生化调查临床化学一个重要援助中心功能,为临床医生提供主要生化信息的诊断、预后、疾病的监控和检查。人们普遍认为大部分的医疗决策使用实验室的数据( 1]。此类信息将有价值的只有是准确的和相关的,如果它的意义是赞赏的临床医生,以便它可以使用适当的指导临床决策 2]。标本进行分析必须收集并运送到实验室根据指定的程序,和样品处理和分析的过程中每一步都需要仔细注意如果数据的临床价值 3]。在某些情况下,分析是推迟,或标本送到遥远的实验室进行分析。此外,多个实验时间点的规划往往导致日后样品将被一起分析,因此受到不同时期之前的存储分析( 4]。在这种情况下,退化不稳定分析物必须防止冷藏或冷冻的样品。很多作者指出,不仅生理条件和因素(如年龄、性别、怀孕和营养状况),还生物样品存储不足,preanalytical错误的潜在来源,可能显著影响许多生化变量的浓度( 5- - - - - - 7]。然而,样品存储的影响在频率较低的浓度测量生化变量,包括急性期蛋白,其稳定性在兽医存储不太良好的文档记录。

急性期蛋白是一组血液蛋白质浓度变化等动物受到内部或外部刺激的组织损伤,炎症,受损的体内平衡,创伤,或压力 8]。在牛血清淀粉样蛋白A (SAA)是一种最重要的诊断急性期蛋白与血清浓度1000倍的增加,由于炎症反应( 9]。血清淀粉样蛋白是一种小疏水蛋白,淀粉样蛋白的前体,的主要蛋白质 α淀粉样蛋白,所以它可能是参与反应性淀粉样变的发病机制( 10]。SAA被发现的几个同形像。其中,同形像SAA1 SAA2回应炎症刺激和显著增加产量在肝脏 11]。表达SAA3对碘氧基苯甲醚在nonhepatic组织的急性期反应增加肺或乳腺( 12]。SAA的mammary-associated对碘氧基苯甲醚的作用(M-SAA)与新生适应子宫外的生活和乳腺组织重构在奶牛乳房炎( 13]。急性期蛋白几十年来一直被用作生物标记的疾病在人类医学( 14]。然而,尽管急性期蛋白质浓度的测量可以检测或证实感染或病理损伤的存在,它提供了有用信息的监测动物的健康状况,急性期蛋白质相对兽医开工不足。血清淀粉样蛋白的使用是有限的由于困难在净化和量化,可能因为它是一种疏水性的载脂蛋白是包裹在血清高密度脂蛋白( 15]。在牛的实践中,增加关注急性期蛋白的应用,包括血清淀粉样蛋白A,最近被开发出来。稳定和存储的研究是最重要的一个研究,应该执行过程中引入急性期蛋白质测定的方法。

出于这个原因,本研究的目的是评估的影响存储在各种条件下的浓度主要牛急性期protein-serum淀粉样蛋白A (SAA)在小牛血清样本。此外,SAA的乳腺的稳定性对碘氧基苯甲醚在奶牛的牛奶样本存储了。

数据指在牛血清SAA的浓度,和牛奶样品中M-SAA存储的值表示为平均值,标准差,中位数,包括平均浓度差异的重要性,介绍了表 1和 2。

的评估意味着血清SAA的浓度随着时间的显示值显著下降的趋势在存储−18°C ( P < 0.01 、表 1)。样品存储在冰箱里已经显著降低浓度从第二天起( P < 0.05 ),14天、21天的最低浓度显著存储与初始值( P < 0.01 )。更详细的分析血清SAA含量的结果显示,50%的样品没有存储(0)天从11.70到42.10不等 μ30.50克/毫升,平均浓度 μ克/毫升(图 1)。SAA浓度中位数记录在第二天的存储(15.60低一半左右 μ比初始值g / mL),和50%的测量值在6.89到-29.70之间 μ克/毫升。类似的趋势较低的值被发现在未来的冰箱内存储,最低的平均浓度SAA 14天的存储(12.00 μg / mL)。

牛奶中浓度的变化意味着M-SAA样本相对于时间的存储温度−18°C是非常重要的( P < 0.001 、表 1)。M-SAA浓度的牛奶样品中确定冰箱存储的第2天,明显降低的值被发现( P < 0.01 、表 1),进一步明显降低浓度后第七天的存储与初始值( P < 0.001 ),然后保持相对稳定的值评估的冰箱储存。M-SAA我们观察到一个中等浓度的逐渐减少的值在冰箱里储存,最低的平均浓度确定在21天的存储(4483.20 ng / mL,图 2)。通过更详细的评估单个M-SAA浓度初步分析中我们发现,牛奶样品50%的测量值范围从3936到7326 ng / mL,和样品分析的第2天存储我们已经记录的低浓度50%的测量值的范围在3371和6091 ng / mL。

在牛血清SAA的平均浓度获得存储在4°C 1天无意义的低于立即记录下样品的评估价值分析(表 2)。同样,当浓度的分析M-SAA牛奶样本存储在冰箱后,没有发现显著差异之间的浓度决定样本中没有存储和牛奶中存储1天4°C。

许多临床试验和研究依赖于延迟的批分析收集血液样本。为了实现这些分析,血液样本被离心分离,和收获血清或血浆中迅速冻结 16]。在特定的随访时间,指定的样本解冻和分析是研究协议。稳定性的一些常规临床生物化学参数(总蛋白、白蛋白、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、微量元素、和激素)测试在人类和动物物种的范围在不同实验室储存条件( 4, 5, 17]。这些研究表明存储的温度和时间是很重要的因素,这可能影响生化分析的结果。数据从这些报告关于急性期蛋白的稳定性和在血液样本存储在他们的浓度的影响相当稀缺。稳定和存储进行研究来确定存储在c反应蛋白的浓度的影响,作为人类最重要的诊断急性期蛋白( 18, 19]。事实上,数据存储稳定的急性期蛋白质和温度的影响和持续时间的存储在他们的浓度在兽医仍然有限。因为急性期蛋白质测定的实验室检测的重要性也可能成为牛血清淀粉样蛋白A和其乳腺同种型(正确),更好的理解他们的生物变异和preanalytical因素对其浓度的影响。

在目前的研究中,我们观察到样本存储在较低温度的显著影响血清淀粉样蛋白的浓度,以不同强度的变化在其浓度在冰箱或冰箱温度。在冰冻的血清样本,结果显示显著减少SAA的趋势,以及M-SAA浓度随着时间的推移。显著降低浓度被发现后已经2天的存储。SAA含量确定在血清样本存储在冰箱的温度下不同无意义的值测量的样品没有存储,但其平均值较低。SAA的贮存稳定性调查Hillstrom et al。 20.在马血清样本。作者观察到SAA含量无显著变化随着时间的推移在血清样本存储在4°C,和天之间的差异并不高于可以解释的不精确的方法。同样的,在另一项研究中,一个马SAA标准池是储存在4°C的两个月,SAA含量无显著变化被发现( 21]。这些作者观察到的只是一个轻微的波动在测量值不精确的方法来解释。此外,不影响人类SAA的稳定性和C反应蛋白被发现的样本存储在−20°C 2个月,直到实际测量( 22]。你等。 23)和Ceron et al。 24)报道,急性期蛋白,包括结合珠蛋白和c反应蛋白,比血液的细胞成分更稳定,并可以冻结的血清样本进行化验。阿齐兹et al。 18]表明,不同标本处理和存储条件的影响5月急性期蛋白的浓度取决于分析配置,应该验证的任何研究项目。根据我们的发现,牛SAA似乎是在较低温度下存储期间更不稳定,主要在冻结。减少SAA含量在较低的温度,在我们的研究中获得的在冰箱,冰箱以及存储,可能与产生的不稳定性和降解的蛋白质分子构型的变化在存储。SAA的稳定性变化的另一个原因在存储可能是其生物行为( 20.]。然而,上述矛盾的数据表明,进一步的调查需要澄清的可能影响温度和持续时间的存储在牛血清淀粉样蛋白的浓度并解释其浓度的变化在存储在较低的温度。

储存温度和持续时间的影响在SAA的乳腺的浓度对碘氧基苯甲醚奶牛的牛奶样品是有据可查的。根据制造商的数据,收集牛奶类样本的确定M-SAA可以存储2天在4°C或存储冻结在−20°C更长(Tridelta发展,爱尔兰)。然而,据我们所知,没有发表的研究报告的影响样品存储M-SAA的浓度与温度和持续时间的存储。在提出的研究中,我们观察到一个明显的趋势逐渐减少的值M-SAA期间存储在冰箱温度从第二天开始。同样的,无意义的减少M-SAA浓度牛奶样品中发现了保持在冰箱温度。上述M-SAA在牛奶样品的浓度减少存储可能是由于降解SAA的乳房对碘氧基苯甲醚,如期间发现了几个因素影响牛奶组件存储在不同的温度和时间 25]。Woltersdorf et al。 26)报道,冷冻过程和产生的时间延迟的分析可能会导致物理样本的变化,这可能影响样品中分析物的浓度。急性期蛋白的浓度,包括M-SAA牛奶,量化得到的信息为诊断或监测的目的( 27, 28]。这要求精确测量的急性期蛋白浓度和稳定分析。根据结果提出,血清和牛奶样品没有冰箱存储建议在牛、SAA分析包括乳腺的浓度的测定同种型关联起来,因为蛋白质降解在存储在低温下可能导致浓度的变化。看到发表SAA的长期稳定和数据主要存储期间乳房同种型在不同条件下仍然是有限的,进一步的研究可能会有帮助。

分析方法适当的样本处理和处理是非常重要的。因此,相关问题的preanalytical因素应考虑急性期蛋白测量生病和健康的动物之间避免潜在的错误分类。我们的研究结果表明,温度和持续时间的存储作为合适的样品处理的一部分是很重要的因素也对一些急性期蛋白质分析。提出了我们的研究结果显示显著影响的示例存储,主要是在冰箱的温度下,在牛血清淀粉样蛋白的浓度及其与逐步显著减少乳房相关的同种型值的评估时间。因此,持久存储在低温下后,南非航空公司的测量,以及M-SAA血清或牛奶样品中可能不准确,可能导致错误的解释。根据这些结果似乎很重要的分析没有提到的样品参数存储在冰箱里。