描述的耐热性的8-Oxoguanine DNA糖基化酶/ N不匹配的特定Thermoacidophilic Archaeon热原体属volcanium

文摘

鸟嘌呤(G)的氧化,8-dihydro-8-oxoguanine(去)形式的一个主要DNA损伤所产生的活性氧(ROS)。去可以纠正DNA糖基化酶(Ogg),酶参与基地切除修复(BER)。未修理的去诱发不匹配的碱基配对与腺嘌呤(A);结果,不匹配引起的点突变,从G与胞嘧啶(C)胸腺嘧啶(T)与腺嘌呤(a),在DNA复制。在这里,我们报告的描述的一个假定的Ogg thermoacidophilic archaeon热原体属volcanium。204 -氨基酸序列的假定的Ogg (TVG_RS00315)股票重要的DNA糖基化酶的序列同源性Methanocaldococcus jannaschii(MjaOgg)和硫化叶菌solfataricus(SsoOgg)。六个histidine-tagged TVG_RS00315重组蛋白基因表达大肠杆菌和纯化。Ogg蛋白质耐热性的,与最优活动在pH值为7.5附近,温度60°C。酶显示DNA糖基化酶和apurinic / apyrimidinic(美联社)裂合酶活动/ N (N是一个T G,或C)不匹配;但它无法消除U从U / G和T T / G,作为失配糖基化酶(MIG)。这些结果表明TvoOgg-encodingTVG_RS00315是Ogg2家族的一员t . volcanium。

1。介绍

生产活性氧(ROS),如过氧化氢、过氧化物,和羟基自由基,一直与癌症的发生和发展(1]。ROS是由细胞呼吸或炎症反应由于电离辐射或由于环境暴露于过渡金属,化学氧化剂或自由基。一般来说,ROS是消除酶或nonenzymatically在正常细胞。然而,功能异常的细胞经常处于氧化应激状态导致高浓度的细胞损伤(2]。

在四个DNA碱基(鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)), G是特别容易受到氧化损伤从ROS由于其较低的氧化还原电势3]。8-dihydro-8-oxoguanine 8-Oxoguanine (7;去)是最常见的氧化产品来自G,和最普遍的DNA分子中观察到的病变。诱发不匹配的配对,/,碱基配对的规则,和复制的DNA可能导致相反的错误插入。防止颠换突变,去识别和切除的基地切除修复(BER)途径2,4]。

在大肠杆菌三种不同的酶处理基因组中去合作。MutM切除可以从双链DNA, MutY可以从走错配切除腺嘌呤(A),和小狗是一种防止8-oxo-dGTPase 8-oxo-dGMP到新生的DNA (5,6]。在真核生物中,处理主要是由Ogg。虽然MutM和Ogg都是双功能酶催化N-glycosylase和apurinic / apyrimidinic(美联社)裂合酶活动,MutM主要是存在于细菌和Ogg是在真核生物和古菌发现,除了非典型细菌Ogg1acetobutylicum梭状芽胞杆菌(CacOgg) [7]。

Ogg酶分为三个独立的家庭,即Ogg1, Ogg2,热点去糖基化酶(兴奋的)8]。Ogg1的结构,智人Ogg (hOGG1) [9];Ogg2,Methanocaldococcus jannaschiiOgg (MjaOgg)和硫化叶菌solfataricusOgg (SsoOgg) [8];兴奋的,Pyrobaculum aerophilumOgg (Pa-AGOG) [10)已经解决。兴奋的是HhH-GPD DNA糖基化酶家族的成员10]。一个兴奋的领域包含非常低的序列与Ogg1身份(即。,13–19% identity between Pa-AGOG and hOGG1), and the HhH-GPD motif of AGOG is noncanonical; the GO recognition activity of AGOG is unlike that observed in hOGG1 because of these differences in the HhH-GPD motif [10]。

的Ogg1糖基化酶和美联社裂合酶活动相关联,通过一个共同的主题:helix-hairpin-helix DNA结合域,其次是glycine-proline-rich拉伸和不变的天冬氨酸(HhH-GPD主题)11]。Ogg1显示/ C配对,高选择性与XRCC1相互作用,一个重要的蛋白质所需的维护通过DNA修复基因稳定,和至关重要的误码率12]。

Ogg2缺乏氨基酸残基Asn149、Arg154 Tyr203 hOGG1相比,提供了一个解释Ogg2特异性降低,相对于Ogg1,对面的基本定位病变。c端赖氨酸Ogg2可能发挥关键作用的G之间的歧视和去13]。证实了这种预测测量糖基化酶/裂合酶活动的缺失突变体MjaOgg缺乏这三个氨基酸在MjaOgg c端和随后的共结晶的DNA序列包含去(8]。

热原体属volcanium是具有多种DNA修复酶。TVG_RS00235 (TVN0046)编码AP的同族体核酸内切酶大肠杆菌美联社核酸内切酶(ExoIII)和人类APE1蛋白(14]。TVG_RS04325 (TVN0804)股票50%氨基酸序列同源性巴勒斯坦权力机构米格(PAE3199) hyperthermophilic archaeonPyrobaculum aerophilum消除尿嘧啶(U)和T U / G, T / G, U /,和T /与非耦合美联社裂合酶活动(不匹配15]。TVG_RS04465 (TVN0827)的相同器官TA_RS02485 (Ta0477) 68%的氨基酸序列的身份,编码一个尿嘧啶DNA糖基化酶(16]。它的同族体,巴勒斯坦权力机构-UDGb,报告为第五尿嘧啶DNA糖基化酶家族成员与催化活性的一个异常的嘌呤,次黄嘌呤,从DNA (17]。

过程中基因组SELEX实验使用铁吸收监管蛋白质,TvFur,我们发现TvFur结合的启动子区域TVG_RS00310(TVN0061),编码超氧化物歧化酶,TvSOD [18]。TvSOD基因的5′末端位于一个操纵子。这种操纵子是由两个基因:tvsod和TVG_RS00315 (TVN0062)。TVG_RS00315 (TVN0062)编码一个假定的Ogg蛋白质同源Ogg2家人MjaOgg SsoOgg。也就是说,这两个基因构成一个转录单位。这个基因配置可以迅速应对氧化应激。

在本文中,我们克隆的DNA TVG_RS00315 thermoacidophilic archaeont . volcanium编码一个假定的TvoOgg蛋白质。TVG_RS00315蛋白质似乎同源性,可能属于Ogg2家庭。为了验证这一点,我们表达了TvoOgg基因大肠杆菌纯化的蛋白,并研究其去糖基化酶/裂合酶的活动。对面的偏爱基地定位去和其他糖基化酶活动也被调查。

2。材料和方法

2.1。菌株

热原体属volcaniumGSS1(日本收藏的微生物;JCM·9571)的应变热原体属volcanium从潜艇和大陆分离硫质喷气孔在火山岛,意大利(19),是用于提取t . volcanium总基因组DNA。大肠杆菌应变JM109用于克隆的羊痘疮假定的TvoOgg,TVG_RS00315。大肠杆菌应变BL21 (DE3)被用作宿主菌株获得TVG_RS00315蛋白质。

2.2。媒介

Luria-Bertani(磅)中用于细菌质粒轴承或文化TVG_RS00315蛋白质。如有必要,添加了抗生素的浓度:氨苄西林,50μg / mL;卡那霉素,20μg / mL;34岁的氯霉素μ克/毫升。表达TVG_RS00315,异丙基- 1毫米β-D-thiogalactoside (IPTG)是在需要的时候使用。

2.3。质粒

质粒pGEM-T容易(美国Promega)被用于克隆TVG_RS00315,假定的TvoOgg基因。质粒pET28a(+)(德国默克密理博)是用于TVG_RS00315蛋白质的表达和纯化。

2.4。假定的TvoOGG的多个对齐,MjaOgg和SsoOgg

假定的8-oxoguanine DNA糖基化酶的氨基酸序列t . volcanium(WP_010916318.1) 8-oxoguanine DNA糖基化酶m . Jannaschii(MjaOgg;Q58134),和一个8-oxoguanine DNA糖基化酶美国Solfataricus(SsoOgg;WP_009992328)选择从NCBI蛋白质数据库。这三个氨基酸序列乘以一致使用多重序列比对程序Clustalω(20.]。

2.5。TvoOgg克隆、超表达和纯化

候选人TvoOgg(基因库基因身份证:1441548、TVG_RS00315注释N-glycosylase)被发现的完整基因组序列的序列分析t . volcanium(21]。DNA片段的ORF TVG_RS00315被使用引物PCR扩增TvoOgg 5′我(5′——濒死经历C ATA TGG ATT TTA ACC AGT攻击力条t - 3′)和TvoOgg 3′Sal我(5′助教G TCG交流GTC T TAC TTT ATA行为三大总部′),其中包含濒死经历我和萨尔我限制网站分别(限制性内切酶网站强调)。PCR与t . volcanium基因组DNA为模板进行35周期在下列条件:94°C 1分钟,1分钟55°C, 1分钟72°C。PCR产物克隆成向量pGEM-T容易(美国Promega),放大大肠杆菌JM109,提取使用试剂盒mini-prep工具包(试剂盒、荷兰)。TVG_RS00315 DNA的克隆子被消化,然后拼接濒死经历我和萨尔即对应的DNA片段的ORF TVG_RS00315 gel-purified subcloned成一个濒死经历我/萨尔我领悟了pET28a(+)表达载体(德国默克密理博)生成pET28a-TvoOgg。TVG_RS00315 DNA的序列克隆的羊痘疮测查双脱氧法测序证实了使用染料终结者周期序列快速启动工具(美国贝克曼库尔特)和T7启动子引物(5′taa TAC广汽柠檬酸CTA TAG-3′)和T7终结者引物(5′gct AGT答TGC柠檬酸GCG-3′)。随后,大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3)(德国默克密理博)与pET28a-TvoOgg转换。大肠杆菌细胞窝藏pET28a-TvoOgg种植在200毫升的37°C包含20磅的媒介μg / mL卡那霉素和34μ0.5 g / mL氯霉素的OD600,然后TvoOgg蛋白的表达与氨基6个组氨酸(他的₆-)标签是诱导,通过IPTG的最终浓度为1毫米,超过5人力资源的培养。细胞收获和悬浮在10毫升的裂解缓冲(50毫米不₂阿宝₄,300 mM氯化钠、10毫米咪唑和5毫米2-mercaptoethanol, pH值8.0)。细胞悬浊液受到声波降解法(10秒脉冲的12次,每隔10秒4 W输出microtip)超声发生器3000(唤醒BTECH、日本)。细胞碎片在8000×g被离心10分钟在4°C。上层清液应用于列嵌入1.5毫升Ni-NTA琼脂糖(试剂盒、荷兰)。列被10毫升的洗不洗缓冲区(50毫米₂阿宝₄,300 mM氯化钠、20毫米咪唑和5毫米2-mercaptoethanol, pH值8.0)。TvoOgg蛋白质被筛选了10毫升的洗脱缓冲(50毫米不₂阿宝₄氯化钠,300毫米,200毫米咪唑和5毫米2-mercaptoethanol, pH值8.0)和分级为1毫升整除。每个筛选了分数的一部分受到15% sds - page分析。包含他的分数₆标记TvoOgg汇集和透析对透析缓冲区1(150毫米氯化钠,KH 50毫米₂阿宝₄5毫米2-mercaptoethanol, pH值7.5)在一夜之间在4°C。然后,透析TvoOgg蛋白应用于列嵌入式1.5毫升的SP产物琼脂糖FF(美国通用电气医疗集团)与透析缓冲区1。列与透析缓冲洗1,TvoOgg是筛选了逐步梯度组成1毫升的100毫米氯化钠,1毫升的200毫米氯化钠,2毫升的250毫米氯化钠,1毫升的300毫米氯化钠,5毫升的400毫米透析缓冲区1中氯化钠。筛选了分数受到15% sds - page分析,和分数包含TvoOgg汇集和透析对透析缓冲2(150毫米氯化钠、5毫米2-mercaptoethanol和50毫米Tris-HCl, pH值7.5)。透析分数包含TvoOgg集中与Centricon离心过滤设备YM-10(德国默克密理博)和存储在透析缓冲2−80°C,直到使用。蛋白质浓度测定吸光度的测量在280海里。

2.6。寡核苷酸基板

的34-mer寡核苷酸oligo1 5′tgt CAA标签CAA GXG GAG亚美大陆煤层气有限公司柠檬酸ATC侠盗猎车手,GTC条t - 3′, oligo2 5′aga CTA CGA TTG TCT CCY结论GCT ATT广汽a - 3′,合成(德国默克密理博)。在每个寡核苷酸的变异,X或Y与A、T、G、C、U,或7,8-dihydro-8-oxoguanine(去)。检测链的休息,5′末端标记寡核苷酸的荧光染料,家人。Oligo1和oligo2退火形成双链DNA包含碱基对X/Y在14日的位置。这双链DNA 34个基点是用于基质糖基化酶和/或AP裂合酶活性测定。

2.7。糖基化酶活力测定

在下面描述的实验,1 pmol (50 nM) TvoOgg用于DNA糖基化酶和/或AP裂合酶活性测定,和60°C的反应进行了30分钟,除非另有提及。糖基化酶活性测定是根据杨et al。15]。糖基化酶活性检测的联合行动的DNA糖基化酶和随后的乳沟美联社网站。反应混合物中含有1毫米二硫苏糖醇(德勤),1毫米EDTA、3%甘油,80毫米氯化钠,20毫米Tris-HCl,和4 pmol标记的双链DNA总量的20倍μL在pH值7.5。pmol之一TvoOgg蛋白添加到反应混合物和孵化37°C, 50°C, 60°C, 70°C, 80°C (90°C为30分钟。反应产品处理4μL 1 M氢氧化钠和加热在96°C 4分钟完成乳沟的DNA电泳前在美联社站点。反应混合物稀释到100μL与1毫米EDTA, 10毫米Tris-HCl pH值8.0 (TE)缓冲区,和DNA提取phenol-chloroform过程。合成DNA是悬浮在10μL凝胶装入缓冲区(95%甲酰胺、20毫米EDTA和5%溴酚蓝)在94°C 3分钟,然后分析15% polyacrylamide-7 M尿素凝胶。灯塔的DNA带检测和分析外汇分子成像和数量一个成像软件(美国Bio-Rad)。离解常数()是根据计算的方法Castaing et al。22]。

2.8。美联社裂合酶活力测定

双链DNA的制备含AP网站本质上是根据霍斯特的方法和弗里茨(23]。十pmol双链DNA包含一个U / C不匹配与1.25 U的孵化大肠杆菌尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG,新英格兰生物学实验室,英国),在反应中缓冲UDG, 30分钟在37°C。美联社/ C衬底与1 pmol TvoOgg孵化,在同一反应缓冲区用于上述糖基化酶活力测定,为30分钟37°C, 50°C, 60°C, 70°C, 80°C (90°C没有后续碱治疗。反应产物是悬浮在10μL凝胶装入缓冲区在94°C 3分钟,然后分析15% polyacrylamide-7 M尿素凝胶。

3所示。结果与讨论

3.1。假定的TvoOgg之间同源性蛋白和其他OGG2 DNA糖基化酶

的开放阅读框(ORF) TVG_RS00315从高温archaeon (TVN0062)t . volcanium编码204个氨基酸残基,通过基因组测序项目确定(21]。图1显示了TVG_RS00315蛋白质的氨基酸排列(WP_010916318.1) MjaOgg和SsoOgg。TVG_RS00315是同源的ORF MjaOgg(207氨基酸残基)和47%(93/198)的身份,和SsoOgg(207氨基酸残基)和40%(78/193)的身份。的ORF TVG_RS00315包含helix-hairpin-helix图案。催化赖氨酸(Lys129 MjaOgg Lys128 SsoOgg)和天冬氨酸(Asp147 MjaOgg和Asp146 SsoOgg)守恒在TVG_RS00315 Lys129 Asp147,分别。Lys204, ORF TVG_RS00315也具有c端赖氨酸(Lys207 MjaOgg和Lys207 SsoOgg), G和之间的歧视。在MjaOgg Phe85之间疏远的胞嘧啶和5′的邻居,His133 Trp198三明治的异常,和Arg84与疏远的胞嘧啶(13];所有这些至关重要的残留在假定的TvoOgg守恒,TVG_RS00315(图1)。这些结果强烈建议TVG_RS00315羊痘疮,TvoOgg Ogg2的相同器官。为了确定蛋白质的编码TVG_RS00315作为去糖基化酶,我们克隆和表达了假定的TvoOgg研究这种蛋白质的功能。

3.2。TvoOgg蛋白的生产大肠杆菌纯化的重组蛋白

DNA编码TvoOgg克隆成pGEM-T简单向量,拼接后消化濒死经历我和萨尔我,subcloned成濒死经历我/萨尔我双消化pET28a(+)在他的后面₆标签和表达大肠杆菌BL21 (DE3)(图2巷1)。他的₆标记TvoOgg从细胞溶解产物纯化的热处理为30分钟60°C,倪^{2 +}-NTA柱层析法(图2SP巷2 - 9),然后,琼脂糖FF柱层析法(图2巷10 - 14)生产本质上是纯粹的蛋白质。TvoOgg是热稳定至少60°,和高度可溶(数据没有显示)。纯化蛋白sds - page的近似分子质量略大于25 kDa(图2,莱茵15)。这个值是一致的分子质量为26.4 kDa从他的预测₆标记TvoOgg氨基酸序列。

3.3。糖基化酶的最佳温度和TvoOgg裂合酶的活动

因为MutM和Ogg家庭成员被称为双功能糖基化酶,我们测试了糖基化酶和裂合酶活动独立使用/ C双链DNA。去DNA糖基化酶和美联社裂合酶活性测定TvoOgg进行在37°C, 50°C, 60°C, 70°C, 80°C (90°C。去DNA糖基化酶活性TvoOgg 1.9倍或2.6倍更活跃在60°C(95.0%)比37°C(59.8%)或90°C(36.6%),分别为(图3(一个))。在50°C和60°C,大部分的底物转化为产品。TvoOgg酶略活跃在37°C和90°C。当AP网站含有双链DNA用于AP裂合酶活力测定,观察轻伤产品温度测试。最伟大的TvoOgg美联社裂合酶的活性,观察60°C,糖基化酶活性(图一样3 (b))。然而,在糖基化酶活动相比,美联社裂合酶表现出几乎相同的活动在50°C和70°C(图3 (b))。大部分的基板被转换为产品在美联社裂合酶试验和NaOH-treated去糖基化酶测定60°C(数字3(一个)和3 (b))。这表明,糖基化酶和美联社TvoOgg裂合酶活动有相似的温度和pH值最优。活动的减少TvoOgg在温度高于60°C(的最佳生长温度t . volcanium)可能是由于酶的热不稳定或不稳定的双链DNA在高温衬底。

3.4。TvoOgg蛋白质的糖基化酶的活动

GO-containing链是FAM-labeled 5′末端和退火互补的寡核苷酸序列具有C定位去对面基地。这双链DNA被用于去DNA糖基化酶的底物和美联社TvoOgg裂合酶活性测定。的候选人TvoOgg蛋白质催化消除从/ C双链DNA衬底(数字4(一)和4 (b))。的裂解反应20或25分钟的DNA饱和反应60°C。这个结果表明TvoOgg是一个TvoOgg DNA糖基化酶的活动。这个DNA糖基化酶活性(图存在剂量依赖的相关性4 (b))。当0.4 pmol TvoOgg蛋白(20海里)是用于反应,大约等量的衬底和产品观察(图4(一))。从这个结果近似TvoOgg 20 nM 60°C。

3.5。衬底的偏好TvoOgg

确定基本的互补链去TvoOgg基本切除的活动至关重要,我们使用双链DNA进行了DNA糖基化酶活性测定基质包含/ N, U / N,或T / N (N意味着,T、G或C)。当GO / N基质被称为5′末端的DNA链包含,TvoOgg可以有效地切除从/ N-containing基质。这种酶切除可以定位任何基地(图相反5(一个))。的分裂是只发现DNA链包含。TvoOgg可以消除从N / N配对但不能消除的配对(N意味着,T、G和C,人物5 (b))。TvoOgg展出不尿嘧啶DNA糖基化酶活动的四个DNA碱基位置相反的U不匹配(图5 (c))和T不能切除展览基地活动:一个碱基对或T mispaired C、T、G(图5 (d))。这些结果表明,DNA糖基化酶的活性TvoOgg蛋白质不能作用于双链DNA包含U / N或T / N的基质,它不同于Mth-MIG和巴勒斯坦权力机构米格失配糖基化酶(15]。我们时间进行课程实验四个基板,去/ N标记5′末端的DNA链包含去证实相反TvoOgg特异性糖基化酶的活动基地。如图6,TvoOgg首选衬底DNA工器包含/ C, / G / T,去最贫穷但活动/(图6)。这衬底偏好TvoOgg Afogg(类似24),但不同于MjaOgg [8]。

在这项研究中,我们为一个ORF的候选人去DNA糖基化酶/裂合酶thermoacidophilic archaeon,t . volcaniumTvoOgg。这个定义的有效性也支持了这种蛋白质的糖基化酶/裂合酶活动(图/ N不匹配5)。

美联社的核酸内切酶t . volcaniumTVG_RS00235 (TVN0046),克隆和金田的特征等。14]。这种酶识别美联社在DNA,然后劈开的5′端美联社网站通过美联社核酸内切酶的活动。TVG_RS00235 (TVN0046)也显示3′5′核酸外切酶活性。两个色氨酸残基(Trp200和Trp214)导致其AP网站识别(14]。

巴勒斯坦权力机构米格包含4 fe-4s结合位点c端部分和是一个U / G和T / G mismatches-specific糖基化酶。巴勒斯坦权力机构米格消除T和U定位相反或G (15]。TVG_RS04325 (TVN0804)蛋白质的相同器官巴勒斯坦权力机构米格,其基本特征是不同于TvoOgg(可以不承认你定位相反G, T定位相反G或者去)(图5)。酶由TVG_RS04325编码(TVN0804)可能有助于消除U / G和T / G不匹配水解胞嘧啶脱氨基作用或5-methylcytosine双链的DNAt . volcanium。TVG_RS04325 (TVN0804)蛋白质可能发挥同样的功能巴勒斯坦权力机构米格,防止G的替换产生C或methyl-C的水解脱氨基作用。

TVG_RS04465 (TVN0827)蛋白质作为6个家庭成员之一巴勒斯坦权力机构-UDGb家庭,第五尿嘧啶DNA糖基化酶家族,根据Sartori et al。17]。巴勒斯坦权力机构-UDGb是尿嘧啶与广泛的底物特异性DNA糖基化酶,因为缺乏一个重要的极地残留在主题的活性部位。这种酶催化效率的尿嘧啶,hydroxymethyluracil,或ethenocytosine定位相反G,没有美联社裂合酶活动,和更有效的基地位置相反的a .它可以,不过,切除异常嘌呤、次黄嘌呤,从错配和T (17]。

Archaeoglobus fulgidusOgg (Afogg) MjaOgg, SsoOgg都属于Ogg2家族的DNA糖基化酶加上美联社裂合酶的活动。Afogg蛋白质高效劈开DNA包含去/ C / G碱基对但不太有效的DNA包含/ T或一个错配(24]。从这个底物特异性,Afogg阻止T / G / C / C错配的颠换突变消除去但不能消除不匹配。这是类似于TvoOgg底物特异性。从Afogg和TvoOgg MjaOgg表示不同基础优先;MjaOgg蛋白质高效劈开DNA包含去对面的四碱基,8]。自SsoOgg重组蛋白质的误码活动尚未报道,其基本倾向于基地定位相反的是未知的。TvoOgg切除可以定位相反的所有四个基地(数据5和6),这表明这种酶是健壮的防止/错配,如果及时矫正,生成C / G, T /颠换突变在接下来的一轮复制。

巴勒斯坦权力机构兴奋的熊HhH-GPD图案,可以删除从/ G, / T,或单链DNA GO-containing有效;然而,巴勒斯坦权力机构热切地显示弱处理活动的/ C或去/10]。在t . volcanium基因组,同族体巴勒斯坦权力机构兴奋的是由传统的序列搜索或短序列检测不到主题搜索(数据没有显示)。这个结果表明t . volcanium没有兴奋的家庭去DNA糖基化酶呢p . aerophilum这Ogg2负责消除8-oxoguanine DNAt . volcanium。

不像m . jannaschii和答:fulgidus,t . volcanium可以在有氧条件下生长。因为8-oxoG结果鸟嘌呤的氧化DNA通过氧化剂或活性氧,是最丰富的DNA的氧化损伤的生物生活在有氧环境中。TvoOgg基因位于3′末端操纵子的两个基因组成,tvsod和tvoogg。t . volcanium可以有效地避免颠换组织由氧化应激产生的基因突变。

4所示。结论

TVG_RS00315的开放阅读框(TVN0062) thermoacidophilic archaeon热原体属volcanium(TvoOgg)属于Ogg2家族中大肠杆菌和生化特征。TvoOgg首选/ N作为最活跃的底物,但其活动对U / N或/ N基质是很难衡量。在这项研究中,我们发现TvoOgg活动的最适温度为60°C。拥有的特点去糖基化酶/裂合酶活性TvoOgg在较低温度下(50°C)应该在的生存发挥重要作用t . volcanium在低温条件下。

t . volcanium拥有几个BER酶。TVG_RS04325 (TVN0804)是一个同族体Pa-MIG,消除了T / T和G / T和U / U和G / U。TVG_RS00235 (TVN0046)是一个美联社在DNA核酸内切酶识别美联社网站。TVG_RS04465 (TVN0827)是作为一个报道巴勒斯坦权力机构-UDGb,尿嘧啶与广泛的底物特异性DNA糖基化酶。的相同器官巴勒斯坦权力机构兴奋的不是编码的t . volcanium基因组。TVG_RS00315蛋白切除可以定位相反的所有四个基地。这些结果表明,TVG_RS00315蛋白质TvoOgg和强劲防止/错配,生成C / G T /颠换突变在一轮复制。TvoOgg位于衔接着超氧化物歧化酶基因,tvsod。这个基因的组织t . volcanium可能抵消了固有的氧化应激在有氧条件下生活。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者要感谢Editage (https://www.editage.jp/)英语编辑。

引用

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