载脂蛋白E基因多态性、糖化血红蛋白与中国2型糖尿病患者外周动脉疾病风险的关系

摘要

背景。载脂蛋白E（载脂蛋白E）基因多态性已被发现影响血浆脂质浓度，以及与外周动脉疾病（PAD）的相关性进行了研究。但是，目前还不清楚是否ApoE基因在中国2型糖尿病（T2DM）患者PAD相关。因此，我们的研究旨在调查中国T2DM患者中载脂蛋白E基因多态性与PAD之间的关系。方法。共有192名T2DM患者被分为两组：2型糖尿病糖尿病有PAD。获得的临床和生化参数。聚合酶链反应被用来确定ApoE基因的基因型。多因素Logistic回归分析来确定PAD可能的危险因素。结果. PAD组与T2DM组ApoE基因型及等位基因频率无显著性差异。然而，有PAD的T2DM组倾向于ε4个/ε与T2DM组相比，3个基因型(21.5% vs. 11.3%)。多因素Logistic回归分析显示，吸烟，年龄，病程，TG，LDL，与HbA1c是对PAD的危险因素。结论. 这些结果表明ApoE与PAD之间没有相关性。

一。介绍

糖尿病患者外周动脉疾病（PAD）是在发病率增加的高风险相比，健康人[1]。PAD是一种疾病，其中斑块导致动脉阻塞，减少血流量[2]并能提高肢体和心血管事件的风险[3.,4]。

以往的研究表明，随着年龄的增长，吸烟PAD增加，糖尿病的患病率[5,6]。最近，它被广泛接受，遗传因素与PAD相关[7]载脂蛋白E（ApoE）是一种潜在的遗传因子[8,9]. PAD与载脂蛋白e相关的机制可能与脂质分布有关。载脂蛋白e在脂质代谢中起着重要作用，并负责改变胆固醇的循环水平[10,11]. 载脂蛋白e有三个等位基因(ε2个，ε3，和ε4)，这些等位基因依次形成6种不同的ApoE基因型(ε2个/ε2个，ε3个/ε2个，ε3个/ε三，ε4个/ε2个，ε4个/ε3，和ε4个/ε4）[德意志北方银行]。一般来说,ε4个等位基因比ε2等位基因和ε3个等位基因[13个,14个]。多项研究调查了ApoE和PAD之间的关联;然而，结果是不一致的。根据元研究，有ApoE和老年日本裔男子PAD [之间没有关系8]。然而，最近的一项研究发现ε2ε2基因型与心血管疾病高危患者PAD风险增加相关[9]。

到目前为止，还没有研究评估ApoE与中国2型糖尿病（T2DM）患者PAD的关系。因此，本研究旨在探讨载脂蛋白e（ApoE）对2型糖尿病（T2DM）患者PAD的影响。

2。材料和方法

2.1。病人和样品

该研究方案已获得常州市第二人民医院伦理委员会批准。从每位患者处获得书面或口头同意表格，并清楚地向他们解释研究的动机。从常州市第二人民医院2017年1月至2017年10月共招募192例2型糖尿病患者。T2DM定义为 要么 根据世界卫生组织的标准[15个]. 男性122例，女性70例，年龄21～87岁。将患者分为2型糖尿病组和2型糖尿病伴PAD组。无PAD的T2DM患者71例，无PAD症状、1型糖尿病、肝病等代谢性疾病。T2DM伴PAD（T2DM+PAD）121例，均经血管成形术或踝臂压力指数（ABI）确诊。排除标准包括1型糖尿病、肝病和其他代谢性疾病。采用问卷调查的方式，收集性别、年龄、糖尿病病史、吸烟习惯、高血压等资料。吸烟者被定义为那些曾经吸烟的人，即使他们不再是吸烟者。高血压是指血压在140/90 mmHg以上或服用抗高血压药物。测量身高和体重，体重指数（BMI）计算为体重（kg）除以身高（m）的平方。

2.2条。ApoE基因分析

2 mL of fresh blood sample was taken from each patient and collected in EDTA-containing tubes. Genomic DNA was extracted from peripheral blood using the DNA extraction kit (QIAGEN, Germany) and amplified by polymerase chain reaction (PCR). The primers for this reaction were sense 5AACAACTGACCCCGGTGGCG 3和反义5ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC 3(16个]. PCR首先在94°C（5 min）下进行初始变性，然后在94°C（45 s）、65°C（45 s）和72°C（45 s）下进行30个周期，然后在72°C（5 min）下进行最终延伸。ApoE基因型采用TaqMan®等位基因鉴别分析（应用生物系统公司，加利福尼亚州福斯特市，美国）。检测载脂蛋白e c.334T>c（参考SNP ID:rs429358），我们使用分析ID:c_20，对于c.472C>T（参考SNP ID:rs7421），我们使用分析ID:c_10。

2.3。外周动脉疾病的测量

简单地说，踝臂指数（ABI）是由踝关节收缩压（SBP）除以手臂收缩压（SBP）的比值计算得出的[17岁]. 踝关节和手臂的血压由ABI型装置（VaSera VS-1000，日本）测定。PAD的诊断标准是 (18岁,19个]。参与者也被列为有PAD，如果有一个主要动脉的50％以上，至少一个狭窄或血管成形术考试期间他们的分支之一。

2.4。生化测定

在10-12小时后，快速采集患者的血液样本，然后在1小时内立即测定。总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）由自动分析仪（Cobas 8000，德国）测量。糖化血红蛋白（HbA1c）值采用高效液相色谱法（Tosoh G8，日本）测定。

2.5。统计分析

所有的统计分析使用SPSS 16.0（SPSS公司，Chicago，USA）进行。从正态分布参数数据表示为在 。独立样本 -进行测试，以发现在年龄，疾病持续时间，体重指数，糖化血红蛋白，总胆固醇，高密度脂蛋白，低密度脂蛋白和甘油三酯之间的区别，在T2DM和T2DM与PAD组。采用卡方检验或Fisher精确检验分析两组患者的性别、高血压、糖尿病家族史和吸烟习惯等分类数据。用卡方检验或Fisher精确检验检测各组间ApoE等位基因和基因型的频率差异。经年龄、性别、体重指数、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、糖化血红蛋白、吸烟习惯、高血压、病程、糖尿病家族史和载脂蛋白e校正后，采用95%可信区间的校正比值比（OR）确定PAD的独立危险因素。统计显著性定义为 。

3.结果

3.1。研究人口的结构和生化指标

最初，共有240名中国T2DM患者参加了本研究。48名受试者排除由于未完成的问卷调查，不成功的基因分型，或两者。最后，192名参与者被纳入样本分析。患者人口统计和生化数据示于表1。2型糖尿病PAD患者中女性39例(32.2%)，吸烟者63例(52.1%)。他们的病史和家族史资料显示，75名(62.0%)患者有高血压，49名(40.5%)患者有糖尿病家族史。在年龄、病程、吸烟和高血压方面，有和没有PAD的2型糖尿病患者存在显著差异。其他临床资料，如性别、糖尿病家族史、TC、TG、HDL、LDL、HbA1c等，两组间差异无统计学意义。此外，患有PAD的2型糖尿病患者的BMI水平与2型糖尿病患者相似。

3.2。载脂蛋白e基因型和等位基因频率

所述的ApoE基因型和等位基因频率的分布示于表2和3.，分别是。所有患者的基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡。通过基因计数估计等位基因频率。单纯2型糖尿病与单纯2型糖尿病合并PAD患者ApoE基因型及等位基因频率无显著性差异。然而，有PAD的T2DM组倾向于ε4个/ε与T2DM组相比，3个基因型(21.5% vs. 11.3%)。此外,ε4等位基因频率更高ε2等位基因在2型糖尿病合并PAD组中出现频率较低，但差异无统计学意义。

3.3。ApoE基因的等位基因协会血脂

载脂蛋白E等位基因和血浆脂质水平之间的关系在表中示出4和5。将两组患者(T2DM及T2DM合并PAD)进行分组ε3个/ε3个载波（ε3个/ε3),ε4个载波（ε3个/ε4ε4个/ε4），和ε2个载波（ε2个/ε3和ε2个/ε2）。两位与会者谁了ε2个/ε4基因型被排除在该分析的，因为对脂质代谢的相对效果。在血浆脂质级三个ApoE基因的等位基因组间无显著差异。此外，我们没有发现之间的血脂显著差异ε3个/ε3艘航母，ε4艘航母，以及ε两组各2例。

3.4条。临床参数与PAD风险的关系

采用多因素logistic回归分析与PAD相关的临床因素，将所有受试者视为一个整体，以PAD的存在为因变量( 和 ）;性( 和 ）高血压( 和 ）抽烟 （ 和 ）糖尿病家族史（ 和 ）载脂蛋白e ( (ε2个/ε2和ε3个/ε2), (ε3个/ε3和ε4个/ε2和 (ε4个/ε3和ε4个/ε4）），BMI，TC，TG，HDL，LDL，糖化血红蛋白，和病程被认为是协变量。结果示于表6。我们发现，吸烟，年龄，病程，TG，LDL，与HbA1c是PAD的存在显著预测（ , , (吸烟); , , （年龄）； , , （病程）； , , （TG）; , , (低密度脂蛋白);和 , , （糖化血红蛋白）。

四。讨论

在我们的研究中，中国2型糖尿病患者的载脂蛋白e与PAD之间没有关系。然而，有PAD的T2DM组倾向于ε4个/ε与T2DM组相比，3个基因型(21.5% vs. 11.3%)。需要进一步的研究探讨PAD在中国T2DM患者的ApoE的潜在作用。

载脂蛋白e与血脂谱的关系仍有争议。这个ε等位基因在中国人群中与高水平的血清TC和LDL有关。来证明ε4等位基因对血脂水平的影响很大，我们分析了在三个ApoE基因的等位基因组之间的血脂水平ε3个/ε3艘航母，ε4艘航母，以及ε分别2个载波在这两个群体。虽然ε4个携带者有较高水平的LDL比ε3个/ε3和ε2个携带者，差异无统计学意义。这可能是由于患者的遗传背景、饮食限制和积极降脂治疗的差异所致。

本研究中PAD指的是下肢和上肢动脉闭塞性疾病[20个]，和其发生和发展涉及到许多因素，如高血糖，异常脂质代谢，炎性变量，种族和基因型[7]。载脂蛋白e被认为是外周动脉疾病的重要候选基因。因此，人们对ApoE与PAD的关系进行了大量的研究。SMART研究分析了广泛的患者样本中ApoE与PAD的关系，发现ε2个/ε2基因型似乎与轻度和重度PAD都有关系[9]. 在意大利南部的一项研究中，在ε观察到4个载波[14个]. 在一个日裔美国人的大样本中，ApoE和PAD之间没有关系，但是ε4个/ε3在吸烟者中，新诊断和流行糖尿病组的PAD患病率明显高于其他糖尿病组[8]。在我们的研究，与PAD患者的2型糖尿病往往有多个基因型ε4个/ε3比2型糖尿病患者，但这并没有达到统计学意义。这种缺乏意义的可能是由于数量相对较少的患者和种族差异的影响。显然，载脂蛋白E的频率等位基因和基因型不同群体之间变化[10,21岁]。因此，ApoE在PAD中的潜在作用还有待进一步的深入研究。

传统的危险因素（年龄[22个]，吸烟[23个,24个]，和血脂异常[25个- - - - - -27个]）已经相对于PAD，这与我们的观察是一致的广泛研究。这样做的原因是，吸烟会增加氧化应激和氧化应激会增加血管的炎症，导致PAD [28个]。血脂异常的可能的解释是，它可能会导致增加的炎症，单核细胞活化和血管内皮功能障碍[29个]。两组之间的年龄差异显著，这表明年龄的增长可能导致更大的机会发展PAD [30个]。

此外，虽然糖化血红蛋白的水平与PAD患者比2型糖尿病患者的2型糖尿病时，我们发现，糖化血红蛋白可能是在中国T2DM患者PAD的危险因素。糖化血红蛋白与PAD组的2型糖尿病在较低的水平可能是由于在高风险人群更好的DM治疗。糖化血红蛋白是血液中的血红蛋白与葡萄糖的非酶糖化反应的产物，和晚期糖基化终产物（AGEs）由葡萄糖，蛋白质，和脂质通过非酶糖基化反应产生的[31个]，因此糖化血红蛋白是与年龄。此外，年龄与PAD相关。首先，它们可以促进活性氧和灭活的一氧化氮（NO）的产生，导致副产物的NO，过氧化亚硝酸盐[的形成增加毒性的32个,33个]。此外，年龄是由内皮NO合酶表达的抑制抑制内皮细胞衍生的NO产生，导致血管舒张，炎症反应，血小板活化，和聚集[临界34个,35岁]。最后，他们可能会导致泡沫细胞的迁移，加速动脉粥样硬化的进展[36个]。

在限制方面，我们的研究人群仅限于T2DM患者。因此，我们的结果可能并不适用于健康人。此外，这项研究仅限于中国的样本量。因此，在这项研究中发现的遗传关联可能不能推广到其他人群。最后，我们没有药物治疗收集数据，并计划收集上述数据中我们进一步研究。

5个。结论

总之，我们的研究发现ApoE与PAD之间没有关系。此外，吸烟、年龄、病程、甘油三酯和低密度脂蛋白可加重这两种疾病的进展。此外，被确定携带高危因素的2型糖尿病患者应积极治疗，以防止PAD的进展。

数据可用性

不适用。手稿的结论是基于相关数据集，这是在手稿可用。

利益冲突

作者宣称，他们没有竞争的利益。

作者的贡献

御景胡灵刘廷焕分析数据并起草了手稿。燕王设计的研究和分析数据。余敏，阳白，通宝丰和凭仗参与收集血液样品和资料。所有作者阅读并认可的终稿。御景胡灵刘廷焕同等贡献这项工作。

致谢

这项工作得到了常州市青年科学基金会的资助（资助号为QN201933）。作者感谢那些血液被用来为这项研究生成数据的病人。作者还感谢钱女士提供了出色的统计建议。

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