SCI 干细胞国际 1687 - 9678 1687 - 966 x Hindawi 10.1155 / 2017/9275248 9275248 研究文章 隔离技术和位置对人类角膜源自基质细胞的表型 Nagymihaly 理查德。 1 2 Vereb Zoltan 1 Facsko 安德里亚 1 http://orcid.org/0000 - 0002 - 0615 - 804 x Moe Morten C。 2 http://orcid.org/0000 - 0003 - 2905 - 9252 Petrovski Goran 1 2 刘 凯伦 1 干细胞和眼睛的研究实验室 眼科学系 医学院 塞格德大学 塞格德 匈牙利 u-szeged.hu 2 眼科研究中心 眼科学系 奥斯陆大学医院和奥斯陆大学 奥斯陆 挪威 oslo-universitetssykehus.no 2017年 29日 10 2017年 2017年 29日 03 2017年 11 07年 2017年 27 08年 2017年 29日 10 2017年 2017年 版权©2017年理查德Nagymihaly et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

目的。确定隔离技术和位置的影响人类角膜源自基质细胞的表型(二者)。 方法。二者从角膜基质隔离中心和外围使用外植体或酶消化法。本机组织染色功能标记,而培养细胞流式细胞仪进行分析。PCR用于确定基因表达在培养和原生细胞。 结果。本机基质呈阳性 α辅肌动蛋白、ALDH1A1 CD31、CD34我胶原蛋白和波形蛋白。培养细胞表达CD73, CD90、CD105 CD51,巢蛋白,CD49a, CD49d, ABCG2, CD47。PCR证实的一个重要upregulation ALDH1A1, AQP1 ITGB4, KLF4, CD31, CD34,趋化因子受体CXCR4在本地组织,虽然ABCG2的表达,ITGAV,巢蛋白,CD73, CD90、CD105,波形蛋白显著高于培养细胞。GPC没有改变。 结论。研究发现二者的表现型之间没有显著差异产生的外植体或酶消化技术中心或边缘的基质。孤立的细胞可以不考虑位置和执行隔离技术用于研究。培育二者进行一个完整的表面标记和基因型剖面变化相比,原位状态。

 挪威的金融机制 MSMT-28477/2014 奥斯陆大学的 奥斯陆大学医院 欧洲区域发展基金 国家大脑研究计划 2.3.2 ginop - - 15 - 2016 - 00006 KTIA_NAP_13-A_III / 9 欧洲科学技术合作 1。介绍

人类的角膜基质负责三分之二的眼睛的折射本领,占据了90%的角膜厚度。受疾病或创伤时,体内平衡,因此透明的组织被破坏。部分原因是由于当地居民角膜水肿和激活的cells-keratocytes。这些静止细胞树突细胞形态 在活的有机体内合成胶原和蛋白聚糖形成的骨干组织( 1];当激活时,可见可以转化为myofibroblasts,与疤痕形成,最终失去角膜透明度( 2, 3]。治疗这种情况下通常涉及片状或穿透角膜移植术,但由于供体短缺在世界范围内,查找替代能源,比如生物工程或decellularised眼角膜或假体 4, 5]。

角膜基质细胞来源于人类已被证明具有trilineage分化潜力,是否存在特定的标记(例如,CD73+,CD90+CD105,+,CD34−、CD45−,CD14−,CD11b−,CD79 α−,CD19−,HLA-DR−),而坚持塑料和接触血清呈现这些细胞与间充质干细胞(msc) [ 6, 7]。此外,二者的免疫抑制潜力已经证明之前( 8, 9),以及他们的潜在细胞疗法在动物实验中 10]。

建立CSC文化相对比较容易。然而,许多国家已经访问只有外围组织剩余未使用角膜角膜成形术后环。使用酶消化分离二者紧密的胶原层也出现简单的( 11, 12),而孤立的角膜组织的外植体培养方法生产细胞体外已经建立。仍有许多猜测的真正起源:角膜基质细胞体外( 9, 12]。最有可能的是,这是居民的角膜基质细胞被激活后隔离,可能不同的人群成为主导,最终生成细胞显示成文化形态( 9, 13, 14]。

各种类型的文化媒体也被评估阐明诱导的最佳条件 在体外在这些细胞(干细胞表型 15];然而,到目前为止比较进行了确定细胞分离不同位置(角膜中心与外围)显示任何差异。本研究旨在建立角膜基质文化由外植体和酶消化方法从中央和周边地区的角膜和比较他们的表型和遗传型的属性为未来的应用角膜研究这些细胞或细胞疗法的目的。

 2。材料和方法 2.1。隔离过程和培养

尸体组织收集符合赫尔辛基宣言的指示和批准由国家医学研究理事会(14387/2013 / EKU-182/2013)。获得的样本在24小时内死亡。消毒后的聚维酮碘(保护、匈牙利)和PBS的人类bulbi冲洗,角膜按钮是用剪刀切割。角膜后弹力层,角膜上皮和角膜内皮剥掉。获得大小相同的基质外植体,部分组织测量直径3毫米的从角膜穿孔按钮的帮助下环钻从周边与中央区域定义为基质,如图 1。同等数量的拳生成从中央和周边地区上述同样的方法和处理3毫克/毫升(> 125基民盟/ mg)胶原酶溶液混合(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)3小时37°C,搅拌。

解剖特点的人类角膜基质细胞隔离和网站。块的组织从表示中央和周边角膜穿孔地区由外科环钻(3毫米)的消化和/或培养。这张照片摄相衬显微镜和放在一起作为一个覆盖(evo®FL显微镜、热费希尔科学)。

CSC文化的四种类型被定义为中央外植体(CE)和外围外植体(PE)和中央消化(CD)和外围消化(PD)来自同一个捐赠者,指酶消化的位置和存在与否,分别。24-well板块(康宁合演,Sigma-Aldrich)被用来扩大细胞。杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM) (Sigma-Aldrich)补充10%胎牛血清(的边后卫)(penicillin-streptomycin Sigma-Aldrich)和1% (PS) (Sigma-Aldrich)应用于细胞。文化媒体每天交替变化。4通道细胞用于实验。

 2.2。Immunofluorescent染色在培养二者增殖标记ki - 67

CD, PD、CE和PE扩大24-well文化板块(康宁合演)。细胞被固定在4%多聚甲醛(Sigma-Aldrich)和permeabilised使用0.1% Triton x - 100 (Sigma-Aldrich)。牛血清白蛋白(BSA) 1% (Sigma-Aldrich)稀释在磷酸盐(PBS)应用屏蔽解决方案1小时在室温下。样本孵化与主ki - 67 (Sigma-Aldrich)抗体室温1小时。phycoerythrin-conjugated二级抗体被用来可视化蛋白质和最后,4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI Sigma-Aldrich)对比染色细胞核染色。照片是由一个evo FL显微镜(热费希尔科学)。

 2.3。Immunofluorescent染色的角膜组织

为研究蛋白质表达原位,角膜部分从石蜡包埋组织和准备染色标记表示的祖和/或干细胞(ABCG2,趋化因子受体CXCR4和巢蛋白)。扩散- (ki - 67), function-related (ALDH1A1,胶原蛋白和CD34)和MSC标记(CD73, CD90、CD105和波形蛋白),细胞外基质和酶组件(纤连蛋白、胶原IV, VE-Cadherin),和其他分子( α辅肌动蛋白、ABCG5和antifibroblast标记)染色。更多信息使用的抗体表所示 1 可以在网上 https://doi.org/10.1155/2017/9275248。

简言之,部分deparaffinised和特异性的网站被封锁了1% BSA (Sigma-Aldrich)在室温下1小时。一夜之间,主要的抗体被应用在4°C。后三次5分钟洗PBS包含1% Tween-20 (PBST), Alexa萤石488共轭二次抗体被孵化的部分1小时在室温下。DAPI对比染色细胞核进行可视化。照片是由一蔡司Axio观察者Z1卡尔蔡司显微镜。

 2.4。Fluorescence-Activated细胞排序(流式细胞仪)

二者在150厘米亚文化2水瓶(TPP,西格玛奥德里奇)流式细胞仪分析。细胞被trypsinisation收集(犹他州洛根Hyclone,通用电气医疗集团生命科学,美国)表面蛋白表达分析。在1000转离心后,10分钟,细胞在流式细胞仪resuspended缓冲DPBS BSA Na-azide(0.05%和0.5%)。三色staining-fluorescein-isothiocyanate、藻红蛋白和allophycocyanin-conjugated主要抗体ABCG2, CD31, CD34, CD44, CD47, CD49a, CD49d, CD51, CD73, CD90、CD105, Nestin-were申请30分钟在4°C。流式细胞仪石中剑血细胞计数器(BD生物科学,Immunocytometry系统)被用来测量样品。最后,数据被流动分析软件2.5 (Perttu Terho图尔库生物技术中心,图尔库大学芬兰)和FCS表达6(美国加州新创软件)。提供更多关于抗体的信息表 2 。

 2.5。反向Transcription-Quantitative聚合酶链反应(RT-qPCR)分析

本地免费角膜基质组织上皮和内皮收集从3。的组织捐助者是均质和汇集。总RNA被孤立Qiazol试剂(试剂盒)和RNeasy迷你包(试剂盒)后,制造商的协议。同样,从培养细胞总RNA分离单独定义的4条件RNeasy迷你工具包和汇集从3捐助者。

NanoDrop核酸浓度测定的分光光度计(热费希尔科学)。随机五个一上标三世逆转录酶(美国马生活技术,沃尔瑟姆)被用来抄写1 μg RNA的互补。StepOnePlus rt - pcr系统(应用生物系统公司)和Taqman基因表达分析是用来确定相对基因表达水平。基因 ALDH1A1(Hs00605167_g1), ABCG2(Hs01053790_m1), AQP1(Hs01028916_m1), CD31(Hs01065279_m1), CD34(Hs00990732_m1), CD73(Hs01573922_m1), CD90/ THY1(Hs00174816_m1), 趋化因子受体CXCR4(Hs00607978_s1), 英格( CD105)(Hs00923996_m1), GPC4(Hs00155059_m1), ITGAV(Hs00233808_m1), ITGB4(Hs00236216_m1), KLF4(Hs00358836_m1), 巢蛋白(Hs00707120_s1), 波形蛋白(Hs 00185584 _m1)被用于分析。10分钟在95°C,那么40周期在95°C(15秒)和60°C 1分钟是测量。分析的数据是由2−ΔΔCt方法。褶皱变化相对数量确定相对于本机间质组织的表达水平。 18 s RNA(Hs03003630_g1)用作看家基因。所有样品都运行在一式三份。

 2.6。统计分析

单向方差分析和学生的 t以及应用于揭示统计不同群体之间的差异。显著性水平设置为0.95。 p 值小于0.05 ( ∗ p < 0.05 ; ∗ ∗ p < 0.01 )被认为是重要的。

 3所示。结果 3.1。细胞形态及增殖活动

文化建立的酶方法(CD, PD)立即产生了二者,而这些细胞扩散快(图 2(一个)),达到融合(图10 - 12天内 2 (b))。外植体文化从中央和周边地区(CE、PE)显示没有显微镜下可观察到的增殖活动直到天12 - 14,当二者开始迁移和增殖在外植体的边缘(图 2(一个))。外植体文化后,20 - 25天达到confluency隔离(图 2 (b))。二者之间没有明显的形态学差异观察从不同位置(中心与外围)和隔离技术(外植体和酶消化)。

相衬的角膜基质细胞培养和各自的增长率。图片显示天1、8、15、21的培养细胞获得中央和周边地区的基质酶消化和外植体技术酒吧代表规模1000 (a) μm。移植的组织是由星号(∗)。培养细胞的Confluency %±SD决心通过为每个隔离技术(ImageJ测量 n = 3 ),点绘制相应的给定值(b)各自的天。

ki - 67染色显示强增殖能力的细胞在外植体和消化文化孤立从中央和周边地区的角膜基质(图 3(一个))。从所有染色的细胞,4.21±1.53%,7.87±4.73%,8.60±4.58%和10.95±4.42% ki - 67(图)阳性 3 (b))四个不同的条件:CD, CE、PD和PE ( p = 0.43 )。

Immunofluorescent核ki - 67培养细胞的染色。二者从中央或周边角膜基质的消化和外植体技术已经培养了21 - 30天,分别和染色标记ki - 67增殖。扩散与DAPI标记所示红色对比染色(a)。ki - 67阳性细胞的相对量(%)±SD (b)所示( p = 0.43 )。酒吧代表规模200人 μm。

 3.2。Immunofluorescent染色的角膜基质

为了第一次证明了微分表达式的培养模式和居民的角膜细胞,具备干细胞标记物的表达,间叶细胞,上皮、内皮细胞起源,和细胞外基质成分和粘附蛋白在本机进行角膜(图 4和表 1,总结的结果)。前基质被定义为第一个1/3的角膜的厚度近端角膜上皮,虽然后基质被定义为角膜内皮的2/3厚度近端(图 1 )。

Immunofluorescent染色正常人类完整的角膜厚度的部分。图像获得10点40(左列)和x(中间和右侧的列)为每一个标记的放大。蛋白质和标记被Alexa染色萤石488共轭二次抗体(绿色)。DAPI(蓝色)对比染色应用可视化细胞核。

各种角膜的角膜基质标记分配区域。

标记 周围间质 中央基质 前基质 后基质
ABCG2 − − − −
ABCG5 − − − −
ALDH1A1 + + + + + + +
α辅肌动蛋白 + + + + + + +
CD31 + + + +
CD34 + + + + + + + +
CD73 − − − −
CD90 − − − −
CD105 − − − −
胶原蛋白我 + + + + + + + +
胶原蛋白4 − − − −
趋化因子受体CXCR4 − − − −
纤维母细胞标记 − − − −
纤连蛋白 − − − −
ki - 67 − − − −
巢蛋白 − − − −
VE-Cadherin − − − −
波形蛋白 + + + + + + + +

“−”代表没有染色,对中等强度的信号“+”,“+ +”一个强大的染色。

ABCG2表达和ABCG5无法检测到原位的角膜层或地区。强大和染色ALDH1A1和相似 α辅肌动蛋白在中央和周边地区的基质。CD34的存在证实了一个强烈的信号来自原位基质的所有部分和CD31检测。(图 4)。

表达的主要基质成分,胶原蛋白我,显示强烈的积极性,而缺乏胶原IV可以发现整个基质。三合一的MSC标记:CD73, CD90、在本机角膜和CD105是负数,标记和ki - 67一样,趋化因子受体CXCR4、巢蛋白不能被探测到的组织。波形蛋白的存在可以证实在基质中,纤连蛋白似乎是负在本机角膜基质。antireticulocyte的表达、纤维母细胞标记和VE-cadherin还发现-在这个组织(图 4)。

 3.3。培养二者的表面蛋白表达谱

流式细胞仪分析显示高表达的MSC标记:CD73, CD90、CD105,培养条件(图中无显著差异 5和表年代 3 )。粘附分子CD51 CD49a、CD49d integrin-related CD47显示表达,增加无显著差异被发现之间的条件。假定的干细胞标记ABCG2和巢蛋白阳性,而CD34和CD31为负。统计分析显示在后者的表达无显著差异蛋白质比较各种隔离条件时使用。

给定的表面标记的阳性细胞百分比±SD显示四个不同的条件(一)( n = 3 )。代表直方图的流式细胞仪分析显示PE捐赠者,与各自的同形像控制,白色中描述,在红色,与所述抗体Overton直方图减法(%)显示了阳性细胞(b)。

 3.4。基因表达模式培养二者和本地角膜基质

CD73, CD90、CD105 / Endoglin明显高表达培养二者相比,本机基质(14 - 95和25倍; p = 0.01 , p < 0.01 , p < 0.01 、职责)。此外,没有区别可以检测到后者的表达基因在不同地区分离的两个方法。波形蛋白的表达似乎是18倍高的培养二者相比,本机基质( p < 0.01 各种培养条件),没有区别。在培养细胞CD34的表达明显下调,高达5倍,相比本地组织中的表达( p < 0.01 )。CD31在培养二者显著表达下调与原生细胞( p < 0.01 )。显著降低表达ALDH1A1可以检测到的文化条件相比,本机角膜基质( p < 0.01 )(图 6)。

基因表达谱的角膜基质培养相比,二者。相对数量显示在对数刻度,在本机和汇集从不同的隔离/培养细胞培养方法;②意味着相对数量±标准差(SD)表示。值被描绘成意义 ∗ p < 0.05 和 ∗ ∗ p < 0.01 。18 s RNA作为看家基因,表达水平的培养二者相比,本地的组织( n = 3 )。RNA从本地组织被剁基质组织准备从3捐助者成碎片,紧随其后的是总RNA的提取。

ABCG2表达,产出在初级二者相比,本机基质细胞( p < 0.01 )。显著降低AQP1的表达、趋化因子受体CXCR4 ITGB4,检测到了KLF4培养二者相比,本地的组织( p < 0.01 , p < 0.01 , p < 0.01 , p < 0.01 、职责),而ITGAV和巢蛋白显著调节文化( p < 0.01 , p < 0.01 )。GPC4表达式被发现影响培养( p = 0.36 )。

 4所示。讨论

细胞角膜的角膜基质可以是一个很好的来源的研究,药物测试,和未来的细胞疗法目的的眼睛或其他器官 9, 16]。二者源自外植体中部的人类角膜基质最近已经被我们广泛的特点( 6]。这些细胞显示MSC-like属性 在体外,包括trilineage分化潜力和免疫抑制特性。这样的特性,然而,似乎并不是居民细胞的特征 在活的有机体内。还讨论细胞从基质干细胞获得细胞是否真正基质,可见,进行形态学和功能变化或一个不同的小祖人口存在的 在活的有机体内,它被激活体外。

全球捐赠眼角膜的短缺( 17)和剩余的可用性角膜环在世界各地的研究小组证明角膜成形术后的比较和澄清的不同来源或孤立的技术可以使用角膜基质细胞。手术后大部分可用的组织包含从外围基质,如后剩余的穿透角膜移植术,DMEK或DSAEK程序。

本机角膜组织组织化学染色显示无显著差异的表达前所述标记在角膜中央和周边地区。本机角膜基质没有表情的假定的干细胞marker-the流出蛋白质ABCG2-while很强的染色观察文化从中央和周边地区生产的这两种技术的隔离(外植体和酶)。这种差异在表达中发现培养二者与原生细胞也可以证实基因表达水平。Upregulation ABCG2可能导致更强的抵抗的培养细胞外部应用治疗(如化疗),而癌细胞已经知道利用使用此类分子生存条件恶劣的( 18, 19]。人口的小鼠成体干细胞染色由赫斯特33342年已被证明放电可以抑制染料通过ABCG2与维拉帕米( 20.]。同样,人口方面已被确定在人类缘的上皮细胞( 21]。没有表达的另一个成员磷酸腺苷盒式运输机总科,如ABCG5,可以发现在本机角膜。

表达ALDH1A1、角膜晶体的差别对透明度的维护至关重要,对这些基因是与角膜霾( 22]。强染色观察角膜基质,这是均匀分布在中央和周边地区的角膜。有趣的是,它的表达明显下调的条件相比,本机组织文化。

所有层角膜的表达 α辅肌动蛋白,包括基质。以来,可见表达这种蛋白质,标记不应仅用于不含成纤维细胞的细胞的存在 在活的有机体内或体外 23]。

CD31表达通常是通过血管内皮细胞可能参与白细胞游走。CD31在吸引和粘附的作用多形核细胞的角膜伤口愈合之前已经证明( 24];然而,它的作用在一个未损坏的和纯粹的无血管的组织如本机角膜仍不清楚。有趣的是,体外培养二者引起没有CD31积极隔离手段的应用。RT-qPCR分析证实了CD31的差别具有统计学意义对这些培养和原生细胞。

对CD34的多效性的功能,这是通常被称为造血祖细胞的标记,尽管证据显示这个标记可能在免疫功能流程,如调节嗜伊红粒细胞和树突细胞的迁移和流动,在动物基因敲除实验( 25]。几项研究已经证明存在CD34,可见,其损失在体外培养时间( 16, 26]。强烈的角膜基质染色的确可以在本机眼角膜,发现在培养细胞中并非如此。基因表达分析进一步支持这一发现,降低5倍CD34的表达是培养观察二者相比,本机基质。这也是符合他人的研究结果,这仍需要进一步阐明这种蛋白质的功能在角膜 16]。Aquaporin-1角膜细胞迁移的一个重要因素是在伤口愈合过程中, 在活的有机体内表达下调,但仍表达 在体外在动物模型 27]。

三合一的MSC markers-CD73, CD90 CD105-was发现消极的原位,对比强烈的积极性在所有细胞体外培养观察。同样的结果被发现当比较基因表达的培养和原生细胞。这些发现支持最近发现在另一个独立研究[ 28),它显示了强劲的潜在的角膜基质细胞,以及他们被激活在体外培养的能力。获得后者三种蛋白质的表达,加上失去CD34在体外培养过程中,是什么使得二者MSC-like表型,根据国际社会细胞治疗(ISCT)。其他类型的不同来源的msc展示类似的表面表型特征(高CD90和CD105的表达) 29日- - - - - - 32]。CD90被认为是参与细胞粘附基质和其他细胞,炎症、纤维化,移民,和肿瘤生长, 33),而CD73可能负责msc的免疫抑制作用( 34]。这个功能已经证明了我们最近,以及[ 6]。这些分子在长期保留和多个段落的细胞,证明了我们和其他人一样( 35]。

描述细胞外基质,使角膜也非常重要的支柱阐明角膜基质细胞的区别 在活的有机体内,而在他们的利基,体外。丰富的角膜基质的主要成分,胶原蛋白,我的确是在本机基质,而胶原IV是缺席。整合素 αV (CD51)被发现在培养细胞表达和观察upregulation在基因层面,而整合素 β4明显下调比原位体外。

这些发现进一步加强培养细胞应对变化的环境周围,可能补偿沉积的从头合成胶原蛋白体外(数据没有显示)。

纤连蛋白也没有出现在本地,完整的角膜,这证实了角膜伤口愈合性能的细胞外基质成分。纤连蛋白已被证明的存款出现在上皮和基质渗透创伤后不久,尽管它消失在两周( 36]。

ki - 67的存在不能检测到本机角膜部分。这进一步证实了没有创伤影响控制,本机上皮,或角膜的其他层,从而表明诱导细胞增殖的存在,尽管外植体和酶技术生成的文化从不同的角膜区域显示积极增殖ki - 67阳性细胞。

间叶细胞标记间质中表达波形蛋白被发现。这是与他人的研究结果一致。所示波形蛋白也被击倒的研究引起角膜阴霾的发展( 37]。神经具备干细胞标志巢蛋白不能检测到本机角膜基质。这种蛋白质表达的是球面文化生成的小鼠角膜,而假定的前体Nestin-positive人口之前的研究已经证实,在周边角膜的兔子 38, 39]。巢蛋白被发现在培养细胞调节相比,本机组织。增殖细胞表达的蛋白被认为是一个角色在中间丝的重组。

具备干细胞KLF4,一个重要的标志,与组织接触到外面的世界( 40]。角膜是第一步,也是最重要的机械屏障。我们特此证明培养二者KLF4基因表达降低,相比本地基质。假定的干细胞迁移趋化因子受体CXCR4 /导航标志( 41, 42通过免疫染色)没有检测到原位,而低水平被PCR检测。其他报道类似,少量的功能趋化因子受体CXCR4在培养的msc,但阻止分子导致减少归航反应骨髓( 43]。趋化因子受体CXCR4也被卷入恶性细胞的入侵和epithelial-mesenchymal过渡(EMT) [ 44]。

,一般upregulation具备干细胞和间充质细胞的标记在体外培养观察二者,function-related的差别,对这些基因的分子,这等细胞治疗时都应该考虑msc。角膜基质细胞的潜力已经证明很多次在动物研究;然而,似乎某些妥协时应使用这种细胞的一部分 在体外研究模型,由于显著的不同 在活的有机体内和 在体外。

目前研究显示任何表型和基因型的区别二者产生的消化或外植体方法从中央或周边地区的角膜。然而,基因表达和蛋白质的天然角膜基质细胞体外扩大二者相比表明,后者可能会适应的 在活的有机体内细胞外基质利基的采用环境和血清的培养基。这样一个表达谱的变化显示了动态角膜基质细胞可以对环境生态位和可能伤口或炎症表面的眼睛和intracorneally。还有待进一步检验这种变化是可逆的,或如果它有利于细胞改变他们的基因和蛋白质表达如果用于治疗角膜,眼睛或其他条件在人类细胞疗法。最有可能的是,未来的活检从任何健康生活的一部分捐赠,尽管被入侵的过程,可以产生可行的,扩大种群的基质细胞表现出间充质干细胞的特性。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 作者的贡献

理查德·Nagymihaly和Zoltan Vereb贡献同样这项工作。

 确认

理查德Nagymihaly已经被欧盟支持成本行动BM1302旅行格兰特在主机站点上执行部分实验挪威干细胞研究中心/眼科研究中心,由挪威奥斯陆大学的。Goran Petrovski和干细胞研究实验室,眼科,医学院,匈牙利塞格德大学一直支持的国家大脑研究计划(2.3.2 KTIA_NAP_13-A_III / 9和ginop - - 15 - 2016 - 00006)(匈牙利),由欧盟和欧洲区域发展基金共同投资。此外,该项目还资助通过眼科研究中心(CER),奥斯陆大学医院眼科学系和挪威奥斯陆大学和金融机制下2009 - 2014项目合同编号。MSMT-28477/2014,项目7 f14156。

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