牙髓干细胞(DPSC)高增殖能力和能够分化成多种细胞类型。这些细胞积极表达特定的间充质干细胞标记线如CD29 +, CD73 +, CD90 + CD105 +和CD166 +和- CD14、CD34、CD45和HLA-DR造血标记。(
最初,从神经嵴,DPSCs可以分化成神经元活性,并分泌不同的神经生长因子如GDNF, BDNF,据,发挥重要的免疫调节,神经保护,和神经营养活动,如伤害引起细胞凋亡抑制,切断了轴突的再生,弥补损失的细胞(
在牙科,DPSCs研究了再生各种组织,如骨、髓(
牙科组织是一种很有前途的和容易的干细胞来源,成功隔绝蛀牙的报告(
考虑保守的可能性获得果肉组织发病率较低,本研究的目的是评估的影响成人DPSC收获方法可行性和分化能力的细胞,比较提取从声音恒牙和牙髓切除术。
五和声音爆发第三磨牙患者选择。所有参与者同意参与这项研究中,根据研究伦理委员会的圣莱奥波尔多Mandic牙科学院的巴西坎皮纳斯(研究设计院:55547916.0.0000.5374)。十个牙齿了,2的牙齿从每个5患者年龄在18岁到25年。
纸浆材料从两种不同的方法获得,后牙冠G1-sectioning提取(对照组
样品在冷藏运输冷却箱(低于10°C)在猎鹰管锥形底包含运输基本培养基(美国Gibco)富含1%青霉素和链霉素(σ,美国)。
G1的牙齿被送往实验室进行处理后提取。借助剪钳、纸浆访问是通过执行水门汀搪瓷结(图
对比收集方法。(一)Postextraction冠状部分。(b)听起来冠冕。(c)冠状动脉的访问。(d)牙髓切除术。
纸浆的访问是通过使用一个球形金刚石钻头(公斤Sorensen)在高速下不断冷却和低压仪表对牙齿,直到纸浆被半透明可视化。髓室的屋顶被破裂牙质刮匙,和纸浆被相同的仪器(数字
所有实验室程序进行R-CrioCriogenia,巴西坎皮纳斯在实验室分为ISO7 (ISO 14644)。样本清洗解决方案包含100 U /毫升青霉素和链霉素(美国σ),紧随其后的是酶和胶原酶消化I型1毫克/毫升37°C 5分钟。消化了的低糖DMEM基础培养基(美国σ)和在178 G离心10分钟。上层清液被丢弃,小球被1 x PBS缓冲去除反应残渣和离心机在178克10分钟。上层清液被丢弃,颗粒悬浮与DMEM补充10% (
细胞形态是由光学显微镜评估(100 x放大)孵化后37°C和5%的公司2在Stempro培养基(美国Gibco)。
评价细胞表面抗原表达,细胞在第三段孵化与单克隆抗体CD45-PE(585海里)鼠标反,克隆HI30 (BD生物科学、圣地亚哥、钙、美国);CD73-PE(585海里)鼠标反,克隆AD2 (BD生物科学、圣地亚哥、钙、美国);CD90-FITC(533海里)鼠标反,克隆5 e10 (BD生物科学、圣地亚哥、钙、美国);和CD105-FITC(533海里)鼠标反,克隆266 (BD生物科学、圣地亚哥、钙、美国)。分析了样品分离的Accuri C6流式细胞分析仪(BD生物科学),包括1000年的事件。
成骨和chondrogenic分化诱导12-well盘子,感应媒体准备根据制造商的指示和改变每3天。28天之后,细胞染色茜素红(美国σ)和软骨细胞与阿尔新蓝染色(σ,美国)。
细胞计数进行评估利用台盼蓝排斥法和光学显微镜下的纽鲍尔血细胞计数器。
在这项研究中,Wilcoxon Mann-Whitney
光学显微镜下细胞形态的评价(100 x)显示细胞与成纤维细胞的形态,即细长纺锤状细胞分布在两组织模式,如图
显微镜下细胞形态(100 x):对照组(a)和(b)测试组。
流式细胞仪显示积极表达CD73 +, CD90 +和CD105 +标记和消极的表达CD45——两组根据采集的样本比较如图
CD45 CD73, CD90、CD105标记表达谱:对照组(a)和(b)测试组。
控制和测试组的细胞显示成骨和chondrogenic变异(图的形态特征
成骨分化:200 x对照组,(b) 200 x测试组,对照组(c) 400 x, x测试组(d) 400。Chondrogenic分化(e): 200 x对照组,(f) 200 x测试组,对照组(g) 400 x, x测试组(h) 400。
测试组(牙髓切除术)91.2%活细胞,而对照组(拔牙术)95.8%活细胞(
结果%的活细胞,文化,和总细胞研究团体。
| 控制 | 测试 |
|
|
|---|---|---|---|
| 活细胞(%) |
|
|
0.0439 |
| 文化时间(天) |
|
|
0.4447 |
| 不。总细胞 |
|
|
0.8340 |
箱线图与获得的值在每个样本的控制和测试组。
总文化时间从隔离到低温贮藏试验和控制组织是52.6和51.6天,分别。没有统计上的显著差异(
细胞扩张后,测试方法产生了总共5736862 .20冻存细胞和对照组5286782细胞。没有统计上的显著差异之间的观察方法,如表所示
干细胞能够自我复制和分化成多个菌株(
研究旨在调查三级牙质的起源形成成发现单独使用高增殖能力和分化的细胞的数量,确认牙髓干细胞的存在(
在牙髓干细胞被发现在纸浆的中部地区,尽管在少量。收获这些细胞可能做无创,没有发病,因为乳牙自然片状剥落,而收获恒牙需要拔牙术。尽管落叶和永久teeth-derived干细胞有许多共同的特征,落叶浆细胞分化较低比从恒牙
间充质干细胞是特别是多能,使它们非常有前途的组织再生。至少有两个收获方法隔离和扩大这些细胞已报告:去除纸浆在无菌环境中提取和脱落的牙齿或牙齿牙髓组织切除,同时保留,尽管没有共识在文献中关于最有效的方法(
本研究的目的是评估的影响两个收获方法对于成人牙髓干细胞的细胞生存和分化能力,比较控制方法(拔牙术)测试方法(牙髓切除术)声音第三磨牙,这是适用于临床场景如拔牙术矫正目的和痛苦。
微观评价显示成纤维细胞的形态学的收获细胞,证实了研究结果的Gronthos等人以及最近的报告,吉梅内斯等。形态被发现是一个重要的标准建立干细胞的特征,描述由Sonoda et al。
Immunophenotyping证明表面分子的表达作为标记的干细胞,即CD73 CD90、CD105和CD45阳性标记-标记的基本描述间充质干细胞(
建立的一个重要标准祖干细胞能够分化成多个菌株(
活细胞计数在测试组(牙髓切除术)占细胞总数的91.2%,而对照组(拔牙术)95.8%活细胞,显示两者之间的显著差异在细胞生存能力收获方法(
众所周知,在可能的情况下,保护牙齿的本体感受比牙科植体康复。自然牙齿的触摸灵敏度较低的咬和咀嚼负载无法取代的vt .骨结合植入物(
果肉组织获得的恒牙的牙髓切除术进行至关重要的纸浆的牙髓学的治疗(例如,在不可逆转的牙髓炎和/或用于假牙修复术)可以让成人牙髓的隔离和扩张msc、甚至在纸浆炎症情况下(即。牙髓炎)(
这项研究的结果表明,牙髓切除术可能是一个可行的替代传统的保守纸浆收获从拔牙术的方法。
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
作者宣称没有利益冲突。
维克多冈田克也Vendramini和Sevda Pouraghaei co-first作者。
这项工作是支持R-Crio干细胞,SP、巴西坎皮纳斯。这项研究的部分资金由斗篷、财务代码001。