SCI 干细胞国际 1687 - 9678 1687 - 966 x Hindawi出版公司 10.1155 / 2016/9313425 9313425 研究文章 白血病干细胞Cell-Released微泡促进骨髓白血病细胞的存活和迁移,这些影响可以通过MicroRNA34a抑制过度 王 悦 1 程 钱 2 刘 京 2 越南盾 最小值 1 长 Weiwen 1 血液学部门 桂林医学院的附属医院 桂林 广西541001年 中国 2 血液学部门 第三个中南大学湘雅医院 长沙410013 中国 csu.edu.cn 2016年 5 4 2016年 2016年 27 01 2016年 07年 03 2016年 2016年 版权©2016王曰et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

白血病干细胞(lsc)扮演的主要角色在复发的急性髓系白血病(AML)。最近的证据表明,微泡(MVs)释放癌症干细胞可以促进肿瘤的生长和入侵。在这项研究中,我们调查是否LSCs-released MVs (LMVs)可以调节AML细胞的恶性肿瘤抑制微rna (miR)的过度表达,是否miR34a,能够中断这一过程。lsc转染了microrna的控制(miRCtrl)或miR34a模仿生产LMVs,分别定义为<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 。miR34a转染的影响在LSC扩散的影响<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 或<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 在扩散、迁移和细胞凋亡的AML细胞(LSC耗尽之后)测定。miR34a的水平目标,caspase-3和T细胞免疫球蛋白mucin-3 (Tim-3)进行了分析。结果表明,(1)<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 促进增殖和迁移和抑制细胞凋亡的AML细胞,这与miR34a有关赤字;(2)转染miR34a模仿抑制LSC扩散和miR34a水平增加<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 ;(3)<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 相比之下,产生相反的效果<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l ,与caspase-3和Tim-3水平的变化有关。总之,LMVs支持AML细胞恶性和调制miR34a可能为AML的管理提供一种新方法。

 1。介绍

急性髓系白血病(AML)是一种激进的疾病特点是快速扩散的不成熟骨髓髓系细胞导致不正常的造血作用[ 1]。尽管目前的治疗可以诱导缓解,许多AML患者最终复发由于休眠白血病干细胞的存在(lsc)对化疗产生抗药性。lsc能够自我更新、增殖和分化广泛AML的启动和维护的关键。众所周知,癌症干细胞通过分泌因素影响癌症恶化部分( 2]。微泡(MVs)膜囊泡释放细胞接受压力,激活,或细胞凋亡,从而调节细胞间通信通过转移蛋白mrna,小分子核糖核酸(大鹏)和细胞间脂质( 3, 4]。最近的证据表明,MVs从癌症干细胞分泌可能与周围的肿瘤细胞和基质细胞相互作用,可能参与肿瘤进展和转移( 5, 6]。例如,胃癌干细胞细胞分泌MVs被证明促进胃癌细胞增殖和迁移 5]。此外,MVs分泌肾癌干细胞诱导体外和体内血管生成和青睐肺转移 6]。然而,未知是否以及如何LSCs-derived MVs (LMVs)调节AML的恶意。

大鹏是小非编码rna转录后的基因调控的功能作为主要参与者在不同的细胞类型。失调的肿瘤抑制miR34a AML[都会涉及到 7]。被迫表达miR34a AML爆炸导致粒细胞分化,表明增加miR34a水平可能成为治疗对AML[有用 8]。此外,一些miR34a下游目标基因在AML被确定。例如,caspase-3报道作为程序性细胞死亡的重要分子,分化,和生存的AML [ 9, 10]。T细胞免疫球蛋白mucin-3 (Tim-3)是人类AML细胞中高度表达,这可能触发prosurvival和proinvasive信号( 11, 12]。因为MVs可以作为旁分泌或内分泌介质水平遗传信息转移到受体细胞( 13),我们建议过度miR34a lsc可能在LMVs同步增加miR34a的水平,这可能是能够废除LMVs-induced对AML的影响。

在这项研究中,我们旨在调查LMVs对扩散的影响,移民和AML细胞的凋亡。相关的miR34a caspase-3和Tim-3通路LMVs-mediated效果也被调查。

 2。材料和方法 2.1。细胞培养和排序

人类AML细胞株KG1a(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州)是维护在悬浮培养与杜尔贝科的修改鹰的介质(DMEM)补充10%胎牛血清的边后卫和100 U /毫升的青霉素和链霉素。自lsc被定义为CD34 + CD38−分数KG1a细胞和所有KG1a CD34 +细胞,丰富了lsc间接标记CD38-FITC抗体和anti-FITC微根据制造商的指示(Miltenyi研究,Bergisch格拉德巴赫,德国)。简单地说,细胞悬浮液在125 g离心10分钟,洗在磷酸盐(PBS)。然后,细胞颗粒在分离resuspended缓冲区(PBS包含0.5%牛血清白蛋白)和孵化CD38-FITC抗体为30分钟。与PBS洗涤后,细胞颗粒在分离resuspended缓冲区包含Anti-FITC微15分钟。经过几次清洗步骤,滤液(CD34 + CD38−细胞)收集LD列使用MidiMACS分离器系统。整个排序过程,细胞保持在4°C和立即通过流式细胞术分析。剩下的电池耗尽后lsc被定义为AML细胞,用于coculture研究。

 2.2。流式细胞术分析

1×10<年代up>5细胞在PBS和孵化resuspended LSC表面抗原抗体包括CD34和CD38 30分钟在4°C。担任负控制免疫球蛋白g同形像。lsc被用来生成LMVs coculture与AML细胞。

 2.3。细胞转染

5×10<年代up>5细胞悬浊液被播种在6-well板块和转染miR34a模仿(σ,100海里)或米尔控制(miRCtrl;σ,100海里)使用Lipofectamine 2000转染试剂(表达载体,CA) 2天。转染效果检测实时定量逆转录聚合酶链反应(存在)。

 2.4。中存在

总RNA提取试剂盒试剂(英杰公司)根据制造商的指示。互补脱氧核糖核酸合成使用miScript逆转录工具包(试剂盒)。进行了定量实时PCR miR34a特定的引物和miScript SYBR绿色PCR试剂盒(试剂盒)实时PCR系统(Bio-Rad)。小核RNA U6作为内部控制。所有的实验都进行了一式三份。相对表达miR34计算使用<我nl我ne-formula> 2 - - - - - - Δ Δ C T 方法( 14]。

 2.5。分离和鉴定< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M10 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miRCtrl < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >和< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M11公路" > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miR34a < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >

MVs产生lsc转染miRCtrl或miR34a模拟,分别定义为<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 。MVs收集从细胞培养基和差速离心纯化,之前报道( 15]。分泌MVs的粒子数量和规模分布是衡量NanoSight NS300仪器(莫尔文乐器,据英国)根据制造商的指示 16]。

 2.6。Coculture AML细胞与车辆,< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M14 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miRCtrl < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >或< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M15 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miR34a < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >

孤立的<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 或<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 (50<我t一个l我c> μg) resuspended新鲜培养基。AML细胞分别处理车辆(veh新鲜培养基),<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l ,<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 24小时在一个孵化器(37°C, 5%的公司<年代ub>2)。AML细胞被收集并受到细胞凋亡、增殖和迁移化验。

 2.7。细胞凋亡检测

终端原位dUTP-digoxigenin尼克结束标记(TUNEL)分析了根据制造商的指示(勃林格曼海姆,德国)。总之,细胞与4%多聚甲醛固定30分钟,随后permeabilized Triton x - 100 0.1% 0.1%柠檬酸钠为2分钟。这些细胞被孵化与50<我t一个l我c> μL TUNEL反应混合物1 h在37°C。标记细胞被流式细胞术分析。

 2.8。细胞增殖实验

细胞被播种在96孔板和添加10<我t一个l我c> μL甲基噻唑基四唑(麻省理工,12毫米;表达载体,纽约)的解决方案。4小时的潜伏期后,二甲亚砜(DMSO)异丙醇(1:1)溶剂直接添加到细胞悬液,孵化了30分钟。吸光度测量570海里。

 2.9。细胞迁移试验

细胞悬浮在无血清培养基,添加到商会24-well transwell板块(纽约康宁Inc .)。下室挤满了500<我t一个l我c> μL完全培养基。Transwell盘子被孵化24小时37°C细胞孵化器。细胞迁移和4%多聚甲醛固定,沾0.1%结晶紫,列举十光显微镜下随机选择的字段。

 2.10。免疫印迹

提取蛋白质从细胞裂解缓冲含有蛋白酶抑制剂(罗氏诊断)。蛋白质是由sds - page分离和转移到PVDF膜。PVDF膜阻止了5%脱脂牛奶1 x Tris-buffered盐水Tween-20 (TBST, pH值7.6)在室温下(RT) 1 h,然后孵化主要抗体Tim-3 (1: 200;圣克鲁斯在一夜之间)在4°C。<我t一个l我c> β肌动蛋白(1:40000;σ)是用于正常蛋白质加载。TBST三次,清洗后膜是孵化与辣根过氧化物酶(合)共轭免疫球蛋白g(1: 40000年,杰克逊实验室)1小时在rt,屁股然后发达与发展中解决方案增强化学发光和量化。

 2.11。酶联免疫吸附试验(ELISA)

Caspase-3活动AML细胞不同群体使用Quantikine化验Caspase-3(研发系统)如前所报道( 17]。总之,AML细胞收获,在PBS洗,resuspended在提取含有蛋白酶抑制剂的缓冲区。标准和样品提取物添加到微型板块预镀caspase-3特定抗体。合底物被添加到每个。在450 nm caspase-3水平测定。

 2.12。统计分析

统计分析是使用SPSS软件16.0版本完成的。所有实验进行了至少三次。数据显示为±SEM,除非另有注明。比较了两组学生的<我t一个l我c> t以及。多个由单向方差分析进行比较。所有情况下,设置为统计学意义<我nl我ne-formula> P < 0.05 。

 3所示。结果 3.1。表征lsc

确定lsc KG1a细胞的比例和lsc是否成功地从KG1a分离细胞,KG1a细胞和microbeads-isolated lsc沾CD34-PE CD38-FITC抗体( 18, 19),通过流式细胞术分析。如图 1(一),KG1a细胞含有约32.8%的CD34 + CD38−细胞。microbead排序过程后,95%以上的细胞CD34 + CD38−和考虑lsc。

LSC表征和LSC扩散miR34a进行靶向治疗的效果。(一)代表流仪CD34-PE与CD38-FITC的情节。CD34的表达和CD38 KG1a细胞前后排序(左)和排序(右)。(b) lsc受到车辆(veh)治疗和转染miRCtrl或miR34a模拟显示和2天后miR34a水平测量中存在。(c) lsc受到veh miRCtrl转染或治疗miR34a模仿转染。2天后,MTT比色LSC扩散的分析。数据表示的意思是±SEM。<我nl我ne-formula> ∗ P < 0.05 与阿明费;<我nl我ne-formula> # P < 0.05 而miRCtrl。

 3.2。在LSC miR34a超扩散的影响

miR34a模仿的转染效率是评价中存在(图 1 (b))。正如所料,miR34a水平lsc miR34a模仿转染后显著升高与miRCtrl相比转染或阿明费。这一发现表明成功的过度的miR34a lsc。过度的miR34a lsc显著抑制增殖能力(与控制,<我nl我ne-formula> P < 0.05 ;与miRCtrl,<我nl我ne-formula> P < 0.05 ;图 1 (c))。

 3.3。粒子浓度和miR34a LMVs, < inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M25公路" > < mml:多行文字> LM < / mml:多行文字> < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> V < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miRCtrl < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml:数学> < / inline-formula >,和< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M26 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miR34a < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >

如图 2(一个),NTA分析显示的数量<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 高于LMVs还是<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l ,虽然没有明显的大小分布的变化。更有趣的是,在LMVs miR34a的表达是显示在相同的模式作为他们的父母lsc。如图 2(一个),存在试验表明miR34a水平<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 远远高于LMVs还是<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 。没有显著差异miR34a LMVs与水平<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 。

粒子数量和miR-34a LMVs水平,<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l ,<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 。(一)代表NTA块MV大小分布(左)和浓度(右)。(b)中存在LMVs miR-34a水平的分析,<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l ,<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 。数据表示的意思是±SEM。<我nl我ne-formula> ∗ P < 0.05 与LMVs;<我nl我ne-formula> # P < 0.05 与<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 。LMVs代表MVs产生lsc没有转染;<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 代表MVs产生与miRCtrl lsc转染;和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 表示与miR34a模仿MVs lsc转染产生。

 3.4。的影响< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M41 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miRCtrl < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >和< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M42 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miR34a < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >在细胞凋亡、增殖和迁移的AML细胞

AML细胞凋亡(图 3)是被TUNEL染色和流式细胞术分析。AML细胞的凋亡是coincubation后下降<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 相比与阿明费或<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 (<我nl我ne-formula> 11.29 ± 1.59 %与<我nl我ne-formula> 26.70 ± 1.90 %,<我nl我ne-formula> P < 0.05 与阿明费;<我nl我ne-formula> 11.29 ± 1.59 %与<我nl我ne-formula> 24.53 ± 2.30 %,<我nl我ne-formula> P < 0.05 与<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 ;和<我nl我ne-formula> n = 3 )。细胞凋亡veh-treated之间没有显著差异<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 治疗AML细胞(<我nl我ne-formula> 26.70 ± 1.90 %与<我nl我ne-formula> 24.53 ± 2.30 %,<我nl我ne-formula> P = 0.63 ;<我nl我ne-formula> n = 3 )。此外,扩散(图 4(一)(图)和迁移能力 4 (b))的AML细胞增强coincubation后<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l (<我nl我ne-formula> P < 0.05 与阿明费;<我nl我ne-formula> n = 3 ),而这些影响在AML细胞coincubated缺席<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 (<我nl我ne-formula> P > 0.05 与阿明费;<我nl我ne-formula> n = 3 )。

的影响<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 AML细胞凋亡。(一)代表流仪块AML细胞凋亡(FITC-TUNEL阳性细胞百分比)与veh coincubation后<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l ,或<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 。(b)总结AML细胞凋亡的数据。数据表示的意思是±SEM。<我nl我ne-formula> ∗ P < 0.05 与阿明费;<我nl我ne-formula> # P < 0.05 与<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 。阿明费:新鲜培养基;<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l :LMVs产生miRCtrl转染lsc;和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 :从miR34a模仿转染lsc LMVs生成。

的影响<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 AML细胞增殖和迁移。(一)总结数据MTT比色的AML细胞增殖试验。(b)总结AML细胞迁移的数据由transwell化验。数据表示的意思是±SEM。<我nl我ne-formula> ∗ P < 0.05 与阿明费;<我nl我ne-formula> # P < 0.05 与<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 。阿明费:新鲜培养基;<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l :LMVs产生miRCtrl转染lsc;和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 :从miR34a模仿转染lsc LMVs生成。

 3.5。的影响< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M80 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miRCtrl < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula >和< inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M81 " > < mml: mrow > < mml: msup > < mml: mrow > < mml:多行文字> LMVs < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < mml: mrow > < mml:多行文字> miR34a < / mml:多行文字> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml: mrow > < / mml:数学> < / inline-formula > Caspase-3活动与Tim-3表达AML细胞

coincubated caspase-3减少在AML细胞的活动<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l (<我nl我ne-formula> P < 0.05 与阿明费;图 5(一个))。<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 显著增加的活动caspase-3 AML细胞(<我nl我ne-formula> P < 0.05 与阿明费;图 5(一个))。Tim-3表达的调节<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 治疗AML细胞(<我nl我ne-formula> P < 0.05 与阿明费;图 5 (b)),但中表达下调<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 治疗AML细胞(<我nl我ne-formula> P < 0.05 与阿明费;图 5 (b))。

的影响<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 caspase-3和Tim-3蛋白质的水平在AML细胞。(a)的活动caspase-3 AML细胞由ELISA。(b) Tim-3蛋白的表达在AML细胞由蛋白质印迹。数据表示的意思是±SEM。<我nl我ne-formula> ∗ P < 0.05 与阿明费;<我nl我ne-formula> # P < 0.05 与<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l 。阿明费:新鲜培养基;<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R C t r l :LMVs产生miRCtrl转染lsc;和<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 :从miR34a模仿转染lsc LMVs生成。

 4所示。讨论

有几本研究的主要发现。首先,我们证明了LMVs促进扩散、迁移,和生存的AML细胞,这与miR34a赤字因为过度miR34a lsc抑制其增殖。其次,lsc miR34a模仿转染生成含有高水平的miR34a LMVs(例如,<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 ),这对AML细胞相比LMVs起到相反的作用。第三,LMVs的不同影响<我nl我ne-formula> l 米 V 年代 米 我 R 34 一个 对AML细胞与不同调节能力有关miR34a-targeted caspase-3和Tim-3通路。

癌症干细胞的概念已经提出多年,近年来受到越来越多的关注。有确凿的证据,AML的lsc包含一个族群主要负责AML的耐火材料和抵抗化疗和免疫治疗( 18, 20., 21]。然而,潜在的机制尚未完全了解。在我们的研究中,我们孤立CD34 + CD38−分数(lsc) KG1a细胞通过immune-magnetic microbead方法之前报道( 18用于生成MVs)和培养。高水平的MVs被发现在各种疾病包括癌症,表明他们可能作为诊断和预后的工具( 22]。此外,MVs可以作为自分泌或旁分泌介质,因为他们可以合并与靶细胞发挥广泛的行为( 13]而LMVs是否影响AML的生存和恶意仍然未知。在我们的研究中,我们首次发现LMVs能促进增殖和migrative能力,防止AML细胞的凋亡。最近的一项研究表明,MVs源自肾癌干细胞诱导内皮细胞生长异常,入侵矩阵,和抗细胞凋亡 6]。因此,我们的研究结果提供了新的见解之前的观点( 5, 6),这表明MVs源自癌症干细胞可以改变周围的肿瘤和间质细胞的表型,创造良好的肿瘤微环境。

接下来,我们检查的潜在机制LMVs-induced影响AML细胞。最近提议,癌症干细胞不仅引发癌症,还支持癌症的发展由于其致癌的内容( 23]。MVs被认为是理想的车辆将癌症干细胞的内容转移到旁观者的细胞。以前的研究也表明RNA内容(主要是大鹏和mrna) MVs扮演关键角色,因为MVs的核糖核酸酶治疗显著抑制了MVs的生物效应( 6]。因此,我们假设重组的米尔内容LMVs能够改变LMVs在AML细胞的影响。肿瘤抑制miR34a在大多数癌症,据报道已经表达下调和恢复miR34a可以诱导细胞凋亡,增强癌细胞的化学敏感性 24, 25]。我们目前的研究发现,过度的miR34a lsc不仅显著抑制其增殖能力也产生LMVs含有高水平的miR34a可以抑制LMVs在AML细胞的影响。这些数据表明miR34a的潜在作用维护lsc LMVs-mediated效应,这可能提供了一个新的目标的方式lsc调节lsc之间的交互以及AML细胞。

下游靶基因miR34a caspase-3和Tim-3等已确定在AML [ 9- - - - - - 12]。的主要效应细胞死亡,caspase-3活动是生存在AML的预测 9, 10]。一项研究报道,过度的miR34a显著诱导胰腺<我t一个l我c> β细胞凋亡伴随着caspase-3活动增加( 26]。在我们的研究中,我们发现LMVs AML细胞,可以显著减少caspase-3活动由miR34a抑制过度。Tim-3人类AML细胞中高度表达,可以作为一种很有前途的候选人AML疗法( 11, 12]。之前的一份报告表明,Tim-3的高表达与高转移潜能和总生存期宫颈癌(短 27]。寻找米尔目标通过使用TargetScan证实Tim-3有一个假定的miR34a绑定网站在其3′utr。我们发现LMVs显著调节Tim-3 AML细胞和蛋白表达的这些影响被LMVs携带高水平的miR34a逆转。然而,我们并没有直接测试miR34a是否可以通过绑定到目标Tim-3 mRNA 3′UTR并调查是否过度Tim-3蛋白质可以挽救miR34a进行靶向治疗的影响。我们承认有一些限制在我们的研究中,有必要把这些问题融入我们的未来的工作。特别注意,miR34a过度可能部分块LMVs在AML细胞增殖的影响,移民,和扩散,尽管它能够显著提升caspase-3活动和减少Tim-3 AML细胞中表达;这些数据表明,其他大鹏和相关机制也可能参与LMVs-induced效果。的责任人,miR34a LMVs及其下游目标,caspase-3 Tim-3,恶意的AML都在我们的研究中显示了。然而,LMVs的角色的详细机制需要进一步调查。

 5。结论

我们的数据表明,LMVs能够促进AML细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡,这是与miR34a的赤字。恢复miR34a不仅抑制了LSC扩散,还能抑制这些LMVs对AML细胞通过调节caspase-3和Tim-3水平。这些发现表明LMVs支持AML细胞的恶性肿瘤和定位的miR34a LMVs可以提供治疗AML的新方法。

 相互竞争的利益

作者宣称没有一个任何形式的利益冲突与工作有关。

 确认

这项工作是由中国国家自然科学基金(国家自然科学基金委,不。81560032分钟盾)。

 屋檐 c·J。 汉弗莱斯 r·K。 急性髓系白血病和Wnt通路 《新英格兰医学杂志》上 2010年 362年 24 2326年 2327年 10.1056 / nejmcibr1003522 2 - s2.0 - 77953702668 Velasco-Velazquez m·A。 波波夫 诉M。 Lisanti m P。 Pestell r·G。 乳腺癌干细胞的角色转移和治疗意义 美国病理学杂志》上 2011年 179年 1 2 11 10.1016 / j.ajpath.2011.03.005 2 - s2.0 - 80052479916 莫斯 美国F。 韦伯 C。 微粒:小说的主人公细胞间信息交换的通信网络 循环研究 2010年 107年 9 1047年 1057年 10.1161 / circresaha.110.226456 2 - s2.0 - 78349285166 联手 J。 Wysoczynski M。 哈耶克 F。 Janowska-Wieczorek 一个。 联手 m Z。 Membrane-derived微泡:重要的和被低估的介质细胞间通讯 白血病 2006年 20. 9 1487年 1495年 10.1038 / sj.leu.2404296 2 - s2.0 - 33747616431 王 M。 赵 C。 史 H。 张 B。 张 l 张 X。 王 年代。 吴 X。 杨 T。 黄 F。 蔡 J。 朱 Q。 朱 W。 钱 H。 徐 W。 管制microrna在胃癌tissue-derived间充质干细胞:新颖的生物标志物和胃癌的机制 英国癌症杂志》 2014年 110年 5 1199年 1210年 10.1038 / bjc.2014.14 2 - s2.0 - 84895779700 画眉山庄 C。 Tapparo M。 Collino F。 Vitillo l Damasco C。 Deregibus m . C。 Tetta C。 Bussolati B。 Camussi G。 微泡释放人类肾癌干细胞刺激血管生成,形成肺premetastatic利基 癌症研究 2011年 71年 15 5346年 5356年 10.1158 / 0008 - 5472. - 11 - 0241 2 - s2.0 - 79960960417 王 X。 李 J。 越南盾 K。 林 F。 长 M。 欧阳 Y。 魏 J。 程ydF4y2Ba X。 翁 Y。 他 T。 张 H。 肿瘤抑制miR-34a PD-L1目标和功能作为一个潜在的目标在急性髓系白血病免疫治疗 细胞信号 2015年 27 3 443年 452年 10.1016 / j.cellsig.2014.12.003 2 - s2.0 - 84921028577 Pulikkan j . A。 Peramangalam p S。 Dengler V。 何 p。 Preudhomme C。 Meshinchi 年代。 Christopeit M。 Nibourel O。 Muller-Tidow C。 Bohlander 美国K。 Tenen d·G。 贝 G。 C / EBP<我t一个l我c> α监管microRNA-34a目标E2F3在粒细胞生成和抑制在AML CEBPA突变 血 2010年 116年 25 5638年 5649年 10.1182 / - 2010 - 04 - 281600血 2 - s2.0 - 78650459322 陆 Y。 程ydF4y2Ba G.-Q。 还存在效应和白血病 国际细胞生物学杂志》上 2011年 2011年 8 738301年 10.1155 / 2011/738301 Estrov Z。 Thall p F。 Talpaz M。 Estey e . H。 Kantarjian h . M。 Andreeff M。 哈里斯 D。 范 Q。 Walterscheid M。 Kornblau s M。 半胱天冬酶2和半胱天冬酶3蛋白质含量的预测生存在急性髓系白血病 血 1998年 92年 9 3090年 3097年 2 - s2.0 - 0032211188 席尔瓦 i G。 吉布斯 b·F。 Bardelli M。 Varani l Sumbayev 诉V。 微分表达式和生化活性的免疫受体Tim-3在健康和人类骨髓恶性细胞 Oncotarget 2015年 6 32 33823年 33833年 10.18632 / oncotarget.5257 2 - s2.0 - 84946017988 普罗霍罗夫 一个。 吉布斯 b·F。 Bardelli M。 Ruegg l Fasler-Kan E。 Varani l Sumbayev 诉V。 免疫受体Tim-3介导激活PI3激酶/ mTOR和HIF-1通路在人类骨髓白血病细胞 国际生物化学和细胞生物学杂志》上 2015年 59 11 20. 10.1016 / j.biocel.2014.11.017 2 - s2.0 - 84917690962 Biancone l 布鲁诺 年代。 Deregibus m . C。 Tetta C。 Camussi G。 间充质干细胞治疗潜力的微泡 肾脏透析移植 2012年 27 8 3037年 3042年 10.1093 /无损检测/ gfs168 2 - s2.0 - 84864598081 程 h·S。 Sivachandran N。 刘 一个。 Boudreau E。 赵 j·L。 巴尔的摩 D。 Delgado-Olguin P。 Cybulsky m . I。 鱼 j·E。 微rna - 146压制内皮激活通过抑制促炎症通路 EMBO分子医学 2013年 5 7 949年 966年 10.1002 / emmm.201202318 2 - s2.0 - 84880044900 斯库格 J。 Wurdinger T。 范Rijn 年代。 梅耶尔 d . H。 Gainche l 咖喱 w·T。 卡特 b S。 Krichevsky a . M。 方法 x O。 胶质母细胞瘤微泡运输RNA和蛋白质,促进肿瘤的生长,并提供诊断的生物标志物 自然细胞生物学 2008年 10 12 1470年 1476年 10.1038 / ncb1800 2 - s2.0 - 57049103401 Dragovic r。 加德纳 C。 布鲁克斯 答:S。 Tannetta d S。 弗格森 d . j . P。 洞 P。 卡尔 B。 瑞德曼 c·w·G。 哈里斯 a . L。 多布森 p . J。 哈里森 P。 萨金特 i L。 使用纳米颗粒大小和表现型的细胞囊泡跟踪分析 纳米医学:纳米技术、生物学和医学 2011年 7 6 780年 788年 10.1016 / j.nano.2011.04.003 2 - s2.0 - 80055118968 Liagre B。 贝特朗 J。 分类帐 d . Y。 Beneytout J.-L。 薯蓣皂苷配基,植物类固醇,cox - 2缺乏K562细胞凋亡p38 MAP激酶信号的激活和抑制NF-kappaB绑定 国际分子医学杂志》上 2005年 16 6 1095年 1101年 2 - s2.0 - 33644878740 她 M。 妞妞 X。 程ydF4y2Ba X。 李 J。 周 M。 他 Y。 勒 Y。 郭 K。 抗白血病干细胞样细胞AML细胞株KG1a自然杀手细胞介导细胞毒性 癌症的信 2012年 318年 2 173年 179年 10.1016 / j.canlet.2011.12.017 2 - s2.0 - 84858150371 张 Y。 周 s Y。 杨ydF4y2Ba h . Z。 徐 D D。 程ydF4y2Ba h . X。 王 x Y。 王 X。 刘 y . T。 张 l 王 年代。 周 p . J。 傅 w . Y。 阮 B . B。 马 d . L。 王 Y。 刘 问:Y。 任 Z。 刘 Z。 张 R。 王 y F。 mir - 203抑制白血病干细胞的增殖和自我更新目标存活素和Bmi-1 科学报告 2016年 6 19995年 10.1038 / srep19995 美国格柏公司 j . M。 史密斯 b D。 Ngwang B。 张 H。 Vala m . S。 Morsberger l Galkin 年代。 收集器 m . I。 珀金斯 B。 李维斯 m·J。 格里芬 c。 考斯风 美国J。 Borowitz m·J。 卡普 j·E。 琼斯 r . J。 白血病CD34的临床相关的人口<年代up>+CD38<年代up>−在急性髓系白血病细胞 血 2012年 119年 15 3571年 3577年 10.1182 / - 2011 - 06 - 364182血 2 - s2.0 - 84859854912 霍顿 美国J。 ·亨特利 b . j . P。 急性髓系白血病干细胞生物学的最新进展 Haematologica 2012年 97年 7 966年 974年 10.3324 / haematol.2011.054734 2 - s2.0 - 84863910743 j H。 Willms 一个。 Lukacs-Kornek V。 Kornek M。 细胞外泡分析和使用作为潜在疾病生物标志物 免疫学前沿 2014年 5日,第413条 10.3389 / fimmu.2014.00413 2 - s2.0 - 84919394606 张 X。 朱 W。 张 J。 霍 年代。 周 l 顾 Z。 张 M。 微rna - 650目标ING4促进胃癌致瘤性 生物化学和生物物理研究通信 2010年 395年 2 275年 280年 10.1016 / j.bbrc.2010.04.005 2 - s2.0 - 77951622745 康 l 毛 J。 道 Y。 首歌 B。 马 W。 陆 Y。 赵 l 李 J。 杨 B。 李 l MicroRNA-34a抑制乳腺癌干细胞的特征,表达下调Notch1途径 癌症科学 2015年 106年 6 700年 708年 10.1111 / cas.12656 2 - s2.0 - 84930403485 段 W。 徐 Y。 越南盾 Y。 曹 l 通 J。 周 X。 异位表达miR-34a提高非小细胞肺癌细胞的辐射敏感性,部分是通过抑制LyGDI信号通路 辐射研究期刊》的研究 2013年 54 4 611年 619年 10.1093 / r·/ rrs136 2 - s2.0 - 84881363206 林 X。 关 H。 黄 Z。 刘 J。 李 H。 魏 G。 曹 X。 李 Y。 Downregulation mir-34a bcl - 2表达的调节palmitate-induced min6细胞凋亡 糖尿病研究期刊》的研究 2014年 2014年 7 258695年 10.1155 / 2014/258695 2 - s2.0 - 84900037375 曹 Y。 周 X。 黄 X。 李 Q。 高 l 江 l 黄 M。 周 J。 Tim-3表达宫颈癌促进肿瘤转移 《公共科学图书馆•综合》 2013年 8 1 e53834 10.1371 / journal.pone.0053834 2 - s2.0 - 84872404413