1。介绍
在干细胞能够分化成多种细胞类型,间充质干细胞(msc)具有免疫抑制功能的有前途的工具,用于治疗应用于自身免疫性疾病甚至在同种异体设置。msc治疗自身免疫性疾病的疗效主要取决于持续的炎症反应的抑制抗炎细胞因子的生产能力以及他们在分化为功能性细胞(
1 - - - - - -
3 ]。探讨骨髓间充质受损组织或其迁移
在活的有机体内 分化成受伤的细胞,一个适当的跟踪系统的可用性是必要的。不同的成像方法已经被用来跟踪注入msc在不牺牲动物的位置。然而,非侵入式基于生物发光成像技术,单光子发射计算机断层扫描使用酶转换/保留和正电子发射断层扫描需要稳定整合的转基因
4 ,
5 ]
。 干细胞的基因操作要求和静脉注射的潜在免疫原性衬底为每个成像会话是这些方法的缺点。核成像还几个缺点包括辐射、高成本,短半衰期的几乎所有的核示踪剂(
6 ]。选择的技术注入是荧光技术后跟踪细胞的命运
在活的有机体内 光学成像,是一种安全、无创的方法和能力
在活的有机体内 随着时间的推移追逐的标记细胞。在生物相容性和解决问题,缺乏选择的示踪剂对msc的所需的生物功能也很重要。因此,任何用于示踪剂
在活的有机体内 MSCs-tracking应该免疫调节功能和msc分化能力的影响。
荧光亲脂性的carbocyanine染料不溶于水,但其荧光纳入膜时很容易发现。他们被归类为一个最合适的家庭染料的标签和跟踪。亲脂性的carbocyanine染料纳入细胞膜和细胞浆内横向扩散膜,导致整个细胞的染色(
7 ,
8 ]。简单的染色过程,与细胞膜磷脂结构相似,延长染料保留在细胞这些染料使用的优势在活的生物体
9 ,
10 ]。在这个家庭的成员,对长波长是适当的激发和发射光谱
在活的有机体内 近红外荧光成像由于事实避免了干扰目标与背景组织的荧光染料时并创建一个高对比度跟踪
在活的有机体内 成像系统(
10 ,
11 ]。有趣的是,已被用于标签没有干扰的msc msc分化成软骨细胞(
11 ]。然而,做标记免疫抑制的影响函数和msc对脂肪形成的或成骨细胞的分化命运仍然调查。因此,本研究旨在揭示的可能影响做了标记
在体外 DiD-labeled msc分化为脂肪形成的、成骨的神经祖细胞以及
在体外 和
在活的有机体内 DiD-labeled msc的免疫抑制功能。
2。材料和方法
2.1。动物
女性C57BL / 6和雄性Balb / C小鼠从伊朗的巴斯德研究所购买和维护12 h光明/黑暗条件下25°C。Balb / C小鼠4至5周的年龄被用于隔离的msc。实验性自身免疫性脑脊髓炎(运算单元)诱导C57BL / 6小鼠。所有的动物都保持在国家卫生保健指南和使用实验动物(NIH出版,1985)在动物的设拉子大学医学科学。
2.2。msc隔离、文化特征和标记
msc与股骨和胫骨根据Da Silva Meirelles之前报道的方法和Nardi
12 ]。简而言之,骨髓细胞从股骨和胫骨的Balb / C小鼠悬浮在适当的媒体和保持在5%2 气氛在37°C,湿度95%。24小时后,悬浮细胞通过改变介质中删除。达到70 - 90%融合后,贴壁细胞使胰蛋白酶化,搬到一个新瓶与合适的密度。为了单独的纯msc人口,msc的胰蛋白酶化至少4次重复,当细胞达到合适的融合。msc在通道5使胰蛋白酶化和流式细胞术分析(美国BD FACSCalibur)表面标记使用藻红蛋白——(PE)共轭anti-CD45 anti-CD44, anti-Sca-1以及异硫氰酸荧光素(FITC)共轭anti-CD34(英国eBioscience)和anti-MHCII(美国BD Pharmingen)抗体。使用适当的同形像控制实验。数据收集和分析细胞的追求和乔流软件(版本7.6),分别。msc是用不同浓度的标记来确定无毒染料浓度最高可追踪经过多个部门的msc。因此,染色的msc执行5
μ 米的。简单地说,1×106 msc在停牌1毫升DMEM包含5
μ 美国米做的(AAT Bioquest)为20分钟37°C,湿度95%,5%的股份有限公司2 。标记细胞与PBS清洗三次,去除多余了,用于进一步的实验。
2.3。DiD-Labeled msc的增殖能力
msc的增殖能力评估与5标签后
μ 米做的。总共2×103 标签和控制细胞数和镀在96孔板。在文化时间的30 h, msc与0.5脉冲
μ Ci (3 H] -methylthymidine(美国议员生物医学)18个小时确定褶皱的扩张。
2.4。活性氧(ROS) msc的生产
生产的ROS DiD-labeled msc测量使用二氯荧光素二乙酸(美国表达载体DCFDA)染色
13 ]。DiD-labeled和无标号msc (2×105 )孵化与2毫升DMEM 6-well板一天。然后,DCFDA(最终浓度10毫米)添加到30分钟的文化有限公司2 孵化器。之后,细胞被洗了三次与PBS和trypsinised染料强度被流式细胞分析仪量化。
2.5。线粒体膜电位(MMP)的msc
MMP的下降是细胞凋亡的早期指标。根据报告的过程常et al。
14 ),2×105 DiD-labeled或无标号msc被播种6-well板和孵化40 nM的3,3-dihexyloxacarbocyanine DiOC6(3)(美国恩佐生命科学)37°C为20分钟。孵化后,msc被清洗和resuspended PBS和荧光强度取决于流式细胞术。
2.6。分化DiD-Labeled msc
msc与5细胞被孵化
μ M为20分钟,保持文化的前一天开始分化的协议。控制井处理相同的除了标签。向脂肪细胞分化,~ 70%汇合的细胞在DMEM培养10天补充1
μ 0.5 M地塞米松,
μ M抗坏血磷酸盐,200
μ M消炎痛(
15 ]。每2 - 3天中被改变。细胞内脂质积累液泡也通过与0.5%油红O染色显示10分钟。成骨分化完成与一个中等补充1
μ M地塞米松,10毫米
β 甘油磷酸盐和0.5
μ 为10天(M磷酸抗坏血
16 ]。细胞被美联储通过改变媒体大约每隔三天。钙沉积是由1%茜素红染色显示10分钟。神经前体(NP)分化,1×106 /从段落7 - 10毫升msc在neurobasal分化培养媒体对琼脂糖凝胶涂层板用于支撑neurosphere感应所述的期刊et al。
17 ]。B27 Neurobasal媒体补充1%,1% insulin-transferring-selenite, 2毫米谷酰胺,青霉素和链霉素1%,10%的边后卫,1 ng / mL b-FGF, 1
μ 脱氢表雄酮。所有材料分化都从σ购买,美国。7天后,neurosphere形成由显微镜检查确认,收集细胞研究神经干细胞标记物的表达真实time-PCR(巢蛋白)。细胞总RNA分离从neurosphere RNAX +工具包(Cinnagen公司、伊朗)。此外,2的互补脱氧核糖核酸合成
μ 使用随机六聚体底漆和M-MuLV g总RNA逆转录酶(美国Fermentas) 60分钟42°C。巢蛋白(正向、反向)引物序列如下:5′-TACAGAGTCAGATCGCTCAGATCC-3′, 5′-CAGCAGAGTCCTGTATGTAGCCAC-3′。两个引物都内含子跨越避免基因组DNA污染。此外,PCR反应是规范化使用选择性转发5′-AGCTTCTTTGCAGCTCCTTCG-3′和反向5′-CATCCATGGCGAACTGGTG-3′引物
β 肌动蛋白作为内部控制。互补脱氧核糖核酸是放大如下:在95°C孵化10分钟紧随其后40周期10 s在95°C, 1分钟60°C。的熔化曲线实时PCR特异性的观察产品后的反应。
2.7。混合白细胞反应(高)
高钙的msc是比较标记的免疫调节功能和DiD-labeled msc。3×104 细胞通道4 - 6被播种在96 -孔板在DMEM包含10%的边后卫,100 U /毫升青霉素,100
μ 克/毫升链霉素。8小时后,msc与PBS和3×10洗两次5 CFSE-labeled脾细胞(1.5×105 从C57BL6和1.5×105 从BALB / c小鼠)被添加到msc。脾细胞被标以10
μ 150年M CFSE
μ L (RPMI 15分钟。1
μ g / ml伴刀豆球蛋白A添加到每个如果除了脾细胞(负控制)。五天之后,脾细胞收获和扩散率是评估基于CFSE荧光强度的降低细胞用流式细胞术。
2.8。通过治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎DiD-Labeled msc
MOG- 55 肽(MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK、Peptron、韩国)被用来诱导C57BL / 6小鼠慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎(
18 ]。简单地说,200年
μ 克撤走- 55 稀释200年
μ 与200年L PBS和乳化
μ L不完全弗氏佐剂(Gibco、德国)和1毫克/毫升热灭活的结核分枝杆菌(美国Difco) PBS是皮下注射。MOG后- 55 政府200 ng百日咳毒素(生物实验室名单,美国)腹腔注射免疫和两天后的日子。临床记录分数的实验性自身免疫性脑脊髓炎每周至少3次。运算单元迹象是得分如下:0 =没有疾病,1 =柔软的尾巴,2 =后肢麻痹,3 =麻痹的四肢,4 =垂死的条件,5 =死亡[
19 ]。小鼠被分为三组每个包含5老鼠与临床评分的平均值是2.2。一百万DiD-labeled或无标号msc在0.2毫升的PBS注入22天,29岁,和36的peritonea治疗组,而老鼠收到控制实验性自身免疫性脑脊髓炎0.2毫升的稀释剂在相同的日子。随后老鼠直到45天。检查DiD-labeled msc在抗原免疫抑制的影响,初始msc管理局24天后,小鼠脾细胞从实验性自身免疫性脑脊髓炎(处理和未经处理的)和MOG刺激- 55 多肽和扩散是评估3 H-thymidine合并。简单地说,2×105 从治疗和untreated-EAE老鼠刺激脾细胞20
μ g /撤走- 55 。文化72 h后,脾细胞与0.5脉冲
μ Ci /的[3 H] -methylthymidine(美国议员生物医学)18 H确定褶皱的扩张。放射性核素吸收测量
β 闪烁计数器(Wallac,德国)。
2.9。细胞因子的检测ELISA
1×10的上层清液6 DiD-labeled和无标号msc在2毫升DMEM 24小时后收集文化和一直冻结在−70°c,直到细胞因子水平的决心。高钙的上层清液也被收集并保存在细胞因子分析相同的条件。PGE2的水平和il - 10在上层清液的msc和PGE2的水平,il - 10,干扰素-
γ ,IL-17高钙的上层清液定量分析了酶联免疫吸附试验(ELISA)根据制造商的指示(英国Mabtech)。血清治疗-(标记和未标记msc)和untreated-EAE老鼠同时进行了对炎症(IFN -的水平
γ 和IL-17)和抗炎细胞因子(il - 10)的ELISA。
2.10。数据分析
数据的平均数±标准差。克鲁斯卡尔-沃利斯测试用于检查整个团体之间的区别。还Mann-Whitney
U
被用来分析临床评分的差异,untreated-EAE治疗组之间和细胞因子水平。15 SPSS软件被用于统计分析。
P
<
0.05
被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
标签和标记msc生长在一个同质纤维母细胞型模式。此外,msc流仪分析CD44的表达,本来,MHC II,造血干细胞标记(CD45和CD34)显示95%以上纯度在第五段(数据没有显示)。
3.1。DiD-Labeled msc的增殖能力
评估可能的做了标记对msc的增殖的影响,这些细胞被沾了经过48小时的文化与(脉冲3 H] -methylthymidine 18小时。没有观察到显著差异之间DiD-labeled和完整的msc (
27014年
±
2001年
CPM和
26747年
±
3540年
CPM、职责;
P
=
0.79
;图
1(一) )。
评价的il - 10和产生PGE2,完好无损,DiD-labeled msc增殖试验。之间无显著差异观察标记和DiD-labeled msc的增殖能力3 H]胸腺嘧啶核苷掺入(a), PGE2水平(b)和il - 10 (c)生产24小时和48 H后文化。这些数据都表示为三个独立实验的均值±SD一式三份。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
3.2。Multilineage DiD-Labeled msc分化能力
后10天的文化分化条件下,细胞被茜素红和油红O染色证实钙沉积和脂质积累的细胞质液泡msc、分别。显微镜检查显示成骨分化能力之间没有显著差异的标记msc(图
2(一个) )和DiD-labeled msc(图
2 (b) )。同样,DiD-labeled msc(图
2 (d) 显示相同的脂肪形成的分化能力完整msc(图
2 (c) )。此外,分化标记和DiD-labeled msc NPs也是评估七天后文化在适当的媒体分化。显微镜检查显示未加标签的msc(图的分化
2 (e) )以及DiD-labeled msc(图
2 (f) )根据neurosphere NPs形成。此外,尽管mRNA表达巢蛋白水平增加近2倍NPs与msc相比,无显著差异在巢蛋白mRNA表达之间NPs来源于无标号msc和DiD-labeled msc (
2。3
±
0.4
和
2.16
±
0.2
、职责;
P
=
0.7
)。
未加标签的谱系分化(a、c和e)和DiD-labeled msc (b、d和f)进入脂肪细胞,骨细胞,NPs。培养的无标号和DiD-labeled msc分化媒体随后与油红O染色脂质(a和b,分别地;原始的放大:400 x)或钙沉积茜素红(c和d,分别地;原始的放大:400 x)和微观考试NPs生产(e和f, resp)被用来证实其相似的分化能力(原始的放大:100 x)。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
(d)
![]()
(e)
![]()
(f)
![]()
3.3。线粒体膜电位、活性氧产量DiD-Labeled msc
中毒性做了标记,线粒体膜电位、活性氧生产由DiOC6 DiD-labeled msc评估(3)和DCFDA标签,分别。结果表明,平均荧光强度没有明显差异(MFI) DiOC6 DiD-labeled之间(3)和无标号msc (
259年
±
14.2
和
239.6
±
15.3
、职责;
P
=
0.35
;图
3(一个) )。进一步巩固安全标签对msc功能,可能发生细胞凋亡也调查了DCFDA染色。没有显著的差异之间的观察DCFDA MFI DiD-labeled和无标号msc (
157年
±
15.68
和
149年
±
20.9
、职责;
P
=
0.52
;图
3 (b) )。因此,结果确认标签没有影响msc的可行性。
流仪分析ROS生产和线粒体膜电位的msc。(a) DiD-labeled msc沾DiOC6(3)发出非常相似(虚线)荧光强度与标记msc(实线)520海里。(b)无显著差异之间的DCFDA也观察到荧光强度DiD-labeled(虚线)和标记msc(实线)。这些数据都表示为三个独立实验的均值±SD一式三份。
(一)
![]()
(b)
![]()
3.4。PGE2和il - 10生产DiD-Labeled msc
本研究的结果表明,无标号和DiD-labeled msc能够产生可检测和统计类似PGE2水平(
5316年
±
328年
和
5338年
±
109年
pg / mL,分别地;
P
=
0.91
;图
1 (b) )和il - 10 (
21.0
±
2。3
和
18.53
±
5。5
pg / mL,分别地;
P
=
0.5
;图
1 (c) )24小时后的文化。也有产生PGE2无显著统计学差异(
6058年
±
424年
和
5828年
±
229年
pg / mL,分别地;
P
=
0.45
)和il - 10的合成(
23.5
±
2。3
和
27
±
5。7
pg / mL,分别地;
P
=
0.2
)标记和DiD-labeled msc之后48小时之间的文化。
3.5。抑制脾细胞的增殖和细胞因子生产DiD-Labeled msc
测试msc在脾细胞的抗增殖作用,高钙反应进行的存在和缺乏msc。明显的增殖中检测出双向高钙缺乏msc (
71.15
±
7.25
%;图
4(一) ),而增生性反应明显减少1:10细胞比率的MSC /脾细胞,MSC是否标记(
21.42
±
7.66
%,
P
=
0.0001
;图
4 (b) )或贴上了(
22.78
±
5.90
%,
P
=
0.0001
;图
4 (c) )。这个观察可以PGE2生产过剩,因为分析的结果高浮层显示upregulation PGE2的无标号的存在和DiD-labeled msc (
5832年
±
362年
pg / mL和
6181年
±
147年
pg / mL, resp)相比,浮在表面的高钙反应没有msc (
1089年
±
93.8
pg / mL;
P
=
0.05
对于比较;图
4 (d) )。有趣的是,如图
4 (d) 相比,高钙的缺乏msc、标记和DiD-labeled msc显著降低il - 10的水平(
3260年
±
400年
pg / mL,
500年
±
96年
pg / mL,
618年
±
174年
pg / mL,分别地;
P
=
0.05
两个),干扰素-
γ (
3903年
±
697年
pg / mL,
963年
±
168年
pg / mL,
873年
±
147年
pg / mL,分别地;
P
=
0.05
),和IL-17 (
223年
±
52.6
pg / mL,
51.5
±
10.4
pg / mL,
67.6
±
7.3
pg / mL,分别地;
P
=
0.05
文化)的上层清液的含量在上述细胞因子没有显著不同上层清液收集的高钙的标记和labeled-MSCs。
msc抑制活化脾细胞增殖和细胞因子的生产。无标号和DiD-labeled BALB / c-derived msc被添加到双向高钙的脾细胞反应(比1:10)和脾细胞的增殖(基于减少CFSE)检查后5天。直方图高的细胞增殖反应没有msc (a)和无标号(b)的存在或DiD-labeled msc (c)演示了脾细胞增殖的抑制msc、是否贴上了。如果脾细胞显示CFSE稀释(d)的最低水平。三天后开始高钙反应,downregulation IL-17,干扰素-
γ ,il - 10和PGE2的upregulation文化上层清液中观察到的高反应的标记或者DiD-labeled msc (e)。NS:不显著;
*
P
<
0.05
;
*
*
P
<
0.01
。这些数据都表示为平均数±标准差在复制三个独立的实验。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
(d)
![]()
(e)
![]()
3.6。改善临床分数的运算单元
三次注射同种异体msc有或没有做标签也(临床评分降低实验性自身免疫性脑脊髓炎
1.65
±
0.24
和
1.67
±
0.21
控制、职责)相比untreated-EAE老鼠(
2.56
±
0.17
;
P
=
0.001
对于比较;图
5(一个) )。符合临床评分、血清水平的促炎细胞因子(IFN -
γ 和IL-17)显著降低小鼠的血清中处理标记(
52.0
±
37.1
pg / mL和
77.0
±
31.1
pg / mL,分别地;
P
=
0.008
和
P
=
0.01
、职责;图
5 )或无标号msc (
67.0
±
32.2
pg / mL和
43.0
±
29.9
pg / mL,分别地;
P
=
0.01
和
P
=
0.007
、职责;图
5 )相比,在未经处理的控制老鼠(
143.7
±
117.0
pg / mL和
185.0
±
91.6
pg / mL,职责)。兴趣,il - 10的水平明显高于在未经处理的控制老鼠(
21.0
±
3所示。8
pg / mL)小鼠相比处理标记msc (
39.0
±
15.9
,
P
=
0.01
;图
5 (b) )或无标号msc (
42.0
±
12.1
,
P
=
0.008
;图
5 (b) )。类似于促炎细胞因子,il - 10的水平没有显著差异之间的观察小鼠接受无标号msc和DiD-labeled msc (
42.4
±
12.1
pg / mL和
39.0
±
15.9
pg / mL,分别地;
P
=
0.7
;图
5 (b) )。同时,
在体外 刺激脾细胞与MOG EAE-treated老鼠- 55 肽比控制未经处理的小鼠显示较小的扩散,尽管这种差异不显著(
P
=
0.13
标记和
P
=
0.2
DiD-labeled msc组,分别地;图
5 (c) )。
小鼠同种异体的msc在实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗效果。临床评分均值±SEM对小鼠的实验性自身免疫性脑脊髓炎处理三个腹腔内注射1×106 同种异体msc有或没有做控制以及实验性自身免疫性脑脊髓炎(a)。描述了msc有或没有做标签降低干扰素-的水平
γ IL-17和增加血清il - 10水平治疗组小鼠相比控制实验性自身免疫性脑脊髓炎(b)。
在体外 MOG刺激脾细胞- 55 肽显示无显著降低脾细胞增殖与对照组相比,治疗组(c)。
*
P
<
0.05
,
*
*
P
<
0.01
,
*
*
*
P
<
0.001
。这些数据收集的意思是±SD从每组5只老鼠。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
4所示。讨论
最近的研究揭示在msc的有力候选人治疗炎性和谷蛋白疾病。msc的特权优势包括在各种细胞类型分化的能力
1 ,
2 ,
20. 和抑制对免疫反应的影响
3 ,
21 ]。然而,缺乏特色和身份验证标记在msc
在活的有机体内 跟踪研究人员采用各种特异性的跟踪方法。跟踪msc与光学成像使用DiI等可以使荧光染料的生物相容性评估在一些研究[
22 ,
23 ]。然而,使用“了”和长波长发射光谱是首选由于低干扰背景荧光(
10 ,
11 ]。因此,也可以被认为是一个合适的DiI的替代品。由于缺少发表调查可能的影响做了标记生物功能的msc,在这项研究中可行性的后果做了标记,增殖,免疫抑制活性,msc分化潜力的调查。本研究的结果表明,与5标签
μ 米并没有在msc诱导活性氧的生产。此外,随着细胞凋亡早期的一个标志,线粒体膜电位的DiD-labeled msc保持不变。此外,DiD-labeled和控制之间没有显著差异观察msc对其增殖能力。因此,5
μ 米有凋亡和细胞抑制剂对msc /细胞毒性的影响。这个结果是与先前的报道指示标签4兼容
μ M DiI没有细胞抑制剂/对msc(细胞毒性影响
22 ,
23 ]。
不良的标签对msc的分化能力的影响一直是研究人员的另一个忧虑。目前的研究表明,做标签并不影响骨髓间充质不同的祖细胞分化的能力包括脂肪细胞和骨细胞对神经前体细胞分化的形态和分子水平(巢蛋白mRNA的表达)。萨顿等人表明DiD-labeled人类msc维护他们的功能分化成软骨细胞谱系
10 ]。尽管粘多糖水平标记msc分化,减少标签没有明显影响细胞形态(
10 ]。堰et al。
22 和戴秉国et al。
24 )也显示标签的msc DiI不干扰他们的分化成心肌细胞的能力。总的来说,与报告,揭示了一些消极的影响
CdSe /硫化锌 量子点标签或Feridex示踪剂在msc分化能力(
25 ,
26 ),并没有对老鼠msc分化的影响。
它已经表明,msc可以抑制免疫细胞功能通过身体接触或分泌的可溶性因子(
27 - - - - - -
30. ]。因此,我们调查是否msc与5的标签
μ 米可能影响免疫抑制了msc在预防脾细胞增殖和细胞因子的能力生产高钙测定。本研究的结果表明,无标号和DiD-labeled msc具有相同生产能力的两个著名的抑制介质(PGE2和il - 10;图
3 ),抑制淋巴细胞激活(
31日 ,
32 ]。根据这些结果,DiD-labeled msc能够有效地减少双向高钙的脾细胞的增殖无标号msc (
P
=
0.001
;图
4 )。此外,炎症(干扰素的生产
γ 和IL-17)和抗炎细胞因子(il - 10)在文化上层清液的高钙的存在显著降低DiD-labeled和标记msc(图
4 (d) )。它可以假设生产高水平的PGE2 DiD-labeled和标记msc(图
3 (b) )可能导致预防淋巴细胞活化和细胞因子的表达。在这方面,PGE2的抑制作用IFN -
γ 生产(
33 ]或抑制淋巴细胞增殖通过msc产生PGE2 [
34 据报道之前。PGE2的影响il - 10生产是有争议的
35 - - - - - -
38 ]。然而,鉴于PGE2参与抑制il - 10的生产在一定条件下(
37 ,
38 ),我们的结果减少生产il - 10在DiD-labeled或无标号msc可能被解释根据存在的高水平的PGE2的coculture msc及脾细胞(
37 ,
38 ]。总的来说,都完好无损,DiD-labeled msc是同样的PGE2和就业主管在生产其他机制,最终降低生产高钙测定脾细胞的细胞因子。
目前的研究表明,类似于无标号msc、DiD-labeled msc显著改善临床分数比未经处理的控制(的实验性自身免疫性脑脊髓炎
1.67
±
0.21
和
1.65
±
0.24
与
2.56
±
0.17
、职责;
P
=
0.0001
)。此外,在未经处理的控制相比,DiD-labeled和无标号MSCs-treated老鼠表现出显著降低血清水平的干扰素-
γ (
193年
±
117年
pg / mL和
52
±
37.1
pg / mL和
67年
±
32.2
pg / mL,分别地;
P
=
0.01
)和IL-17 (
185年
±
91年
pg / mL和
77年
±
31.1
pg / mL和
43
±
29.9
pg / mL,分别地;
P
=
0.01
)和il - 10水平上升(
21.0
±
3所示。8
pg / mL和
39.0
±
15.9
pg / mL和
42
±
12.1
pg / mL,分别地;
P
=
0.05
和
P
=
0.01
、职责)。这些结果可以解释为提高外围公差造成DiD-labeled或无标号msc政府Th2细胞因子和偏差/ Treg模式。因此,我们的研究并没有发现显著差异
在活的有机体内 未标记的影响和减少DiD-labeled msc在疾病的症状。然而,在跟踪标记的特异性msc需要详细调查以来DiI从标记细胞分裂的可能性和donor-to-host染料的转移
39 据报道。