SCI 干细胞国际 1687 - 9678 1687 - 966 x Hindawi 10.1155 / 2021/8859071 8859071 研究文章 抑制Notch信号促进心外膜祖细胞的分化成脂肪细胞 刘 本 王 Dinghui 熊 Tianhua 刘 原来 京 小东 杜 Jianlin https://orcid.org/0000 - 0001 - 5049 - 1264 她 羌族 张 Dunfang 心内科 第二附属医院的重庆医科大学 重庆400010 中国 cqmu.edu.cn 2021年 9 4 2021年 2021年 30. 8 2020年 21 3 2021年 26 3 2021年 9 4 2021年 2021年 版权©2021本刘et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。的角色等级分化的信号通路心外膜的祖细胞(epc)脂肪细胞尚不清楚。Notch信号的目的是探讨影响内皮祖细胞的分化成脂肪细胞。 方法。冻结的部分 C57BL / 6J老鼠心脏被用来观察心外膜脂肪组织(吃),和遗传谱系的方法被用来跟踪内皮祖细胞。内皮祖细胞培养在脂肪形成的诱导与切口配体jagged-1或媒介 γ分泌酶抑制剂榫眼。脂肪细胞标记、Notch信号和脂肪形成转录因子测定。 结果。有位于心房心室槽吃老鼠。通过使用遗传谱系追踪方法,我们发现内皮祖细胞心外膜脂肪细胞的来源。内皮祖细胞脂滴堆积,脂肪细胞标记物的表达FABP-4脂肪形成的诱导下,perilipin-1调节。激活Notch信号与jagged-1减脂肪形成的分化的内皮祖细胞和表达下调脂肪形成的关键转录因子过氧物酶体扩散者激活受体- γ(PPAR - γ),而促进脂肪形成的分化和抑制信号调节PPAR - γ。当阻塞PPAR - γ,Notch信号的角色在促进脂肪形成的分化抑制。 结论。内皮祖细胞是心外膜脂肪细胞的来源。Downregulation切口的信号通路促进内皮祖细胞的分化成脂肪细胞通过PPAR - γ。

 重庆市渝中区科技基础和先进的研究项目 20170107 社会事业和民生保护技术创新重庆科学委员会 cstc2017shmsA130086 中国国家自然科学基金青年科学基金项目 81800254 中国国家自然科学基金 81770251 1。介绍

心外膜脂肪组织(吃),位于心肌和心外膜之间,覆盖了超过四分之三的人类心脏表面的,是20%的人类心脏的质量( 1]。吃充当缓冲保护扭转引起的冠状动脉动脉脉搏波和提供能量到邻近的心肌能量限制( 1]。不仅吃含有脂肪细胞基质细胞和免疫细胞。它分泌许多细胞因子(包括发病、白介素和趋化因子),被认为是一个活跃的内分泌器官 2]。吃量和冠状动脉疾病之间的关联,心房纤维性颤动、睡眠呼吸暂停综合症和代谢综合征已经证明( 3, 4]。尽管吃起着重要的保护作用和病理生理意义,很少有人了解它的起源和扩张。

心外膜是外部细胞层覆盖心脏表面。在发展中心,心外膜的祖细胞(epc)迁移到心脏的外表面形成了心外膜[ 5]。内皮祖细胞专门表达T-box转录因子(Tbx18)和肿瘤基因1 (Wt1)在小鼠的心脏。他们影响心肌的发展通过分泌生长因子和细胞因子在胚胎阶段。此外,内皮祖细胞接受epithelial-to-mesenchymal过渡(EMT)和迁移到心肌分化成平滑肌细胞和成纤维细胞,这可能也有可能分化成内皮细胞和心肌细胞 6]。最近,一些研究报道,内皮祖细胞向脂肪细胞分化的能力( 7- - - - - - 11]。转录因子过氧物酶体扩散国激活受体- γ(PPAR - γ),胰岛素样生长因子1受体(IGF1-R) prokineticin-2,心房利钠肽(ANP)调节内皮祖细胞的脂肪形成的分化 7, 8, 10, 11]。

Notch信号通路中起着重要的作用在调节内皮祖细胞的分化和增殖 12, 13]。四个级距受体(Notch 1到4)和五个配体(Jagged-1, Jagged-2, Dll1、Dll3 Dll4)参与信号转导过程。一旦切口受体配体结合,劈裂 γ分泌酶,然后,切口形成胞内域研究所( 6]。接下来,镍镉进入细胞核,结合复合信号结合蛋白J (RBP-j),和各种目标基因的转录激活包括Hes-1 Hey-1, Hey-L。榫眼(N - [N - (3, 5-Difluorophenacetyl-L-alanyl)] -S-phenylglycine-Butyl酯), γ分泌酶抑制剂,防止切口受体和块的乳沟镍镉的释放。Jagged-1和榫眼调节信号通路和间接决定命运的干细胞( 14]。有证据表明,缺口信号调节干细胞的分化脂肪形成的( 15- - - - - - 17]。然而,Notch信号作用的内皮祖细胞分化成脂肪细胞还不清楚。因此,我们调查了Notch信号通路的影响内皮祖细胞的脂肪形成的分化。

 2。方法 2.1。老鼠

动物实验是符合国家卫生研究院发表的实验动物保健和使用指南和执行协议下动物研究委员会批准重庆医科大学。男性和女性 C57BL / 6J小鼠购自重庆医科大学实验动物中心单独通风笼(IVC)条件下和维护。 Tbx18: Cre敲入鼠标和 R26REYFP :埃文斯的Cre血统记者介绍了老鼠实验室和杰克逊实验室,分别是2010年1月。两个鼠标线是基于 C57BL / 6J小鼠背景。我们穿过 Tbx18Cre 鼠标的 R26REYFP 鼠标和获得 Tbx18Cre/ R26REYFP 双杂合的鼠标( 18]。Tbx18专门表达在老鼠心脏内皮祖细胞,可用于跟踪内皮祖细胞的命运 Tbx18Cre/ R26REYFP 双杂合的老鼠。

 2.2。隔离和鼠标心外膜祖细胞的文化

隔离和主要的文化 C57BL / 6J老鼠心外膜祖细胞(epc)是前面描述的 6, 19]。胚胎心室组织切割从胚胎(E)天11.5鼠标。然后,心室组织放在12-well文化盘子涂以1%明胶和无菌盖玻片覆盖着。心室组织培养在37°C公司为5%2中包含杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)补充10%胎牛血清(的边后卫)和1%青霉素链霉素。内皮祖细胞迁移和扩大从心室组织24小时后的边缘。然后,心室组织移除,内皮祖细胞继续生长。

 2.3。脂肪形成的诱导

内皮祖细胞在DMEM保持10%胎牛血清(的边后卫)和1%的青霉素和链霉素。诱导脂肪形成的差异化,在脂肪形成的诱导培养基培养细胞包含2 μ地塞米松(σ,猫:D1756), 0.5毫米3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX;σ,猫:I5879)和10 μ胰岛素(g / ml:生化药品、猫:U-40)最多21天。每3天中被改变。

 2.4。Jagged-1、榫眼和PPAR -γ<斜体> < /斜体>拮抗剂治疗,分别

诺配体jagged-1肽购买从研发(研发系统,明尼苏达州,美国;猫:599 -詹- 100)。Jagged-1肽重组在200的浓度 μ克/毫升无菌PBS遵循制造商的指示。激活信号,jagged-1肽添加到中等浓度的100,200,500,1000 ng / ml。N - [N - (3 5-Difluorophenacetyl-L-alanyl)] -S-phenylglycine-Butyl酯(榫眼)购买的多国评价(MedChemExpress,猫:hy - 13027)。榫眼准备在二甲亚砜(DMSO)和存储在-20°C。抑制信号,榫眼被加入到培养基的浓度1,2、5、10 μm . GW9662(美国新泽西州多国评价;猫:hy - 16578)是一个有效和选择性PPAR - γ拮抗剂,10的浓度 μM GW9662被用来抑制PPAR - γ( 20.]。内皮祖细胞治疗和DMSO作为控制。

 2.5。RNA隔离和实时定量聚合酶链反应(rt - pcr)

总RNA提取约1 ∗ 107细胞与试剂盒试剂(豆类,猫:9108)根据制造商的指示。对逆转录PCR, RNA是转化为互补使用的主要脚本逆转录酶工具包(豆类,猫:RR047A)。执行反向转录如下:37°C 15和85°C 5 s, 4°C 4分钟紧随其后。实时定量PCR(存在)进行C1000热循环(BioRad)在下列情况下:95°C 30年代后跟5 s 95°C, 30年代60°C, 95°C为39周期30年代。每个样本的信使rna表达水平计算使用比较方法( ΔΔCT)与GAPDH内生控制( 21]。

 2.6。免疫荧光

细胞被固定在PBS 4% PFA 20分钟,用PBS洗净、孵化和10%的山羊血清阻断特异性的绑定。细胞随后被沾染了以下抗体:兔子anti-Tbx18 (Abcam,猫:ab115262),兔子anti-Wt1 (Abcam,猫:ab180840),兔子anti-perilipin-1 (Abcam,猫:ab3526),兔子anti-FABP4(脂肪酸结合蛋白4;Abcam,猫:ab92501),兔子anti-activated notch 1 (Abcam,猫:ab52301),鼠标anti-Hes-1(圣诞老人,猫:sc - 166410),兔子anti-C / EBP - α(细胞信号技术,猫:8178 t),兔子anti-PPAR - γ(细胞信号技术,猫:2435 t),兔抗 αsma (Abcam猫:ab124964),兔子anti-Myh11 (Abcam,猫:ab224804),和鼠标anti-Periostin(圣诞老人,猫:sc - 398631)在4°C(至少12个小时 22]。然后,这些细胞被孵化与Cy3-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白(Proteintech,猫:SA00009-2), Alexa萤石647 -共轭山羊anti-rabbit免疫球蛋白(Abcam,猫:ab150079),或FITC-conjugated山羊anti-mouse免疫球蛋白(Proteintech,猫:SA00003-1) 37°C 30分钟,和核沾染了4 ′ 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI Beyotime,猫:C1005)在室温下为6分钟。冰冻切片,老鼠心脏被孤立,固定在PBS PFA 24小时4%,在15%蔗糖溶液脱水,12小时为30%,6小时,嵌入在最佳切削温度复合(10月),并分为10 μ米厚的部分。部分用PBS,孵化与10%的山羊血清阻断特异性的绑定,并沾以下抗体:兔子anti-perilipin-1 (Abcam,猫:ab3526),兔子anti-FABP-4 (Abcam,猫:ab92501),兔子anti-activated notch 1 (notch 1胞内域,镍镉)(Abcam,猫:ab52301),兔子anti-Notch-1(细胞信号技术,猫:4380 t),和兔子anti-Jagged-1(细胞信号技术,猫:70109 t)在4°C至少12个小时。然后,孵化了片Cy3-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白(Proteintech,猫:SA00009-2)和Alexa萤石647 -共轭山羊anti-rabbit免疫球蛋白(Abcam,猫:ab150079) 37°C 30分钟,和核沾染了4 ′ 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)在室温下为6分钟。

 2.7。油红O染色

细胞和冷冻组织部分被固定在PBS 4% PFA 20分钟在室温下,用PBS三次每次5分钟,渗透和60%异丙醇3分钟。细胞和组织的部分然后沾油红O(0.3%, 60%异丙醇)在室温下30分钟和60%异丙醇清洗30年代,20年代与苏木精染色,并与自来水洗5分钟。

 2.8。苏木精和伊红染色

因为脂肪组织将被有机溶剂溶解,不能嵌入在组织石蜡。因此,冷冻切片用于染色。与苏木精染色切片的染色30年代和用自来水洗净5分钟。后,他们与伊红染色10年代和用自来水洗净了10分钟。

 2.9。统计分析

使用SPSS统计分析软件20.0版本。数据被表示为 意味着 ± SD 。两组之间的差异计算 t 以及。以上两组之间的差异被单向方差分析评估。 p 值< 0.05被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。老鼠吃,Tbx18 <一口> + < /一口> epc心外膜脂肪细胞的来源

我们观察到小鼠在不同年龄段的心寻求心外膜脂肪组织(吃),包括胚胎11.5天(E11.5),新生儿,和产后2 - 4 -,8-week-old老鼠。然而,我们没有发现在E11.5吃,还是鼠标新生儿,2 -和油红O染色(补充图。 1)。相反,我们发现吃8-week-old鼠标位于左和右心房心室槽(数字 1(一)- 1(d))。我们还发现吃通过确定脂肪细胞特定的标记perilipin-1(数字 1(e)和 1(f))。Tbx18是专门表达内皮祖细胞在小鼠的心,和内皮祖细胞被标记为他们最初形成的 Tbx18Cre/ R26REYFP 杂合的老鼠。我们使用了遗传谱系追踪方法调查心外膜脂肪细胞的来源。结果表明,一些perilipin-1+和FABP4+脂肪细胞与谱系标记EYFP(数字 1(g) - 1(l)),这表明部分心外膜脂肪细胞来源于内皮祖细胞。

吃位于左和右心房心室槽在产后8-week-old老鼠心脏。(a, b)油红O染色显示,位于心房心室沟吃老鼠。盒装地区在较高放大显示在“B”。(c, d))染色表明,吃在心房心室心外膜下面槽。高倍镜下显示的盒装地区在C和D。(e, f)对脂肪细胞免疫荧光染色标记perilipin-1显示,心外膜脂肪细胞出现在左、右心房心室槽。高倍镜下显示的盒装地区在E和F。(g-l)的遗传谱系追踪方法被用来跟踪内皮祖细胞。对脂肪细胞免疫荧光染色标记perilipin-1(红色)和FABP4(红色)部分与谱系标记EYFP(绿色)在同一部分。

 3.2。文化和鉴定内皮祖细胞从胚胎11.5天老鼠心脏

探索Notch信号的影响内皮祖细胞的脂肪形成的差异化,我们使用胚胎培养内皮祖细胞(E) 11.5胚胎小鼠心室组织。可以看到细胞迁移从心室组织24小时后的边缘的文化,展示cobblestone-like形态和组织质量(图向外扩张 2(一个))。细胞持续生长和统一类上皮形态(数字显示 2 (b)和 2 (c))。识别的主要细胞属性,内皮祖细胞的特定标记Wt1和Tbx18取决于免疫荧光染色。结果表明,所有的细胞表达内皮祖细胞的特定标记Tbx18和Wt1(数字 2 (d)和 2 (e))。总之,我们证实了培养细胞内皮祖细胞根据其形态和特定的标记。

内皮祖细胞迁移从胚胎小鼠心脏的边缘。(一)cobblestone-like内皮祖细胞从胚胎的边缘增加心室组织24小时后的文化。(b) cobblestone-like内皮祖细胞持续增长的胚胎心室组织经过48小时的文化。(c) Cobblestone-like内皮祖细胞移除后观察心室组织。(d, e)免疫荧光染色显示Tbx18和Wt1表达的各种培养内皮祖细胞。

 3.3。Jagged-1激活而榫眼抑制内皮祖细胞的Notch信号

确定最优的浓度jagged-1激活Notch信号和榫眼抑制信号,内皮祖细胞与jagged-1在脂肪形成的诱导培养基培养(100、200、500、1000 ng / ml)或榫眼(1、2、5、10 μ米)2天。Notch信号相关基因Notch 1到4和目标基因Hes-1和Hey-1测定。结果表明,jagged-1治疗增强Notch 1的信使rna表达水平,Notch-2, Hes-1,和Hey-1 500 ng / ml jagged-1最大的效果,但是1000 ng / ml jagged-1没有进一步激活Notch信号(数字 3(一)和 3(b))。在榫眼治疗组,10的浓度 μM榫眼导致细胞死亡,5 μM榫眼显著抑制了Notch信号及其目标基因(数字 3(c)和 3(d))。与mRNA表达一致,内皮祖细胞的蛋白质水平的激活notch 1和Hes-1显著调节500 ng / ml jagged-1治疗当减少5 μM榫眼治疗(数字 3(e)和 3(f))。这些数据表明,500 ng / ml jagged-1激活Notch信号而5 μM榫眼抑制Notch信号,用于后续实验。

Notch信号和目标基因在内皮祖细胞由jagged-1和榫眼2天的治疗。(a, b)信号和目标基因的mRNA表达显著调节jagged-1 2天的治疗与控制。(c, d)信号和目标基因的mRNA表达明显下调与榫眼2天的治疗与控制。的 p 值的计算是通过 t 以及。 ∗ p < 0.05 , ∗ ∗ p < 0.01 , ∗ ∗ ∗ p < 0.001 两两比较。(e)免疫荧光染色显示激活notch 1显著调节与榫眼jagged-1治疗而减少的治疗。(f)免疫荧光染色显示Hes-1显著调节与榫眼jagged-1治疗而减少的治疗。的 p 值是由方差分析计算。 ∗ p < 0.05 , ∗ ∗ p < 0.01 , ∗ ∗ ∗ p < 0.001 对各组之间两两比较。

 3.4。抑制Notch信号促进内皮祖细胞的脂肪形成的分化

评价等级信号的影响内皮祖细胞的脂肪形成,我们与jagged-1 Notch信号激活,抑制脂肪形成的诱导下的缺口与榫眼信号。经过7天的培养,adipocyte-related蛋白质测定评估Notch信号在脂肪生成的影响。Jagged-1治疗显著降低脂联素的信使rna表达水平的脂肪形成的标记和脂肪酸绑定含有(FABP-4),而榫眼治疗增加了脂联素mRNA的表达,FABP4, perilipin-1(图 4(a))。确认mRNA表达的结果,我们决定脂肪细胞标记FABP-4 perilipin-1疣状。与mRNA表达结果一致,FABP4的比例和perilipin-1在jagged-1治疗组显著减少,增加了榫眼治疗组(数字 4(b)和 4(c))。然而,油红O染色显示,每组没有明显脂质积累后7 - 14天文化。有脂质积累后21天的脂肪形成的诱导文化,和脂质积累的增加在榫眼治疗组减少jagged-1治疗组(图 4(d))。这些结果表明,jagged-1治疗减脂肪形成的内皮祖细胞分化,而榫眼治疗增强脂肪形成的分化。

抑制Notch信号促进了内皮祖细胞的脂肪形成的分化。(a) adipocyte-related脂联素基因的信使rna表达水平,FABP4,瘦素,LPL、和perilipin-1 rt - pcr测定内皮祖细胞培养后仅在脂肪形成的感应中,与榫眼jagged-1,或者7天。(b, c)脂肪细胞标记FABP-4 perilipin-1免疫荧光染色法测定仅在脂肪形成的诱导培养基培养内皮祖细胞后,与榫眼jagged-1,或者7天。(d)脂滴堆积后,油红O染色法检测内皮祖细胞培养仅在脂肪形成的诱导培养基,jagged-1,或与榫眼21天。的 p 值是由方差分析计算。 ∗ p < 0.05 , ∗ ∗ p < 0.01 , ∗ ∗ ∗ p < 0.001 对各组之间两两比较。

 3.5。在鼠标心外膜Notch信号逐渐下调

为了观察Notch信号的动态变化在心外膜的细胞在老鼠身上,我们决定Jagged-1 Notch 1,和镍镉(E11.5 Notch 1胞内域研究所),新生儿,和产后2 - 4 -,8-week-old老鼠心脏。我们发现Jagged-1主要是表达的心外膜E11.5和新生儿老鼠但不明显2 - 4 -,8-week-old老鼠(图 5(a))。notch 1在鼠标在不同年龄段心外膜持续表达,但表达最高E11.5和新生儿(图 5(b))。镍镉只有E11.5和新生儿老鼠表达但是不明显在产后2 -心外膜,(图4 -,8-week-old老鼠 5(c)),它与Jagged-1的表达是相一致的。

在鼠标心外膜Notch信号的动态变化。(a)的动态变化在鼠标心外膜Jagged-1不同年龄。Jagged-1主要是表达小鼠E11.5和新生儿的心脏。(b)的动态变化在鼠标在不同年龄段心外膜notch 1。notch 1表达鼠标从E11.5心外膜逐渐减少产后8-week-old老鼠。(c)的动态变化在心外膜镍镉(激活notch 1)小鼠在不同的年龄。镍镉被发现在心外膜E11.5和新生儿老鼠但没有找到在产后2 -心外膜,4 -,8-week-old老鼠。

 3.6。Notch信号抑制脂肪形成的分化的内皮祖细胞通过PPAR -γ<斜体> < /斜体>

了解Notch信号在体外脂肪形成的潜在机制,我们确定主转录因子过氧物酶体扩散者激活受体- γ(PPAR - γ)和CCAAT /增强子结合蛋白- α(C / EBP - α脂肪形成。然而,我们没有发现显著差异的C / EBP - α在三组(数字 6(一)和 6(c))。有趣的是,我们发现PPAR - γ增加与榫眼治疗而减少Jagged-1治疗(数字 6(b)和 6(c))。我们推测Notch信号抑制脂肪形成的内皮祖细胞的分化转录因子PPAR - γ。因此,我们使用了榫眼下调等级信号和PPAR - γ拮抗剂PPAR -阻止转录的作用 γ。我们发现PPAR - γ拮抗剂的表达显著下调FABP4 perilipin-1和降低脂滴的形成(数字 6(d) - 6(f))。adipocyte-related基因的mRNA表达也表达下调(图 6(g))。

榫眼治疗调节转录因子PPAR - γ。(a, b)关键的脂肪形成的转录因子PPAR - γ和C / EBP - α免疫荧光染色法测定仅在脂肪形成的诱导培养基培养内皮祖细胞后,与榫眼jagged-1或7天。(c)的mRNA表达水平PPAR - γ和C / EBP - α通过rt - pcr测定。(d, e)脂肪细胞标记FABP-4 perilipin-1免疫荧光测定。内皮祖细胞培养在脂肪形成的诱导培养基与榫眼单独或结合PPAR - γ拮抗剂。(f)脂滴堆积是由油红O染色。内皮祖细胞培养在脂肪形成的诱导培养基与榫眼单独或结合PPAR - γ拮抗剂。(g) adipocyte-related FABP4基因的信使rna表达水平,perilipin-1,脂联素瘦素,LPL和rt - pcr测定。的 p 值的计算是通过 t 之间以及两组,3组之间的方差分析。 ∗ p < 0.05 , ∗ ∗ p < 0.01 , ∗ ∗ ∗ p < 0.001 对各组之间两两比较。

 3.7。抑制Notch信号减少内皮祖细胞的分化成平滑肌细胞

内皮祖细胞有能力自发分化成平滑肌细胞和成纤维细胞体外。确定切口的影响信号的平滑肌细胞和纤维母细胞分化,内皮祖细胞培养在媒介与Jagged-1或榫眼7天。我们发现平滑肌细胞特定的标记 α光滑的肌肉肌动蛋白( αsma)和肌凝蛋白重链11 (Myh11)与榫眼治疗增加Jagged-1治疗而减少(数字 7(一)和 7(b))。然而,我们没有发现显著差异的成纤维细胞中特定的标记periostin组(图 7(c))。

榫眼治疗减少了内皮祖细胞的分化为平滑肌细胞。(a, b) Jagged-1治疗增加平滑肌细胞的表达特定的标记 αsma和Myh11,榫眼减少了表达式。(c) Jagged-1和榫眼治疗并不影响periostin纤维母细胞的表达特定的标志。

 4所示。讨论

在这项研究中,我们发现心外膜脂肪组织(吃)位于心房心室槽在老鼠和心外膜祖细胞(epc)心外膜脂肪细胞的来源。内皮祖细胞向脂肪细胞分化有可能在体外脂肪形成的感应。Upregulation jagged-1 Notch信号的衰减内皮祖细胞的脂肪形成,而与榫眼Notch信号增强的抑制脂肪形成的分化。同时,Notch信号作为一个上游PPAR - γ和抑制脂肪形成的分化的内皮祖细胞通过PPAR - γ。

早期的研究报道,没有吃常用实验动物包括两栖动物,鸟类,和啮齿动物,但最近的研究表明,成年老鼠吃位于心房和心房心室槽( 7, 8]。我们的研究也证实,老鼠吃位于左和右心房心室槽,但我们没有发现吃心房心室沟外。吃是出生后逐渐形成伴奏。差别Notch信号对这些心外膜可能心外膜脂肪细胞的来源和导致吃的形成和扩张。心肌损伤、高脂肪饮食和ANP引发内皮祖细胞的脂肪生成过程和促进内皮祖细胞到心外膜脂肪细胞的分化 8, 9]。然而,心外膜脂肪细胞来源于内皮祖细胞的比例仍然是有争议的。使用血统追踪的方法,我们的研究表明,心外膜脂肪细胞部分来源于内皮祖细胞。

鼠标内皮祖细胞已被证明是多功能,可分化成平滑肌细胞和成纤维细胞,软骨细胞和成骨细胞谱系,在不同的诱导条件培养( 9]。据报道,鼠标心外膜的细胞可以分化成体内心外膜脂肪细胞心脏损伤的条件下( 9, 10]。PPAR - γIGF-1R、ANP和prokineticin-2证明参与脂肪形成的内皮祖细胞的分化 7, 8, 10, 11]。诺信号通路已被证明在细胞增殖和分化发挥重要作用在干细胞( 23]。切口激活抑制脂肪形成的主要人类骨髓基质细胞,甚至导致小鼠脂肪细胞的去分化( 16, 17]。切口配体Jagged-1减少了3的分化t3-l1 preadipocytes成脂肪细胞移植Hes-1表达式。的 γ分泌酶抑制剂,榫眼,块Notch信号的激活和促进脂肪形成的分化的干细胞( 24]。到目前为止,切口脂肪形成的信号的作用内皮祖细胞并没有被调查。在我们的研究中,我们发现,内皮祖细胞向脂肪细胞分化有潜力在体外脂肪形成的感应。内皮祖细胞的脂肪形成的差异化是减毒的upregulation Notch信号但强化等级的差别,对这些信号。另外,切口信号通路在出生后小鼠的心逐渐下调,伴随着吃的形成。等级的差别表明,对这些信号可能促进内皮祖细胞的分化成心外膜脂肪细胞。我们还发现,激活Notch信号促进了内皮祖细胞的分化成平滑肌细胞。这些结果表明,缺口信号影响内皮祖细胞的命运。

转录因子核受体PPAR - γ和C / EBP - α被认为是至关重要的干细胞转化的脂肪细胞,和C / EBP - α作为上游调节器的PPAR - γ( 25]。PPAR - γ已被证明在脂肪细胞分化起着重要的作用,被认为是一个重要的和足够的因素诱发脂肪形成的分化( 26, 27]。我们决定转录因子PPAR - γ和C / EBP - α内皮祖细胞的脂肪形成。我们发现两个C / EBP -的表达 α和PPAR - γ脂肪形成的诱导下非常低。这就是为什么没有许多脂肪细胞脂肪形成的诱导下形成。此外,切口的差别我们发现对这些信号促进脂肪形成的内皮祖细胞的分化和增强的PPAR - γ表达式。当阻塞PPAR - γ转录,以上的等级差别的脂肪形成的影响,对这些信号消失了。这些结果表明,缺口信号通过PPAR -调节内皮祖细胞的脂肪形成的分化 γ。Notch信号通路已经被证明可以作为上游PPAR - γ( 15]。Upregulation Notch信号抑制PPAR - γ表达式,反之亦然( 28]。Hes-1 Notch信号的目标基因。先前的研究表明,upregulation Hes-1抑制PPAR -的表达 γ,防止脂肪形成的间充质干细胞的分化( 15]。的差别在我们的研究中,我们发现,对这些基因的upregulation Hes-1伴随着PPAR - γ表达式。这些表明,转录PPAR - γ可能受Notch-Hes-1内皮祖细胞的信号通路。已经表明,吃有助于增加冠心病的发病机理,心房纤维性颤动、心脏衰竭的支持纤维化和炎症( 29日, 30.]。减少吃的增加可能有助于治疗这些疾病。我们的研究表明,缺口信号可能会减少吃的扩张目标。

4.1。限制

本研究有潜在的局限性。首先,我们观察到的动态变化Notch信号通路在发展中心,但我们没有——或者移植Notch信号观察对EPC体内的脂肪形成的分化的影响。其次,先前的研究表明,心肌梗死,心力衰竭心肌冻伤,诱导内皮祖细胞到心外膜脂肪细胞的分化 7- - - - - - 10),但我们没有调查Notch信号通路的变化及其影响脂肪形成的病理条件下内皮祖细胞的分化。

总之,我们确认老鼠吃(吃)位于心房心室槽。内皮祖细胞向脂肪细胞分化有可能在体内和体外。Downregulation Notch信号通路促进脂肪形成的分化的内皮祖细胞通过PPAR - γ。

 数据可用性

和/或使用的数据集分析在目前的研究可从相应的作者以合理的要求。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 作者的贡献

QS、JD XJ,提单设计实验。提单,DW、TX和我们进行实验。提单和DW分析数据。提单写的论文。提单、DW和QS回顾和修订后的手稿。刘本和Dinghui王同样这项工作。

 确认

这项工作是支持由中国国家自然科学基金(81770251),中国国家自然科学基金青年科学基金项目(81800254),社会事业和民生保护重庆市科学技术创新委员会(cstc2017shmsA130086)和重庆市渝中区科技基本和高级研究项目(20170107)。

 补充材料

图S1:油红O染色显示,没有吃在左和右心房心室E11.5槽,新生儿,产后2 -,还是老鼠。吃:心外膜脂肪组织;艾凡:胚胎。

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