通过观察镜：用荧光转基因斑马鱼观察白血病的生长、迁移和植入

摘要

斑马鱼已经成为发展和癌症的强大模型。人类、小鼠和斑马鱼的恶性肿瘤表现出惊人的组织病理学和分子相似性，强调了诱导癌症所需的显著遗传途径的保存。斑马鱼非常适合大规模研究，因为在大规模研究中，数百种动物可以用来研究癌症过程。此外，斑马鱼体积小，在发育过程中视觉清晰，易于基因操作。简单的转基因方法和基因失活的新技术为研究肿瘤中特异性致癌和抑癌途径的功能提供了急需的基因组资源。本手稿着重于用荧光蛋白标记白血病细胞和直接可视化癌症过程的独特属性在活的有机体内包括肿瘤生长、扩散和血管内渗。我们还将讨论使用荧光转基因方法和细胞移植来评估白血病细胞传播频率和对化疗的反应。

1.斑马鱼白血病模型

斑马鱼血液系统恶性肿瘤模型与人类和小鼠疾病表现出惊人的相似性[1- - - - - -7，但由于成像模式允许直接可视化活体动物体内荧光标记的血细胞，为研究提供了独特的途径。与小鼠和人类疾病一样，斑马鱼白血病与淋巴瘤的区别在于白血病细胞浸润到骨髓。淋巴瘤主要以肿块的形式分布于全身，包括小鼠和人类的淋巴结，并没有或很少渗入骨髓[8]．白血病也可分为急性白血病和慢性白血病。急性白血病在成熟的早期阶段就被抑制住了，是高度增殖的，并且在患者中进展迅速[8]．相比之下，慢性白血病在成熟的后期阶段被抑制，类似于功能正常但异常的血细胞。虽然慢性白血病的特点是循环白细胞计数增加，但它的生长速度往往较慢，需要几个月或几年的时间才能进展。白血病可以根据细胞转化的血液谱系进一步细分[8]．迄今为止，斑马鱼模型的急性淋巴母细胞白血病(ALL)，急性髓系白血病(AML)，和骨髓增生性肿瘤(MPN)已被描述。

斑马鱼首次作为白血病的一种强大的遗传模型出现，其中cMYC在发育中的胸腺细胞中过度表达[7]．利用rag2启动子驱动MYC和GFP的表达，转基因斑马鱼t细胞急性淋巴母细胞白血病(t - all)可以很容易地在活体动物中看到。在该模型中，驻留在胸腺中的荧光标记T细胞前体是T- all启动细胞类型，并在肿瘤进展过程中广泛扩散[7]．此外，在连续几天的荧光成像评估中，GFP+胸腺细胞表现出典型的向鼻基板、眼周间隙和肾骨髓的归巢[7]．随后的研究开发了有条件的方法来创建荧光转基因斑马鱼T-ALL模型，利用CRE-Lox或三苯氧胺诱导的MYC-ER策略[5，9]有趣的是，三苯氧胺的退出和随后MYC表达的失活导致荧光标记T-ALL的消退；然而，在这些患者中未观察到白血病消退pten突变鱼或过度表达的激活鱼Akt［9]．这些数据表明Akt在这个模型中，通路的激活足以维持肿瘤的生存。其他研究利用荧光成像评估MYC和Bcl2之间的协同作用[5，10]及NOTCH1-ICD [1]．此外,人类NOTCH1-intracellular domain-EGFP在稳定的花叶转基因斑马鱼中，转基因表达诱导荧光标记T-ALL，潜伏期为>6个月[6]．最后，利用ENU (n -乙基-n -亚硝基脲-)诱变的斑马鱼易于进行正向遗传筛选，因为它们的群体大小大，表型观察容易。利用这种方法，Trede小组进行了诱变Tg (lck: GFP)转基因鱼和可视化动物在F1和F2动物中荧光标记的T-ALL发病，识别影响T-ALL发病的显性和隐性突变[11]．在这些突变系中发现的突变图谱将可能揭示在斑马鱼和人类中驱动T-ALL发病和生长的新机制。

许多令人兴奋的造血恶性肿瘤模型已经被创造出来，包括b细胞急性淋巴母细胞白血病(B-ALL)、急性髓系白血病(AML)和骨髓增生性肿瘤(MPN)。例如，Sabaawy等通过过表达开发了B-ALL模型EGFP-TEL-AML1来自普遍存在的转基因启动子。在这个模型中，545只转基因动物中有16只在8-12个月大时发育出B-ALL[2]．Zhuravleva等人产生了转基因斑马鱼MYST3 / NCOA2融合基因的表达受spi1启动子(12]．180年2MYST3 / NCOA2-EGFP嵌合转基因动物在14和26个月时发生AML。还开发了两种MPN模型。Le等人利用CRE/Lox技术进行条件激活kRASG12D在胚胎发育过程中[3.]．这些动物的一个子集继续发展骨髓增生性肿瘤，潜伏期为66.2±23.1天(19鱼)。Forrester等人还开发了一种有条件的CRE/Lox转基因方法来模拟MPN [13]．具体地说,NUP98-HOXA9是条件激活的pu.1表达细胞，导致23%的成人NUP98-HOXA9-转基因鱼在19-23月龄时发育为MPN。最后，一些研究人员利用热休克转基因方法来揭示融合癌基因在血液发育中的早期发育效应，包括AML1-ETO RUNX1-CBF2T1,和TEL-JAK2［4，14，15]．这些热休克方法在早期发育过程中驱动转基因表达，并经常导致血液发育早期细胞的异常阻滞。然而，在热休克诱导的转基因系中frank白血病的研究进展尚未见报道。综上所述，斑马鱼已迅速成为一种新的白血病动物模型，并有望有助于我们理解人类疾病的分子发病机制。

2.荧光转基因标记方法白血病细胞

许多研究已经使用稳定的转基因斑马鱼以组织特异性的方式驱动致癌转基因表达，包括胰腺腺癌[16，肝细胞癌[17],黑色素瘤[18- - - - - -20.]、胚胎性横纹肌肉瘤[21),和白血病。总的来说，研究人员已经使用致癌基因与绿色荧光蛋白融合来制造荧光标记的肿瘤。例如，我们和其他人已经生成EGFP-Myc、NOTCH1-GFP EGFP-TEL-AML1,MYST3 / NCOA2-EGFP融合驱动白血病发生，同时荧光标记白血病细胞[2，6，7，12]．尽管这些方法在产生荧光标记白血病方面取得了很大的成功，但值得注意的是，荧光蛋白表达与细胞内的癌基因定位和蛋白质稳定性有关。例如，MYC在非转化细胞中是一个半衰期约为30分钟的核转录因子。因此，在正常胸腺细胞中，EGFP-MYC融合蛋白在GFP成熟为一个有功能的荧光分子之前就迅速翻转，从而阻止了使用荧光来识别稳定的转基因Tg (rag2 EGFP-Myc):出生5天的动物。然而,EGFP-Myc转基因在转化后稳定，导致T-ALL中弱的核荧光蛋白表达。荧光蛋白融合也可以根据细胞背景显示转化活性降低。例如，我们开发了斑马鱼模型kRASG12D-诱导胚胎性横纹肌肉瘤，但无法使用相同的转基因启动子来驱动GFP与kRASG12D融合的表达，从而建立该疾病的模型。相比之下，其他人使用类似的RAS融合结构来产生荧光标记的肝细胞癌、胰腺癌和黑色素瘤[16，17，19，20.]．为了避免荧光蛋白-癌基因融合的功能问题，有可能利用双重转基因方法在相同的细胞类型中驱动癌基因和荧光蛋白。例如,Tg (rag2 Myc):这些系可以被培育成Tg (rag2: GFP)鱼。由此产生的后代将发育出表达高荧光蛋白表达的T-ALL。

虽然稳定的转基因斑马鱼已被用于开发鲁棒的癌症模型，但镶嵌转基因方法为斑马鱼癌症建模提供了许多独特的优势。首先，稳定的转基因斑马鱼通常容易患早发性癌症，这使得维持稳定的品系很困难。第二，建立稳定的转基因斑马鱼非常耗时，并且需要杂交假定的转基因动物来识别创始人鱼。尽管Tol2转座酶的转基因有助于建立稳定的转基因系，但需要复杂的育种策略将额外的转基因和/或突变等位基因引入特定背景。这种方法通常需要几代人才能形成感兴趣的菌株。相比之下，镶嵌转基因依赖于多个线性化转基因在显微注射到一个细胞阶段的斑马鱼体内时作为共聚体并入基因组的能力，最终导致转基因在疾病发展过程中的共表达。我们已经成功地使用这种方法来证明kRASG12D与p53胚胎性横纹肌肉瘤早期发病的损失[22]和Feng等人的研究巧妙地表明，嵌合转基因可以用于修饰Myc-诱导T-ALL通过共注入激活的Akt［10]．我们已经使用类似的方法开发了共表达MYC和各种荧光报告基因的t - all，包括AmCyan, GFP, zyellow, dsREDexpress和mCherry [23，24]．在这些实验中，胚胎被共注入Myc和荧光蛋白在转录控制下rag2启动子。一小群动物产生荧光标记胸腺，最终发展为T-ALL。使用这种方法，我们已经能够在不同的遗传背景下创造T-ALL，允许创建具有多色T-ALL的同基因品系鱼(图)1) [23]．最后，我们最近通过将三种转基因同时共注射到单细胞期动物中，利用嵌合转基因共表达Notch1a-ICD、MYC和GFP [1]总之，虽然一些荧光转基因方法可能受到融合稳定性、癌症早期发病和遗传背景的限制，但其他荧光转基因方法已经能够克服这些限制。这些方法提供了快速检测，以确定白血病中协同致癌/肿瘤抑制途径。

3.可视化肿瘤细胞植入的细胞移植方法

研究人员利用荧光标记的癌细胞移植到亚致死辐射的成年斑马鱼体内，以评估其致瘤性[7]．例如，Traver等人优化了将血液和白血病细胞移植到γ射线照射的动物体内[7，25]．具体来说，细胞移植前2天用20 - 25gy辐照受体鱼，然后将荧光标记的供体细胞注射到腹膜腔或静脉窦。对于T-ALL，动物可注射1 × 10⁶细胞和荧光标记白血病移植后10天的评估[7，25]．通过移植到视觉清晰的缺乏虹膜和黑素细胞的斑马鱼株中，可以进一步促进移植的成像卡斯珀［26]．卡斯珀鱼是通过共同繁殖创造出来的罗伊和珍珠层突变体，必须保持为双纯合突变动物。这些鱼成年后是透明的，有助于细胞迁移、转移和肿瘤生长动力学的详细成像。例如，最近的研究表明，使用激光扫描共聚焦显微镜和一个集成光学系统，可以在活的成年鱼的循环中跟踪和计数血细胞在活的有机体内流式细胞分析仪(27]．

尽管将供体细胞移植到受照者体内是评估短期移植潜力的有力工具，但由于宿主免疫系统的恢复和移植细胞随后的攻击，在移植后20天内长期移植细胞>往往是不可能的[23，28]．为了避免免疫排斥，Mizgirev和Revskoy最近开发了同基因斑马鱼株，并创建了可移植的、化学诱导的肝细胞癌、肝母细胞瘤、胆管癌和胰腺癌的稳健模型[29- - - - - -31]．具体来说，同基因斑马鱼是通过让卵子与紫外线灭活的精子受精，然后将卵子置于热休克中培育出来的[29]．雌性雌性二倍体动物被饲养到成年，并重复这个过程。由此产生的后代在基因上是相似的，可以通过与雄鱼杂交或交配回到创始母鱼来维持。利用该方法构建了包括克隆金株1和2 (CG1和CG2)在内的多个品系。化学诱发癌症的过继转移和Tg (rag2: EGFP-Myc -)从cg2株鱼中诱导的t - all可以将疾病移植到同基因受体中[31]．此外，在CG1株鱼中产生的荧光标记横纹肌肉瘤和T-ALL细胞也可以移植到未辐照的受体鱼中[23，24]．总之，这些结果说明了细胞移植和使用同基因斑马鱼研究白血病细胞移植的力量。

4.检测肿瘤细胞归巢和血管内浸润的细胞移植方法

在活的荧光转基因斑马鱼身上可以很容易地看到血细胞及其动态的细胞运动。例如，研究人员跟踪了包括红细胞和巨噬细胞祖细胞在内的各种血液谱系的迁移[25，32- - - - - -34]．重要的是，造血干细胞(HSC)的运动也可以跟进Tg (CD41 eGFP):，Tg (cmyb: GFP)，Tg (runx1: GFP),和Tg (lmo2: GFP)转基因斑马鱼幼虫[35- - - - - -40]．此外，荧光标记的血细胞也可以在成年鱼体内追踪到[27，41]．利用细胞移植的方法，研究人员还利用荧光成像来可视化正常的造血细胞在活体动物中的归巢。例如，Bertrand等人通过移植可视化HSC向尾部造血组织的归位Tg (CD41: eGFP;gata1:安全域)细胞进入受辐射者体内[36].我们还描述了Tg (lck: GFP)+ T细胞移植到幼体野生型鱼后返回胸腺[42]．当恶性GFP+ T-ALL淋巴母细胞也迁移到胸腺时，它们表现出对嗅球强有力和特异性的归巢[6，7]．这些研究表明，使用荧光标记的正常造血和白血病细胞，可以很容易地可视化细胞迁移和归巢到活动物体内特定的解剖学定义的位置。

癌细胞进入血管内是癌症进展的关键一步，允许肿瘤细胞扩散到起源部位以外[43]．淋巴母细胞扩散的程度是t淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)和急性t淋巴母细胞白血病(T-ALL)的临床定义特征[8]．在T-LBL中，转化的淋巴母细胞局限于纵隔肿块，而坦白性白血病涉及细胞向骨髓扩散。值得注意的是，最近在移植了荧光标记淋巴母细胞的斑马鱼身上观察到了这种疾病的转变[10]．例如，RFP+淋巴母细胞Myc-诱导的T-ALL能够静脉注射Tg (fli: GFP)而过表达抗凋亡蛋白Bcl2的细胞无法进入血管，因此处于T-LBL状态(图)2) [10]．值得注意的是，对过表达MYC和Bcl2的转基因斑马鱼使用一种针对sphingosine -1-磷酸(一种t细胞粘附和迁移蛋白)的拮抗剂(S1P1)，促进了对血管系统的侵袭[10]．Feng等人的这些优雅的研究首次直接可视化了T-LBL向T-ALL转变的分子机制，并强调了在荧光标记动物中成像动态细胞过程的能力。

5.荧光成像可视化白血病对药物治疗的反应γ辐照

移植的癌细胞的荧光成像也可以用来显示对化疗和放疗的反应。例如，Revskoy小组最近表明，gfp标记的T-ALL细胞可以连续移植到同系菌株的幼虫中[31]．用长春新碱或环磷酰胺治疗移植受者可减少肿瘤负担(图)3.)及显著延长寿命[31]．这些实验证明，高通量细胞移植试验可以产生大量的动物群体用于药物筛选，并表明斑马鱼T-ALL对用于治疗人类T-ALL患者的药物有反应[31]．此外，可以评估荧光标记细胞对辐射的反应。例如，我们已经证明了嫁接gfp标记的t - all共表达EGFP-bcl2和Myc20gy γ射线照射后转基因细胞未发生凋亡[44];然而，t - all只表示Myc在放疗后4天消融，这说明Myc诱导的T-ALL有一个完整的p53DNA损伤途径。

6.细胞移植方法量化白血病细胞增殖频率和侵袭性

白血病增殖细胞(LPCs)有能力产生白血病中包含的所有其他类型的细胞，负责肿瘤的持续生长，并最终导致复发。研究人员使用荧光激活细胞分选(FACS)来确定独特的细胞群和限制稀释细胞移植，以评估分子定义的白血病细胞在人类疾病中是否保持LPC活性。例如，在AML中，一种罕见的CD34+、CD38−细胞富集，具有白血病传播潜能[45，46]．在T-ALL中，已有研究表明CD34+ CD7+细胞群在LPCs中富集[47].尽管在确定LPC活性是否和由什么细胞表面标记物定义方面做出了巨大的努力，但对驱动白血病增殖活性的分子机制知之甚少。例如，Jean Soulier小组的出色工作表明，将原代人类T-ALL异种移植到免疫受损的小鼠体内，这些小鼠是为白血病诊断中发现的克隆的一小部分而选择的[48]．这些克隆包含特定的基因组病变，可能增加白血病的侵袭性，并增加白血病群体中LPCs的频率[48]．然而，尽管在持续的克隆进化中发现了与复发相关的基因组变化，但驱动这些复发相关过程的机制在很大程度上还是未知的。

白血病细胞获得突变以增加LPCs的攻击性和频率的过程一直难以在人类和小鼠疾病模型中进行研究。然而，Trede小组最近的工作已经利用连续传代荧光标记斑马鱼t - all来证明白血病变得更具侵袭性，并随着潜伏期缩短而发展[49]．为了评估初级克隆和进化克隆之间的遗传变化，完成了阵列比较杂交研究，以确定与攻击性增加相关的周期性基因组DNA改变。在连续传代后的T-ALL中平均鉴定出34个新的拷贝数畸变(CNAs)，其中大多数也在人类T-ALL中发现[49]．克隆进化也可导致白血病团块中LPCs数量的增加[48]．为了直接评估肿瘤体积内的LPC频率，我们率先采用了高通量限制性稀释细胞移植方法，并显示1%的myc诱导的T-ALL细胞有能力在同基因受体动物中重造白血病[23，24]在连续传代后，一部分克隆可以提高LPC活性，目前有16%的细胞能够在移植受体动物中诱导白血病[23]．Rudner等人所描述的类似阵列CGH研究[49]目前正在鉴定与斑马鱼T-ALL中LPC频率调节相关的复发CNAs。综上所述，我们认为，无偏性遗传学方法，结合斑马鱼限制性稀释细胞移植试验，将可能揭示导致人类疾病中侵袭性和LPC频率复发相关变化的机制。

7.结论和未来的挑战

斑马鱼迅速成为白血病的有力模型。当结合荧光转基因方法和强大的成像技术时，这些模型在揭示驱动肿瘤传播、进展和复发的机制方面具有独特的地位。此外，使用多荧光转基因动物将允许标记肿瘤细胞室，类似于ras诱导的横纹肌肉瘤模型中定义的那些[21，50]以及白血病生长与支持细胞类型（包括血管系统、成纤维细胞和巨噬细胞）的关系的可视化。此外，尽管不是本文的重点，但将荧光标记的人类白血病细胞移植到斑马鱼胚胎或成人体内的细胞移植方法可能会为评估肿瘤生长和治疗反应提供新的实验模型[51- - - - - -60，利用可以通过微注射和肿瘤生长的直接可视化来创造患病动物的数量体内。

利益冲突

两位作者宣称没有相互竞争的经济利益。

致谢

D. M. Langenau由NIH基金K01 AR055619, 1RO1CA154923和1R21CA156056、美国癌症协会研究学者基金、白血病研究基金会、亚历克斯柠檬水基金会和哈佛干细胞研究所资助。

参考文献

1. J. S. Blackburn, S. Liu, D. M. Raiser等人，“Notch信号扩展了t细胞急性淋巴母细胞白血病克隆的恶性前池，而不影响白血病传播细胞的频率，”白血病．在出版社。浏览：谷歌学术搜索
2. H. E. Sabaawy, M. Azuma, L. J. Embree, H. J. Tsai, M. F. Starost, D. D. Hickstein，“TEL-AML1转基因斑马鱼B细胞前体细胞淋巴母细胞白血病模型”，美国国家科学院学报，第103卷，第41号，第15166-151712006页。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
3. X. Le, D. M. Langenau, M. D. Keefe, J. L. Kutok, D. S. Neuberg，和L. I. Zon，“热休克诱导Cre/Lox方法在转基因斑马鱼中诱导不同类型的肿瘤和增生”，美国国家科学院学报，第104卷，第104号22，页9410-9415,2007。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
4. J. R. J. Yeh, K. M. Munson, Y. L. Chao, Q. P. Peterson, C. A. MacRae, and R. T. Peterson，“AML1-ETO通过下调scl表达重组造血细胞命运”，发展，第135卷，第2期2，页401-410,2008。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
5. D. M. Langenau, H. Feng, S. Berghmans, J. P. Kanki, J. L. Kutok, and A. T。美国国家科学院学报第102卷第1期17, pp. 6068 - 6073,2005。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
6. J. Chen, C. Jette, J. P. Kanki, J. C. Aster, A. T. Look, and J. D. Griffin，“转基因斑马鱼中notch1诱导的t细胞白血病”，白血病第21卷第2期3，页462-471,2007。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
7. D. M. Langenau, D. Traver, A. A. Ferrando等人，“转基因斑马鱼中myc诱导的T细胞白血病”，科学，第299卷，第5608号，第887-890页，2003年。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s . h . Swerdlow国际癌症研究机构，世界卫生组织。WHO对造血和淋巴组织肿瘤的分类，国际癌症研究机构，里昂，法国，2008。
9. a . Gutierrez, R. greblunaite, H. Feng等，“Pten介导了条件斑马鱼T细胞急性淋巴母细胞白血病模型中Myc癌基因的依赖性”实验医学杂志第208期18, pp. 1595-1603, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
10. H. Feng, D. L. Stachura, R. M. White等，“t淋巴母细胞淋巴瘤细胞表达高水平的BCL2, S1P1和ICAM1，导致肿瘤细胞内渗受阻，”癌症细胞第18卷第2期4，页353-366,2010。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
11. J. K. Frazer, N. D. Meeker, L. Rudner等人，“在斑马鱼表型筛选中建立的遗传性t细胞恶性肿瘤模型，”白血病，第23卷，第2期。10，第1825-1835页，2009。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
12. J. Zhuravleva, J. Paggetti, L. Martin等，“MOZ/ tif2诱导转基因鱼急性髓系白血病”，英国血液学杂志，第143卷，第2期。3, pp. 378-382, 2008。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
13. A. M. Forrester, C. Grabher, E. R. Mcbride等人，”NUP98-HOXA9-转基因斑马鱼发展成骨髓增生性肿瘤，为髓系白血病的发生机制提供了新的见解。”英国血液学杂志号，第155卷。2，页167-181,2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
14. M. L. Kalev-Zylinska, J. a . Horsfield, M. V. C. Flores等人，“斑马鱼血液和血管发育和人类RUNX-1-CBF2T1转基因表达所需的Runx1为白血病发生研究提供了一个模型。”发展号，第129卷。第8页，2015-2030,2002。浏览：谷歌学术搜索
15. S. M. N. Onnebo, M. M. Condron, D. O. McPhee, G. J. Lieschke, and a . C. Ward，“表达tel-jak2a融合的斑马鱼的造血紊乱”，实验血液学第33卷第3期2，页182-188,2005。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
16. S. W. Park, J. M. Davison, J. Rhee, R. H. Hruban, A. Maitra, and S. D. Leach，“致癌KRAS诱导斑马鱼外分泌胰腺的祖细胞扩张和恶性转化，”胃肠病学第134期7，第2080-2090页，2008。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
17. A. T. Nguyen, A. Emelyanov, C. H. Koh等人，“在转基因斑马鱼中，高水平的肝脏特异性致癌Kras(V12)表达驱动了强大的肝脏肿瘤发生，”疾病模型与机制，第4卷，第801-813页，2011。浏览：谷歌学术搜索
18. E. E. Patton和L. I. Zon，“将人类癌症基因移植到鱼身上:斑马鱼中黑色素瘤的转基因模型，”斑马鱼， vol. 1, no. 14, 2005。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
19. C. Santoriello, E. Gennaro, V. Anelli等人，“在斑马鱼中，Kita驱动的致癌HRAS表达导致早发和高渗透黑色素瘤，”《公共科学图书馆•综合》，第5卷，第5期。文章编号e15170, 2010。浏览：谷歌学术搜索
20. M. Dovey, R. M. White和L. I. Zon，“致瘤性NRAS与p53缺失合作在斑马鱼中产生黑色素瘤，”斑马鱼，第6卷，第2期4，第397-404页，2009。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
21. D. M. Langenau, M. D. Keefe, n.y. stororer等，“RAS对胚胎横纹肌肉瘤发生的影响”，基因与发育，第21卷，第11期，第1382-13952007页。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
22. D. M. Langenau, M. D. Keefe, n.y. stororer等，“共注射策略改变转基因斑马鱼的辐射敏感性和肿瘤启动”，致癌基因第27卷第2期30，页4242-4248,2008。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
23. A. C. H. Smith, A. R. Raimondi, C. D. Salthouse等，“高通量细胞移植证实斑马鱼t细胞急性淋巴母细胞白血病中肿瘤起始细胞丰富。”血第115卷第1期16, pp. 3296-3303, 2010。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
24. J. S. Blackburn, S. Liu, A. R. Raimondi, M. S. Ignatius, C. D. Salthouse，和D. M. Langenau，“用LED荧光宏观显微镜对成年荧光斑马鱼进行高通量成像”，自然的协议，第6卷，第2期2, pp. 229-241, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
25. D. Traver, B. H. Paw, K. D. Poss, W. T. Penberthy, S. Lin, and L. I. Zon， "移植和在活的有机体内斑马鱼无血突变体多系移植成像自然免疫学，第4卷，第4期。12，页1238-1246,2003。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
26. R. M. White, a . Sessa, C. Burke et al，“透明成年斑马鱼作为工具在活的有机体内移植分析。”干细胞，第2卷，第2期2，页183-189,2008。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
27. L. Zhang, C. Alt, P. Li, R. M. White, L. I. Zon，“一种用于成年斑马鱼细胞跟踪的光学平台，”血细胞计数部分，第81卷，第176-182页。浏览：谷歌学术搜索
28. D.Traver，A.Winzeler，H.M.Stern等人，“斑马鱼致命辐射的影响和造血细胞移植的拯救，”血，第104卷，第104号5, 2004。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
29. I. V. Mizgireuv和S. Y. Revskoy，“克隆斑马鱼产生的可移植肿瘤系，”癌症研究第66期6，第3120-3125页，2006。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
30. I. Mizgirev和S. Revskoy，“克隆斑马鱼系和可移植肝肿瘤的产生”，自然的协议，第5卷，第5期。3, pp. 383-394, 2010。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
31. I. V. Mizgirev和S. Revskoy，“实验性白血病治疗的一种新的斑马鱼模型，”癌症生物学与治疗，第9卷，第5期。11，页895-903,2010。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
32. C. Hall, M. Flores, T. Storm, K. Crosier，和P. Crosier，“斑马鱼溶菌酶C启动子在转基因鱼中驱动髓系特异性表达”BMC发育生物学， 2007年第7卷第42条。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
33. 张新元、A. R. F. Rodaway，“SCL-GFP转基因斑马鱼:在活的有机体内血液和内皮发育的成像和确定确定的造血起始部位。”发育生物学第307期2，页179-194,2007。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
34. M. J. Redd, G. Kelly, G. Dunn, M. Way和P. Martin，“巨噬细胞趋化成像”在活的有机体内:斑马鱼伤口炎症中微管功能的研究，”细胞运动和细胞骨架，第63卷，第2期7，第415-422页，2006。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
35. E. Murayama, K. Kissa, A. Zapata等，“追踪斑马鱼发育过程中造血前体向连续造血器官的迁移”，免疫力，第25卷，第2期6，第963-975页，2006。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
36. J. Y. Bertrand, A. D. Kim, S. Teng, and D. Traver， " CD41⁺cmyb⁺前体通过一种新的迁移途径进入斑马鱼的前肾细胞，从而启动成人造血。”发展，第135卷，第2期10，页1853-1862,2008。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
37. K. Kissa, E. Murayama, A. Zapata等，“新生造血干细胞和早期胸腺定植的实时成像，”血号，第111卷3，页1147-1156,2008。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
38. J. Y. Bertrand, N. C. Chi, B. Santoso, S. Teng, D. Y. R. Stainier, D. Traver，“造血干细胞在发育过程中直接来自主动脉内皮”，自然，第464卷，第2期。7285, pp. 108-111, 2010。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
39. E. Y. N. Lam, C. J. Hall, P. S. Crosier, K. E. Crosier, M. V. Flores，“背主动脉Runx1表达的实时成像跟踪内皮细胞中血液祖细胞的出现，”血，第116卷，第116期6, pp. 909-914, 2010。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
40. K. Kissa和P. Herbomel，“血液干细胞通过一种新型的细胞转变从主动脉内皮中产生，”自然，第464卷，第2期。7285, pp. 112 - 115,2010。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
41. C. Hall, M. V. Flores, K. Crosier, P. Crosier，“斑马鱼白细胞的活细胞成像”，分子生物学方法， vol. 546, pp. 255 - 271,2009。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
42. D. M. Langenau, A. A. Ferrando, D. Traver et al， "在活的有机体内在转基因斑马鱼中追踪T细胞的发育、消融和移植，”美国国家科学院学报，第101卷，第1期。19，页7369-7374,2004。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
43. P. B. Gupta, S. Mani, J. Yang, K. Hartwell, and R. A. Weinberg，“癌症转移的进化画像”，冷泉港数量生物学研讨会， 2005年，第70卷，第291-297页。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
44. D. M. Langenau, C. Jette, S. Berghmans等人，“转基因斑马鱼淋巴细胞中bcl-2过表达抑制凋亡”血第105卷第1期8，页3278 - 3285,2005。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
45. D.Bonnet和J.E.Dick，“人类急性髓系白血病是由原始造血细胞形成的一个层次结构。”自然医学，第3卷，第7期，第730-737页，1997年。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
46. T. Lapidot, C. siard, J. Vormoor等人，“移植到SCID小鼠后引发人类急性髓系白血病的细胞，”自然，第367卷，第2期。6464，第645-648页，1994。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
47. B. Gerby, E. Clappier, F. Armstrong等，“人t细胞急性淋巴母细胞白血病CD34和CD7的表达区分功能异质性细胞群。”白血病， vol. 25, pp. 1249-1258, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
48. E. Clappier, B. Gerby, F. Sigaux等，“异种移植的人T细胞急性淋巴母细胞白血病复发时的克隆选择重演恶性肿瘤的增加，”实验医学杂志第208期4, pp. 653-661, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
49. L. A. Rudner, K. H. Brown, K. P. Dobrinski等人，“斑马鱼和人类T-ALL的共享获得性基因组变化，”致癌基因， vol. 30, pp. 4289-4296, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
50. M. S. C. C. Ignatius, N. M. Elpek, A. Fuller et al， "在活的有机体内胚胎横纹肌肉瘤中肿瘤增殖细胞、区域性肿瘤异质性和动态细胞运动的影像学研究癌症细胞，第21卷，第5期，第680-693页，2012年。浏览：谷歌学术搜索
51. D. P. Corkery, G. Dellaire，和J. N. Berman，“斑马鱼白血病异种移植化疗反应试验在活的有机体内,”英国血液学杂志，第153卷，第153期6, pp. 786-789, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
52. A. M. Cock-Rada, S. Medjkane, N. Janski, N. Yousfi, and M. Perichon，“SMYD3通过表观遗传上调金属蛋白酶MMP-9促进癌症侵袭”，癌症研究，第72卷，第810-820页，2012。浏览：谷歌学术搜索
53. B. E. Lally, G. a . Geiger, S. Kridel等人，“通过化学库的无偏性筛选识别和生物评价一种新型和强效小分子辐射敏化剂”，癌症研究，第67卷，第5期18，页8791-8799,2007。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
54. L. M. J. Lee, E. A. Seftor, G. Bonde, R. A. Cornell，和M. J. C. Hendrix，“人类恶性黑色素瘤细胞移植到斑马鱼胚胎中的命运:在没有肿瘤形成的情况下对迁移和细胞分裂的评估，”发展动态第233卷第1期4, pp. 1560-1570, 2005。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
55. I. J. Marques, F. U. Weiss, D. H. Vlecken等人，“斑马鱼异种移植模型中原发性人类肿瘤的转移行为”，BMC癌症， 2009年第9卷第128条。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
56. 赵灿，王昕，赵颖等，“一种用于高分辨率研究肿瘤新生血管动力学的斑马鱼异种移植模型，”《公共科学图书馆•综合》，第6卷，第2期7、文章编号e21768, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
57. S. Zhang, Z. Cao, H. Tian等，“SKLB1002是一种新的VEGF受体2信号通路的有效抑制剂，可抑制血管生成和肿瘤生长在活的有机体内,”临床癌症研究，第十七卷，第二期13, pp. 4439-4450, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索
58. V. P. Ghotra, S. He, H. de Bont et al，“自动化全动物生物成像人类癌症传播分析”，《公共科学图书馆•综合》，第7卷，文章编号e31281, 2012。浏览：谷歌学术搜索
59. S. He, G. E. Lamers, J. W. Beenakker, C. Cui, V. P. Ghotra等，“在斑马鱼异种移植模型中，VEGFR抑制增强了中性粒细胞介导的实验转移。”病理学杂志．在出版社。浏览：谷歌学术搜索
60. a . Eguiara, O. Holgado, I. Beloqui, L. Abalde，和Y. Sanchez，“斑马鱼胚胎异种移植作为乳腺癌干细胞样细胞鉴定的快速功能分析”，细胞周期， vol. 10, pp. 3751-3757, 2011。浏览：谷歌学术搜索
61. M. S. Ignatius和D. M. Langenau，“斑马鱼癌症的荧光成像”，细胞生物学方法，第105卷，第437-459页，2011。浏览：出版商的网站|谷歌学术搜索

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