作为一个前瞻性研究,不受控制,一年,单中心安全,疗效的临床研究同种异体的BM-MSCs双边移植的病人诊断为帕金森病。

一旦80%汇合的这些细胞被分离与0.25%胰蛋白酶/ 0.53毫米EDTA(表达载体)和进一步的高档和扩大为了为病人提供所需数量的细胞。简而言之,使胰蛋白酶化细胞受移植者的密度每厘米1000个细胞²在细胞栈(康宁)。在文化14天之后,细胞达到80% confluency准备移植。

msc进行了质量控制参数,如支原体检测,内毒素,不育和细胞表面标记如CD73 CD90、CD105, CD166 CD34、CD45标记使用流式细胞仪。他们应该超过80%阳性CD73, CD90、CD166和CD105但消极CD34、CD45 (< 10%)。

调度的细胞移植前,电池进程内执行质量检测的细胞。包括形态、immunophenotyping细胞表面标记分析,内毒素使用LAL试验测试,并使用rt - pcr也做支原体。只有那些细胞充实ISCT标准为移植msc被释放。

任何样品内毒素和支原体阳性立即丢弃并适当。

提供了最终的细胞悬液移植的临床医生再次检测细胞表面标志分析如上所述。此外,核型分析、内毒素和支原体也进行强制性的质量检测。细胞生存能力测量通过流式细胞术使用7 aad (7-amino放线菌素D)。分析证明书(COA)是准备,为移植和细胞被发布文档。

主题,18 - 80岁之间的男性和女性,都报名参加了这项研究。患者筛查艾滋病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、巨细胞病毒和性病研究化验室其次是入选标准选择之前参加审判。8例PD患者和4 PD +综合症患者选择试验(这些患者诊断为多发性系统atropy和进行性核上的麻痹(PSP)分类下PD +综合症患者)。这将有助于我们理解的角色从骨髓间充质干细胞在疾病的早期阶段和快速进步PD +综合症患者。

患者完成以下研究入选和排除标准:。

这些患者承认前48小时程序,并进行详细的临床评价包括UPDRS, MMSE、步态和神经心理评估。一般体格检查和患者的心脏状态评估纳入研究。MRI是基线和12个月的跟进。Tractography先生是由3、6和9月跟进会议。

核磁共振成像是1.5 5 t (Wipro通用电气、密尔沃基、WI美国)机器。常规成像是用图像和矢状轴天赋和T2W T1W图像。DTI的大脑做了轴面使用摘要CTL数组脊柱线圈用以下parameters-25方向EPI张量成像(TR 8500, TE: 97.6 b 值:1000频率:128,128年阶段,NEX-1,切片厚度:5毫米与零interslice差距和带宽:250 kHZ)表示。

图像处理是使用FuncTool软件提供的通用电气和定量分析是计算分数各向异性使用标准的方法。ROI被安置在双边中枢semiovale,膝,胼胝体压部,前肢体内囊、内囊后肢、大脑总花梗(共12 ROI)。

描述性统计分析进行了本研究。在连续测量结果在均值±SD (min-max)和结果分类测量提出了数字(%)。意义是评估在5%水平的意义。学生 t依赖以及(正反)被用来发现的意义研究参数对连续规模在每个组。

正如前面提到的研究( 19移植的细胞被处理。短暂,收获后一步,总细胞计数是使用一个标准的血细胞计数器。细胞与正常生理盐水洗几次。最后,细胞被人类血清白蛋白resuspended盐水中含0.2%。细胞悬液(2毫升)均匀分布为两个2毫升注射器和标记。这些都是打包在一个无菌容器和派出运输容器保持在22°C到医院移植通过最短的路线。

病人定位仰卧的移植和部分无菌准备。短的异丙酚麻醉下双边额磨孔钻和小硬脑膜的空缺。子心室区是通过一个标准的大脑插管CRW立体框架或隐形(美敦力公司)导航援助。BM-MSCs,剂量的200万个细胞/公斤体重,移植到大脑和明胶海绵放置在硬脑膜的缺陷之前关闭伤口。

手术后的患者观察到neurointensive病房后24小时,他们转向了病房,4 / 5天出院回家。

患者随访密切每三个月为一年。他们被一个独立评估neurophysician和运动障碍专家。在每个访问病人临床检查、UPDRS评分,评估,神经和药物研究进展。在最后的随访中,12个月病人可以接受MRI扫描,以检查任何结构性变化相比基线扫描。药物将审查每一次访问太阳系时根据症状和调整。任何不良事件报告给调查员和IEC有关。

3成人健康筛查献血者招募了骨髓在全身麻醉下的愿望。分离、培养BM-MSCs如[ 20.]。这些细胞冻存和适当地传播一旦患者参与了这一研究。所有的细胞形态学进行了评估,immunophenotype和微分潜力。

临床评估上执行所有患者UPDRS评分系统的基于四个基本参数:(1)心理行为和情绪,(2)日常生活活动,(3)运动障碍和障碍,(4)PD治疗并发症。这被认为是主要的可测量的临床研究结果。得分是典型的“关闭”期间(约完成。12hours off the anti-Parkinsonian medication) and during the “on” period (within 1-2 hrs of the medication) where maximum benefit could be appreciated in the PD symptoms. The average score during the “on period” at baseline was 62.33 and after stem cell transplantation it improved to 51.16 that is, an improvement of 17.92% over the baseline (Figure 2)。同样“掉期”的平均得分是86.5在基线和减少到59.5的干细胞移植后12个月。改善“掉期”的分数比例为31.21%(图 3)。这类似于早些时候报道的数据我们组用自体从骨髓间充质干细胞( 19]。

大部分的PD患者主观改善报告在第一次跟进,在干细胞移植后3个月。这些包括清晰的演讲、减少震动和刚性,和一般意义上的幸福。这些变化被认为在以后的后续也表明不是短暂而是更持久的改变。类似的改进也指出一些PD +但并不是所有的病人。然而,对于这些患者改变瞬态和接下来的跟进(6月)的进一步发展成疾病。

如图 5和表 2,有直接相关性观察疾病的持续时间和改善PD患者指出。病人被诊断相比,最近的表现要好于UPDRS的长期疾病。表 2表明,这些患者PD不到5年提高更快和保持比较稳定的患者超过10 - 15年。而PD +病人没有显示改善移植后或相关性。虽然有一个主观的初步改善,但从未在PD +综合症的长期持续。

需要提到的PD +病人不能使用UPDRS评分系统评价干细胞移植后由于疾病的严重程度和进展。因此,这些数据没有被提到。

anti-Parkinsonism药物剂量的干细胞移植前后进行了分析。4 PD +的病人,临床医生建议增加剂量的药物根据其疾病的发展。然而,PD患者在疾病的早期阶段类似的用量的增加并不是必需的。剂量保持一样的基线药物处方。这表明疾病的干细胞移植后没有进一步进展。只有2例,Syndopa的用量必须增加。这可能是因为当时的先进疾病已经无法修复的干细胞移植也明显UPDRS分数的患者。

因此,8 PD患者的早期干预是6例。随着疾病的发展,似乎是干细胞的政府放慢了速度。他们不需要增强的剂量。在疾病的晚期和PD +病人,干细胞移植展示了相对较小的症状缓解,另一方面需要增加的药物。

护理人员已经注意到一个总体改善的活动水平7例,其中包括减少震动静止和运动,更好的清晰的演讲,减少刚度,能够走的更远的距离和独立完成个人任务。这对病人的福祉产生重大影响和进一步具体化,随着疾病的发展,干细胞治疗后已经放缓。

帕金森病涉及nigral和extranigral系统。因此,有运动并发症,痴呆有关,多个系统功能障碍,认知功能下降。

大多数研究都集中在运动方面只将多巴胺神经元的损失(DA)在中脑黑质。细胞替代实验至今针对更换的DA神经元。胎儿中脑的移植的结果显示移植诱导运动困难由于植入物周围炎症,混合DA神经元的人口,和不适当的突触联系 6, 8- - - - - - 10]。

因此,在我们的研究中我们选择选择一个细胞类型,主要帮助神经保护受影响的地区无论细胞类型,其次是神经发生。这是一个更多的全球解决问题的方法,将目标不仅经典运动症状还记忆丧失和认知功能下降有关。我们的主要目的是阻止疾病的发展,其次有助于神经功能的恢复。这是第一篇论文表明,双边外源的成人从骨髓间充质干细胞移植是安全的,有益的PD患者的神经保护和neurorestorative效果。

在这种背景下,必须了解间充质干细胞在神经保护和神经发生。

完善,BMMSCs能够释放cytotrophic介质如神经生长因子(神经生长因子)superfamily-Brain-derived神经营养因子(BDNF)和NGF-3;Glial-derived神经营养因子(GDNF)和neurturin [ 26]。这些神经营养因子对神经发生至关重要,神经保护,神经元存活和分化。在PD动物models-mesenchymal干细胞是减缓退化的进展,改善邻近的神经活动,再生神经纤维,最重要的是居民的诱导增殖和分化的神经干细胞池( 27]。

动物研究数据也表明,炎症SN的中脑多巴胺能神经元变性导致重大损失。也有一位著名的肿瘤坏死因子的水平 α白介素1 β和 γ干扰素在PD患者的SN 28]。间充质干细胞免疫调节。 在体外研究表明,它们参与免疫抑制活动虽然作用机理需要进一步清晰。在自身免疫性脑脊髓炎动物模型,间充质干细胞已经证明降低炎症浸润,较小的复发和神经的侮辱。最近的研究表明,非甾体抗炎药据说PD患者的有利影响。抗炎正在这里提出有益的间充质干细胞的影响。

神经干细胞位于大脑的subventricular区,因此是最首选的注入在这项研究中虽然入侵。外生BMMSCs将有助于激活和增加居民的增殖干细胞再生能力(内生再生)。同时,SVZ是远离已知的大脑损伤目标。

在这项研究中,我们报告说,有22%的改善患者UPDRS分数。改善才注意到早期病变患者和PD +。在研究结束时(12个月)不需要增加的药物是一个指示器,疾病进展已经被阻止。进一步的后续研究正在进行。至今没有研究报道失速的PD患者的能力。并发的UPDRS分数,有一种主观的幸福被病人和照顾者在10 12例。

PD +, 3例出现轻微的瞬态改善干细胞移植。1例病人没有明显的改变。我们觉得应该考虑BM-mesenchymal干细胞作为治疗选择的早期PD患者的最大利益升值。这是由于“neuroregenerative储备”的损失出现在大脑。它证明了这样一个事实:一旦疾病进一步发展,涉及多个领域,很难停止的过程。变性是如此广泛和快速,超出的修复能力外生骨髓间充质干细胞帮助神经保护和神经发生。我们还假设退化过程是缓慢的随着时间的推移,在最初的阶段和增长势头。PD +似乎涉及多个领域的退化 新创因此没有药物或手术是有用的。不幸的是细胞疗法似乎并没有改变。这将创建一个需要进一步的研究,我们需要考虑的选项提供多个剂量的细胞在频繁的时间间隔和/或测试潜在的干细胞来自不同来源(如脂肪组织或脐带矩阵,因为这些也具有神经保护作用和高分化转化潜力。在基线和干细胞移植后12个月,磁共振成像的大脑。虽然一直在改善症状和没有进一步进展的疾病,没有结构性变化观察到核磁共振成像扫描。tractography先生结果显示复苏的一个特定的模式。某些结构性变化观察膝的胼胝体和左花梗表明早期再生的大片可能发生在这里。这些变化是持续的整个后续研究和临床与改进报告的病人。目前我们正在继续研究,PET扫描将给我们有价值的信息在任何代谢和功能的变化发生在中脑的SN地区。这将给我们更多的有价值的线索在再生的机制在人类PD-affected大脑。

因此,总而言之,BM-mesenchymal干细胞有个三叉神经退行性疾病,如帕金森病治疗方法:神经发生、神经保护和神经可塑性。同时,必须让大脑退化的外源性刺激干细胞,而 原位neuroregenerative水库存在的干细胞,在疾病的早期。