1。介绍
多能性是内在的,无限制的,灵活的发展潜在的胚胎细胞在胚胎发育过程中,产生的三个胚胎胚芽层,最终形成所有的细胞在成年有机体。这可以了
在体外 通过推导多能干细胞已经被从不同的发展阶段。已经,来源于胚胎植入前的小鼠胚胎的外胚层(E3.75-E4.5)被称为胚胎干细胞(ESCs) [
1 - - - - - -
3 ]。制可以带到一个所谓的地面/天真的多能性状态,使用白血病抑制因子(生活),维持自我更新(
4 ,
5 ),结合抑制ERK (
2 GSK3]和[
6 ],同时抑制分化(我中等生活/ 2)(
7 ]。已经被认为是来源于postimplantation胚胎(E5.5-E7.5)被称为外胚层干细胞(EpiSCs),这是在影射的多能性状态(
1 ,
8 ]。ESCs的鼠标EpiSCs和人类(为其传统文化在激活素A和FGF2 (AA / F2)。当公司面临hESC / EpiSC条件(AA / F2),他们过渡到一个EpiSC-like待发状态(
1 ,
8 - - - - - -
11 ]。
在原肠胚形成过程中,多能发展中老鼠的胚胎外胚层细胞接受epithelial-mesenchymal过渡(EMT)和迁移到原条(PS),形成mesendoderm细胞,中胚层和内胚层的共同前体
12 ]。外胚层细胞不通过PS形成neuroectoderm迁移。几个信号通路起着至关重要的作用在这个重排过程,如TGF
β /苯丙酸诺龙/节点,WNT /
β 连环蛋白和FGF / ERK / MAPK信号通路(
13 - - - - - -
15 ]。各种转录因子之间的协作交互,比如T-box转录因子(Tbx) T和加工的关键标记中胚层和内胚层发起这种分化过程
16 - - - - - -
18 ]。
目前,一系列多能州被发现(
19 ,
20. ,尽管事实EpiSCs分享许多属性(
21 维护他们的多能性,他们拥有独特的功能和分子性质使其与众不同
22 ,
23 ]。这种差异可能反映了外胚层细胞进行的转换,基于他们的时空位置和环境在发展中胚胎,某些血统限制他们的发展潜力。在目前已知的外在文化条件下,EpiSCs可能可能发生在异构的亚稳状态,具有变量微分电位(
24 ,
25 ]。
标准hESC文化条件适应支持mEpiSCs(激活素A和FGF2 (AA / F2)) (
1 ,
8 - - - - - -
11 ),同样可以转换制在地面/天真的多能性状态启动EpiSC-like状态。本研究旨在了解多能性的过渡从天真到待发状态,标准hESC / EpiSC条件下。在这项研究中,我们表明,尽管这个条件成熟的制不同影射EpiSC-like状态,这些状态不能持续,但细胞进一步成熟PS / mesendoderm-like状态,突显出一个可能的老鼠和人类物种区别epiblast-like干细胞。这也凸显了保护的附加因素的要求不同的鼠标EpiSCs多能性状态,相反的要求为其能够增强我们的能力在高分化成任何想要的细胞类型。
2。材料和方法
2.1。小鼠ESC行
实验进行了利用小鼠胚胎干细胞(制)从C57BL / 6 n的背景,有荧光记者Brachyury (T)和Sox2
26 ]。老鼠细菌人工染色体()包含的一部分老鼠基因组组成的特定基因的位点(rp24 - 530 c15 (T)和rp23 - 249 o15 (Sox2)包含∼180 - 230 kb的围绕各自的C57BL / 6小鼠基因组位点),由红/ ET recombineering (GeneBridges) [
27 ]。不久,起始密码子(ATG) T或Sox2 mCherry取代或金星编码序列,紧随其后的是兔子b-globin聚腺苷酸化信号和一个FRT-site在潮霉素选择磁带由Pgk启动子驱动的。5毫克修改BAC的线性化与限制性内切酶PI-SceI(内)和electroporated
3
×
10
6
ESCs。后选择在ES细胞中含有潮霉素(150毫克/毫升),克隆选择,扩大,检查采用聚合酶链反应对BAC集成。详情,请参考[
26 ]。
2.2。细胞培养和分化
ESCs和EpiSCs培养根据标准条件(
24 ]。天真的转换,feeder-free制被播种在纤连蛋白- (3 - 5 ng / ml) (Merck-Millipore;Calbiochem)涂层板N2B27包含生活的媒介,PD0325901 (1
μ 米)(轴突轴突Medchem, 1408),和CHIR99021 (GSK3
β 抑制剂)(3
μ 1386)(轴突Medchem,轴突)我媒介(2)(
7 ]。第二天,我的细胞被裁判的媒介。小块殖民地后,改变了媒介N2B27中补充了苯丙酸诺龙(20 ng / ml)和FGF2 (10 ng / ml) (AA / F2)。AA / F2治疗持续了6天,而媒介被替换为新的AA / F2中每一天。
2.3。全转录组数据分析
RNA序列进行了80 ng的总RNA。在量化和质量评估(细节
24 ]),RNA-seq图书馆准备使用ScriptSeq完成从总RNA工具包(人/鼠标/鼠)低输入(SCL24H) (Illumina公司),根据制造商的指示。准备测序图书馆最终被测序Illumina公司HiSeq 2000 2350周期(paired-end),以下的标准协议。RNA-seq测序读被映射到鼠标基因组(mm10)使用大礼帽(版本))(
28 ]。Cuffdiff被用来计算规范化FPKM每百万映射(每千碱基片段阅读)值在所有样本中基因(
29日 ]。结果被过滤删除基因FPKM值低于1在所有样本,然后用于进一步分析(R统计程序)(
http://www.r-project.org )。RNA-seq数据被存入ArrayExpress数据库(e - mtab - 3784)。
2.4。实时聚合酶链反应分析
总RNA分离使用RNeasy微观和迷你包(试剂盒),其次是量化使用NanoDrop(生命技术)(未分类的细胞)或量子位荧光计(英杰公司)(排序的细胞)。未排序的细胞直接与RLT缓冲细胞溶解细胞培养井,后与PBS冲洗一次。一个额外的步骤DNase我(瑞士罗氏公司,巴塞尔
https://www.roche-applied-science.com )进行治疗,以避免基因组DNA污染。RNA是量化使用分光光度计NanoDrop技术(无序细胞)或量子位(表达载体,卡尔斯巴德、钙、
http://www.invitrogen.com )(FACS-sorted细胞)。执行反转录与M-MLV逆转录酶(Promega)和Oligo-dT引物(英杰公司)(表
S3 )。定量逆转录酶聚合酶链反应(存在)是通过使用GoTaq qPCR大师混合(Promega)的帮助下验证gene-specific系统StepOnePlus实时PCR引物(生活技术,罗克维尔市,医学博士
https://www.lifetech.com )。数据分析是使用来实现的
ΔΔ Ct方法,管家基因,
Pmm2 和
Gapdh 和/或
Actb 正常化。
2.5。Fluorescence-Activated细胞排序(流式细胞仪)
这些细胞被轻轻冲洗磷酸盐(PBS)和分离用冰冷的胰蛋白酶。与冷淘汰赛DMEM-F12,中和细胞迅速(30秒)在高速旋转(10000 rpm),在寒冷的淘汰赛resuspended DMEM-F12并立即放在冰。细胞被分类在流式细胞仪咏叹调II(,新泽西,正欲富兰克林湖
https://www.bd.com )直接进入RLT缓冲区包含
β 巯基乙醇,紧随其后的是总RNA隔离使用RNeasy微工具包(试剂盒,希尔登,德国,
http://www1.qiagen.com )和进一步处理。
2.6。免疫印迹和免疫细胞化学
标准程序对这些化验(细节
24 与合适的抗体(表)
S4 )。细胞最初与PBS冲洗,在免疫印迹和免疫细胞化学。
免疫印迹,添加后裂解缓冲(含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂(PhosStop,磷酸酶抑制剂鸡尾酒Easypack,罗氏)),细胞进一步被刮掉,细胞溶解,后放置在冰上,保持蛋白质的磷酸化状态。免疫印迹使用ImageJ数据量化,基于java的图像分析包。H3和Actb担任控制。
免疫细胞化学,细胞单层培养和PBS和4%多聚甲醛固定洗。透化作用后,初级和二级抗体进行染色。可视化是使用共焦显微镜(LSM510元,蔡司),并使用软件,进一步分析了AxionVision(蔡司)。
3所示。结果
3.1。人类ESC / EpiSC文化条件让天真的ESCs不同EpiSC-Like状态
生活/ 2我(生活,PD0325901 (MEK抑制剂)和CHIR99021 (GSK3
β 抑制剂),在定义的条件下,可以维护公司在他们的天真的多能性状态(
4 ,
5 ,
7 )和AA / F2(激活素A和FGF2)可以变换成primed-like状态(
1 ,
8 ,
10 ]。3天进行一次课程分析理解这种转变的多能性状态(图
1(一) )。圆形穹顶的殖民地,天真的ESCs的特点,观察当制我生长在生活/ 2。在AA / F2曝光,公司逐渐失去了由平板菌落形态和生长。表达Rex1基态的特点之一是(
30. ]。在Oct4 / Sox2 / Nanog三巨头,Oct4 Sox2,定义为core-pluripotency因素,需要采集和维护的多能性
31日 ),而Nanog是只需要收购的多能性(
32 ,
33 ]。AA / F2治疗导致的表达减少
Rex1 和
Nanog 从第一天,
年代 ox2从第二天仍然保留的表达
Oct4 (
31日 ,
34 ,
35 )到3天,显示细胞的发展进步在治疗(数字
2(一个) ,
2 (b) ,
2 (e) ,
2 (f) ,
S1 、表
S1 )。虽然Nanog表达式限制只新生的外胚层,Oct4和Sox2广泛表达的桑椹胚和囊胚细胞内细胞团(ICM),直到内胚层将[
36 ]。全转录组数据表明naive-specific基因表达下调,并启动基因的诱导治疗期间(数字
2(一个) 和
2 (b) 、表
S1 )。然而,主成分分析和层次聚类显示AA / F2-2D和AA / F2-3D细胞不仅彼此不同,但也从ESCs的天真和EpiSCs(数据
1 (b) - - - - - -
1 (d),
S1 、表
S1 )。这是一个时间当一个频谱多能状态被发现的
19 ,
20. ),可以来源于E5.5 mEpiSCs E7.5胚胎,在几个分子特征是相似的(
21 ),也可能在某些基因的表达状况不同
22 ]。综上所述,我们的研究结果表明,影射EpiSC-like州所派生的曝光天真的ESCs AA / F2截然不同的和EpiSCs用于这项研究。这里使用的EpiSCs来源于早期postimplantation E5.5小鼠胚胎(
9 ]。
图1
人类ESC / EpiSC文化条件让天真的ESCs不同EpiSC-like状态。(a) Brightfield表示的图像样本(100年规模的酒吧
μ 米)。制被带到天真状态与生活/ 2(生活+ 2我(PD0325901 + CHIR99021)),其次是AA / F2治疗。这种治疗会导致从圆形穹顶形态变化平坦的殖民地。(b)主成分分析(PCA)表示的样本。(c)热图,根据皮尔逊相关系数。AA / F2治疗不同时间让天真的ESCs影射EpiSC指出,不同于彼此的已经被比较。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
图2
人类ESC / EpiSC文化条件成熟的ESCs进一步原始streak-like状态。(a)表达水平的具体pluripotency-associated基因表示的样本。AA / F2治疗导致热解色谱和差别诱导多能性基因并对这些天真的多能性基因。(b)分析细胞多能性基因AA / F2-treated表示样本。
Gapdh 和
Pmm2 :看家基因。
Rex1 ,
Sox2 ,
Nanog 表达下调,
Oct4 表达式是保留。误差:
的意思是
±
SD
(
n
=
2
);
∗
p
≤
0.05
,
∗
∗
p
≤
0.01
,
∗
∗
∗
p
≤
0.001
,
∗
∗
∗
∗
p
≤
0.0001
(
p
雷克斯
1
=
0.0107
,
p
袜
2
=
0.0421
,
p
10月
4
=
0.0029
)(学生的
t
以及)。(c)热量地图的表达状态lineage-specific标记表示样品相比,天真制。PS标记在AA诱导/ F2-3天(3 d)。(d)分析EpiSCs (
Fgf5 )和PS标记(
T 和
Fgf8 )表示样本。
Fgf5 和
Fgf8 是诱导从1 d和6 d, PS标记
T 也是高度诱导。误差:
的意思是
±
SD
(
n
=
3
);
∗
p
≤
0.05
,
∗
∗
p
≤
0.01
,
∗
∗
p
≤
0.001
,
∗
∗
∗
∗
p
≤
0.0001
(
p
Fgf
8
=
0.0070
和
p
T
=
0.0235
)(学生的
t
以及)。(e)表示标记的免疫印迹分析表明样品。六天的AA / F2治疗导致的高蛋白质表达PS / mesendoderm T Sox2的差别和加工,对这些基因的标记。(f)代表表示蛋白质的免疫染色显示样本(100年规模的酒吧
μ 米)。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
(d)
![]()
(e)
![]()
(f)
![]()
3.2。人类ESC / EpiSC文化条件成熟的ESCs进一步原始Streak-Like (PS-Like)状态
多能性基因的变化,三天恰逢的感应
T ,
加工 ,
Fgf8 ,基因表达在PS(数字
2(一个) - - - - - -
2 (e) 、表
S1 )。在蛋白质水平,T的感应很低,这可能归因于转录和翻译之间的可能的延迟。此时(AA / F2-3D),没有明显的感应的lineage-specific标记,中胚层(Foxf1, Gata6, Osr1、Tbx6 Msgn1),内皮层(Sox17) neuroectoderm (Pax6和Sox1),或原始内胚层(Sox7发生(图)
2 (c) 、表
S1 )。postimplantation末EpiSCs来源于胚胎(E7.5)减少了神经感应潜力和表达T和OCT4 [
22 ]。因此,AA / F2治疗3天到期的ESCs的天真的多能性更成熟影射EpiSC-like状态。
EpiSCs例行维护使用AA / F2 (
1 ]。知道这种情况是否会保持转换EpiSC-like细胞,AA / F2治疗持续了6天。这个核心多能性的差别导致了对这些因素,
Oct4 ,
Sox2 ,
Nanog (数据
2 (b) ,
2 (d) ,
2 (e) 、表
S1 ),PS的重要诱导基因,
Fgf8 和
T (数据
2 (c) - - - - - -
2 (e) )。综上所述,尽管EpiSC文化条件成熟,天真的ESCs primed-like状态,连续六天将这些细胞暴露的条件PS-like或mesendoderm-like状态。
3.3。Epithelial-Mesenchymal转变发生在成熟到PS-Like状态
Epithelial-mesenchymal过渡(EMT)和通过PS促进多能外胚层细胞的迁移的形成中胚层和内胚层祖细胞(
12 ]。Brachyury EMT需要(T)和PS感应
37 ,
38 )和刺激之间的协作相声FGF和WNT信号
24 ,
39 ]。
β 连环蛋白调节PS感应通过促进SMAD2/3活动(
39 ,
40 ]。6天的AA / F2曝光,T,加工,
Fgf8 高度诱导(数据吗
2 (c) - - - - - -
2 (e) ),当时SMAD2磷酸化,
β 连环蛋白磷酸化抑制(图
3(一个) ,
S2A ),反思TGF的活动状态
β /苯丙酸诺龙/节点和规范WNT信号通路。的差别与此同时适度对这些上皮钙粘蛋白标志(背景)(数据
3 (b) 和
3 (c) ,
S2D )。我们还发现高感应的一种蛋白激酶和总ERK在AA / F2-6D细胞(图
S2B-S2C )。外胚层的上皮细胞表达压抑在PS的形成背景,进而诱发EMT (
41 ]。总的来说,持续6天促进EMT EpiSC条件,一个关键过程,发生在PS的形成。
图3
Epithelial-mesenchymal转变发生在成熟到PS-like状态。(a)的免疫印迹分析标记参与WNT和TGF
β 信号通路的样品(相对量化图:图表示
S2A )。苯丙酸诺龙/节点(pSMAD2)和WNT(活跃
β 6天连环蛋白)信号是高度活跃的AA / F2治疗,而3天。Actb:控制。(b)上皮标记的免疫印迹分析背景表示样品蛋白质。组蛋白H3(用于标准化和Actb(图)
S2D )作为控制。有一个轻微的下降是携带者的表达。误差:
的意思是
±
SD
(
n
=
2
);
∗
p
≤
0.05
;
p
鼎晖
1
=
0.0471
(学生的
t
以及)。(c)代表疣状表示蛋白质的细胞治疗与AA / F2为6天(规模100酒吧
μ 米)。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
3.4。连续暴露在hESC / EpiSC条件吸引已经转向后中胚层和内胚层血统
在早期发展过程中,心脏中胚层和内胚层来自前PS,而体节的胚外中胚层源自后PS (
42 ,
43 ]。AA / F2治疗6天导致的upregulation内胚层(Sox17和
Gata6 )和后中胚层标记(Tbx6和Msgn1)(数据
4(一) 和
4 (b) ,
S3 ),反映在一个混合的细胞。外胚层,而高苯丙酸诺龙/节点信号支持内胚层分化(
18 ,
44 ),WNT /
β 支持后PS连环蛋白基因(
45 ]。这些途径都是活跃在AA / F2-6D细胞(图
3(一个) ),在这个阶段,T是高表达(数字
2 (c) - - - - - -
2 (e) ),大量人口的细胞表达
T (图
4 (c) )。然而,神经(Sox2
Pax6 ,
Sox1 )、横向中胚层(
Foxf1 )和中间中胚层(
Osr1 )(图
4(一) )基因没有明显的表达。内源性WNT信号EpiSCs诱导多能性的损失,与增加的比例T-positive细胞和分化倾向的内胚层[
46 ]。分析的分类
T 阳性细胞透露,他们表达了外胚层(
Fgf5 ),后中胚层(
Fgf8 ,
T ,
Msgn1 ,
Tbx6 ),和内胚层(
Foxa2 和
Sox17 )标记(图
4 (d) )。多能性标记,
Nanog 和
Sox2 表达下调。相比之下,大多数的AA / F2-3D EpiSC-like状态表达的细胞
Sox2 ,没有
T 阳性细胞。这强调了早期使EpiSCs的重要性,可以避免对PS / mesendoderm-like状态的进一步成熟,以建立稳定的细胞系。这些观察总结,连续AA / F2治疗导致的天真已经被影射EpiSC-like状态,其次是PS -或mesendoderm-like状态,支持内胚层和后中胚层血统(图
4 (e) )。
图4
连续暴露在hESC / EpiSC条件吸引已经转向后中胚层和内胚层血统。(a)中存在的分析表明lineage-specific基因表示的样本。
Gapdh 和
Pmm2: 管家基因。内胚层(
Gata6 和
Sox17 )和后中胚层(
Tbx6 和
Msgn1 )标记由6天。neuroectoderm (
Pax6 和
Sox1 )、横向中胚层(
Foxf1 ),中间的中胚层(
Osr1 )基因不表达。(b)的免疫印迹分析中胚层(Msgn1和Tbx6)和内胚层(Sox17)蛋白在细胞治疗与AA / F2表示持续时间。后中胚层(Msgn1和Tbx6)和内胚层(Sox17)蛋白表达的6天的治疗。(c) Flow-cytometric分析的一部分
Sox2 + ve和
T + ve细胞3和6天后AA / F2治疗。误差:
的意思是
±
SD
(
n
=
2
);
∗
p
≤
0.05
和
∗
∗
p
≤
0.01
(
p
袜
2
=
0.0070
和
p
T
=
0.0098
)(学生的
t
以及)。6天的治疗,计数的
Sox2 表达细胞很低,几乎一半的比例PS表达的细胞标记,
T 。(d)的分析表明在FACS-sorted基因
T +细胞从AA / F2-6D-treated细胞。的
T 表达细胞表达PS的早期征兆、中胚层和内胚层。(e)模型,总结了本研究的主要发现。制被转换为天真的多能性状态(代表E3.5-E4.5多能胚胎细胞发育阶段)使用2我介质(生活/ 2)。AA / F2治疗2到3天导致这些细胞多能性的待发状态(可能代表多能E5.5-E7.5外胚层细胞发育阶段)。这项研究表明,AA / F2的继续治疗6天浓缩了细胞的基因表达原条,中胚层(为主,后中胚层)和内胚层(可能代表多能外胚层细胞和PS / E6.5-E7.5 mesendoderm细胞发育阶段)。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
(d)
![]()
(e)
![]()
4所示。讨论
在胚胎发育期间,上胚层细胞进行一些系统的多能性的变化和它的一部分可以模仿
在体外 。ESCs鼠标可以带到地面/使用仍天真的多能性状态,随着GSK3 ERK抑制剂,(
7 我中等(2)。标准hESC文化条件适应支持mEpiSCs(激活素A和FGF2 (AA / F2)),同样可以转换制在地面/天真的多能性影射EpiSC-like状态(
1 ,
8 - - - - - -
11 ]。当前的研究表明,公司的曝光在基态的多能性AA / F2转换通过不同primed-like EpiSC州,和长期接触这种情况导致他们PS-like状态,活跃WNT和苯丙酸诺龙/节点信号,表示T,加工,后中胚层和内胚层标记(图
4 (e) )。他们没有表达神经元标记。
T和加工在一起促进后中胚层和内胚层upregulation标记(
18 ,
47 ),由FGF诱导,WNT /
β 连环蛋白、苯丙酸诺龙/节点/ TGF
β 对多能性和神经信号,负面影响标记(
9 ,
18 ]。此外,内生WNT信号EpiSCs hESC文化条件下导致损失的多能性和WNT抑制可以防止这种情况,反思可能导致的老鼠和人类的不同文化条件(
46 ,
48 - - - - - -
50 ]。虽然hESC / EpiSC条件(AA / F2)成熟的制",我们表明,这些状态不能持续,但细胞进一步成熟的PS / mesendoderm-like状态有更高的WNT信号活跃,而中间EpiSC-like州(AA / F2-2D和AA / F2-3D)。这突显出WNT抑制剂等额外因素的要求,保存的影射多能的鼠标EpiSCs,相比人类的ESCs的要求(
46 ,
48 - - - - - -
50 ]。
虽然AA / F2-treated细胞显示primed-like特性由2和3天的感应,他们彼此不同,也从EpiSCs源自早期postimplantation阶段(E5.5) [
9 ]。为期三天的AA / F2-matured EpiSC-like细胞,除了多能性基因(
Oct4 ,
Sox2 ,
和Nanog ),也表示
T ,
加工 ,
Gsc。 这些特征相似的特性EpiSCs源自postimplantation胚胎后期表达T [
22 ]。EpiSCs可以来自老鼠postimplantation胚胎在不同胚胎阶段(E5.5-E7.5),尽管在一些待发状态特征相似(
21 ),彼此之间也不同(
22 ]。新兴理论从最近的研究,在多功能或外胚层祖细胞,可能会有一个广泛的分子状态有特定的潜在的分子特征。这种异构的外胚层细胞有不同的分化能力可能取决于不同的外在文化维护条件,赋予他们多能或多功能属性(
51 ),而大多数这些信息仍然是未定义的。例如,不同时间的AA / F2导致的ESCs截然不同的多能状态,产生了不同比例的presomitic中胚层细胞(
24 ]。目前,天真和影射的多能性是唯一明确的国家在人类和小鼠可互换的,可以维护下定义
在体外 条件。的
在体外 ESCs条件用于维护可能会影响基因表达状态和细胞群内的文化很大程度上(
52 ,
53 ]。ESCs EpiSCs不同人群,不同于,是可互换的
在体外 ,如Brachyury或Oct4积极或消极的,可以共存,即
Oct4 + ve细胞仍能保留chimera-forming能力(
54 ,
55 ),这表明他们是全能的。尽管有试图捕捉全能性
在体外 (
56 ,
57 ),具体的条件,维持这样一个状态仍然是未知的(
58 ]。在目前已知的外在文化条件下,可能EpiSCs可能发生在异构的亚稳状态,具有变量微分电位(
24 ,
25 ),甚至对胚胎外的血统,比如滋养层(
1 ,
8 ,
59 - - - - - -
62年 ];(
63年 - - - - - -
66年 ]。不同的州可以保存或可互换的得心应手,仅仅通过操纵信号通路。3 i的发现:(PD184353, PD173074 / SU5402 CHIR99021,分别),后来我(CHIR99021 GSK3抑制
β 和抑制MEK1/2 PD0325901)媒体奥斯汀史密斯和他的同事们(应et al . 2008年)增加了ESC推导效率非许可的老鼠和老鼠菌株,如CBA,点头,DBA从低或不存在的50 - 70% (
67年 - - - - - -
73年 ]。因此,它是非常重要的探索的可能性保持特定的全能性或多能性的文化,不仅要进一步提高效率的ESC派生从任何应变和chimera-forming能力,但同时也促进胎盘和早期胚胎发育的研究。更多调查所需的特定因素保持特定的全能性或多能性状态可以提高我们的能力,更高效地分化成任何想要的细胞类型,比例高,我们对哺乳动物的胚胎发展的理解。这和进一步的研究将是至关重要的对于理解模式在早期胚胎发生的分子机制,此外,将确保知识获得全能性,多能性和分化为科学目的以及祖细胞再生医学,因此相关的干细胞疗法。