SCI 干细胞国际 1687 - 9678 1687 - 966 x Hindawi出版公司 10.1155 / 2016/6853081 6853081 研究文章 细胞外Matrix-Dependent代集成,Xeno-Free iPS细胞使用修改后的信使rna转染方法 李 Kang-In 1 李 舒英 1 黄 Dong-Youn 1 李 茎的 生物医学科学系的 CHA大学 凭借 京畿道 韩国 cha.ac.kr 2016年 12 1 2016年 2016年 04 09年 2015年 29日 11 2015年 12 1 2016年 2016年 版权©2016 Kang-In李et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

人类诱导多能干细胞(iPS细胞)在再生医学领域蕴含着巨大的希望,尤其是immune-compatible细胞疗法。最重要的安全问题,必须解决“诱导多能性”细胞的临床应用包括前代“footprint-free”和“xeno-free”“诱导多能性”细胞。在这项研究中,我们试图检查是否一个细胞外基质(ECM)建立xeno-free文化系统,我们最近建立了可以一起microRNA-enhanced信使rna重组方法一代临床安全的“诱导多能性”细胞。该方法的显著特点是使用xeno-free / feeder-free文化系统“诱导多能性”细胞的生成和扩张,而不是传统的劳动密集型的文化系统使用人类馈线细胞或人类feeder-conditioned介质和增强mRNA-mediated重组通过小分子核糖核酸的交付。引人注目的是,我们观察到早期的“诱导多能性”细胞的出现殖民地(~ 11天),实质性的重组效率(0.2 ~ -0.3%),和高的百分比ESC-like殖民地之间的总殖民地(~ 87.5%),表明加强动力学和重编程效率。因此,合并后的方法建立在这项研究提供了一个宝贵的平台的产生和扩张(即临床安全。、集成和xeno-free)“诱导多能性”细胞,促进immune-matched细胞疗法在不久的将来。

 1。介绍

发现诱导多能干细胞(iPS细胞)开设了一个新的途径缺失和immune-compatible细胞替代疗法( 1]。

最初的方法用于介绍重组基因对人类成纤维细胞依赖逆转录病毒、慢病毒载体,导致不受欢迎的随机转基因插入染色体( 2, 3]。转基因的染色体整合这些病毒载体可能导致肿瘤的形成取决于插入站点,显然是在先前的基因治疗试验和x染色体相关重度联合免疫缺陷症( 4- - - - - - 6]。此外,集成转基因可能持续表达重组后由于不完整的沉默,或者在某些情况下,可能会引起活化产生的充分表达。

因此,生成“诱导多能性”细胞的方法没有染色体整合外源重组基因发展迅速。这些方法包括游离质粒转染( 7- - - - - - 9),仙台virus-mediated基因传递( 10),信使rna转染( 11]。

其中三个integration-free方法,信使rna转染方法显示几个独特的优势。例如,在游离质粒转染相比,信使rna转染完全避免染色体整合的可能性。此外,与游离质粒转染和仙台病毒感染,信使rna转染不需要长时间使消除挥之不去的外源基因表达由于短半衰期的mRNA。然而,17连续每日转染的mrna的要求( 11, 12非常费力,可能限制了该方法的实用生产良好生产规范(GMP),年级“诱导多能性”细胞细胞疗法。因此,需要建立一个更有效和方便的方法来生成“诱导多能性”细胞使用信使rna。

要考虑的另一个重要的问题关于“诱导多能性”细胞的临床应用是这些细胞的生成和扩展严格xeno-free条件下。Xeno-free文化防止xenopathogen传输和免疫并发症引起的非人抗原( 13, 14]。执行mRNA-mediated重组,初始和后续研究使用人类馈线细胞,和人类新生儿纤维母细胞,(足够的)条件培养基( 11, 12, 15, 16]。在重组期间,尽管这些方法xeno-free条件制备人类馈线细胞或人类feeder-conditioned中非常繁琐和劳动密集型。因此,有很大的需求建立一种更简单和更方便mRNA-mediated重组协议细胞替代疗法。

在这项研究中,我们试图建立这样一个方法结合先前建立细胞外基质(ECM)建立xeno-free / feeder-free人类多能干细胞(hPSC)文化系统( 17)和一种改进mRNA-mediated重组协议。因为临床安全“诱导多能性”细胞所需的细胞替代疗法,这项研究提供了一个有用的平台,促进未来细胞治疗方法使用“诱导多能性”细胞。

 2。材料和方法 2.1。细胞培养

这项研究是通过盆唐CHA CHA大学医院的伦理委员会,大韩民国(申请号:KNC12005)。成人真皮成纤维细胞(美国ScienCell研究实验室,卡尔斯巴德,CA)在DMEM培养(WelGENE、大邱、韩国)补充10%胎牛血清的边后卫,2毫米谷酰胺(表达载体)和1 x青霉素和链霉素(P / S)(美国所有从表达载体,卡尔斯巴德,CA)。

人类“诱导多能性”细胞培养在vitronectin XF(美国麦迪逊Primorigen生物科学)涂布文化菜肴使用我们最近建立了xeno-free / feeder-free hPSC培养基与少量修改 17]。简而言之,介质由DMEM / F12, 15%击倒SR XenoFree CTS, 1 x不必要的氨基酸(NEAA), 1 x GlutaMAX, 0.1毫米 β巯基乙醇,1 x P / S从英杰公司(所有),10 ng / mL碱性纤维母细胞生长因子(bFGF) (CHA生物科技有限公司、大田、韩国),10 nM trichostatin (TSA) (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国),5嗯Go6983 (Tocris Ellisville,密苏里州,美国),和1毫米dorsomorphin盐酸盐(Tocris)。

 2.2。集成和Xeno-Free iPS细胞的生成

修改后的mRNA-based重组试剂用于本研究一种礼物Stemgent, Inc .(美国Cambridge, MA)。该系统由微rna鸡尾酒的解决方案(20 uM)含有小分子核糖核酸执行重组功能,包括mir302a-d和mir367,和一个包含mRNA的mRNA鸡尾酒Oct4、Sox2, Klf4,原癌基因,和Lin28摩尔化学计量学3:1:1:1:1,分别。每个信使rna是包括100 ng /浓度 μl“诱导多能性”细胞的生成使用提供的试剂根据协议执行Stemgent, Inc .,少量修改( 11]。

生成“诱导多能性”细胞,首先,成人真皮成纤维细胞被播种密度 5 × 10 4 每口井的细胞与vitronectin 6-well盘预镀XF (10 µg / mL)。第二天,培养基是我们xeno-free替换/ feeder-free hPSC培养基转染前2小时。重组B18R蛋白质(工作浓度,200 ng / µL) (eBioscience Inc .,圣地亚哥,美国),增加了1型干扰素的抑制剂,在这个时间点,促进RNA转染后细胞的可行性。Stemfect RNA转染工具包(Stemgent, Inc .)是用于RNA转染:1 µ3.5 g的mRNA鸡尾酒和/或 µL的microRNA鸡尾酒(20 µM)混合Stemfect转染缓冲管(总量的50 µL)和4 µL Stemfect RNA转染试剂的添加到Stemfect转染缓冲管(总量的50 µL)。第二管的混合添加到第一个管,紧随其后的是温柔的吸量总数的100 µL的体积相结合的解决方案。孵化RNA-liposome复杂15分钟后在室温下,被添加到混合介质drop-wise的方式温柔颤抖的菜肴,以确保均匀分布RNA-liposome复杂的井。孵化后4小时的细胞,中替换为2毫升新鲜xeno-free / feeder-free hPSC培养基。信使rna转染进行连续11天开始2天,和微rna转染细胞后进行天1和5播种(两只)。“诱导多能性”细胞的出现殖民地监控每一天,和一个单独的殖民地被选中约天-通过机械方法为进一步克隆扩张。

 2.3。定量反向Transcriptase-Polymerase连锁反应(存在)

总RNA分离使用NucleoSpin RNA II工具包(Macherey-NagelGmbH & Co .公斤,Duren,德国)根据制造商的指示。从1互补DNA合成(互补) µ总RNA的g使用ReverTra Ace qPCR RT工具包(Toyobo,大阪,日本),并使用权力存在分析SYBR绿色PCR反应混合液(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)和StepOnePlus实时PCR系统(应用生物系统公司)在下列情况下:40周期在95°C DNA变性5秒,DNA与每一对引物退火30秒55 - 63°C,和聚合在72°C,持续30秒。人类的 β肌动蛋白基因作为标准化控制。中使用的引物中存在网上实验补充表1中列出 http://dx.doi.org/10.1155/2016/6853081。

 2.4。体外<斜体> < /斜体>分化试验

测试他们的多能性,“诱导多能性”细胞殖民地机械分离和培养悬浮在培养皿(SPL Lifesciences、Pocheon、韩国)胚状体的身体(EB)介质(DMEM / F12, 10%击倒SR XenoFree CTS, 1 x NEAA 1 x P / S,和0.1毫米 β巯基乙醇;所有从英杰公司)。三维培养5 - 10天后,EBs附着在基底膜基质(美国BD生物科学,贝德福德,MA)涂层的幻灯片,进一步培养15天在分化培养基(DMEM / F12 NEAA补充1%,1 x P / S, 0.1毫米 β巯基乙醇,10%的边后卫内胚层、中胚层或DMEM / F12补充1 x NEAA, 1% P / S, 0.1毫米 β巯基乙醇、1 x N2补充和10 ng bFGF的外胚层)。几个具有代表性的标记特定衍生品的这三个胚芽层分化后被用于免疫染色。本研究中使用的抗体补充表2中列出。

 2.5。畸胎瘤的形成

约 2 × 10 6 “诱导多能性”细胞/鼠标是肌内注入NOD / SCID小鼠的大腿,和群众肿瘤解剖在9 - 12周后注射。存在的所有三个胚层结构后的肿瘤质量检查与苏木精和伊红染色。

 2.6。核型分析

G-banding分析iPS细胞收获从T-25烧瓶进行SamKwang医学实验室(Smlab,首尔,韩国)。

 2.7。DNA指纹分析

确认“诱导多能性”细胞确实源自“诱导多能性”细胞生成,使用的成纤维细胞基因组DNA的DNA指纹“诱导多能性”细胞和成纤维细胞比较基因信息中心在韩国(首尔,韩国)。

 2.8。酸性亚硫酸盐测序

人类成纤维细胞的基因组DNA, H9-hESCs,“诱导多能性”细胞提取使用Exgene组织SV工具包(GeneAll生物技术,首尔,韩国)和DNA治疗与亚硫酸氢EpiTech工具包(试剂盒GmbH是一家现代化、希尔登,德国)亚硫酸氢转换根据制造商的指示。“CpG-rich”人类Oct4和Nanog基因的启动子区域放大使用S1表中列出的特定PCR引物。PCR扩增产品subcloned到助教克隆载体(RBC生物科学公司,新台北市,台湾),并进行测序分析。

 2.9。全球基因表达分析

总RNA样本准备使用NucleoSpin RNA II工具包(Duren Mahcerey-Nagel GmbH & Co . KG,德国)根据制造商的协议。全球基因表达的分析进行Macrogen, Inc .(首尔,韩国)使用2 µ克总RNA和HumanHT-12 v4表达式BeadChip (Illumina公司,Inc .,圣地亚哥,美国)。微阵列数据存入公共存储库,如基因表达综合(GEO、系列记录GSE68035)。

 3所示。结果 3.1。代的韩国帝王,Footprint-Free iPS细胞通过RNA转染的ECM-Based Feeder-Independent文化系统

在我们的实验中,我们试图生成xeno-free和integration-free iPS细胞通过结合基于ECM (vitronectin) xeno-free / feeder-free hPSC文化系统mRNA-mediated重组方法。信使rna重组方法在本研究中被修改,使用微rna鸡尾酒重编程效率提高。微鸡尾酒转染成纤维母细胞的两倍,在天1和5细胞后播种。Oct4、Sox2 Klf4,原癌基因,Lin28信使rna转染到成纤维细胞连续11天开始播种后2天。mesenchymal-to-epithelial过渡的现象(遇到)天3和5(图之间的明显 1 (b)上面一行,左两个面板)。初始ESC-like殖民地的迹象(紧密与清晰的边界,是由细胞细胞团nucleus-to-cytoplasm比率高,明显的核仁)开始出现在11天(图 1 (b)上面一行,最右面板),尽管他们白天13(图变得更明显 1 (b)底下一行最左面板)后细胞播种。如果在天14 - 16细胞变得过于密集,他们分成3碗。大约每个ESC-like殖民地被选在天20 - 22和培养使用我们vitronectin-based xeno-free / feeder-free hPSC文化系统的扩张。ESC-like殖民地形成的效率大约是0.2 - -0.3%(图 1 (c)),引人注目的是,ESC-like殖民地之间总殖民地的比例非常高(~ 87.5%)(图 1 (d))。ESC-like殖民地中,我们选择两个克隆,称为mRNA-iPSC2 mRNA-iPSC11,被用于进一步的实验。DNA指纹分析证实,这些“诱导多能性”细胞是来源于最初的成纤维细胞用于“诱导多能性”细胞生成而不是从污染其他多能干细胞(补充表3)。

rna介导的一代“诱导多能性”细胞使用ECM-based xeno-free / feeder-free hPSC媒介。(一)实验设计的示意图表示。成人真皮成纤维细胞被播种6-well板( 5 × 10 4 细胞每口井)和受到多个转染如计划所示。(b) ESC-like殖民地开始出现在11天之后细胞播种(见箭头的提示在白色的圆的中心, 右上方的面板)。广场内的数量在每个面板的右下角显示的天数后通过细胞播种。酒吧规模:100 µm。(c)图形显示生成ESC-like殖民地的数量每10000人成纤维细胞最初播种。(d)的百分比ESC-like殖民地之间的总殖民地提出了图形格式。

综上所述,我们的研究结果显示,效率高,加速我们的重编程过程动力学。

 3.2。“诱导多能性”细胞来自成纤维细胞显示多能干细胞的典型特征

通过多次积极的“诱导多能性”细胞碱性磷酸酶染色,早期的标志(图的未分化细胞 2)。所有的殖民地表现出锋利的边界和圆形的形状,来显示他们的未分化状态。更仔细地检查这些iPS细胞是否表达的标记未分化的细胞,免疫染色进行已经被几个特定抗原。Oct4、Sox2 SSEA4、Tra-1-60 tra1 - 81强劲“诱导多能性”细胞中表达,通过在我们的15倍ECM-based xeno-free / feeder-free hPSC文化系统(图 2)。检查使用的抗体的特异性在这项研究中,我们进行免疫染色hESC-derived神经前体Oct4等多能性标记抗体和Tra1-60(补充图1)。

“诱导多能性”细胞数多能细胞组织化学染色标记。mRNA-iPSCs生成和培养15章节xeno-free / feeder-free hPSC系统积极应用多能细胞标记Oct4、Sox2, SSEA4 Tra1-60, tra1 - 81。此外,殖民地沾常用的未分化细胞碱性磷酸酶标记( 右上方的面板)。

接下来,我们检查了几个标记的未分化细胞的表达水平在两个诱导多能干细胞生成在这项研究中,为和urine-derived iPS细胞(UNFiPSC1)积极控制。此外,hESC-derived EBs被用作-控制(图 3(一个))。种能阻碍DNMT3B mRNA-iPSCs表示Oct4、Nanog Sox2,, Zic3, REX1为一样丰富。相比之下,mRNA-iPSCs最低限度表示标记代表外胚层(NCAM、巢蛋白和Pax6),中胚层(FoxF1, Hand1, Gata2)和内胚层(法新社和Gata6)血统(数字 3 (b)- - - - - - 3 (d))。

存在“诱导多能性”细胞的分析。(一)分析了mRNA-iPSCs多个代表lineage-specific标记的表达。H9-hESCs和urine-derived iPS细胞生成使用游离质粒的方法(UNFiPSC1) [ 18)被用作积极控制,EBs作为消极的控制。 p ∗ ∗ ∗ < 0.01 。(罪犯)代表标记的表达水平的衍生品的外胚层(NCAM、巢蛋白和Pax6) (b),中胚层(FoxF1、Hand1 Gata2) (c)和内胚层(法新社和GATA6) (d)通过检查中存在。在这些实验中,H9-hESCs和UNFiPSC1用作未分化的细胞,控制而EBs对分化细胞和成纤维细胞被用作控制。 p ∗ ∗ ∗ < 0.01 。

我们进一步分析了mRNA-iPSCs使用DNA微阵列表达模式。散点图和热图分析的全基因组基因表达谱表明,基因表达模式为mRNA-iPSCs非常相似的数据 4(一)和 4 (c))。然而,mRNA-iPSCs的基因表达模式显著不同的成纤维细胞mRNA-iPSCs起源(数字 4 (b)和 4 (c))。人类基因和fibroblast-enriched ESC-enriched基因的列表给出了补充表4。

mRNA-iPSCs的全基因组基因表达分析。(a - b)散点图分析表明,全球mRNA-iPSCs的基因表达模式相似H9-hESCs (a)。然而,mRNA-iPSCs之间的基因表达模式显然是不同的和他们父母的细胞,成纤维细胞(b)。(c)的热图分析表明100 hESC-enriched基因的表达模式和100年人类fibroblast-enriched基因(补充表4)mRNA-iPSCs H9-hESCs类似,但不是成纤维细胞。(d e) PluriTest分析表明,mRNA-iPSCs和其他先前建立iPS细胞(UNFiPSC1和ANiPSC1) ( 18集群与H9-hESCs多能组,而成纤维细胞和其他细胞主要集中在nonpluripotent组。(f)基因profiling-based分层聚类分析证明了与H9-hESCs mRNA-iPSCs之间的密切关联,但不与主细胞(成纤维细胞)。

PluriTest,生物信息学分析的基于基因表达谱的多能性,表明mRNA-iPSCs多能,类似于为其和其他“诱导多能性”细胞,建立了包括UNFiPSC1和ANFiPSC1之前( 18)(图 4 (d)和 4 (e))。分层基因表达数据的聚类分析表明,mRNA-iPSC2线更类似于为比这个细胞系是派生的成纤维细胞(图 4 (f))。

 3.3。分析Pluripotency-Associated基因的启动子区域的甲基化模式

我们执行重亚硫酸盐测序分析研究甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的模式(论文认定)两种代表pluripotency-associated基因的启动子,Oct4 Nanog。能够很好的证明,反向启动子甲基化与基因表达( 19]。启动子的甲基化DNA甲基化模式Oct4和Nanog基因启动子区域的mRNA-iPSCs为类似,但不是原来的成纤维细胞(图 5(一个))。这个结果符合Oct4和Nanog基因的高表达mRNA-iPSCs和为(图 3(一个))。

分析甲基化的Oct4 Nanog推动者和mRNA-iPSCs染色体异常的。(一)重亚硫酸盐测序数据表明的推动者 Oct4和 Nanog基因在mRNA-iPSCs大都是脱甲基,类似于为这些启动子的甲基化状态。相比之下,其原始细胞,成纤维细胞,在这些hypermethylated推动者。(b) G-banding分析表明,没有明显的染色体异常期间生成重组和扩展文化(35段落)mRNA-iPSCs的ECM-based xeno-free / feeder-free hPSC文化系统。

细胞遗传学分析Giemsa-banded中期mRNA-iPSCs总值显示没有异常的染色体,即使长时间使通道(图35 5 (b))。

 3.4。多能性的mRNA-iPSCs <斜体>体外体内< /斜体>和<斜体> < /斜体>

检查是否mRNA-iPSCs获得多能性的细胞自发分化成三个胚芽层的衍生品 在体外。为此,EBs生成第一,紧随其后的是附着在Matrigel-coated菜肴文化的形成中含有10%的边后卫。人工基底膜上分析后15天分化时,清楚的表达代表标记为外胚层(巢蛋白和第三类 β微管蛋白(Tuj1))、中胚层(平滑肌肌动蛋白(SMA)和血小板内皮细胞粘附分子(PECAM)),和内胚层(甲胎蛋白(AFP)和FoxA2)检测(图 6(一))。

多能性的分析 在体外和 体内。通过EB mRNA-iPSCs受到自发分化培养,和外胚层的代表标记的表达水平(巢蛋白和第三类 β微管蛋白(Tuj1)),中胚层(SMA和PECAM),和内胚层(法新社和FoxA2)血统被检查。酒吧规模:100 µm。(b)畸胎瘤包括结构和衍生品的三个胚芽层被发现在3 - 4个月后肌内管理mRNA-iPSCs NOD / SCID小鼠。

当移植到NOD / SCID小鼠,mRNA-iPSCs发展成为畸胎瘤组成的各种细胞类型来源于三个胚芽层(分泌上皮(外胚层),软骨(中胚层)和肠道(E4)上皮(内胚层))(图 6 (b))。

综上所述,这些研究结果清楚地表明,mRNA-iPSCs生成并培养在xeno-free feeder-free hPSC文化系统表现出多能性。

 4所示。讨论

人类iPS细胞临床试验针对视网膜疾病正在进行( 20.),和几个试验预计将开始在可预见的未来。因此,需要生成符合临床安全的“诱导多能性”细胞继续增加。

方法中产生“诱导多能性”细胞染色体整合,信使rna转染显示重要的优势,如染色体的完整避免集成。与游离转染方法,使用信使rna转染方法不需要检查转基因插入染色体。此外,信使rna转染可以快速去除外源遗传物质的细胞重新编程后,减少了不必要的负面影响的挥之不去的转基因。

然而,这种方法与某些相关问题之前,必须解决其临床应用:(1)原协议mRNA-mediated重组需要17日转染完成重组( 11),这是高度劳动密集型;(2)初始和后续协议使用人类馈线细胞(即。,人类新生儿包皮成纤维细胞(足够的))( 11]或NuFF-conditioned介质在重组阶段( 12, 15, 21, 22]。使用人类馈线细胞或NuFF-conditioned媒介既费时费力且价格昂贵,需要重复制备postmitotic人类馈线细胞和人类的集合feeder-conditioned介质,分别;和(3)大部分的信使rna重组协议迄今报告使用了不同的文化条件生成的“诱导多能性”细胞的重组和扩张。例如,沃伦等人使用足够的馈线细胞在小鼠胚胎成纤维细胞重编程和使用(mef)扩张的iPS细胞( 11]。最近的信使rna重组协议采用NuFF-conditioned介质在重组阶段,其次是使用人类馈线细胞( 21)或feeder-free定义中( 12文化“诱导多能性”细胞。使用不同的文化系统“诱导多能性”细胞的重组和扩张是不便和麻烦,促使寻找一个文化系统,可以在整个“诱导多能性”细胞生成过程(即。重组阶段和生成的“诱导多能性”细胞)的传播。

在这项研究中,我们建立了一个更简单、更方便的方法生成和传播xeno-free和integration-free iPS细胞的信使rna转染方法结合我们之前开发的xeno-free feeder-free hPSC文化系统。这两个系统运作协调地在xeno-free iPS细胞的生成和扩展。本研究中使用的信使rna转染方法改进从原始协议通过添加两种转染的microRNA鸡尾酒在重组阶段。这两个与微rna转染鸡尾酒被认为是加速动力学和重组的效率。符合这个概念,我们发现ESC-like殖民地开始播种的细胞在11天后,由沃伦比结果报道et al。(~ 17天) 11]。日常所需的信使rna转染重组的总数减少了从17 11]11由于转染微鸡尾酒。此外,我们发现ESC-like殖民地之间总殖民地的比例大约是87.5%,明显高于之前报道的结果( 2, 9]。综上所述,我们的研究结果表明,小分子核糖核酸的混合物促进重组过程,因此,呈现mRNA-mediated一代“诱导多能性”细胞,随着越来越多的劳动力和时效。

我们的方法的另一个重要特性是使用相同(或相似)的xeno-free / feeder-free hPSC培养基iPS细胞重编程和传播,这使得iPS细胞生成和扩张过程更简单、更方便。简单的方法将提前生产的良好生产规范(GMP)年级xeno-free iPS细胞细胞疗法。

“诱导多能性”细胞生成的效率使用信使rna重组方法被报道显著变量(0.04 - -4.4%) 11, 12, 22),这可能至少部分造成的先天属性所用的体细胞重编程,转染效率,重组因子引入的数量,培养期间氧浓度(5%比20%),和文化媒体/条件采用重组( 11, 12, 22]。例如,重组效率、馈线细胞的1.89%,降至0.22%时Matrigel-based feeder-free文化条件是使用[ 22]。在我们的研究中,我们始终如一地获得了重组的效率20% ~ 0.2 -0.3%在常氧条件下(O2)当我们xeno-free / feeder-free hPSC文化系统是采用成人真皮成纤维细胞的重编程。

本研究中使用的介质是一个完全定义,xeno-free, feeder-free hPSC培养基。在这里,我们表明,这种媒介高度兼容修改信使rna转染方法“诱导多能性”细胞的生成和扩展。因此,这种组合的ECM-based xeno-free / feeder-free hPSC文化系统的一个改进版本信使rna转染方法提供了一个快速、高效和labor-effective平台代footprint-free xeno-free iPS细胞,临床应用安全。

 5。结论

在这里,我们报告(即治疗安全。,xeno-free and footprint-free) iPS cells can be efficiently generated and expanded by combining our previously developed ECM-based xeno-free/feeder-free hPSC culture system with an improved mRNA reprogramming method, facilitating the use of a labor- and time-effective platform for future iPS cell-mediated cell therapy.

 利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 作者的贡献

Kang-In李,李舒英对本文有同等的贡献。

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