哮喘是一种慢性气道炎症性疾病涉及多个细胞组件;它的关键特性(AHR),气道高反应持续的气道炎症和气道重塑( 间充质干细胞(msc)调节免疫反应和炎症( 最近的一些研究表明,T细胞的激活和增殖抑制的MSC文化上层清液(MSC吃晚饭) 在这项研究中,我们通过对asc和孤立EVs分泌进行微阵列基因表达分析哮喘小鼠接受ASC-derived电动汽车。我们还研究了差异表达基因(度)与过敏性气道炎症的抑制ASC-derived电动汽车。
六个女C57BL / 6小鼠从Samtako有限公司购买(乌山,韩国)和饲养动物在实验设施没有特定的病原体。动物研究协议是机构批准的动物保健和使用委员会釜山国立大学医学院(批准号pnu - 2016 - 1109)。
在我们之前的研究(
过敏性气道炎症的小鼠模型诱导与少量修改之前报道(
评估ASC-derived电动汽车的影响,我们注入10
肺组织提取和度在三组两两比较。调查ASC-derived EVs治疗后基因表达的变化,微阵列分析由Macrogen Inc .(首尔,韩国),一个公司,专门从事这项技术。了Affymetrix Whole-transcript表达阵列过程使用整个GeneChip成绩单+执行试剂盒从肺组织中提取总RNA根据制造商的协议。然后,互补脱氧核糖核酸合成作为制造商使用GeneChip所描述的整体成绩单(WT)放大工具包和cDNA支离破碎和biotin-labeled末端转移酶(TdT)使用GeneChip WT终端标签设备。大约5.5
肺组织的总RNA提取使用1毫升QIAzol(试剂盒,瓦伦西亚,CA)制造商的协议。我们转录2
我们使用了Affymetrix GeneChip命令控制台软件提取原始数据,按照Affymetrix数据提取方案。我们总结和标准化的数据使用健壮multiarray平均(RMA)方法与Affymetrix表达式控制台软件。能够结果导出RMA一起分析,并进一步研究通过度分析。
统计学意义的表达数据评估的褶皱变化。评估相似,我们检查了链接和欧几里得距离每度的层次聚类分析的结果集。该基因本体论(去)和《京都议定书》百科全书的基因和基因组(KEGG)通路数据库(
透射电子显微镜(TEM)表明,ASC-derived EVs脂质影响,是球形的形状。免疫印迹显示ASC-derived电动汽车的研究外来体标记和CD40微泡标记(数据未显示)。
正常化后,我们分析了度概要文件的错误发现率(罗斯福)截止<在line-formula>
酒吧的重要的探测器。我们确定了868年和249年(度)和褶皱的差异表达基因的变化<在line-formula>
层次聚类的识别度如图 层次聚类分析和热图图。绿色和红色阴影指示和调节基因,分别。 基因表达下调后治疗ASC-derived电动汽车。 对asc:脂肪干细胞;三地:趋化因子配体;反对:控制;Ear6: eosinophil-associated核糖核酸酶家族成员6;电动汽车:细胞外囊泡;IL5Ra: interleukin-5受体α;卵:卵白蛋白;Tnfrsf13b:肿瘤坏死因子受体超家族成员13 b;8 Tnfsf8:肿瘤坏死因子配体超家族成员。 基因调节治疗后ASC-derived电动汽车。 对asc:脂肪干细胞;Bex2:大脑x 2;反对:控制;电动汽车:细胞外囊泡;Fpr1:甲酰肽受体1;Igfbp6:胰岛素样生长因子结合蛋白6;卵:卵白蛋白;PON1: paraoxonase 1;Scgb1c1: secretoglobin家庭1 c成员1。
基因 卵子/反对 电动汽车/反对 电动汽车/卵子
Ear6 1.838022 1.149834 -1.598512
Ccl5 2.641300 1.198238 -2.204320
Ccl6 29.061333 16.230038 -1.790589
Ccl12 5.776364 3.477515 -1.661061
Tnfsf8 2.617759 1.697634 -1.542005
IL5Ra 2.587367 1.613224 -1.603849
Tnfrsf13b 1.985461 1.238539 -1.603067
基因 卵子/反对 电动汽车/反对 电动汽车/卵子
PON1 -9.35267 -6.482819 1.442686
Bex2 -3.798534 -2.489212 1.525998
Igfbp6 -3.230484 -2.120048 1.523779
Fpr1 -3.109904 -2.022899 1.537350
Scgb1c1 -2.224596 -1.467501 1.515908
PON1和Scgb1c1的基因表达水平显著降低卵巢组相比CON组(<在line-formula>
PON1 ASC-derived电动汽车的影响,Bex2, Igfbp6 Fpr1, Scgb1c1基因表达。PON1和Scgb1c1基因表达显著减少卵巢组相比CON组。然而,电动汽车治疗PON1的表达明显增加,Bex2 Igfbp6, Scgb1c1哮喘小鼠。
去数据库被用来执行富集分析度审视自己与生物过程的关系,细胞组件和分子功能。十大最非常重要条款与截止的度有关<在line-formula>
功能类别浓缩度的分析。的<在line-formula>
——和表达下调基因与每一项分别进行了分析。度,表达下调后治疗ASC-derived电动汽车参与全细胞和within-cell组件(图 气泡图的基因本体术语关联。泡沫大小显示的数量(a)或(b)使之抑制调节基因对应的注释。
基于KEGG通路富集分析显示治疗后高度显著度ASC-derived电动汽车与环境相关信息处理,有机系统,和人类疾病(图 富集分析基于基因和基因组的京都百科全书(KEGG)通路识别显著差异表达的基因。度环境信息处理有很大的关联,有机系统,和人类的疾病。PON1的表达、Bex2 Igfbp6, Scgb1c1 ASC-derived治疗后显著增加电动汽车在哮喘小鼠。基因本体论分析表明,这些调节基因主要参与免疫系统流程及其调控,细胞和有机体的过程,和生物的监管。这些改变的基因可能参与过敏性气道炎症的改善治疗ASC-derived电动汽车。
msc已报告有前途的候选人为治疗过敏性气道疾病( 分子和遗传研究需要阐明潜在的免疫抑制机制MSC-derived EVs Th2-mediated过敏性气道炎症。DNA微阵列杂交技术被广泛应用于分子生物学研究[ 在这项研究中,我们进行了DNA微阵列分析识别度与过敏性气道炎症的抑制ASC-derived电动汽车。我们进行层次聚类的度,其次是功能和路径分析。总共有249度,其中228和21下降和调节,分别用折叠的变化<在line-formula>
PON1,一个主要的抗氧化酶,据报道,导致哮喘的发病机制 我们的研究有一些局限性。进一步评估确定的基因的影响在本研究T细胞等免疫细胞需要澄清我们的发现。未来的工作应该检查的具体函数的识别度过敏性气道炎症的抑制ASC-derived EVs和调查哪些组件ASC-derived电动汽车导致了监管的度。
在这项研究中,我们发现遗传信息的潜在的免疫调节机制ASC-derived EVs过敏性气道疾病。我们假设确定基因(PON1, Bex2、Igfbp6 Scgb1c1)导致过敏性气道炎症的改善,导致过敏性气道疾病的改善ASC-derived电动汽车。
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
作者宣称没有利益冲突。
Sung-Dong Kim Shin Ae Kang Kyu-Sup秋,Hwan-Jung卢武铉的贡献同样本文的内容。Sung-Dong金正日在起草了这篇文章,获取数据,并对数据进行分析和解读。Shin-Ae Kang贡献在本文起草,获得数据,并对数据进行分析和解读。Yong-Wan金正日贡献在对数据进行分析和解读。Hak-Sun Yu贡献在对数据进行分析和解读。Kyu-Sup曹贡献分析和解释数据和概念化和设计。Hwan-Jung卢武铉在概念化和设计起到了推波助澜的作用。
这项工作是由韩国国家研究基金会(NRF)授予由韩国政府资助(MSIT) (NRF - 2017 r1a2a2a05069529)。