泰爱泰党 结核病研究和治疗 2090 - 1518 2090 - 150 x Hindawi出版公司 970203年 10.1155 / 2012/970203 970203年 临床研究 清晨痰样本为肺结核的诊断是必要的,即使有更敏感的技术:前瞻性队列研究中青少年TB-Suspects乌干达 Ssengooba 威利 1、2、3 Kateete 大卫·P。 1 Wajja 安妮 2、3 Bugumirwa 埃里克 1、3 Mboowa 杰拉尔德 1、3 Namaganda 卡洛琳 1、3 Nakayita 1、3 Nassolo 玛丽亚 1、3 Mumbowa 弗朗西斯 1、3 Asiimwe Benon B。 1 Waako 詹姆斯 2、3 神韵 苏珊 4 Musoke 菲利帕 2、3 Mayanja-Kizza 哈丽特 2、3 Joloba 摩西L。 1、2、3 Garzelli 卡洛 1 美国医学微生物学 生物医学科学学院 Makerere大学健康科学学院 坎帕拉 乌干达 mak.ac.ug 2 传染病研究所 Makerere大学健康科学学院 坎帕拉 乌干达 mak.ac.ug 3 Iganga / Mayuge人口监测站点 公共卫生学院的 Makerere大学健康科学学院 坎帕拉 乌干达 mak.ac.ug 4 KNCV结核病基金会、海牙、影剧院、学术医学中心Parkstraat 2514 JD海牙 荷兰 kncvtbc.nl 2012年 3 12 2012年 2012年 17 10 2012年 19 11 2012年 20. 11 2012年 2012年 版权©2012威利Ssengooba et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

世界卫生组织(WHO)推荐的两个结核病(TB)诊断痰液样本,至少有一个是一个清晨(EM)使用涂片镜检。目前尚不清楚这是否即使痰培养工作是必要的。这里,我们确定诊断产量从现货和增量收益率EM痰样本之间的文化TB-suspected青少年从农村乌干达。痰液样本(包括现场和清晨)从1862年青少年被Lowenstein-Jensen培养(LJ)管(MGIT)方法和分枝杆菌增长指标。对于现货样品,诊断结核病的收益率分别为19.0%和57.1% LJ和MGIT分别,而清晨的增量收益率(不是总数)示例分别为9.5%和42.9% ( P < 0.001 LJ和MGIT分别。在TB-suspected乌干达农村青少年的EM痰文化增量诊断产量很高。因此,EM痰除了现货样品文化对于提高结核病检出率是必要的。

1。背景

结核病仍然是一个全球紧急,导致高死亡率和发病率尤其在撒哈拉以南非洲地区( 1]。一些研究表明,结核病的发病率在青少年(12 - 18岁)增加了22%,减少了38%在小于5岁的儿童 2]。

虽然鲜有数据结核病在全球青少年在乌干达和总的来说,他们的保护性反应 结核分枝杆菌(MTB)感染似乎不那么有效 3]。青少年也有独特的结核临床表现;他们更无症状,更可能有空洞的疾病( 4]。报告显示,许多青少年有活动性结核病诊断在疾病的后期阶段( 2]。此外,青少年与结核病的人口统计学和临床特点不同于成人和儿童( 5]。此外,它是很难获得质量痰液样本,这使得结核病诊断青少年具有挑战性。事实上,许多青少年与结核病容易产生痰涂片阴性样本( 6]。

世界卫生组织(世卫组织)、国际防痨和肺部疾病联合会(IUATLD)推荐的两个痰标本涂片镜检和至少一个作为一个清晨(EM)样本。这个旨在减少工作负载/串行样品检查( 7, 8]。然而,这些建议似乎在设置工作服务于普通人群,外部质量保证(EQA)方法。因此,这些建议可能不会解决所需的样本数量在其他情况下,痰培养。

结核病的确诊结核分枝杆菌主要取决于文化从临床样本 9]。根据寒酸的数学模型等,扩大使用的结核病文化可能对结核病有直接的影响,因为它可以减少结核病负担利率在高负担国家 10]。然而,这个概念仍然较少应用于资源有限的国家,最大的压力是结核病。这主要是由于基础设施的高费用和成本要求( 11]。例如,只有一个公众结核病在乌干达文化设施,位于首都坎帕拉。

尽管此举扩大和提高实验室能力进行结核病文化( 12],和自动液体培养系统的可用性,需要更少的劳动力( 13),已经完成评估和成本效率的影响包括操作研究执行结核病资源有限的国家的文化。情况更糟的是当青少年参与文化是最适合诊断( 14]。

而痰涂片镜检所需样品的数量和类型已经标准化,痰液样本的数量和类型所需的文化没有被标准化。此外,虽然是一个重要的诊断获得EM痰样本使用涂片镜检时,尚不清楚这是否获得显著仍在使用技术,如文化尤其是青少年更加敏感。因此本研究旨在确定诊断的现货和增量收益率EM痰样本对结核病的诊断青少年文化在农村乌干达。

2。方法 2.1。研究设计和设置

这项研究是一个大的子组件观察研究由Makerere大学公共卫生学院,共招收了5000名青少年在乌干达农村,为结核病疫苗试验做准备。这项研究是在一个人口监测站点(DSS)位于Iganga和Mayuge在乌干达东部地区(首都坎帕拉~ 150公里)。

青少年结核病组(12 - 18岁)招收了5000名参与者在DSS从小学和中学。它注册参与者积极结核菌素皮肤试验(TST)和至少一个结核病相关症状或接触一个结核病患病的人的历史。参与者计划研究期间内的迁移或医学上不适合痰被排除在外的集合。结核病的临床评价包括给两个痰样本;一个收集的现场监督下在第一天(现货样品),另一个2天的参与者没有监督(EM样本)。

痰液样本获得每天从护士和运输的参与者在寒冷的盒子(温度≤8°C)参考mycobacteriology实验室(3)生物安全水平的实验室文化和分析完成。这个实验室位于美国医学微生物学,Makerere大学健康科学学院坎帕拉。样品收集在中午被冷藏,直到第二天。

因此,研究分析包括研究参与者与EM和现货痰样本提交文化。

2.1.1。实验室程序

根据标准程序(痰样本处理 15Jensen)同时接种在洛温斯坦(LJ)(正欲和迪克森,富兰克林湖,新泽西,美国)和分枝杆菌增长指示管(MGIT)(正欲和迪克森,富兰克林湖,新泽西,美国)文化瓶与增长媒体所描述的其他地方( 15, 16]。荧光显微镜的涂片也做根据标准程序 15]。

纯洁,MGIT-positive文化进一步他们的亚文化在血琼脂24小时37°C和Ziehl Neelsen(锌)涂片。文化ZN-positive和纯(即。,no growth on blood agar) were subjected to Capilia TB Neo (TAUN, Numazu, Japan) for identification of the MTBC [ 17]。文化与经济增长在血琼脂还ZN-positive再次亚文化圈如上所述;持久ZN-negative文化与经济增长在血琼脂被认为是污染。所有ZN-positive、血琼脂消极和Capilia结核病Neo -样本认为除了肺结核分枝杆菌(莫特);这些受到基因型试验(海Lifescience, Nehren,德国)物种形成。否则没有殖民地在LJ或荧光MGIT被认为是负面的。数据进入计算机实验室访问数据库与病人记录样本报告形式。

2.1.2。数据分析

我们的分析的主要结果是文化积极的结核病,定义为在LJ MTBC积极或MGIT文化从现货或EM样本。实验室诊断产量数据进行了分析;这称为结核病例的数量检测到每个痰样本类型(点或EM)无论是否比较器是正面的。增量诊断产量数据进行了分析;这被称为文化的产生积极的EM样本的结核病病例发现当现货样本相同的情况是负面的。文化污染率计算总数每样本污染超过总数的文化样本类型接种。

统计分析与占据SE进行软件版本11(美国大学站TX占据公司LP)。分析样本类型的单位显示诊断产量从每个和增量产量EM痰样本收集的文化。一个 P 值< 0.05的被认为是具有统计学意义。

2.1.3。道德的考虑

本研究在豁免下运作的同意,因为它涉及二次数据分析主要研究之前获得伦理批准Makerere大学健康科学学院的公共健康机构审查委员会(IRB)和乌干达国家科学技术理事会起草的。

3所示。结果

总共有5000青少年参与者进行结核病筛检,其中有2418(48.4%)符合研究标准的结核病可疑。2418 TB的嫌疑犯,803例(33.2%)有一个积极的结核菌,237名(57.0%)与肺结核病人接触,和1378年(57.0%)至少有一个结核病症状。此外,556(22.9%)被排除由于与样本收集的挑战;50(2.1%)干咳因此没有提供痰,301(12.4%)未能实现一个EM示例中,110(4.5%)搬迁痰收集之前,在95年(3.9%)错过了学习访问收集点。因此,分析仅限于1862合格参与者EM和现货样品图 1

研究流程图1862青少年结核病嫌疑人基于现货和EM痰液样本。

1862名参与者,6 (0.3%)MTBC-positive基于涂片镜检,21 (1.1%)MTBC-positive基于文化(Capilia Neo结核病试验证实了所述方法)因此他们视为真正的结核病例(表 1)。

特征的六个患者MTBC-positive 21 MTBC-positive文化患者痰涂片和样本类型结核病嫌疑人在乌干达农村青少年( n = 1862年 )。

特征 涂片阳性* 文化积极的(MTBC) *
现货 n(%)的总数 新兴市场 n(%)的总数 现货 n(%)的总数 新兴市场 n(%)的总数 总注册 n(%)的总数
3 6 9 15 1862年
男性 1 (33.3) 4 (66.7) 4 (44.4) 7 (46.7) 1069 (57.4)
2 (66.7) 2 (33.3) 5 (55.6) 8 (53.3) 793 (42.6)
年龄范围
12 - 14 0 (0.0) 1 (16.7) 5 (55.6) 1 (6.7) 805 (43.2)
15 - 16岁 3 (100) 4 (66.7) 4 (44.4) 8 (53.3) 543 (29.1)
17 - 18 0 (0.0) 1 (16.7) 0 (0.0) 7 (46.7) 514 (27.6)
体积
≤5毫升 1 (33.3) 3 (50.0) 3 (33.3) 9 (60.0) 1226 (65.8)
> 5毫升 2 (66.7) 3 (50.0) 6 (66.7) 6 (40.0) 636 (34.2)
一致性
2 (66.7) 3 (50.0) 4 (44.4) 7 (46.7) 872 (46.8)
Mucosalivary 1 (33.3) 3 (50.0) 3 (33.3) 2 (13.3) 350 (18.8)
黏液状的 0 (0.0) 0 (0.0) 1 (11.1) 2 (13.3) 360 (19.3)
黏脓性的 0 (0.0) 0 (0.0) 1 (11.1) 3 (20.0) 213 (11.4)
脓性 0 (0.0) 0 (0.0) 0 (0.0) 1 (6.7) 67 (3.6)

新兴市场:清晨,MTBC:结核分枝杆菌复杂, n:数量,%:百分比;* 3涂阳现场也检测到清晨样本,还3参与者积极点和清晨痰文化。

3.1。分枝杆菌产生的地方,清晨痰液样本

基于LJ文化,只有6个(0.4%)样本MTBC-positive意义结核病病例发现基于LJ-positive文化6例:这些也积极通过涂片镜检。的六个LJ-positive情况下,一个(0.1%)来自现货样品,两个从新兴市场(0.2%),( P < 0.001),而三个(0.5%)来自现货和EM样本。LJ现货样品污染率为1.6%,这个数据是2.9% EM样本( P = 0.008 )。

另一方面,MGIT文化发现21结核病例(包括六个LJ-positive的);6个(0.3%)在现场,他们12(0.6%),和三个(0.2%)现货和EM样本( P < 0.001 )。此外,MGIT 225莫特(12.1%)也发现其中106(5.7%)和119年(6.4%)( P < 0.001 从现货和EM样本),分别(表 2)。

分枝杆菌产生从新兴市场和现货痰样本不同的文化方法( n= 1862)。

培养法 结果 现货样品 n(%) 他们的样品 n(%) 新兴市场和现货样本 n(%) n(%)
LJ ( P< 0.001) MTBC积极 1 (0.1) 2 (0.1) 3 (0.2) 6 (0.3)
莫特 0 (0.0) 0 (0.0) 0 (0.0) 0 (0.0)
文化负 1831 (98.3) 1806 (97.0) 1859 (99.8) 1772 (95.2)
受污染的 30 (1.61) 54 (2.9) 0 (0.0) 84 (4.5)

MGIT ( P< 0.001) MTBC积极 6 (0.3) 12 (0.6) 3 (0.2) 21日(1.1)
莫特 106 (5.7) 119 (6.4) 0 (0.0) 225 (12.1)
文化负 380 (20.4) 301 (16.2) 1859 (99.8) 681 (36.6)
受污染的 436 (23.4) 499 (26.8) 0 (0.0) 935 (50.2)

新兴市场:清晨;MTBC:结核分枝杆菌复杂,莫特:非结核分枝杆菌,LJ:洛温斯坦Jensen管MGIT:分枝杆菌增长指标。IY:增量收益,LJ:洛温斯坦Jensen管MGIT:分枝杆菌增长指标。

莫特是种如下: m . fortuitum143例(63.6%); m . Szugai32 (14.2%); m . gordonae21 (9.3%); m . intracellulare11 (4.9%); m . scrofulaceum7 (3.1%); m . lentiflavum7 (3.1%); m . peregrinum4 (1.8%)。

总的来说,436/1862(23.4%)的现货和499/1862 (26.8%)( P < 0.001 EM样本的文化受到了污染(表 2)。最常见的革兰阳性球菌污染物。

3.2。结核病的诊断产量点的增量收益率清晨痰样本的文化

结核病诊断产量现货样品4(19.0%),12例(57.1%)在LJ和MGIT,分别。的增量收益率(不是全部)诊断EM样本2(9.5%),12例(42.9%)( P < 0.001 分别在LJ和MGIT(表 3)。

诊断产量现货和增量的结核病诊断产量(不是全部)EM的痰样本文化( n = 21 )。

培养法 收益率的现货 n(%) 增量诊断产量EM(观察) n(%) 结核病例总数 n(%)
LJ 4 (19.0) 2 (9.5) 6 (28.6)
MGIT 12 (57.1) 9 (42.9) 21 (100)

n:数量,IY:增量收益,LJ:洛温斯坦Jensen MGIT:分枝杆菌生长指示管,EM:清晨。

4所示。讨论

这项研究显示,青少年中结核病嫌疑人在乌干达农村,一个EM痰样本文化增量诊断产量更高。然而,研究还发现,他们的文化也检测到更多的莫特相比,现货样品。诊断EM痰文化获得给定一个消极点痰样本MGIT LJ文化和文化是9.5% 42.9%。

鉴于痰文化尤其是液体系统的灵敏度(MGIT)涂片镜检,人会想象的增量诊断产量EM痰样本可以忽略不计;然而,这是与我们的研究结果与以前的研究一致通过显微镜或文化( 7, 18- - - - - - 20.]。发现在这项研究中进一步同意先前的研究报告一个重要获得EM样本( 21- - - - - - 23]。这可能是部分原因是肺部的痰的积累一夜之间,导致细菌浓度的样品。相比之下,患者可能白天更加活跃,可能摆脱杆菌断断续续,从而减少的产量杆菌痰现货样品。这些事实进一步支持指南研究EM样品除了现货痰样本之前宣布肺结核可疑肺结核的消极。

坚实的文化发现结核病例较少,更少的污染MGIT和这种差异相比,样品类型而言,与先前的研究是在协议( 21, 24, 25]。然而,Tortoli等人记录与LJ文化相反的( 26]。LJ的低收益率与MGIT相比不太可能归因于净化程序样本同样使用相同的处理程序和均质相同的痰样本接种培养基。降低污染率可能是由于这样的事实,我们使用商业准备LJ正确品质管理,是不太可能吸引了污染物。

的高污染率MGIT可能部分是由于这个方法使用高营养中等,容易支持其他细菌的增长。另外,长途的痰样本收集网站(3小时车程)实验室,它起到了促进快速增殖的正常菌群,这主要是革兰氏阳性球菌( 26]。我们观察到更少的污染和现货样品(监督集合地点)与EM样品相比(没有无监督集合地点);然而,这可能不是重要的因为我们没有提供水或其他材料,以减少患者咳痰前正常菌群。然而,这一发现支持类似的发现在一项研究 27]。同样值得注意的是,高污染率可能是导致低估的结核病例MGIT和做测试的成本增加。此外,第二次痰培养产量的增加,一部分是因为他们样品检测那些被污染的现场;然而污染不大可能解释EM产量的增加文化因为类似的场景增加的产量也记录了先前的研究污染率较低( 21, 22]。

与之前的研究结果相一致( 28),我们发现,LJ可能有不利的环境支持莫特增长以来所有的孤立的分枝杆菌MTBC [ 28)和大量的莫特和MGIT孤立。这主要是由于这一事实MGIT更敏感和促进快速乘法的快速增长比LJ莫特。这就是为什么那些强调快速识别任何MGIT锌积极之前确认报告结果( 29日]。然而这是相反的另一项研究记录几乎同样数量的莫特孤立LJ和MGIT文化( 26]。这可能是由于地区差异在莫特因为大多数莫特物种的分布,研究不同于那些在我们的。

因为大多数分枝杆菌表型类似,莫特的流行在这个研究人口令人担忧,他们可能扭曲了免疫原性结核病疫苗试验计划中的数据。此外,就像我们没有文档由于莫特感染任何疾病,研究莫特疾病由于这些生物以来需要记录在其他设置( 30.]。此外,作为参与者的数量未能返回一个EM样本在这个研究是高301/2418(12.4%),未来的研究考虑其他痰样本收集策略,例如,“前装”战略也很重要。

我们的研究有一定的局限性;首先,我们没有单独的分枝杆菌产生的现货和EM痰样本收集基线和随访;因此,不同的样品成分可能发生在不同的时间点在研究过程中。此外,主要研究记录了一些实验室确诊结核病例。这可能是不同其他形式的结核病诊断包括临床诊断。然而,更大的样本量,我们的发现为未来的研究提供重要的信息关于结核病青少年。

样品收集分析在研究制定与监督现场样本集合作为一个纯粹的分析研究BSL-3结核病文化设施;因此,正如我们的研究结果对控制研究具有一定的临床试验,他们可能不代表在日常实践中会发生什么。

此外,我们发现MTBC Capilia结核Neo,这可能会给假阴性所记录的先前的研究[ 30., 31日];然而,所有莫特和MTBC出行使用线性探针海厘米和基因型分析。

总之,清晨痰文化有很高的增量在乌干达青少年肺结核诊断产量。在结核病疑似青少年,清晨痰除了现货样品更好的结核病病例发现文化是必要的。MGIT系统培养所有MTBC例莫特和大多数人从清晨痰液样本。

确认

作者感谢参与者从Iganga / Mayuge Iganga / Mayuge人口监测站点(DSS)和技术团队的Mycobacteriology (BSL-3)实验室Makerere大学健康科学学院。这项研究是由欧洲和发展中国家临床试验伙伴关系(EDCTP)与传染病研究所的行政支持(伊迪)和Iganga / Mayuge DSS Makerere大学健康科学学院。

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