文摘
eb病毒(EBV)是一种常见的病毒在世界范围内是一个病原体发展的许多疾病,包括癌症。最近的报告表明协会EBV与肿瘤发生在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)。此外,EBV报道出现在扁桃体组织,这表明病毒感染和扁桃体疾病之间的密切关系,包括慢性扁桃体炎。这项研究的目的是分析EBV DNA的患病率与头颈部鳞状细胞癌86例,144年70年慢性扁桃体炎患者,健康人(对照组)EBV感染之间的关系和临床病理的人口学特征和兴奋剂的使用在所有的学习小组。本研究的目的也是分析合并感染的患病率与人类乳头状瘤病毒(HPV)。前DNA隔离后,EBV检测使用的EBV工具包执行实时聚合酶链反应。EBV感染的患病率与头颈部鳞状细胞癌患者中,慢性扁桃体炎,患者和对照组为47.7%,60%,和24.3%,分别。控制相比,发病率明显高于慢性扁桃体炎患者EBV的HNSCC表明EBV可能是一个潜在的危险因素。没有发现协会EBV感染与人口之间或临床数据。进一步的研究是必要的,由于不确定的报告,主要是与地理分布有关,样品类型和检测技术。 Considering the prevalence of the virus and the risk of serious diseases, attention should be paid to screening diagnosis and prevention of the infection.
1。介绍
巴尔病毒属于gammaherpesviruses和由一个二十面体衣壳的直径超过100海里,162衣壳粒组成,围绕一个双链脱氧核糖核酸(DNA)分子(1]。此外,EBV有两种类型,即EBV-1和EBV-2(以前称为EBV-A和EBV-B)。病毒主要通过体液传播,唾液、血液、精液(2]。EBV感染的症状可能会有所不同,这取决于年龄和免疫力。他们大多是温和善良的年轻人3]。根据各种来源,90 - 95%的成年人感染EBV,无论社会经济地位和居住的地方。最近,EBV的兴趣显著增加由于报告潜在的致癌病毒的性质(4,5]。研究表明,EBV可能参与发起和/或增强epithelial-mesenchymal过渡(EMT),这是很重要的在肿瘤进展和转移6- - - - - -9]。据报道,在致癌病毒,EBV可能与肿瘤的发展有关头颈部鳞状细胞癌(HNSCC) [10]。
HNSCC疾病相关重要解剖区域如口腔、鼻咽腔,喉(11]。HNSCC是全世界第六最普遍的癌症(890000例新病例和每年约450000人死亡)(12]。大约90%的所有癌症的头部和颈部区域来源于鳞状细胞(13]。这些癌症的发生是环境因素和生活方式密切相关。研究表明,增加的风险因素HNSCC包括烟草暴露和酗酒14- - - - - -16]。
术语“慢性扁桃体炎”没有明确的定义,它通常是指一个喉咙痛持续3个多月伴有淋巴结的扁桃体的炎症反应(17]。大多数慢性炎症发生在腭和/或咽扁桃体(18]。扁桃体发炎感染的焦点,可以在其他器官产生重大影响。在慢性炎症,扁桃腺切除术通常是执行(19]。
这项研究的目的是分析EBV DNA的患病率与头颈部鳞状细胞癌患者中,慢性扁桃体炎患者和健康人EBV感染之间的关系和临床病理的人口学特征和兴奋剂的使用在所有的学习小组。本研究的目的也是分析合并感染的患病率与人类乳头状瘤病毒(HPV)。
2。材料和方法
2.1。研究人口和样本采集
这项研究是生物伦理委员会批准的机构对医学伦理审查委员会,没有。知道/ 0022 / KB1/49/16也没有。知道/ 0022 / KB1/49 /二/ 16/17)。之前所有志愿者给书面知情同意参与这项研究。
这项研究是由300名患者,包括与头颈部鳞状细胞癌86例,70例慢性扁桃体炎患者。对照组由144名健康的个体。信息在人口统计学变量包括年龄、性别、和兴奋剂的使用酒精和烟草等收集来自所有患者和健康人。患者在研究团体在美国耳鼻喉科学诊断和肿瘤在扎布热喉科学,医科大学在卡托维兹西里西亚。癌症样本中获得手术切除和扁桃体组织样本在扁桃腺切除术。
HNSCC在肿瘤组织的诊断是由常规组织学评估后手术切除。组与慢性扁桃体炎,样本抽样在扁桃腺切除术后病理组织学检查证实。两组的样品都储存在-80°C,直到在液态氮冷冻后进一步分析。
从健康志愿者收集口腔上皮被刮削下的碎屑。口腔黏膜的脸颊刮用棉签棒DNA提取紧随其后。所有的分子分析的医学和分子生物学,医学科学学院在扎布热,西里西亚的医科大学。此外,人乳头状瘤病毒感染状况的研究参与者得到从我们前面的研究分析合并感染20.]。
2.2。学习小组
HNSCC组包括86名患者(平均年龄 年);这组由28(32.6%)妇女和58例(67.4%)人(表1)。在86名患者,肿瘤的解剖网站如下:舌头( ,48.8%)、口腔的地板( ,18.6%)、下颌骨( ,17.4%),左腭扁桃体( ,8.1%)、脸颊和软腭( ,7.0%),和腭扁桃体( ,5.8%)。一例HNSCC发现retromolar膀胱三角区(1.2%)。此外,22例(25.6%),肿瘤被发现在多个位置。放疗或化疗前不进行任何病人肿瘤切除手术。肿瘤的临床分期是根据TNM分类特征的美国癌症联合委员会(与)8th版(21]。详细的临床资料,包括T-classification (T)淋巴结状态(N),组织学分级(G),给出了表2。
慢性扁桃体炎组70例患者(平均年龄组成 年);这个群体包括36(51.4%)妇女和34(48.6%)人(表1)。
健康对照组由144个人(平均年龄 年);这一组是由91名(63.2%)妇女和53例(36.8%)人(表1)。
2.3。DNA制备
所有肿瘤和扁桃体组织样本矩阵与赖氨酸慢慢解冻,均质陶瓷珠子在FastPrep®-24(美国加州MP生物医学,欧文),然后,使用基因DNA分离矩阵组织DNA净化设备(EURx、Gdańsk、波兰)按照标准程序。在对照组中,DNA从口腔上皮细胞分离使用GeneMATRIX Swab-Extract DNA净化设备(EURx、Gdańsk、波兰)根据制造商的指示。的数量和质量提取的DNA进行了分析使用分光光度计(NanoPhotometer珍珠,Implen,德国)。
2.4。EBV通过聚合酶链反应检测
EBV与EBV PCR检测进行工具包(GeneProof EBV / ISEX / 100年,布尔诺,捷克共和国)使用实时PCR根据制造商的协议使用QuantStudio 5(热费希尔科学、沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)。放大的方法由一个特定的守恒的编码基因的DNA序列的单个副本核抗原1 (EBNA1)和测量荧光的增加。EBV的存在表示的家人荧光团的荧光。内部标准(是)是包括在反应混合物,也控制DNA提取过程的质量。积极是放大检测到十六进制荧光团的荧光通道。
2.5。人乳头状瘤病毒检测和人乳头状瘤病毒类型的决心
人乳头状瘤病毒感染状况的研究参与者得到从我们之前的研究20.]。人乳头状瘤病毒的亚型进行探测和识别GenoFlow HPV(人乳头瘤病毒)阵列测试套件(DiagCor生物科技有限公司、香港)。彩色膜表示积极点,记录通过扫描(CapturePro形象,CaptureREAD 3.1。但生物科学公司,香港)。所有运行包括积极的和消极的控制和放大和杂化控制。
2.6。统计分析
克鲁斯卡尔-沃利斯检验和Fisher精确检验被用于比较组基于EBV地位和年龄,性别,吸烟,偶尔/定期饮酒,酒精和烟草使用。EBV状态和巴尔病毒和人乳头状瘤病毒合并感染影响临床T-classification (T)淋巴结状态(N),组织学分级(G),原发肿瘤的定位评估利用克鲁斯卡尔-沃利斯和费舍尔准确测试。所有使用STATISTICA 13.3统计分析软件(StatSoft。美国俄克拉何马州的塔尔萨Inc .)的显著性水平 成套的临床数据。因此,一些病人或控制被排除在研究之外。
3所示。结果
3.1。在所有学习小组EBV的患病率
EBV出现在慢性扁桃体炎患者的60%(42/70),明显高于( )比对照组(24.3%,35/144)。然而,它没有明显( )更普遍比HNSCC组(47.7%,41/86)。EBV-positive地位明显更普遍的HNSCC组和慢性扁桃体炎组比健康对照组( ,图1)。
合并感染人乳头状瘤病毒和EBV组与慢性扁桃体炎的最常见(15.7%)。HNSCC组,共感染发生在11.6%的病人在对照组仅在7.6%(图1)。合并感染EBV与HPV在HNSCC患者明显高于淋巴结状态N2(表S1)。这种效果只能观察到患者合并感染。没有其他的显著差异观察合并感染的患病率。
3.2。临床和人口数据,使用兴奋剂,EBV地位与头颈部鳞状细胞癌组和慢性扁桃体炎和对照组
没有发现重大协会之间的EBV地位和年龄,性别,吸烟,偶尔/定期饮酒,或饮酒和吸烟与头颈部鳞状细胞癌组和慢性扁桃体炎或对照组。此外,没有发现显著的协会之间的EBV状态和临床T-classification (T)淋巴结状态(N),组织学分级(G),或者HNSCC患者原发肿瘤的位置。在分析所有样品( ),我们发现只有一个重要的协会中EBV感染的患病率低群偶尔和普通酒精(表的用户S2)。
4所示。讨论
eb病毒(EBV)是第一个疱疹病毒与癌症和被感染的成年人口。EBV生命周期分为溶解阶段和潜在的阶段。潜伏感染EBV基因的表达上皮细胞可能是与他们转换为癌细胞(22]。
这项研究的目的是阐明EBV是否有影响的生物行为HNSCC致癌作用和慢性炎症过程通过分析EBV患病率和临床病理的HNSCC患者的人口学特征,慢性扁桃体炎患者和健康人。我们的分析也集中在外部环境因素,如饮酒和吸烟,合并感染人类乳头瘤病毒(HPV)。
Polz-Gruszka et al。23)进行了一项研究发现在波兰人口和报道,EBV在57.5%(46/80)的样本,包括喉部癌的60%(30/50)和53.3%(16/30)的口咽癌。此外,该病毒已被报道更频繁超过50岁的病人(66.7%)(24]。在另一项研究通过Polz-Gruszka et al。24),其中包括154名患者主要口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口咽鳞状细胞癌(OPSCC)波兰人口,结果表明,27.3%的检测EBV阳性标本,在口腔口咽的29.1%,26.1%24]。78年一项研究涉及患者组织学证实OPSCC和40名健康对照组来自波兰,EBV DNA中发现肿瘤样本的51.3%和20%的控制(25]。在随后的研究基于146名波兰患者EBV感染的患病率是34.3%,口咽癌8.6%癌症的口腔26]。在我们的研究中,47.7%的病例有EBV HNSCC。这样不同的结果的检测EBV可能与HNSCC组的差异,尤其是与不同位置的主要肿瘤。她等人进行了一次重要的荟萃分析研究EBV与OSCC的协会(27]。13个研究的结果(28- - - - - -40)建议积极EBV感染与OSCC的风险之间的联系。参与者的总数是686病人和433个对照组。九个研究使用石蜡包埋组织和四个研究使用新鲜冷冻组织。不同的检测技术,如PCR、嵌套PCR RT-qPCR里面,包含IHC(免疫组织化学),(原位杂交)被用来检测EBV [27]。这些测试表明微分检测EBV。因此,采用适当的方法和技术在检测EBV是至关重要的。仍然没有黄金标准在这种类型的研究。此外,数据表明,在OSCC EBV的角色可能取决于地理位置(41]。Jaloluli et al。42)检测EBV在OSCC的样本8不同国家(挪威、英国、瑞典、美国、斯里兰卡、印度、苏丹和也门)。155年的口腔癌、85例(55%)患者EBV阳性。EBV-positive样品(80%)是最普遍的英国患者。
在我们的研究中在HNSCC情况下,合并感染EBV和人乳头状瘤病毒发生在11.6%的病人。此外,合并感染与pathoclinical特性。集团的N2淋巴结状态,患者合并感染EBV和更频繁地观察人乳头状瘤病毒。在一项由Polz-Gruszka et al。24]在波兰人口,合并感染EBV与HPV检测在15%的样本24]。在另一项研究通过Polz-Gruszka et al。24),154年的波兰人口上进行初级OSCC患者OPSCC,合并感染人乳头状瘤病毒和发现EBV在7.8%(12/154)的患者,口咽患者9.7%(6/62),6.5%(6/92)在口腔患者。之间不存在相关性HPV或EBV感染与年龄或吸烟24]。在另一项研究,旨在分析与人乳头状瘤病毒合并感染的患病率,EBV,和多瘤BK病毒(BKPyV)在口腔、口咽,波兰146年和喉鳞状细胞癌患者中,43.8%的样本中,检测出一个感染和混合感染的56.2%。合并感染人乳头状瘤病毒/ EBV,人乳头状瘤病毒/ BKV EBV / BKV被发现在34.1%,22%,和23.2%的样本,分别。这三个测试病毒出现在17标本。人乳头状瘤病毒更常见于口腔癌症患者(44.5%)在EBV口咽癌(57.1%)。EBV喉癌中发现(34.3%)和口腔癌症病人(8.6%)。年级G3和N1和N2阶段是最常见的人乳头状瘤病毒(EBV合并感染患者。阶段N1和N2是所有三个病毒感染的特点。年级G3在场在人乳头状瘤病毒/巴尔病毒合并感染,高四倍五倍EBV / BKV合并感染,和十倍的样本与所有三个病毒只与EBV检测(26]。江泽民等人建议,存在EBV感染可能促进患有乳腺癌的侵袭性OPSCC肿瘤(43]。另一方面,人乳头状瘤病毒的存在会增加EBV的致病效应影响的口腔上皮细胞和细胞周期延长EBV [44]。相反,研究中,古伯伯et al。45]显示改变后EBV感染人乳头状瘤病毒的生命周期的不灭的上皮组织。hpv相关细胞变化导致潜在EBV感染的形成(45]。
一些作者表明EBV也发现扁桃体疾病,包括慢性扁桃体炎(46- - - - - -50]。在我们的研究人群中,我们观察到在统计上有显著差异的发病率EBV-positive病例组与慢性扁桃体炎和对照组之间( ;60%比24.3%)。一些作者指出微分频率反复扁桃体炎和病毒的肥厚性扁桃体炎从26至43% (48,51- - - - - -54]。据报道,EBV与扁桃体炎的患病率的变化取决于方法(48]。更高的检测EBV在扁桃体组织中演示了使用PCR研究,这被认为是一种快速、具体,和敏感的方法来检测最少的病毒DNA据Peiper et al。55]。使用这种方法,我们的研究显示存在EBV慢性扁桃体炎患者的扁桃体组织中42/70(60%)例。同样,与慢性扁桃体炎相关的其他研究表明存在EBV在54.1%的情况下(13/24)(47)在46%的情况下(23/50)(49]。其他非癌变扁桃体炎的报告检测到病毒在大多数情况下,即,在53.6%56)和58%慢性hyperplasic扁桃体炎(57)和64%的扁桃体急性传染性单核细胞增多症(58]。建议口腔和咽部上皮细胞,尤其是扁桃体组织,被认为是EBV的主要储层(48,57]。此外,其他研究显示扁桃体淋巴细胞病毒复制的网站(49,50,53]。
Gonzalez-Lucano [49)报道,年轻的慢性扁桃体炎患者存在EBV的更大49]。这样的报告也证实了其他研究非癌变扁桃体组织,如复发性和肥厚性扁桃体炎(46,48,51]。这是怀疑EBV感染孩子的扁桃体,从而可能导致复发的发展和肥厚性扁桃体炎(48]。另一个假设是,过度使用抗生素会导致扁桃体微生物的变化和扁桃体(病毒感染的风险增加47]。在我们的研究中,我们没有观察到相关性慢性扁桃体炎患者的年龄和EBV的患病率增加。在我们的学习小组中,它可以解释为没有孩子的情况下,他们通常有EBV拷贝数高。然而,时间以及成熟的特异性抑制(免疫是必不可少的因素56]。
此外,我们的研究显示,15.7% EBV /慢性扁桃体炎组的人乳头状瘤病毒合并感染。搜索的数据库(PubMed和Medline)并没有发现其他报告建议合并感染在慢性扁桃体炎。雪等人研究样本的儿童扁桃体和腺肥大了EBV感染扁桃体组织的45%,但没有发现任何EBV /人乳头状瘤病毒合并感染患者(59]。江也得到类似的结果(43),观察EBV感染舌癌基地样本的20%。然而,人乳头状瘤病毒是没有证实43]。在一项研究中患者的良性的扁桃体,上述病毒,只有DNA-EBV中发现超过一半的样本。作者得出的结论是,人乳头状瘤病毒和EBV感染彼此独立的60]。有趣的是,在体外研究表明,在合并感染的情况下在口腔鳞状上皮细胞、人乳头状瘤病毒的存在会增加EBV的发病机制(44]。
最后,似乎可以与EBV相关病因的慢性扁桃体炎。进一步的研究应该关注解释EBV感染在慢性扁桃体炎的作用更大的人口。数据可能是有用的在设计公共卫生策略,包括临床检查和EBV测试。
EBV的患病率在健康个体范围从0到90%。在病例对照研究中,我们发现24.3%(35/109)病例EBV的口腔拭子标本,这是与其他报告中EBV的18.1%(17/94)的样本中,检测出口腔脱落细胞(61年),22%(34/157)的喉咙洗液(62年),20%(4/20)的样本收集的鳞状上皮细胞刮(63年]。唾液中EBV DNA被发现在30%以上的情况下(64年,65年),这是符合毛泽东和史密斯(66年)报道,25%(15/60)的不吸烟者和偶尔的酒精用户显示EBV积极性[66年]。没有发现协会之间的EBV地位和人口因素或兴奋剂的使用,包括吸烟、酗酒,这是符合其他研究(66年,67年]。然而,Kuri等人报道更频繁的EBV血清阳性的女性(68年]。毛和史密斯66年]显示统计无关紧要的老年(> 60岁)之间的关系和EBV的患病率66年]。一些研究发现,EBV的患病率随着年龄的增加(64年,68年]。这些报道相反,古普塔等人观察EBV最频繁的群30—39岁(69年]。另一项研究报告没有老年人对EBV的患病率的影响(38]。病毒的血清样本中也检测到61%69年和85.3%的病例68年]。明显高于结果所示的研究病毒中发现90%(43/48)的喉咙洗液的成年患者,这正好与总体数据EBV血清阳性的日本人口(64年]。
在我们的研究中,我们检测到病毒合并感染,7.6%的健康志愿者。几个百分比的同样低的结果是得到麦考密克et al。(13.3%)70年)和Lattario et al。(15%)71年对颈椎健康个体样本)。在波兰的一项研究中,作者报道人乳头状瘤病毒(2.5%)和EBV感染(20%)血清和唾液样本25]。在突尼斯研究Kahla et al .,没有人乳头状瘤病毒或EBV感染宫颈活检中发现对照组(72年]。进一步研究HPV相关的机制和EBV共存,以及筛选健康个体的早期检测致癌病毒的影响癌症恶化的风险,是重要的72年]。
分子生物学等科学领域的飞速发展,基因工程,以及病毒学促成了新疫苗的发展选择,主要感染的预防和随后的慢性疾病。因为EBV与许多恶性肿瘤包括HNSCC、EBV疫苗的发展也是必需的。
5。结论
总之,在HNSCC EBV和慢性扁桃体炎的患病率显著高于对照组,表明EBV可能被定义为一个对这些疾病的潜在危险因素。研究结果表明,致癌病毒,包括EBV,不是唯一的危险因素HNSCC但可能发展的促进与其他病因因素的致癌作用。考虑到病毒的流行和严重疾病的风险,要注意检查的诊断和预防感染。除了需要广泛使用方法快速有效地检测EBV,预防性EBV疫苗将承诺在EBV-associated癌症的预防。
缩写
| 与: | 美国癌症联合委员会 |
| BNLF: | 脑源性神经营养因子 |
| 埃伯斯: | eb病毒编码小rna |
| EBNA: | 巴尔核抗原 |
| EBV: | 巴尔病毒 |
| EMT: | Epithelial-mesenchymal过渡 |
| HHV-4: | 人类gammaherpesvirus 4 |
| 艾滋病毒: | 人类免疫缺陷病毒 |
| HNSCC: | 头颈部鳞状细胞癌 |
| 人乳头状瘤病毒: | 人类乳头状瘤病毒 |
| 包含IHC: | 免疫组织化学 |
| 伊什: | 原位杂交 |
| LMP: | eb病毒潜伏膜蛋白 |
| microrna的: | 微 |
| 全国人大: | 鼻咽癌 |
| OPSCC: | 口咽鳞状细胞癌 |
| OSCC: | 口腔鳞状细胞癌 |
| 聚合酶链反应: | 聚合酶链反应 |
| PTEN: | 磷酸酶和tensin同族体 |
| STAT3: | 信号传感器和转录激活3 |
| TNBC: | 三阴性乳腺癌。 |
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项工作是由科技部支持高等教育(没有。知道- 1 - 037 / N / 8/0)。
补充材料
补充1。表S1: EBV感染和合并感染EBV协会和人乳头状瘤病毒和临床参数。
补充2。表S2: EBV感染之间的联系和合并感染EBV和人乳头状瘤病毒和人口参数和吸烟和饮酒。