生物蛋白酶作为宫颈癌研究的辐射升级剂（括号）：双盲随机安慰剂对照试验

摘要

宫颈癌是全世界妇女死亡的主要原因，特别是在印度尼西亚。晚期宫颈癌的主要治疗是辐射;但是，结果不符合所需的期望。在癌症治疗效力的几项研究中报道了[1,7-双（4-羟基-3-甲氧基苯基）-1,6-庚二烯-3,5dionee。本研究旨在探讨临床和分子[（丙二醛（MDA）和NF-κ..生物姜黄素(BCM-95)作为放射增敏剂在宫颈癌中的作用、凋亡指数和安全性。在这项双盲安慰剂随机对照试验中，我们将121例患者随机分为2组(BCM-95组或安慰剂组)。丙二醛及其NF-κ..在给药前和给药后测定B水平和凋亡指数辐射的能量。用Wills方法鉴定MDA，而NF-κ..B经ELISA鉴定。TUNEL和DAPI染色检测凋亡指数。根据RECIST对临床反应进行分类。在根据方案和意向治疗(ITT)分析中，两组间辐射前的MDA水平相似( 和 ,分别)。放疗后，两组患者MDA水平均升高，但根据方案和ITT分析无显著差异( 和 ,分别)。nf-κ..根据方案和ITT分析，两组受照前的B水平相似( 和 ,分别)。辐射后，BCM-95组显示NF-增加κ..B级与Peratecbo组相比，每个协议分析但不在ITT分析中（和 ,分别)。BCM-95组在每种协议分析的辐射之前具有更高的凋亡指数，但不在ITT分析中（和 ,分别)。辐射后，每种协议分析中BCM-95组凋亡指数仍然较高，但在ITT分析中不存在（和 ,分别)。组之间的完全响应没有显着差异（每个协议， ;ITT分析, )．虽然BCM-95可以调节ROS，NF-κ..B，凋亡和人类宫颈癌的凋亡，它不显着。因此，BCM-95不改善对辐射处理的临床反应。

1.介绍

宫颈癌是可预防的疾病，但它在2018年促进了18,279人死亡，特别是在发展中国家[1.］.在印度尼西亚，大多数患者被诊断出患有先进的宫颈癌[2.］.迄今为止，子宫颈癌的治疗方式，特别是在晚期，是放射治疗和或不同时进行化疗[3.］.辐射后的整体存活或不同时的化疗不令人满意，特别是在晚期宫颈癌中。必须递送高剂量的辐射以消除所有肿瘤细胞，因此增加不良影响[4.］.

姜黄素[1,7-双（4-羟基-3-甲氧基苯基）-1,6-庚二烯-3,5dione]，从而提取天然多酚Curcuma Domestica L.。，已闻名于其在癌症治疗中的效力[5.］.姜黄素的抗癌作用在于其调节细胞周期和凋亡的能力[5.,6.］.姜黄素在靶组织中的吸收和药物水平差，并引入了几种方法来克服这种限制。被称为生物蛋白酶（BCM-95）的制剂，包括哌啶，以增加姜黄素生物利用度[7.］.我们的旨在评估BCM-95作为局部晚期宫颈癌患者的辐射升级剂的临床结果和分子机制。

2.材料和方法

2.1。材料和仪表

Biocurcumin (BCM-95)和安慰剂购自DolCas Biotech, LLC (9 Lenel Rd, Landing, NJ 07850, USA)。BCM-95是一种含有生物姜黄素-胡椒碱的胶囊1.)．安慰剂是一种含有二碱性磷酸钙(无水)的胶囊。由线性加速器组成的外部束辐射治疗设备来自UNIQUE系统(Varian医疗系统，加利福尼亚，美国)。使用的近距离放射治疗设备是Nucletron公司(德国慕尼黑)的微选择HDR。反核因子-kappa B (NF-κ..B) p65抗体购自Abcam (1 Kendall Square, Cambridge, USA)。TUNEL试剂盒购自Sigma-Aldrich公司(St. Louis, MO, USA)。DAPI染色试剂盒购自Sigma-Aldrich公司(St. Louis, MO, USA)。


描述	规格	测试方法	结果

鉴别	通过	TLC.	符合
颜色	橙红色	视觉的	符合
外观	粉	视觉的	符合
味道	特征	有机膜	符合
气味	特征	有机膜	符合

分析化验
草本确切的比例	25：1	内部规格	符合
溶解度（在丙酮中）（在水中	可溶不溶性	IP IP.	符合符合要求
潮湿	nmt 2％	USP < 921 >	0.2％
提取溶剂	100％乙酸乙酯	内部规格	符合
颗粒大小	100％到30目	USP <786>	符合
过敏原	没有检测到	埃莉莎	符合
抽头密度（g/ml）	壮年的0.60	USP <616>	0.82
散装密度（g / ml）	NLT 0.39	USP <616>	0.61
农药残留物	符合USP.	美国药典<561>	符合
赋形剂	没有任何	内部规格	符合
载体	没有任何	内部规格	符合

剩余溶剂
苯	按USP	USP <467>	符合
四氯化碳	按USP	USP <467>	符合
1,2-二氯乙烷	按USP	USP <467>	符合
1,1-二氯乙烷	按USP	USP <467>	符合
1, 1, 1-Trichloroethane	按USP	USP <467>	符合
乙酸乙酯	按USP	USP <467>	符合
乙醇	按USP	USP <467>	符合
丙酮	按USP	USP <467>	符合

痕量金属
总重金属	nmt 10 ppm.	ICP-MS.	0.3911 ppm.
砷	nmt 1 ppm.	ICP-MS.	0.0183 ppm
带领	NMT 0.5 百万分之一	ICP-MS.	0.3728 百万分之一
汞	nmt 1 ppm.	ICP-MS.	BDL
(BDL：AS，0.02 ppb;PB，0.015 PPB;Hg，0.02 ppb）

微生物测定
总板数量	NMT 1000 cfu/g	AOAC，BAM	20 CFU / g
酵母和模具	NMT 100 cfu / g	AOAC，BAM	10 cfu / g
沙门氏菌	缺席/ 25克	AOAC，BAM	符合
大肠杆菌	缺席/10 G	AOAC，BAM	符合
金黄色葡萄球菌	缺席/10 G	AOAC，BAM	符合
铜绿假单胞菌	缺席/10 G	AOAC，BAM	符合
黄曲霉毒素	缺席的	AOAC，BAM	符合
大肠杆菌	缺席/10 G	AOAC，BAM	符合
(微生物测定检测限：10 CFU / g）

用于活性物质的测定
姜黄的挥发性化合物	现在	UV-vis.	符合
总curcuminoids复杂	nlt 95％	高效液相色谱	98.39％

由姜黄素，去甲氧基姜黄素，双去甲氧基姜黄素和姜黄油的挥发性油组成
总姜黄素	nlt 86％	高效液相色谱	91.39％
姜黄素	NLT 65％	高效液相色谱	71.96％

BCM-95和Biocurcumin是Dolcas Biotech LLC的注册商标，位于Landings Lenel Road 9号，http://www.dolcas-biotech.com.

2.2. 患者群体

作为宫颈癌研究的辐射敏细胞腺苷病的生物蛋白是一项双盲安慰剂对照试验，超过2年。该临床试验是在印度尼西亚雅加达雅加达的Cipto Mangunkusumo医院进行的。试验方案由调查人员设计，并在ClinCORINGRIAN.GOV注册（NCT03269097). Cipto Mangunkusomo医院伦理委员会批准了该方案。

在2016年11月至2018年9月期间，在2016年11月至2018年9月期间，新诊断患有抗鳞状宫颈癌的宫颈癌。通过活组织检查证实了宫颈癌的诊断。通过主要调查仪（S.P），膀胱镜检查和矫直物进行阴道检查完成分期。使用MRI测量癌症质量直径。

癌症阶段基于FIGO标准[8.］.患者解释了审判，并在首发初级调查员开始审判之前获得书面知情同意书。患有慢性疾病的患者（即，糖尿病，脑血管疾病，需要血液透析的脑血管疾病，肾病）被排除在试验中。

2.3。随机化和治疗

宫颈癌的组织类型、分级和淋巴管腔侵犯(LVSI)经主要研究者(S.P)进行的活检证实。用MRI评估肿瘤肿块的大小，并测量最大肿块的直径(cm)。患者接受外部放射治疗和近距离放射治疗作为晚期宫颈癌的标准治疗。患者被分为两组:一组使用BCM-95作为放射增敏剂，另一组使用安慰剂。干预组口服BCM-95 1000 mg，每日3次，连续9周。研究助理通过短信跟踪并提醒患者每天服用试验胶囊，以确保依从性。患者每周到门诊就诊一次，接受一包新的BCM-95或安慰剂，并继续接受放射治疗。在患者开始每周放疗计划前，通过东部合作肿瘤组评分(≤2分)进行评估，并进行全血计数、肾功能和肝功能检测。

随机化序列是由1：1的比例产生的计算机产生（程序的随机排序）：1。随机化的结果如表所示2.．一组病人用A和B编码，第一助理被分配给病人，但不知道A或B编码是什么。在Cipto Mangunkusumo医院药剂科工作的第二名研究助理将Biocurcumin编码为A，安慰剂编码为b。在研究过程中，只有第二名助理知道编码，第二名助理没有参与结果分析。患者接受24gy的放射治疗后，如果患者同意，则进行第二次活检。


特征	总计	bcm - 95 (N = 61)	安慰剂（N = 60)	价值

年龄（年）				0.24
敏敏	25 - 69	25 - 68	34-69
意思（SD）	50.47 (8.69)	49.2（9.74）	51（7.96）

受教育程度（％）				0.26
根据小学生	44 (36.3%)	22（36％）	22（35.5％）
小学	52 (43.3%)	23（37.7％）	29（49.1％）
>高中	25（20.4％）	16 (26.3%)	9（15.4％）

ProRadiation BMI（kg / m^2.)				0.68
敏敏	15.4 - -35.7	15.4 - -35.7	16.8-30.6.
意思（SD）	23.9（3.8）	23.8（4.22）	24.1（3.4）

平价				0.98
敏敏	划分的	0-9	划分的
中位数（方差）	3（4.6）	3（5.05）	3（4.55）

肌酐（mg / dl）				0.43
≤1.2 毫克/分升	97（80.8％）	51（83.6％）	46（77.9％）
> 1.2 mg / dl	24（19.2％）	10（16.4％）	14（22.1％）

凝聚肿瘤大小（mm）				0.31
敏敏	25–176	30–107	25–176
中位数（方差）	67.5（555.6）	69.5（393.6）	64（739.6）
的意思是⁺（SD）	4.1（0.39）	4.1（0.31）	4.1（0.39）	0.38

LVSI				0.144
积极的	2（1.7％）	0	2（3.4％）
消极的	119（98.3％）	61 (100%)	58（96.6％）

年级				0.68
温和的	21（17.3％）	10 (16.3%)	11（18.3％）
温和的	87 (71.9%)	43 (70.4%)	44（73.3％）
高的	13（10.8％）	8（13.3％）	5（8.4％）

辐射>10 GY.				0.33
敏敏	12-78.4	12-78.4	16-74
中位数（方差）	71（176.6）	71（219.8）	71（128.1）

2.4。初级和二次结果

主要结果是使用MRI在最后一次辐射会议的2个月后评估肿瘤质量的完全反应。完全响应的标准基于实体肿瘤的响应评估标准（Recist）[9]. 次要结果是MDA和NF水平-κ..24 Gy照射前后B和凋亡指数的变化。根据放射治疗肿瘤组报告不良事件[10.］.

2.5。评估MDA，NF-κ..B、凋亡指数

我们使用两个不同活检的新鲜组织来测量MDA和NF的水平-κ..B和凋亡指数在24 GY辐射处理之前和之后。在可能在最小的坏死组织的区域使用射频切除，通过调查人员进行活组织检查。

通过添加细胞提取缓冲液，在新鲜组织制备的匀浆中测量MDA水平。匀浆在10000℃下离心 ×g，上清液稀释5倍。将400微升样品添加到试管中，然后添加200微升 μ.加入20％TCA溶液。将样品涡旋以良好混合并以5000rpm离心10分钟。接下来，将2ml上清液与400混合 μ.L 0.67％TBA并在96-100℃下孵育。用分光光度计（Thermo Sciencific Genesys 10s）以530nm的波长读取样品。nf-κ..通过用500的新鲜组织来测量B水平 μ.L细胞提取缓冲液PTR。使用均化器和微泡均匀化样品，然后以10,000×g离心15分钟，将上清液在-20℃下温育。将抗体鸡尾酒加入微孔板孔中，并在室温下在黑暗中孵育1小时。用洗涤缓冲液PT洗涤微孔板孔三次。TMB衬底（100 μ.l）转移到孔中并在黑暗中温育15分钟。接下来，100 μ.立即加入静止溶液中的L.使用ELISA读取器（Thermo Sciencific Varioskan闪频扫描多模读数）以450nm的波长测量样品的吸光度。

使用TUNEL和DAPI染色测量凋亡指数[11.,12.］.样品被染色并标记为获得癌细胞的田地。在室温下用4％多聚甲醛在PBS中用4％多聚甲醛固定20分钟。然后，将样品在2-8℃下用渗透溶液（0.1％柠檬酸钠×100中的0.1％柠檬酸钠）孵育2分钟，每次洗涤两次5分钟。

还制备阳性和阴性对照样品。对于阳性对照，将样品干燥并100 μ.加入DNase I（100u / ml），然后在室温下孵育10分钟，每次洗涤两次5分钟。阴性对照样品为50 μ.L的标记溶液。将50微升的TUNEL反应缓冲液加入阳性对照样品和试验样品中。在黑暗中在37℃下将样品孵育60分钟。然后，每次将样品洗涤三次2分钟。然后用100次染色样品 μ.L的DAPI然后在室温下孵育10分钟，每次洗涤三次5分钟。然后用共聚焦显微镜检查样品，然后使用细胞甲型蛋白定量。使用公式计算凋亡指数

2.6。统计分析

我们确定需要121名患者进行精确度并考虑实际因素。该样品大小提供了足够的统计功率（80％），置信区间为95％。在每种协议分析和意向治疗（ITT）分析中分析了初级和二次结果。MDA和NF-κ..B水平和凋亡索引被转换为对数值的值，以产生统计分析的标准化数据分布。我们描述了在每个协议分析中测量的每个变量的统计功率（表3.和4.)．使用配对分析数据T- 与软件Stata 15.5，置信区间95％和值<0.05。


变量	总主题（电源）	bcm - 95 (N)	安慰剂（N)	价值/协议	价值ITT.

预辐射				0.53	0.16
MDA（NMOL / MG蛋白）	100例(100%)	50.	50.
敏敏	16×x1016×10^−6. – 0.36	16×x1016×10^−6. – 0.27	11 × x1011 × 10^−4. – 0.36
的意思是⁺（SD）	-3.1（1.09）	-3.2（1.37）	-3.0（0.73）

后辐射				0.52	0.18
MDA（NMOL / MG蛋白）	56 (15%)	26.	30.
敏敏	0.01-0.24	0.01-0.24	0.01-0.23.
的意思是⁺（SD）	-2.6（0.67）	-2.5（0.69）	−2.6 (0.65)

Ddelta MDA（％）	54（95.6％）	25.	29.	0.43	0.15
敏敏	-83.2-1658.32	−83.2–764.0	-70.38-1658.32
的意思是⁺（SD）	-9.9（30.5）	-13.4（35.6）	-6.9（25.5）

预辐射				0.98	0.92
nf-κ..B（MCG / MG pprotein）	101 (26.4%)	51.	50.
敏敏	32×10^−5. – 1.26	32×10^−5. – 1.05	65 × 10^−5. – 1.26
的意思是⁺（SD）	-2.6（1.93）	−2.6 (2.04)	−2.6 (1.83)

后辐射				0.018	0.42
nf-κ..B（mcg / mg蛋白质）	56（11.7％）	26.	30.
敏敏	85×10^−4.-1.19	0.008-1.19	0.009 - -0.90
的意思是⁺（SD）	-2.9（1.38）	-2.4（1.44）	-3.3（1.22）

Delta NF-κB（％）	54（100％）	25.	29.	0.10	0.92
敏敏	-98.45-119687.1.	-98.45-119687.1.	-96.8-3227.8
的意思是⁺（SD）	-61.6（924.5）	−283.3 (1227.6)	129.4（494.2）

预辐射				0.01	0.61
凋亡指数（％）	40（17％）	21.	19.
敏敏	3.6–75.8	4.04-75.8.	3.6-58.86.
的意思是⁺（SD）	3.0（0.08）	3.2（0.79）	2.6 (0.72)

后辐射				0.04	0.91
凋亡指数（％）	40（98.9％）	21.	19.
敏敏	0.87-94.41.	5.81-94.41.	0.87-36.12
的意思是⁺（SD）	3.01（0.92）	3.3（0.82）	2.6（0.86）

Delta凋亡指数（％）				0.68	0.70
指数(%)	40 (92.3%)	21.	19.
敏敏	-2293.1-95.2	-494.6-95.2.	-2293.1-75.3.
的意思是⁺（SD）	11.6 (59.8)	14.9 (63.3)	7.9（57.2）

⁺将平均值转换为对数均值进行统计分析。Delta为辐射后结果-辐射前结果。


变量	病人人数 = 40.8%	bcm - 95 (N = 28)	安慰剂（N = 22)	协议价值	ITT的价值

治疗响应（重新入住）				0.61	0.90
完全的	23 (46%)	12 (42.8%)	11（50％）
非完整	27（54％）	16 (57.2%)	11（50％）

放疗后肿瘤肿块(mm)				0.18	0.86
敏敏	0–79	0–79	0-38
中位数（方差）	0（358.2）	72（483.5）	70（154.6）
的意思是⁺（SD）	1.5（1.6）	1.7（1.7）	1.1（1.5）	0.41	0.91

肿瘤δmmass（％）				0.39	0.95
敏敏	100-12	100-12	100 - 20
中位数（方差）	71（514.4）	89.4（29.03）	100 (27.1)
的意思是⁺（SD）	-63.2（40.1）	-59.2（41.1）	-69.1（39.0）	0.43	0.91

⁺将平均值转换为对数均值进行统计分析。Delta为辐射后结果-辐射前结果。

结果

3.1。患者和干预措施

在试验期间，对806名宫颈癌患者进行了资格筛查；195名患者被诊断为IIIB期鳞状细胞癌，74名患者被招募到另一项研究中并拒绝参与，结果有121名符合条件的患者（62.0%）。BCM-95组有61名患者，安慰剂组有60名患者。在开始治疗之前，有四名患者死亡（BCM-95组一名患者和安慰剂组三名患者）。在放射治疗期间，4名患者死亡，28名患者失去随访，35名患者违反了试验方案（图1）1.)．

BCM-95组和对照组的患者特征均衡。患者的年龄从25至69岁之间，平均年龄为50.47岁。大多数患者是小学或初中毕业生。患者奇偶校验不同于排感到11个平等。两组癌症特征也相似。大多数病例是LVSI阴性和中等等级。

两组的治疗辐射剂量相等（表2.)．完成协议治疗的患者也具有相似的特征（表5.)．


变量	总主题（N= 50)	bcm - 95 (N = 28)	安慰剂（N = 22)	价值

年龄（年）				0.18
敏敏	32-64	32-68	34-64
意思（SD）	49（49.8）	51.3（9.5）	47.5（7.8）

受教育程度（％）				0.42
根据小学生	16（32％）	10 (35.7%)	6（27.2％）
小学	22（44％）	10 (35.7%)	12（54.5％）
>高中	12（24％）	8（28.6％）	4（18.3％）

ProRadiation BMI（kg / m^2.)				0.98
敏敏	15.4-33.2.	15.4-33.2.	16.8-30.6.
意思（SD）	23.9（4.01）	23.9 (4.3)	24.0 (3.6)

平价				0.13
敏敏	0-9	0-9	0-6
中位数（方差）	3（4.2）	3（5.8）	3（1.71）

肌酐（mg / dl）				0.91
≤1.2 毫克/分升	39（78％）	22（78.5％）	17（77.2％）
> 1.2 mg / dl	11（22％）	6（21.5％）	5（22.7％）

凝聚肿瘤大小（mm）				0.31
敏敏	25 - 125	29-105	25 - 125
中位数（方差）	71（514.4）	72（424.7）	70（642.8）
的意思是⁺（SD）	4.1（0.34）	4.2（0.3）	4.1（0.39）	0.29

LVSI				1.
积极的	0（0％）	0	0
消极的	54（100％）	29（100％）	25 (100%)

年级				0.73
温和的	8（17％）	5（18.5％）	3（15％）
温和的	30 (63.8%)	16（59.2％）	14 (70%)
高的	9（19.2％）	6（22.3％）	3（15％）

辐射剂量				0.31
敏敏	66 - 78.4	69 - 78.4	66-74.
中位数（方差）	71（4.2）	71（5.5）	71（2.5）

我们发现在双臂辐射之前和之后的MDA水平没有差异，使用每个协议分析或ITT分析。nf-κ..B组的比赛水平在组之间没有显着差异（每个协议值= 0.98;ITT.值= 0.92)，但放射后，BCM-95组NF-水平较高κ..B按协议分析(值= 0.018）但不是ITT分析（值= 0.42）。nf-的差异κ..辐射前后的B水平没有统计学意义（表3.)．

BCM-95组中的凋亡指数在辐射前较高，并且在辐射后仍然保持较高，而辐射与每个协议分析中的安慰剂组（值= 0.01和0.04）但不在ITT分析中（价值 = 0.61和0.91）。在按方案分析或ITT分析中，凋亡指数没有显著变化(值= 0.68和0.70）（表3.)．

显示了按方案分析和ITT分析的结果分析。反应完全的病例占46%，反应不完全的病例占54%。两组之间完全应答的比例没有差异（根据方案分析） ;ITT分析 )．我们还分析了肿瘤大小的降低，在最终肿瘤大小或肿瘤大小的百分比变化方面没有发现群体之间的差异（表4.)．

在治疗过程中，BCM-95组所有不良事件的百分比为30％，安慰剂组中的24.5％。最常见的不良事件是胃肠道。治疗完成后，两组发生血小板减少症和白细胞减少症（表6.和7.)．两组之间存在不良事件的发生没有统计学差异（表8.)．


的意思是⁺	星期1	星期2	星期3	星期4	星期5	第6周	星期7	第八周	9周

BCM-95.	2.44	2.33	2.12	2.04	2.03	1.95	1.82	1.7	1.8
安慰剂	2.24	2.12	1.9	1.89	1.88	1.77	1.64	1.61	1.77
每个协议	0.053	0.06	0.08	0.24	0.2	0.11	0.17	0.34	0.55
PITT.	0.18	0.65	0.62	0.72	0.89	0.64	0.67	0.90	0.81


的意思是	星期1	星期2	星期3	星期4	星期5	第6周	星期7	第八周	9周

BCM-95.	5.99	5.94	5.7	5.6	5.6	5.3	5.5	5.6	5.6
安慰剂	6.00	5.95	5.7	5.6	5.7	5.6	5.7	5.7	5.7
每个协议	0.84	0.89	0.69	0.79	0.32	0.38	0.23	0.39	0.22
ITT.	0.71	0.87	0.32	0.77	0.68	0.94	0.50	0.70	0.41


不良事件	bcm - 95 (N = 60)	安慰剂（N = 57)	价值RR CI 95％

不良事件摘要
整体不良事件	18（30％）	14（24.5％）	0.47
			1.08 (0.87–1.3)
严重不良事件	6 (10%)	3（5.2％）	0.33
			0.5（0.13-1.9）
死亡	2（3.33％）	2（3.5％）	0.97
			1.03（0.15-7.09）
最常见的不良事件
胃肠道恶心/呕吐	18（30％）	14（24.5％）	0.47
			1.08 (0.87–1.3)
口炎	12（20％）	15 (25%)	0.45
			1.2（0.6-2.5）
腹泻	2（3.33％）	0	0.16
			1（1.00372-1.00377）
肝
增加AST	3（5％）	2（3.3％）	0.67
			0.68（0.11-3.9）
增加ALT	3（5％）	0	0.08
			1（0.01-0.14）
肾
增加肌酐	3（5％）	1（1.6％）	0.35
			0.3（0.03-3.2）
血尿	0	0
皮肤
皮炎	0	0

4.讨论

辐射杀死癌细胞的作用机制是通过高线性能量转移和间接通过ROS产生[10.］.辐射具有通过光子能量发射癌症经由电子引起电离的直接作用导致细胞死亡的治疗效果，然后断裂的DNA或由H 2 O分子形成自由基[13.］.辐射是通过光子能量发射导致细胞死亡，电子直接作用电离，破坏DNA或h2molecule形成自由基[11]来达到治疗癌症的作用。放疗的治疗反应基于5Rs:修复、再分配、再群体、再氧和放射敏感性。细胞死亡触发共济失调-毛细血管扩张突变(ATM)和共济失调-毛细血管扩张和Rad3相关(ATR)的表达，它们与DNA损伤反应相关，并维持真核细胞的基因组完整性[14.］.激活ATM和ATR调控细胞周期检查点通路，诱导细胞周期阻滞和DNA修复;如果损伤严重，细胞就会发生凋亡[14.］.

可以通过脂质过氧化物或来自癌细胞的细胞内产生来生产ROS。由癌细胞产生的ROS是导致DNA链破裂的ROS的主要来源，但癌细胞可以中和该ROS。脂质过氧化物，一种类型的RO，导致通过两个机制导致细胞死亡。第一种机制是破坏脂膜的组成，完整性，结构和动态。第二种机制通过脂质过氧化物降解产物交联到DNA或蛋白质。除了4-羟基诺之外，MDA是脂质过氧化物的降解产物。MDA可以是ROS生产或细胞膜损伤的标记。

ROS可以激活NF-κ..b在细胞质中并抑制nf-κ..b在核中。但是，大多数NF-κ..B表达诱导细胞存活。nf-κ..B可以通过两个途径，经典途径或替代路径激活[15.］.经典通路是通过促炎受体激活的，例如受体超家族，偶然的受体家庭，细胞因子受体和白细胞介素。经典途径通过TNF受体家庭激活，通过TRAF2和TRAF3招聘信号[15.］.辐射可以激活TNF-α.导致I的降解κ..B，但只有高剂量。nf-κ..b在NF-引起的辐射敏感度中发挥着作用κ..B活性通过内在或外在途径抑制细胞死亡。

两组治疗后MDA水平均升高，但无统计学差异。既往研究报道姜黄素可增加ROS水平在体外[16.,17.]. Seema等人报道，接受放疗的宫颈癌患者的MDA水平高于未接受放疗的对照组( )[18.］.我们在辐射后检测到MDA的增加。这可能是通过脂质过氧化物降解的ROS和细胞膜破裂的表现。在本研究中，BCM-95未导致MDA的水平增加，ROS的生物标志物。

nf-κ..在BCM-95组的辐射处理后，预期细胞质中的B水平预期保持高或增加。nf-κ..B级别没有显着增加BCM-95组。降低NF-κ..B级别可能是由于活性NF的易位 -κ..b到核心;BCM-95组在抑制该过程方面表现出轻微但没有显着效果。Garg等人。报告说nf-κ..B水平对应于癌症的更恶性特征，但NF-的外观κ..B postradiation对应于更好的生存[19.］.nf-κ..b在癌症预后有两个作用：它可以有助于预后差，也可以作为肿瘤抑制和促进细胞凋亡[20.］.

通过检测完整细胞中的DNA碎片来测量凋亡指数。姜黄素，如在几项研究中报道，可以诱导细胞凋亡在体外[11.,12.,17.]. 最近没有研究报道接受放疗的宫颈癌患者的凋亡指数。我们发现BCM-95组在放疗前和放疗后的凋亡指数较高；然而，这种差异并不显著。这一发现的一个可能解释是BCM-95不影响诱导凋亡，或者吞噬作用消除了大多数凋亡细胞。Kim之前的一项研究未能证明4或24小时后细胞凋亡 h辐射后。因此，目前尚不清楚什么是合适的辐射剂量，或者何时可以对细胞中的分子变化进行最佳检测。我们没有测量靶组织中生物胆蛋白的水平，因此无法评估通过MDA和NF诱导细胞凋亡的剂量相关反应-κ..B

接受生物滤蛋或安慰剂的患者显示出临床反应没有显着差异。生物蛋白酶组和安慰剂组的完全反应率分别为42.8％和50％。几项研究报告了在辐射或不基于再循环的同时化疗的辐射后报告临床反应，但它们都没有特异于局部晚期宫颈癌。报告的完整响应率为17.3％-86.9％[21.–23.］.生物姜黄素活性低可能是由于药代动力学因素导致细胞内浓度低所致。到目前为止，生物姜黄素的药代动力学研究尚未发表。与安慰剂相比，生物姜黄素没有改变不良事件发生率。耶格尔的研究R在12次志愿者中没有报告不良事件，消耗376毫克的生物滤育六次。基于我们的研究，提出了一种姜黄素诱导的凋亡分子活性模型。

本研究至于我们的知识首次，使用新鲜的人宫颈癌组织来检查BCM-95的分子响应和临床反应。我们的研究结果允许我们提出由人类姜黄素诱导的凋亡过程（图2.)．尽管没有统计学意义，但我们在生物蛋白酶组中报道了肿瘤的尺寸更大。未来的研究可以专注于这一结果，以评估生物透明蛋白在1阶段宫颈癌中的作用。该研究的主要限制是超过50％的案例中缺失的数据，这是因为并非所有患者都同意第二个活检。未来的研究只能用单一的活组织检查进行并分析生物透明蛋白酶的作用在体外，但结果不能表明生物蛋白酶在人体组织对分子水平的影响。在实施本研究时，由于CT扫描计划的长队列，一些患者延迟了他们的最终CT扫描;在未来，我们需要将CT扫描计划分开进行研究和医疗服务。

5。结论

总之，BCM-95显示了调节ROS，NF-的活动κ..B，和人宫颈癌细胞凋亡，但效果无统计学意义。需要进一步的研究来探索它对人类的影响。

缩写

ATM机:	Ataxia-Telanciectasia突变
ATR:	Ataxia Telangiectasia和Rad3相关
bcm - 95:	Biocurcumin品牌
DDR：	DNA损伤反应
DAPI：	4'，6-二氨基-2-苯基吲哚
ELISA：	酶联免疫吸附测定
FIGO：	国际妇科和妇产科联合会
ITT：	意向治疗
MDA:	丙二醛
MRI：	磁共振成像
nf-κ..B:	核因子κB
ROS:	活性氧
TUNEL:	末端脱氧核苷酸转移酶DUTP缺口末端标记。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据包含在文章中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

致谢

博士教授。Bambang Sutrisna，MHSC。（B.S.）（bsbambangsutrisna@gmail.com），在2020年3月23日逝世。

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