SCI 干细胞国际 1687 - 9678 1687 - 966 x Hindawi 10.1155 / 2020/3768718 3768718 研究文章 脂肪间充质干细胞调节纤维化和炎症在尿毒症腹膜纤维化模型大鼠 https://orcid.org/0000 - 0003 - 3282 - 9457 Costalonga Elerson C。 https://orcid.org/0000 - 0003 - 4425 - 7708 内利 卡米拉 Garnica Margoth R。 https://orcid.org/0000 - 0002 - 3208 - 4435 诺罗尼亚 艾琳L。 兰格 莉香B。 实验室的细胞 遗传和分子肾脏学 肾部 圣保罗大学 圣保罗 巴西 usp.br 2020年 20. 5 2020年 2020年 7 2 2020年 17 4 2020年 6 5 2020年 20. 5 2020年 2020年 版权©2020 Elerson Costalonga et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

腹膜纤维化(PF)代表一个长期腹膜透析(PD)的并发症,影响腹膜膜(PM)功能。tissue-derived脂肪间充质干细胞免疫调节(ASC)显示效果和可能代表一个策略阻止PF。本研究的目的是分析ASC在实验的影响PF在尿毒症大鼠模型。模仿长期PD患者的临床情况,一个组合模式,特点是PF和慢性肾脏疾病(CKD),在Wistar鼠了。老鼠被喂食了0.75% adenine-containing饮食,30天,诱导慢性肾病尿毒症。PF与腹腔注射诱导葡萄糖酸氯已定(CG)从15到30天。 1 × 10 6 ASC在15 - 21天静脉注射。老鼠被分为5组:控制,正常大鼠;CKD,老鼠接受腺嘌呤饮食;PF,老鼠接受CG;与PF CKD + PF,慢性肾病大鼠;CKD + PF + ASC,尿毒症有PF治疗ASC的老鼠。PF被马森评估三色的染色。炎症,通过免疫组织化学方法评估和fibrosis-associated因素,多元分析,qPCR。与控制和CKD组相比,GC政府诱导显著增加点厚度和PF炎症和慢性肾病+ PF组。PF被ASC治疗的发展。 Further, the upregulation of profibrotic factors (TGF- β、纤连蛋白和胶原蛋白)和增加myofibroblast表达式在CKD + PF ASC组明显改善。除了antifibrotic效应、ASC显示抗炎效应避免白细胞浸润和炎性细胞因子(il - 1的超表达 β肿瘤坏死因子- α下午和il - 6)在由GC。ASC是有效预防CKD的PF发展实验模型+ PF,可能由于他们的免疫调节特性。这些结果表明,ASC可能代表一个潜在的策略治疗长期PD-associated纤维化。

 慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府 461785/2014-5 1。介绍

腹膜透析(PD)是一种安全的维持生命的肾脏替代模式,用于治疗终末期肾病(ESRD)。根据去年注册中心,全球11%的透析人口在PD ( 1- - - - - - 3]。在许多国家,与PD患者的结果相当于或优于血液透析,和PD也更符合成本效益。

尽管提供最好的保护残余肾功能和提高患者的生活质量,与血液透析相比,PD促进连续曝光的腹膜膜(PM) bioincompatible,下午高渗透析的解决方案,这可能会导致慢性炎症。此外,PD患者受到传染性腹膜炎的危险。长期暴露在PD液体与传染性腹膜炎诱发炎症的反复发作,neoangiogenesis,和腹膜纤维化(PF),削弱其功能,导致该模式的技术故障( 4, 5]。

PF的病理生理学包括损失的间皮的细胞和增厚submesothelial区,主要由一个细胞外基质(ECM)和myofibroblasts。最近的研究提出,间皮的细胞代表myofibroblasts的重要来源,通过epithelial-mesenchymal过渡。然而,最近的一项研究显示submesothelial居民成纤维细胞的重要作用myofibroblast前体在PF ( 6]。除了myofibroblasts, submesothelial白细胞的浸润,如巨噬细胞和t细胞,通常也观察到。这些炎症细胞的活化是由刺激的刺激,如高浓度的葡萄糖和glucose-degradation产品中发现的透析液,开始合成和释放大量的促炎因子,即il - 1 - β肿瘤坏死因子- α、il - 6和特别,转化生长因子- β(TGF - β)。TGF -下 βmyofibroblasts,信号的特征 αsma表达,产生ECM蛋白质,胶原蛋白和纤连蛋白等,导致PF的发展( 7, 8]。

当前的策略来最小化PF提交PD患者包括使用bioincompatible透析的解决方案。此外,临床管理antifibrotic药物,如他莫昔芬,在一些病人被描述试图废除腹膜炎症和纤维化。然而,这些方法只是部分有效( 7, 9, 10]。此外,实验的封锁和TGF -炎症 β政府的丙戊酸、三苯氧胺和骨形成protein-7 (BMP7)显示积极作用在防止在动物模型的进展。然而,需要进一步的研究来证实这些化合物的效率和安全性 5, 10]。

在这种背景下,研究替代方法来防止PF,如细胞疗法,是至关重要的。以前的实验研究表明,间充质干细胞(MSC)管理促进renoprotection通过防止肾脏炎症和纤维化的发展模型的急性和慢性肾脏疾病(CKD),由于其免疫调节作用[ 11, 12]。因为有表达相似性肾和腹膜纤维发生的机制,本研究的目的是分析潜在的抗炎和antifibrotic影响脂肪细胞在大鼠MSC (ASC)政府提交给尿毒症CKD + PF的组合模型,更好的再现了长期帕金森病的病理生理的场景。

 2。材料和方法 2.1。动物模型

38个成年雄性Wistar鼠体重300 - 350克得到当地的动物设施的圣保罗大学(USP)。动物被保持在一个恒定的温度 23 ± 2 °C,在12 h光/暗周期和免费的自来水。所有动物程序研究伦理委员会批准的USP医学院(FMUSP-CAPPesq 029/2016),进行按照我们与国际机构的指导方针和规定实验动物的操作和护理。为了模拟长期PD患者的临床情况,组合模型,特点是PF和尿毒症的结合,采用在目前的研究 10]。尿毒症是由adenine-rich饮食诱导。24动物喂食0.75% adenine-containing鼠饮食(美国圣路易斯σ有限公司)连续30天,而剩下的14个动物喂养标准鼠粮(Nuvital实验室,巴西的库里提巴)。PF由IP诱导24动物注射葡萄糖酸氯已定(CG)。体重是一周一次评估,tail-cuff收缩压在有意识的动物一个自动化的光电测量设备(美国Visitech系统),在研究结束的时期。

 2.2。试验协议

15天后adenine-rich饮食管理,当尿毒症已经建立,PF是CG的每日IP注射引起的。两个静脉注射(IV)剂量的 1 × 10 6 ASC每个管理到治疗组在两个不同的时刻。鉴于第一剂量的ASC是与第一个IP CG注入(adenine-rich饮食管理开始后15天内)。第二个剂量给6天后,21天后adenine-rich饮食管理开始。所有的动物研究总共30天。我们的实验协议由以下组:

CKD:动物接收adenine-rich饮食诱发严重的慢性肾病(30天 N = 8 )

PF:动物喂养老鼠的饮食标准,报CG-induced PF模型( N = 8 )

CKD + PF:慢性肾病动物报CG-induced PF模型adenine-rich饮食管理开始后15天内( N = 8 )

CKD + PF + ASC: CKD + PF动物收到2静脉输液 1 × 10 6 ASC,在无菌PBS稀释。第一个执行输液是与第一个CG IP注入,adenine-rich饮食管理开始,15天之后,第二个是执行后21天adenine-rich饮食管理开始( N = 8 )

控制:动物用标准鼠饮食和保持治疗30天( N = 6 )。

2.3。隔离,扩张,以及鼠ASC的表征

性腺的脂肪组织从5健康成年雄性Wistar鼠安乐死后获得了一个IP注射硫喷妥钠0.1克。脂肪组织样本切碎的无菌剪刀和消化在0.075%胶原酶溶液(美国Sigma-Aldrich)。离心后,孤立的细胞培养在37°C和5%的公司2塑料培养瓶与杜尔贝科修改鹰介质(美国表达载体DMEM-low葡萄糖)含10%胎牛血清灭活(的边后卫;表达载体),100单位/毫升青霉素,链霉素100毫克/毫升抗生素溶液(Gibco,卡尔斯巴德,密苏里州,美国)。培养基是每周3次改变,细胞使胰蛋白酶化然后当他们到达80%的融合。在4th通道,细胞被认为是MSC根据定义的标准国际社会的细胞治疗共识:坚持塑料在标准条件下,积极到特定的表面标记,如CD29、CD44, CD90、CD105;消极CD45;和能力分化为间充质血统时提交给合适的培养基和刺激。

细胞在段落使用4 - 6根据流式细胞术分析(FACSCanto™, BD生物科学,美国)。为此,ASC贴上异硫氰酸盐——(FITC)共轭抗体CD31、CD29, CD90;藻红蛋白(PE)共轭CD34抗体,CD44,和CD105;Pe-cy5.5-conjugated抗体CD45;和FITC -或者PE-conjugated非特异性免疫球蛋白(美国圣地亚哥eBioscience)。这些分析的结果作为补充图 1,在补充数据部分。同时,潜在的ASC分化成间叶细胞细胞系包括成骨细胞,内层,脂肪细胞在体外条件下评估。成骨分化被补充的培养基诱导可M / L地塞米松(σ),5 μg / mL抗坏血酸2-phosphate(σ),和10毫米/ L β-glycerolphosphate(σ)。确认存在的钙沉积,文化与茜素红S染色(核、圣保罗、SP、巴西)。诱导chondrogenic分化,ASC在DMEM培养补充10 ng / mL转化生长因子- (TGF) β1(σ),50纳米抗坏血酸2-phosphate(σ)和6.25毫克/毫升胰岛素。为了确认分化,细胞与阿尔新蓝染色pH值2.5。脂肪形成分化培养诱导了ASC在DMEM补充5 μg / mL胰岛素,10 - 6 M地塞米松,0.5 μM isobutylmethylxanthine, 50 μ吲哚美辛。细胞然后沾油红O确认存在的脂质滴入细胞液泡(补充图 2)。ASC作进一步鉴定,免疫荧光检测的细胞培养4th通过进行。为此,具体主要抗体CD19, CD44, CD90、CD146(微孔,欧洲大学协会),CD73,和CD45(美国圣克鲁斯生物技术),以及荧光dye-conjugated二级抗体Alexa 488年,594年和546年(技术),被雇佣。细胞核与DAPI复染色(4 ′ 6-diamidino-2-phenylindole表达载体)。图 1显示了这些结果。

细胞免疫荧光鉴定间充质干细胞表面标记。ASC CD44阳性,CD90 CD146,并为CD19和CD45 CD73和消极。

 2.4。腹膜Histomorphometry和免疫组织化学分析

在研究结束时,30天随访后,动物安乐死的IP注射致命剂量的硫喷妥钠。腹腔开放,血液和组织样本的收集点。血液样本离心机,血清尿素浓度测定使用商用比色箱(Labtest、巴西)。样本点的腹前壁的注入点仔细解剖,立即在液态氮冷冻,储存在-70°C的聚合酶链反应(PCR)和多元分析。额外的部分被固定在45分钟然后后缀Duboscq-Brazil解决方案在缓冲4%甲醛溶液。

PF是评价部分(3 μ米)沾着马森的三色的。至少10个数字图像在每个老鼠200 x放大拍摄,和厚度( μ米)的显微照片是测量。然后,从每个鼠腹膜厚度是计算( 5]。在这个过程中,我们使用数字化图像和图像分析软件(Image-Pro + 7.0软件,媒体控制论Inc .的贝塞斯达,美国)。

免疫组织化学研究点部分与以下特定抗体:孵化anti-CD68克隆ED1 (Serotec,牛津大学,英国),检测巨噬细胞;anti-CD3 (Abcam、剑桥、马、美国),检测t细胞;和反 α美国sma(σ),检测myofibroblasts。反应是使用一个LSAB-AP系统开发(美国Dako)和快速显示红色染料(σ,美国)。定量分析的ED1 anti-CD3-positive细胞存在于腹膜蒙蔽的方式进行下×200显微放大和表达为细胞/毫米2。的 αsma染色面积(%)计算相对于整个腹膜面积使用Image-Pro + 7.0软件(马里兰州贝塞斯达美国媒体控制论,Inc .)。

 2.5。基因表达纤维化标志物的点样本

实时定量PCR (RT-qPCR)分析是用来评估基因表达的一些主要fibrosis-related因素,如胶原蛋白三世,TGF - β,纤连蛋白。为此,总RNA从点获得使用商用冷冻样品和转换cDNA工具包(美国Promega)严格按照制造商的说明。使用StepOnePlus qPCR的反应进行实时PCR系统(美国热费希尔),以下循环程序:10分钟在95°C,紧随其后的是40周期15 s在95°C的变性,20年代60°C退火相结合,和10年代在72°C扩展。

 2.6。促炎细胞因子的基因和蛋白质表达

基因表达的细胞因子il - 1等 β肿瘤坏死因子- α后,il - 6被RT-qPCR评估,前面描述的方法。此外,这些炎症介质的蛋白质浓度在采样点通过多路复用评估细胞因子分析,使用商用设备(MILLIPLEX-EMD微孔,Billerica,欧洲大学协会),制造商的指示。化验Bio-Plex悬挂矩阵系统上的阅读,和数据分析使用Bio-Plex Manager 4.0版本软件(美国大力神生命科学)。结果表示为pg /毫克的蛋白质。

 2.7。统计分析

数据了 的意思是 ± 扫描电镜 ,所有使用GraphPad棱镜进行了统计分析软件,版本5.0(美国圣地亚哥GraphPad)。单向方差分析两两比较根据Newman-Keuls配方是用来比较不同实验小组,而未配对 t 测试是用来比较不同时间点的每个实验组。 p 值等于或低于0.05被认为是重要的。

 3所示。结果 3.1。ASC注入改善体重损失和逆转高血压在CKD + PF老鼠

所有的动物用于研究显示类似的体重,血压,和血清尿素浓度开始时的协议,在慢性肾病或/和PF归纳。正如所料,控制和PF组表现出正面的身体体重在整个研究。此外,这些动物才开发高血压或尿素保留30天随访。另一方面,动物提交慢性肾病模型(联合PF)显示在分析期间体重明显下降,伴有高血压和尿毒症。如表所示 1和补充图 3ASC治疗预防体重15 - 30天之间的发展和逆转高血压动物的CKD + PF + ASC组。

比较分析的体重(BW),收缩压(BP)和尿素氮(BUN)水平在不同群体天01,15日和30日。

控制 慢性肾病 PF CKD + PF CKD + PF + ASC
BW (g)
天01 332年 ± 3 321年 ± 6 319年 ± 8 310年 ± 4 329年 ± 5
一天15 360年 ± 4 ∗ 296年 ± 6 ∗ __ 356年 ± 8 ∗ ϕ 267年 ± 4 ∗ __ ϕ¥ 279年 ± 10 ∗ †¥
30天 428年 ± 5 ∗ 239年 ± 10 ∗ # __ 360年 ± 8 ∗ __ ϕ 243年 ± 11 ∗ †¥ 277年 ± 8 ∗ __ ϕ¥§
英国石油公司(毫米汞柱)
天01 122年 ± 4 129年 ± 3 123年 ± 2 127年 ± 3 125年 ± 3
一天15 128年 ± 5 164年 ± 5 ∗ __ 127年 ± 4 ϕ 178年 ± 6 ∗ †¥ 176年 ± 4 ∗ †¥
30天 124年 ± 3 175年 ± 2 ∗ __ 134年 ± 6 ϕ 169年 ± 4 ∗ †¥ 130年 ± 4 ∗ # ϕ§
包子(mg / dL)
天01 51 ± 11 24 ± 13 51 ± 10 34 ± 12 60 ± 12
一天15 55 ± 13 178年 ± 16 ∗ __ 40 ± 10 ∗ ϕ 185年 ± 25 ∗ †¥ 169年 ± 15 ∗ †¥
30天 46 ± 14 307年 ± 36 ∗ # __ 38 ± 12 ∗ ϕ 287年 ± 37 ∗ #†¥ 333年 ± 24 ∗ #†¥

未配对 t 测试: ∗ p < 0.05 01和各自的一天,# p < 0.05 与各自的15天。ANOVA-Newman-Keuls后续测试:__ p < 0.05 与各自的控制, ϕ p < 0.05 与各自的慢性肾病,¥ p < 0.05 与各自的PF,§ p < 0.05 与各自的CKD + PF。

 3.2。ASC治疗预防PF的发展老鼠提交CKD + PF

建立PF的动物不同组织进行组织学分析马森trichrome-stained点的样本。说明故事的每个实验组显示严重点增厚和胶原蛋白积累在PF和CKD + PF(图组 2(一个))。这些组织学研究表明,PF的量化和CKD + PF动物表现出三倍大点比控制或慢性肾病大鼠( p < 0.05 ),可以看到在图 2 (b)。ASC治疗显著预防CKD的PF + PF + ASC动物,显示点厚度控制或CKD组所观察到的类似。

腹膜的组织学特征样本不同群体沾着马森的三色的(×200)(a)。这些研究结果的量化是在酒吧图表(b)。没有间皮的形态改变,submesothelial或肌肉细胞的控制和CKD组。IP CG注射诱导标志submesothelial腹膜膜增厚,具有多孔性和胶原沉积增加,可以看到在PF和CKD + PF组。动物提交CKD + PF收到ASC注入展出保留腹膜膜。

 3.3。ASC灌注预防PF通过减少腹膜Myofibroblasts和调制ECM合成相关基因的表达在老鼠提交CKD + PF

免疫组织化学的 α生物标志物的sma myofibroblasts, ECM生产商细胞,纤维发生密切相关,表现在每个实验组的点样本的动物。如图 3(一个)和补充图 4基于腺嘌呤、动物报CKD模型过载表现出一个数值的百分比增加 αsma的点,而控制。确凿的我们之前的组织学研究,组织受到PF实验模型(PF和CKD + PF)展出大量腹膜 αsma积累。值得注意的是ASC治疗显著预防的增加 αsma CKD的百分比+ PF + ASC的动物。

的比较分析 αsma表达(用来通过免疫组织化学方法检测myofibroblasts)和TGF - β第三、胶原蛋白、纤连蛋白基因表达式(通过定量实时PCR)腹膜膜的所有组。CG-induced PF显著增加 αsma表达PF和PF + CKD组(a)也表现出显著的超表达的TGF - β(b),胶原蛋白3 (c),纤连蛋白基因(d)。ASC治疗显著降低了腹膜的百分比 αsma以及纤维化相关基因的表达。

类似的结果从RT-qPCR点样本的分析来评估一些主要profibrotic基因的基因表达。下午样品提交的未经处理的动物实验模型,结合CKD + PF显示TGF -的重要过度 β第三、胶原蛋白、纤连蛋白与对照组相比。如数据所示 3 (b)- - - - - - 3 (d)。ASC的过度治疗显著降低TGF - β和胶原蛋白三世和规范化纤连蛋白的表达。

 3.4。管理ASC减毒腹膜炎症

为了评估当地白细胞招聘、腹膜浸润的巨噬细胞(ED1 +细胞)和t细胞(CD3 +细胞)被免疫组织化学评估。说明故事人物所示 4(一)和 4(b),这些参数的量化数据表示为酒吧图表 4(c)和 4(d)。

说明故事的腹膜样本提交的不同群体对巨噬细胞免疫组织化学(a)和t细胞(b)检测。相关CKD + PF诱导巨噬细胞(c)和t细胞(d)渗透,虽然下午ASC注入预防炎症,完全(c, d)。

如图 4(c)点样本中发现巨噬细胞的数量从控制动物间没有差别,CKD, PF组。然而,合并后的CKD + PF模型提升显著增加点浸润的巨噬细胞显著控制相比,CKD, PF组( p < 0.05 )。ASC注入完全阻止巨噬细胞渗透点的动物CKD + PF + ASC组。

同样腹膜t细胞,巨噬细胞,控制没有差别,CKD,和PF组,与此同时,在CKD + PF组明显增加。根据获得的数据与巨噬细胞量化,ASC治疗显著降低t细胞浸润点样本的动物从CKD + PF + ASC组(图 4(d))。

此外,我们分析了两个基因和蛋白质表达以下炎症介质:il - 1 β肿瘤坏死因子- α白细胞介素6、腹膜膜的每个实验组动物,如图 5。

比较分析的基因(qPCR)和蛋白质(多路)il - 1的表达 β(a, b)、肿瘤坏死因子(c, d)和白细胞介素6 (e, f)腹膜膜各组实验动物的。CKD + PF模型提升显著增加在基因和蛋白质表达il - 1 β肿瘤坏死因子- α白细胞介素6,比控制。ASC治疗规范化的基因和蛋白质表达这三个因素进行了研究。

CKD + PF模型提升显著增加在基因和蛋白质表达il - 1 β,最后还增加CKD和PF组。动物对待ASC正常基因和蛋白质表达il - 1 β,相比之下,那些在对照组(数字 5(一个)和 5 (b))。肿瘤坏死因子- α基因在动物的样品下午报CDK + PF模型相结合,而蛋白质含量的TNF - α(由多路复用分析评估点样本)在CKD明显增加,PF, CKD + PF组。基因和蛋白质表达的肿瘤坏死因子- α在CKD + PF显著降低动物对待ASC(数据吗 5 (c)和 5 (d))。因此,腹膜的白细胞介素6基因和蛋白的表达明显升高在CKD + PF的动物组和完全由ASC注入规范化(数字 5 (e)和 5 (f))。

 4所示。讨论

腹膜的长期接触膜逐渐bioincompatible PD的解决方案促进局部炎症、间皮的细胞,增殖myofibroblasts,胶原蛋白沉积,submesothelial增厚,导致PF,超滤能力和丧失,最终失败的透析模式( 5, 7, 13]。在这项研究中,静脉注射ASC管理局阻止PF的发展引起的GC在尿毒症的老鼠。ASC治疗也减少myofibroblast渗透和减毒的调节表现profibrotic和促炎基因治疗中观察到的动物。这些发现与先前的报道是一致的,研究干细胞实验PF的antifibrotic效应模型( 14, 15]。不同于以前的研究中,在我们的实验中,我们使用了尿毒症的动物,ASC是由静脉路线。

如前所述,尿毒症CKD的组合实验模型与PF受雇于本研究像更密切地观察到的临床和病理生理特征在终末期肾病患者长期PD的提交。除了CKD的直接影响,如体重减轻、系统性高血压,并增加了包子,CKD的动物+下午PF组表现出明显增厚,以胶原蛋白和submesothelial积累 αsma与腹膜炎症,证明通过submesothelial巨噬细胞和t细胞渗透,这是统计上高于观察动物只提交PF模型,没有相关的慢性肾病。此外,当地的腹膜炎症和纤维化相关基因的超表达显著增加CKD + PF组与PF组相比,从而表明先进尿毒症腹膜炎症的发展加剧这些动物( 10]。

纤维增厚和超表达的 αsma myofibroblast标记,GC注射诱导的点被ASC减毒治疗。ASC政府还封锁了upregulation profibrotic因素,值得注意的是,TGF - β纤连蛋白。与我们的研究结果相似,上野等人证明了人类MSC阻止GC nonuremic动物引起的PF。此外,人类腹膜间充质细胞与人类的coculture MSC TGF -导致显著减少 β和纤连蛋白mRNA表达水平相比vehicle-treated细胞( 14]。自TGF - ß信号通路在PF中起着关键作用,它可能antifibrotic效应在我们的研究中观察到的ASC是由TGF - β抑制。

系统性炎症和更高水平的细胞因子在腹水先于PF和封装PD患者的腹膜硬化( 16]。除了antifibrotic通路的抑制,ASC也表现出强烈的对腹膜膜抗炎作用。动物提交组合模型和处理ASC没有submesothelial白细胞的浸润,如巨噬细胞和t细胞。同意我们的发现,王et al .,在老鼠模型中使用骨骨髓来源SC急性腹腔粘连,显示腹腔内注射点和TNF - MSC抑制白细胞浸润 α表达式通过旁分泌机制[ 17]。因此,抑制肿瘤坏死因子- α生产由ASC可能占其有益的影响在我们的研究中。

ASC输液也提升显著减少腹膜基因和蛋白质表达il - 1 β肿瘤坏死因子- α,il - 6在ASC-treated CKD + PF动物,比未经处理的CKD + PF老鼠。这些发现证实了先前的报道描述MSC-induced抗炎和免疫调节作用。Aggarwal等人表明,净化人类免疫细胞的亚种群有其细胞因子分泌剖面向更多的抗炎和immunotolerant表型改变,当cocultured MSC。根据这一研究,MSC的刺激下,树突细胞降低TNF - α和释放il - 10, Th1干扰素-淋巴细胞减少 γ表达和增加il - 4生产( 18]。

有许多MSC发挥其有利影响的可能机制。MSC的迁移到受损的组织和分化成修复细胞最初发生的地方。然而,它已经认识到,旁分泌MSC分泌的因素可能是主要的机制诱导组织保护和恢复。王等人表明,静脉输液后提交给腹膜MSC在大鼠的尾静脉损伤通过取消,这些细胞累积在肺部,肝脏和脾脏。没有观察到的干细胞受伤的腹膜,尽管保护作用通过静脉注入MSC。这些数据表明,MSC注入的主要生物效应可能是由于更多的抗炎和免疫调节因子的释放,这些细胞,而不是他们的 原位分化( 17]。

值得注意的,我们发现一个意想不到的ASC治疗血压的影响。而尿毒症治疗组大鼠(CKD和CKD + PF)显示高血压、CKD + PF + ASC组的血压与对照组相似。未来的研究需要更好地理解这一发现,但在肾血管性高血压的一个实验模型,MSC控制血压和抑制intrarenal血管紧张素系统( 19]。

 5。结论

总之,我们已经表明,ASC治疗抑制了PF的进展CG-induced PF在尿毒症大鼠模型。ASC抑制不同的和重要的机制参与腹膜膜修改引起的PD的激活TGF - β通路、myofibroblast增殖和炎症。我们的研究结果很有趣,增强干细胞疗法作为治疗的角度PF。然而,未来的研究需要在此之前实验发现转化为临床应用。

 数据可用性

所有生成的数据或分析在本研究中包括发表的这篇文章及其补充信息文件。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 确认

我们衷心感谢Luiza Justini de Freitas阿曼达·g·皮雷,菲利浦- m·o·席尔瓦和Cleonice席尔瓦的优秀的技术支持。这项工作得到了巴西国家研究和发展委员会(CNPq)批准号461785/2014-5。

 补充材料

补充材料图1:细胞免疫荧光鉴定间充质干细胞表面标记。ASC CD44阳性,CD90 CD146,并为CD19和CD45 CD73和消极。补充材料图2:描述脂肪间充质细胞(ASC)用于这项研究。ASC Wistar鼠的段落P0 (A), P4 (B),分析能力的ASC分化成脂肪形成的(C), chondrogenic (D)和成骨的血统(E) 10倍放大。补充材料图3:代表线图数据如表1所示的主要手稿文件。比较分析的体重(BW) (A)、收缩压(BP) (B)和尿素氮(BUN) (C)水平,不同群体在天01,15日和30日。图4:补充材料说明故事的免疫组织化学 αsma在腹膜样本不同群体(×200)。

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