供应商管理库存 兽医国际 2042 - 0048 2090 - 8113 Hindawi出版公司 10.1155 / 2016/3478746 3478746 研究文章 的识别 软面包卷在紧张的 沙门氏菌血清无性系种群。 血清与野生动物关在笼在锡那罗亚,墨西哥 http://orcid.org/0000 - 0001 - 7825 - 6880 Silva-Hidalgo 加芙 1 Lopez-Valenzuela 马丁 1 Carcamo-Arechiga 诺拉 1 Cota-Guajardo 西尔维亚 1 Lopez-Salazar 全场9 1 Montiel-Vazquez 伊迪丝 2 Lobetti 雷莫 1 病理实验室 兽医学院和畜牧业 自治大学的锡那罗亚 大道圣天使s / n Fraccionamiento圣贝尼托 80246年,库利亚坎 罪 墨西哥 uas.edu.mx 2 肠细菌学实验室 流行病学诊断和参考研究所的 弗朗西斯科·德·p·米兰达177 Lomas de普拉特罗 Alvaro Obregon 01480年墨西哥城 DF 墨西哥 2016年 9 6 2016年 2016年 30. 01 2016年 16 05年 2016年 2016年 版权©2016加芙Silva-Hidalgo et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

软面包卷一个,以前叫 stm2689,编码BapA蛋白质,纤维素和菌毛,构成生物膜。生物膜微生物群落,生长在一个矩阵的胞外,可能坚持组织生活或惰性表面。生物膜的形成与持续的能力在不同的环境中,导致一些物种的致病性。我们分析的存在 软面包卷在83株属于17型 沙门氏菌血清无性系种群。 血清从野生动物被囚禁在库利亚坎的动物园和马萨特兰的水族馆。每个隔离放大667个基点的产品,对应的预期大小 软面包卷一个启动程序,没有观察到不同型之间的差异分析。 软面包卷发现了一个基因是高度保守的 沙门氏菌并且可以针对genus-specific检测不同来源的生物。自 软面包卷主机以外的表达提高细菌增殖和促进耐消毒剂和干燥,的生存 沙门氏菌在自然栖息地可能青睐。因此,从这些动物增加了细菌污染的风险。

 1。介绍

生物膜,由纤维素、菌毛和biofilm-associated (BapA,编码的蛋白质 软面包卷),社区中生长的微生物胞外的一个矩阵,可以坚持惰性表面或活组织( 1]。生物膜的形成与持续的能力在不同的环境中( 2),导致一些物种的致病性( 3]。它已经表明,细菌在生物膜更耐抗菌药物比生长在浮游文化由于其物理结构和多层生物膜的形成 4]。而急性细菌感染可以消除一个简短的抗生素治疗后,由biofilm-producing细菌感染通常不能被完全消除,导致复发性感染,这只能解决代替最初的抗生素治疗( 3]。

沙门氏菌杆状细菌通常存在于生物膜( 5]。本属包括鞭毛,革兰氏阴性细菌孢子,在动物的消化道和促进长期的生存环境,这使得消除困难( 6]。

菌毛,或菌毛,对生物膜的形成至关重要 沙门氏菌( 7]。这些蛋白质结构识别广泛的分子靶点,让细菌与各种表面并遵守特定组织在主机 8]。例如,1型菌毛薄,刚性,胶粘剂的结构表达FimH丰富,促进细菌粘附和入侵上皮细胞( 9]。1型菌毛也调解与非生物表面相互作用[ 9]。

沙门氏菌生物膜矩阵由纤维素、菌毛和BapA。这些矩阵的胞外纤维素是一个主要的组成部分,起着重要的作用抗干燥,消毒剂和紫外线。纤维素生产是由工会的环核苷酸c-di-GMP合成取决于一个家庭的GGDEF domain-containing蛋白( 10]。

后 沙门氏菌细菌的感染,持续消除粪便引起慢性无症状的载体。一旦排泄到环境中, 沙门氏菌能抵抗脱水长时间在凳子上和人类或动物消费的食物( 11, 12]。由于其能够遵守许多表面和抵抗常见消毒剂的作用,这种细菌的存在环境中是一个公共卫生问题,因为沙门氏菌病是一种人畜共患疾病( 13]。此外,生物膜中的细菌对抗生素有更强的抵抗力由于若干因素。例如,这些细菌复制和代谢异质性影响抗生素的作用和生物膜的结构,从而阻碍了行动的抗菌剂 10]。

理解本属细菌生物膜形成的能力将使我们能够建立预防措施防止疾病的爆发在两种动物和人类,尤其是密切接触受感染的动物。识别基因参与细菌耐药性将决定必要的类型的抗生素疗法治疗动物的健康问题。因此,本研究的目的是检测的存在 软面包卷一个在 沙门氏菌菌株与野生动物被囚禁。

 2。材料和方法 2.1。菌株

八十三株的 沙门氏菌种虫害属于17个不同型(表 1)从围场,食物和动物园和水族馆的动物粪便被囚禁在库利亚坎和马萨特兰,墨西哥锡那罗亚,被用于这项研究。所有隔离,通过生化和血清学方法证实了肠细菌学实验室,流行病学诊断和参考研究所(InDRE), DF,墨西哥和保持营养制冷剂,直到被测试。 沙门氏菌沙门氏菌感染14028年代从美国文化类型集合(写明ATCC)作为参考控制压力。

的列表 沙门氏菌型用于这项研究。

身份证号码 型 源隔离(#)
1 沙门氏菌感染 参考应变
2 奥尔巴尼 Leopardus pardalis ( f ) 一个 , 豹属狮子座(f), 猫属concolor(f), 豹属底格里斯河sumatrae(f), 豹属底格里斯河底格里斯河(f), 猞猁鲁弗斯(f), 美洲黑熊(f), 河马amphibius(f), Ara澳门(f), Carassius auratus ( w ) b 水生鸟类(f),水生鸟 ( 年代 ) c , 鼠属spp。(f), Periplaneta美国 ( 我 ) d , 有明显(我),生鸡肉 ( F ) e
3 3、10 H: r: - 河马amphibius(f), Bassariscus astutus(f)、水生鸟类(f),水生鸟类(w), 宿务apella(f)
4 圣地亚哥 水生鸟类(f)、水生鸟类(s), Python钦定讲座 ( h ) f , 鼠属spp。(f)
5 Braenderup 毒气macroura(f), 猫属concolor(f), 豹属底格里斯河(f), 南河三lotor(f), Ateles geoffroyi(f)
6 Weltevreden 鸽属flavirostris(f), 鸽属fasciata(f), 野猪有明显(f)、水生鸟类(f),水生鸟类(s)
7 德比 宿务apella(f), 美洲虎(f), 豹属底格里斯河(f), 鼠属spp。(f)
8 Oranienburg Urocyon cinereoargenteus(f), Saimiri sciureus(f)
9 6 7 H: en x: - 河马amphibius(w), Crocodylus acutus(w)
10 浦那 鹦形目鸟类(f), 鼠属spp。(f)
11 圣保罗 水生鸟类(f)
12 巴拿马 Crocodylus acutus(w), Ranaspp。(f)
13 波莫纳 Ramphastos sulfuratus(f)、生物过滤器
14 纽波特 水生鸟类(f)
15 肠炎 鹦形目鸟类(f)
16 Javiana Ranaspp。(f)
17 给 鬣蜥鬣蜥(f)
18 Agona Araspp。(f)

一个 粪便。 b 水。 c 土壤。 d 昆虫。 e 食物。 f 直肠 Hyssopus。

 2.2。复苏和纯度验证菌株

沙门氏菌菌株是从保护恢复介质含有大豆broth-glycerol(制冷剂),转移到trypticase酱油汤,和孵化37°C 18 h。获得的细菌悬浮液镀在MacConkey和XLT4琼脂证实的负面反应 沙门氏菌菌株乳糖和视觉的纯度分析菌株生长在37°C 24 h。斜管含有血琼脂基(BAB)接种菌株证实,直到进一步的使用。

 2.3。细菌的DNA提取

DNA提取分离菌株与商业矩阵(InstaGene矩阵,Bio-Rad®)。

 2.4。PCR鉴定<斜体> bap < /斜体>

PCR的寡核苷酸引物合成根据发表的DNA序列 软面包卷一个基因( 10),分别以下核苷酸序列:向前,5′-GCCATGGTGCTGGAAGGCCTGGCGGTT-3′;相反,5′-GGTCGACGGGAAGGGTAAAATGACCTTC-3′。放大进行了thermocycler (Bio-Rad,乔丹迷你个人热周期计)的反应混合物25 μL,含有5 μL模板DNA, 1 μL (10 pmol L−1)的正向和反向引物,12.5 μL PCR SuperMix(22毫米Tris-HCl,氯化钾55毫米,1.65毫米MgCl2,220年 μdGTP, 220 μdATP, 220 μdTTP, 220 μ22 M dCTP, U /毫升Taq重组DNA聚合酶)和1.5 μL MgCl2(50毫米)。最后的成交准备nuclease-free水。PCR程序包含一个初始变性步骤在94°C 5分钟紧随其后30周期的变性1分钟(94°C),退火(50°C 45 s)和扩展1分钟(72°C)。最后在72°C扩展进行了5分钟。放大产品由潜艇在1.5%琼脂糖凝胶电泳凝胶与prestained GelRed(解决方案1:10000)在0.5 x Tris-EDTA电泳缓冲。100个基点DNA梯(Bio-Rad)作为分子量标记。凝胶的凝胶是可视化文档系统 ™EZ GelDoc和照片进行分析。

 2.5。统计分析

出现的频率 软面包卷一个决心根据先前报告的公式 14]。确定是否有显著的统计差异不同型检查,卡方测试使用流行病学数据分析程序,执行Epidat 3.1。

 3所示。结果与讨论

PCR反应的83属于17个不同的隔离型与寡核苷酸 软面包卷放大产品的667个基点,这对应于预期的大小 软面包卷引发剂(图 1)。重要的是,没有差异中发现这个启动程序元素不同型测试。65株的分析,从动物粪便分离(哺乳动物、鸟类和爬行动物),6被隔绝 美国蟑螂和 有明显,2是孤立的从食物,1是孤立的从生物过滤器,和附件4和5是隔绝水和土壤,分别。

PCR的检测结果 软面包卷一个来自不同 沙门氏菌型。巷1:nontemplate控制;巷2: 沙门氏菌奥尔巴尼;巷3: 沙门氏菌3 10 H: r: -;巷4: 沙门氏菌圣地亚哥;巷5: 沙门氏菌Braenderup;巷6: 沙门氏菌Weltevreden;巷7: 沙门氏菌德比;巷8: 沙门氏菌Oranienburg;巷9: 沙门氏菌6 7 H:在x: -;巷10: 沙门氏菌浦那;巷11: 沙门氏菌圣保罗;巷12: 沙门氏菌巴拿马;巷13: 沙门氏菌波莫纳;巷14: 沙门氏菌纽波特;巷15: 沙门氏菌肠炎;巷16: 沙门氏菌Javiana;巷17: 沙门氏菌给;雷恩18: 沙门氏菌Agona;巷19: 沙门氏菌沙门氏菌感染参考菌株(写明ATCC 14028年代);莱恩M: 100个基点。粗箭头标识667个基点的利息。

所有型放大 软面包卷一个,与以前的结果一致 10] ,这表明 软面包卷非常保守基因之间和不同型中高度的身份(99%)( 15]。这种保护提供了诊断优势因为的存在 软面包卷可用于识别 沙门氏菌在不同环境中属( 16]。

BapA属于一个家庭的大型表面蛋白参与细菌粘附各种表面和成熟的生物膜( 17]。蛋白质,以前叫Stm2689,扮演着一个重要的角色在小鼠模型的肠道殖民以及细菌扩散到其他器官( 18]。在这项研究中,菌株被野生动物粪便中分离出缺乏胃肠的疾病,这表明肠道殖民在这些动物有关,部分的存在 软面包卷一个基因。支持这个概念,先前的研究比较的倾向 沙门氏菌菌株有或没有 软面包卷在肠和发现,突变菌株表现出较低的殖民率比野生型 软面包卷( 19]。

的机制,允许这些病原体存在于动物的消化道是知之甚少。然而,肠道的持久性 沙门氏菌种虫害在临床上观察到健康的动物会增加细菌污染的风险,因为 软面包卷表达式确保主机以外的更多的细菌生存和保持他们的感染能力。这使得细菌抵抗干燥和消毒剂的作用;因此,的生存 沙门氏菌在自然栖息地可能青睐( 20., 21]。进一步了解细菌性肠道持久性机制将促进创新的发展战略,保障公众对沙门氏菌病人口,一个自然的人畜共患疾病。

 4所示。结论

软面包卷被发现在所有83株属于17个不同型与野生动物圈养这表明这是一个高度保守的基因 沙门氏菌并且可以针对这个有机体的genus-specific检测不同来源和诊断的潜力,需要探索。此外,大多数动物阳性无症状携带者。这提出了一个挑战在卫生保健领域的专业人士克服,因为的能力 沙门氏菌生存在许多环境中表明其传播在未来可能会继续增加。

 相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 确认

作者感谢2011项目持有y Apoyo四面八方de Investigatcion (PROFAPI,翻译成程序的激励和支持的研究项目)资助。

 白色的 答:P。 吉布森 d . L。 草原动物 g。 凯 W·W。 芬利 B . B。 瓦兰斯 b。 瑟特 m·G。 聚合通过红色,干燥,粗糙的形态类型不是一个毒性适应 沙门氏菌血清型沙门氏菌感染 感染和免疫 2008年 76年 3 1048年 1058年 10.1128 / iai.01383-07 2 - s2.0 - 40749105319 Gruzdev N。 平托 R。 塞拉 年代。 干燥对公差的影响 沙门氏菌血清多的压力 应用与环境微生物学 2011年 77年 5 1667年 1673年 10.1128 / aem.02156-10 2 - s2.0 - 79953190447 Mah T.-F。C。 奥图尔 g。 生物膜抗菌药物耐药性的机制 微生物学的趋势 2001年 9 1 34 39 10.1016 / s0966 - 842 x (00) 01913 - 2 2 - s2.0 - 0035014383 唐兰 r·M。 Costerton j·W。 生物膜:临床相关微生物的生存机制 临床微生物学检查 2002年 15 2 167年 193年 10.1128 / cmr.15.2.167 - 193.2002 2 - s2.0 - 0036228505 Malcova M。 Hradecka H。 Karpiskova R。 Rychlik 我。 生物膜形成的领域 沙门氏菌血清型沙门氏菌感染:识别一个新殖民地形态类型和SGI1在生物膜形成的作用 兽医微生物学 2008年 129年 3 - 4 360年 366年 10.1016 / j.vetmic.2007.12.006 2 - s2.0 - 43049152785 所罗门 e . B。 Niemira b。 Sapers g . M。 Annous b。 生物膜的形成、纤维素生产和curli生物合成 沙门氏菌来自生产、动物和临床资料 《食品保护 2005年 68年 5 906年 912年 2 - s2.0 - 18444372676 奥斯丁 j·W。 桑德斯 G。 凯 W·W。 歌 美国K。 薄综合菌毛增强 沙门氏菌肠炎生物膜的形成 《微生物学字母 1998年 162年 2 295年 301年 10.1016 / s0378 - 1097 (98) 00137 - 2 2 - s2.0 - 0032525168 克莱姆 P。 Schembri m·A。 细菌丰富:功能和结构 国际医学微生物学杂志》上 2000年 290年 1 27 35 10.1016 / s1438 - 4221 (00) 80102 - 2 2 - s2.0 - 0034088763 索拉诺 C。 加西亚 B。 瓦莱 J。 Berasain C。 Ghigo 人类。 Gamazo C。 拉萨 我。 遗传分析 肠炎沙门氏菌生物膜的形成:纤维素的关键作用 分子微生物学 2002年 43 3 793年 808年 10.1046 / j.1365-2958.2002.02802.x 2 - s2.0 - 0036270804 Biswas R。 阿加瓦尔 r·K。 Bhilegaonkar k . N。 库马尔 一个。 Nambiar P。 Rawat 年代。 辛格 M。 克隆和测序的biofilm-associated蛋白(BapA)基因及其在不同血清型的发生 沙门氏菌 在应用微生物学字母 2011年 52 2 138年 143年 10.1111 / j.1472 - 765 x.2010.02975.x 2 - s2.0 - 78650971891 勃固 d . A。 哦! m E。 米勒 我美国。 沙门氏菌,包括 沙门氏菌伤寒 胃肠道感染 2002年 2日 美国费城,宾夕法尼亚州 Lippincott Williams &威尔金斯 669年 697年 Steenackers H。 何曼思 K。 Vanderleyden J。 De Keersmaecker s . c . J。 沙门氏菌生物膜:概述在发生、结构、监管和根除 食品研究国际 2012年 45 2 502年 531年 10.1016 / j.foodres.2011.01.038 2 - s2.0 - 84857409524 Habimana O。 Steenkeste K。 Fontaine-Aupart M.-P。 Bellon-Fontaine M.-N。 Kulakauskas 年代。 Briandet R。 扩散改变了纳米颗粒在生物膜的细菌细胞壁疏水性 应用与环境微生物学 2011年 77年 1 367年 368年 10.1128 / AEM.02163-10 2 - s2.0 - 79251620715 Thursfield M。 疾病发生的措施 兽医流行病学 2007年 3日 美国新泽西州霍博肯 著名 53 55 Latasa C。 面粉糊 一个。 Toledo-Arana 一个。 Ghigo 人类。 Gamazo C。 Penades j . R。 拉萨 我。 BapA,大量分泌蛋白质所需的生物膜的形成和主机的殖民 沙门氏菌血清肠炎型 分子微生物学 2005年 58 5 1322年 1339年 10.1111 / j.1365-2958.2005.04907.x 2 - s2.0 - 28244447376 Diez-Garcia M。 人均 R。 Alonso-Calleja C。 血清型对生长动力学的影响和形成生物膜的能力 沙门氏菌隔离从家禽 食品微生物学 2012年 31日 2 173年 180年 10.1016 / j.fm.2012.03.012 2 - s2.0 - 84861005660 Latasa C。 索拉诺 C。 Penades j . R。 拉萨 我。 Biofilm-associated蛋白质 学习Rendus-Biologies 2006年 329年 11 849年 857年 10.1016 / j.crvi.2006.07.008 2 - s2.0 - 33750149652 Garcia-Calderon c . B。 Casadesus J。 Ramos-Morales F。 Rcs和PhoPQ监管重叠的控制 沙门氏菌血清毒性 细菌学期刊 2007年 189年 18 6635年 6644年 10.1128 / jb.00640-07 2 - s2.0 - 34548563919 Latasa C。 加西亚 B。 Echeverz M。 Toledo-Arana 一个。 瓦莱 J。 Campoy 年代。 Garcia-del波蒂略 F。 索拉诺 C。 拉萨 我。 沙门氏菌生物膜的发展取决于RcsB的磷酸化状态 细菌学期刊 2012年 194年 14 3708年 3722年 10.1128 / jb.00361-12 2 - s2.0 - 84864013022 Bridier 一个。 Briandet R。 托马斯。 V。 Dubois-Brissonnet F。 消毒剂抗性的细菌生物膜:审查 生物淤积 2011年 27 9 1017年 1032年 10.1080 / 08927014.2011.626899 2 - s2.0 - 84857071307 白色的 答:P。 瑟特 m·G。 比较遗传学的rdar形态类型 沙门氏菌 细菌学期刊 2006年 188年 24 8395年 8406年 10.1128 / jb.00798-06 2 - s2.0 - 33845445094