkot,印度提供设施进行实验以及Tripada制药、艾哈迈达巴德,印度利培酮样品提供礼物。
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