SCI 干细胞国际 1687 - 9678 SAGE-Hindawi访问研究 304562年 10.4061 / 2011/304562 304562年 研究文章 增强治疗的糖尿病伤口局部脂肪管理局Tissue-Derived基质细胞Overexpressing Stromal-Derived因子- 1:Biodistribution和移植生物荧光成像分析 Di Rocco 古丽亚娜 1 外邦人 Antonietta 2 安托尼尼 安娜莉莎 2 Ceradini 弗朗西斯卡 2 吴 约瑟夫·C。 3 Capogrossi 莫里吉奥C。 2 Toietta Gabriele 2 李 Zongjin 1 Laboratorio di Biologia Vascolare e药物Rigenerativa Centro Cardiologico基金会Monzino——IRCCS 20138年通过Parea 4日米兰 意大利 cardiologicomonzino.it 2 Laboratorio di Patologia Vascolare 史Dermopatico戴尔'Immacolata——IRCCS 104年通过一些蒙蒂di白垩 00167年罗马 意大利 3 医学和放射学 的心脏病 斯坦福大学医学院的 300巴斯德驱动器,格兰特S140B,斯坦福大学,94305 - 5111 美国 stanford.edu 2011年 02 12 2010年 2011年 13 09年 2010年 15 11 2010年 2011年 版权©2011古丽亚娜Di Rocco et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

慢性溃疡是糖尿病患者的主要卫生问题导致疼痛和不适。传统疗法并不能保证足够的伤口修复。糖尿病、治疗在一定程度上是由于贫穷受损内皮祖细胞动员和归航,趋化因子的改变水平stromal-derived因子- 1 (SDF-1)伤口部位。脂肪tissue-associated基质细胞(AT-SCs)可以提供一个可访问的祖细胞分泌proangiogenic因素和区分成endothelial-like细胞。我们证明了局部AT-SCs转基因 体外过度表现SDF-1,促进糖尿病大鼠伤口愈合成。特别是,由 在活的有机体内生物荧光成像分析,我们监控biodistribution luciferase-expressing细胞移植后和生存。总之,本研究表明AT-SCs政府在伤口愈合的治疗潜力,通过细胞分化,增强细胞招聘伤口部位,与当地相关的旁分泌影响生长因子的生产。

 1。介绍

皮肤溃疡由于微/ macrovascular疾病和周围神经病变是糖尿病常见的并发症。患有慢性伤口有降低生活质量,需要频繁的住院治疗,和经验增加发病率和死亡率,造成巨大的社会和经济成本( 1]。目前的治疗,包括缓解伤口部位的压力,积极的外科清创,控制感染,和动脉重建,效果有限,而且往往不足以保证足够的治疗( 2]。事实上,相当数量的病人不应对传统疗法,和复发的症状是频繁。蛋白半衰期短、效率低下的交付目标细胞阻碍一些非传统的治疗方法,包括局部应用重组生长因子促进组织再生( 3]。

考虑到疾病的发病率的上升,有必要开发改善疗法治疗糖尿病溃疡减少病人不适和更低的社会负担。最近,干细胞的应用程序被认为是一个可能的新的治疗选择促进慢性伤口愈合( 4]。特别是,从胎儿肝脏间充质干细胞分离 5和骨髓 6, 7)可以通过差异化和血管生成促进提高伤口修复。间充质细胞从骨髓中分离的共享类似的特征也可以来源于脂肪组织( 8]。脂肪tissue-derived基质细胞(AT-SCs),也称为基质血管部分细胞(AT-SVFs),收集从脂肪组织胶原酶消化和差速离心 9]。自吸脂只涉及局部麻醉,细胞可能会从病人可重复获得,nondebilitating现场操作和自体移植的组织再生。执行的过程可以在一个大规模的、可再生的方式根据GMP法规,允许AT-SCs用于临床研究和实验临床试验( 10]。

脂肪tissue-derived multipotential在几个细胞前体细胞能够区分类型的中胚层和nonmesodermal起源,包括脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞、细胞、肝细胞、内分泌胰腺细胞,神经元和内皮细胞(审查[ 9])。

AT-SCs分泌血管生成分子,包括胶质瘤、VEGF PlGF, IGF, KGF [ 11, 12]。此外,转录分析表明proangiogenic基因的表达( 13]。AT-SCs移植已被证明能够促进小鼠后肢缺血的治疗性血管生成( 14- - - - - - 16]。这可能是由于AT-SCs融入血管 在活的有机体内( 17)和贡献neovascularisation由旁分泌作用[ 18]。此外,AT-SCs能促进人类真皮纤维母细胞增生( 12)和伤口愈合在小鼠模型( 19, 20.)通过直接细胞间接触和通过旁分泌的影响。此外,保护作用AT-SCs及其分泌的因素在氧化损伤被描述( 21]。改善伤口愈合猪脂肪组织提取测定的实验模型( 6),而AT-SCs提取并不影响小鼠伤口修复( 19]。

综上所述,这些研究都支持使用AT-SCs管理方法的发展,促进伤口愈合。尽管如此,我们知之甚少如何移植细胞的行为 在活的有机体内,以及他们的能力嫁接、持久性,分化,biodistribution之后 在活的有机体内管理。 在活的有机体内研究动物模型有可能证明干细胞疗法的临床潜力,阐明细胞生物学和生理学的移植细胞和他们的后代。当前的方法研究干细胞的命运后政府主要依靠组织化学评价样本来自牺牲动物。这种方法费时、费力和昂贵,需要多个样本的切片分析源于大量的实验动物。为了更好地理解干细胞活动 在活的有机体内、快速、可负担得起的和非侵入性成像技术是必要的。

为了评估移植的AT-SCs糖尿病伤口愈合受损的小鼠模型,我们使用生物荧光成像跟踪移植细胞。此外,我们有兴趣决定相伴过度SDF-1可能进一步促进伤口愈合和细胞移植。事实上,在糖尿病条件下,受损的治疗至少部分是由于[差别SDF-1对这些 22),影响迁移和在伤口处归航的循环内皮祖细胞(epc) [ 23]。另一方面,病变部位的外生政府重组SDF-1 [ 24]或慢病毒载体表达SDF-1 [ 25)逆转受损EPC的糖尿病伤口愈合的小鼠模型。相反,SDF-1抑制糖尿病动物造成进一步损伤伤口修复( 26]。此外,SDF-1超表达生存和增长的CXCR4-expressing间充质干细胞 在体外( 27), 在活的有机体内( 28, 29日]。

在这里,我们表明,在糖尿病小鼠局部AT-SCs管理促进伤口愈合,并确定通过BLI biodistribution和动力管理移植的细胞。

 2。材料和方法 2.1。实验动物

老鼠研究中使用6 -瑞士CD1 8-week-old野生型雄性,转基因小鼠无所不在地表达GFP ( 30.),或者GFP和萤火虫荧光素酶( 31日从殖民地保持在我们机构动物设施。所有试验程序进行根据意大利国立卫生研究院的指导方针和被批准的机构动物保健和使用委员会。

诱导的糖尿病得到50毫克/公斤腹腔注射链脲霉素(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州)在0.05 M柠檬酸钠,pH值4.5,连续5天。过去两周后注射链脲霉素,动物禁食2小时血糖水平测量使用Ascensia确认glucometer(瑞士巴塞尔拜仁医疗、)。小鼠glycaemia超过200 mg / dl被选作进一步研究。三个星期后,糖尿病动物被用于愈合实验。

 2.2。细胞隔离

AT-SCs得到从6周大的老鼠如前所述 32]。短暂、腹股沟皮下脂肪垫被消化了45分钟摇晃在37°C水浴PBS含有2% BSA和2毫克/毫升胶原酶(罗氏诊断,曼海姆,德国)。组织崩溃后,细胞透过40 μm细胞过滤器(BD猎鹰,富兰克林湖,新泽西)和收集的低速离心(500克)清除浮动成熟的脂肪细胞。细胞被洗在PBS、统计和用于伤口愈合实验。这个过程,我们孤立大约0.8 - -1.2×106细胞每6周大老鼠。

获得脂肪附着基质(ADAS) ( 13),有时也称为脂肪issue-derived间充质细胞(AT-MSCs) [ 33镀),细胞在DMEM 20% FCS在组织培养的菜肴。一夜孵化后,附着的细胞群。

皮肤成纤维细胞是来自相同的动物如前所述[ 34]。在PBS短暂、皮肤样本洗,然后皮下组织被淘汰和表皮被酶消化。在PBS,洗后皮肤样本切成小块,用0.3%胰蛋白酶在PBS 30分钟37°C水浴。冰冷的完全培养基(DMEM 10% FCS)然后添加样品混合在一个漩涡。悬架是通过40 μm细胞过滤器,离心收集的细胞(g 150×10分钟,4°C)。细胞被洗在PBS和清点,用作血管生成控制塞试验(见下文)或镀在组织培养菜(0.4×105细胞/厘米2在完全培养基。

 2.3。病毒载体建设

第一代重组E1-E3-deleted adenoviral(广告)向量SDF-1和GFP的表达获得使用Ad-Easy系统如前所述[ 35]。放大后,运载体被中海纯化2梯度超速离心法[ 36含3%蔗糖)和透析一个解决方案,10毫米三羟甲基氨基甲烷、液pH值7.8,150毫米氯化钠,MgCl 10毫米2。病毒滴度估计连续稀释的病毒293年股市细胞和表达为点状单位/毫升(空斑形成单位/毫升)。检测病毒股缺乏replication-competent腺病毒对A549细胞。

 2.4。体外损伤修复试验

比利奇的化验所述执行et al。 37一式三份。第二段间充质细胞来源于脂肪组织发展到融合在完全培养基(DMEM 20% FCS)。细胞被adenoviral-mediated然后转导基因转移为1小时37°C的感染复数10。细胞用PBS然后洗净增长与无血清培养基补充0.1%牛血清白蛋白(BSA)。基因转移后的第二天细胞单层进行使用2 mm细胞刮刀不破坏盘表面。病变区域与数码相机记录时间0和1和2天后。分析是由跟踪病变边缘和计算像素区域使用图像分析系统(IAS、三角洲Sistemi、罗马、意大利)。 在体外损伤修复表示为零时的价值的百分比计算。

 2.5。体内血管生成凝胶试验

的分析是基于植入人工基底膜插头( 38]。新孤立AT-SCs resuspended拌在PBS Cultrex增长因素都可以降低基底膜提取(马里兰州Gaithersburgh Trevigen Inc .)维持在4°C(液态)。400年一个整除 μ包含7×10 l (Cultrex5瑞士CD1小鼠细胞皮下注入聚集在实验5组动物腹部中线附近。解决方案和注射器被保存在冰前注射针,防止胶凝。一个星期后,老鼠牺牲和凝胶插头移除。样品固定在4%甲醛和嵌入在石蜡切片和组织学分析。部分被处理马森三色的染色和毛细血管密度确定。

 2.6。在伤口处细胞管理

Hyperglycaemic动物镇静的腹腔内政府三溴乙醇(200毫克/公斤,Sigma-Aldrich)和刮背,和全层伤口进行背中线使用3.5毫米直径活检穿孔(施蒂费尔,奥芬巴赫是主要,德国)。后伤口感应,新鲜孤立AT-SCs然后管理网站在单一剂量(7.5×105细胞/鼠标溶解在40 μl(生理盐水)局部病变。控制动物收到同样体积的生理盐水。受伤的动物被单独安置。

 2.7。伤口分析

在不同的时间点(0、3、5、7、10、14天)受伤后,病变闭包是使用数码相机记录。图像处理和分析通过跟踪伤口边缘和计算像素区域使用图像分析系统(IAS)。Re-epithelialisation报道最初的伤口面积的百分比,计算Re-epithelialisation比例=[1−(区分析/天区天0))×100 39]。一天的全层伤口是完全封闭的被视为完全愈合。此外,苏木精和伊红染色的图像幻灯片的伤口获得最大截面变为数字,然后上皮差距(两个上皮边缘之间的距离)测量来评估组织愈合。

 2.8。体外和体内光学生物荧光成像

体外和 在活的有机体内成像分析使用新腔从卡尺生命科学(马卡尺生命科学、数据)。为 体外成像,AT-SCs孤立从腹股沟时尚垫luciferase-expressing老鼠镀成清晰的底部组织培养的菜肴和孵化的溶液D-luciferin(卡尺生命科学)溶解在prewarmed组织培养基(150 μ分析前g / ml)。为 在活的有机体内分析小鼠麻醉与三溴乙醇和D-luciferin溶解在PBS(150毫克/公斤体重),管理i.p。10分钟前分析。光子发出luciferase-expressing AT-SCs移植到动物收集最终积累1 - 5分钟,这取决于生物荧光发射的强度。相同的小鼠移植后不同时间点进行了分析使用相同的程序,提供纵向数据的移植细胞biodistribution和生存。

 2.9。组织学分析

活检是固定在4%甲醛48小时,嵌入在石蜡连续切片(7 μ米)垂直伤口表面。第八部分每个伤口都苏木精和伊红染色进行形态学分析。免疫组织化学在福尔马林固定,石蜡包埋组织进行与GFP抗体(Abcam有限公司,剑桥,英国),

 2.10。统计分析

结果表示为±SEM手段。数据分析和比较控制和治疗组用INSTAT (GraphPad,圣地亚哥)。差异的重要性与小动物——一张长有学生评估 t 以及未配对的数据;是统计显著性水平 P < 。 05年 。

 3所示。结果与讨论 3.1。在AT-SCs SDF-1超表达促进损伤修复体外单层培养

我们确定AT-SCs修复的潜力 在体外损伤修复试验执行如前所述[ 37]。AT-SCs培养20% FCS包含了2毫米的差距表现在细胞单层在不到3天。Non-transduced和mock-transduced AT-SCs无血清培养系统中维护无法修复。Non-transduced细胞表现好于mock-transduced (Ad-GFP),可能与病毒暴露相关的毒性,但是差异没有统计学意义在损伤诱导后48小时。另一方面,细胞SDF-1 adenoviral-mediated基因转移后,有一个改进的损伤修复损伤的潜在48小时后,相比与non-transduced和mock-transduced AT-SCs(图 1)。

体外损伤修复试验。区域的病变关闭(表示为%天0)在一个 在体外损伤修复试验。Nontransduced AT-SCs (NT)或转导与adenoviral向量表达GFP (Ad-GFP)或表达SDF-1和GFP (Ad-SDF-1)保存在无血清培养基补充0.1% BSA。控制细胞生长在完全培养基(FCS dmem - 20%)。数据表示为均值±SEM和实验进行了一式三份。是统计显著性水平 P < 。 05年 。没有统计上的显著差异NT和Ad-GFP-transduced团体之间的评估。在48小时内,损伤修复Ad-SDF-1组相比提高与NT组( P = 。 018年 )和Ad-GFP (* P = 。 006年 )。代表病变区域的荧光显微图(虚线)在第二天。原来放大40 x。

AT-SCs已被证明表达的趋化因子受体CXCR4受体alpha-chemokine特定stromal-derived因子- 1,和它的过度增加AT-SCs迁移和扩散 40]。因此,这些结果表明,SDF-1可能作为自分泌因子在AT-SCs viral-mediated基因转移,促进细胞增殖和迁移。

 3.2。AT-SCs促进体内血管生成凝胶塞试验

我们发现基质分数从脂肪组织中分离的细胞能够分化成endothelial-like结构的基底膜基质堵塞试验( 14]。执行这个分析,我们孤立AT-SCs从表达绿色荧光蛋白转基因小鼠无所不在地 30.),然后移植包含GFP-positive GFP-negative动物细胞的插头。这样就能够对检测endothelial-like结构来源于植入GFP-positive AT-SCs(图 2 (b)),而我们未能发现类似的结构控制老鼠(图 2(一个))。在本实验条件下,99%以上的endothelial-like结构来自GFP-positive细胞(图 2 (d))。我们还进行了分析使用AT-SCs转导adenoviral模拟矢量和AT-SCs转导adenoviral向量表达SDF-1。我们观察到,即使在normoglycemic条件,endothelial-like结构形成的数量略(5%)提高了SDF-1超表达(图 2 (h));尽管在实验设置用于执行分析( n = 5 每组)与对照组的差异没有达到统计学意义( P 价值 ≥ 。 05年 )。

体内血管生成凝胶试验。AT-SCs处处隔绝GFP-expressing老鼠与Cultrex混合和皮下注入CD1收件人。1周后,分析了胶塞和毛细血管密度是由马森三色的染色(b)和anti-GFP免疫组织化学(d)。对照组收到包含生理盐水凝胶插头(一)- (c)。马森三色的染色植入凝胶包含nonconditioned插头无血清培养基(e)和来自AT-SCs文化的条件培养基(f);AT-SCs被Ad-GFP转基因(g)和Ad-SDF-1 (h)。endothelial-like结构形成的数量略提高了SDF-1过度,但与对照组的差异(Ad-GFP)没有达到统计学意义( P 价值 ≥ 。 05年 )。

基底膜基质插头包含同等数量的皮肤成纤维细胞获得相同的动物用于隔离AT-SCs被用作控制和未能组织成endothelial-like结构(数据未显示)。

除此之外,我们也进行了人工基底膜塞化验使用条件培养基获得一夜AT-SCs文化,发现分泌产生的可溶性因子AT-SCs可以促进血管生成(图 2 (f))。这是根据几项研究已经证明AT-SCs分泌的血管生成分子( 21),这有可能是,至少部分负责我们和其他人的治疗效果观察伤口愈合。

集体这些组数据表明AT-SCs能够促进血管形成 在活的有机体内在基底膜基质试验通过参加vessel-like结构组织和proangiogenic分泌的因素。

 3.3。糖尿病动物的AT-SCs移植促进伤口愈合

为 在活的有机体内研究中,我们使用体外接收全层CD1小鼠糖尿病伤口背中线。我们观察到病变部位局部管理7.5×105AT-SCs显著提高伤口愈合在糖尿病小鼠(图 3)。

糖尿病动物的伤口缝合。影响病变局部AT-SCs管理局的网站。四组用生理盐水治疗的受伤的糖尿病小鼠(生理盐水),AT-SCs不是转基因(AT-SCs)或AT-SCs adenoviral-mediated基因转移后GFP (AT-SCs GFP),和SDF-1 (AT-SCs SDF-1)。在伤后不同时间点,确定损伤的面积使用图像分析。愈合的报道是最初的伤口面积的百分比(a)。每组代表图像从一个动物受伤后立即被(0)和损伤后不同时间点(b),数据表达的意思是±SEM表明误差; n为每个组= 8 - 12的伤口。值AT-SCs、AT-SCs GFP和AT-SCs SDF-1明显不同( P < 。 05年 )与生理盐水组相比,在时间点由星号表示。此外,在3和5天,伤口关闭改善AT-SCs SDF-1-treated动物相比,AT-SCs GFP集团( P < 。 05年 )。

间充质细胞与脂肪组织细胞介导的基因治疗,因为他们代表一个合适的目标已被证明是容易viral-mediated基因转移( 41]。然后我们评估是否过度SDF-1的downmodulation糖尿病伤口的病理生理学中起着举足轻重的作用,可能导致一个更好的治疗的AT-SCs-mediated治疗。事实上,我们取得了进一步改进adenoviral-mediated SDF-1基因转移到AT-SCs前局部管理。伤口面积和上皮差距显著降低在对待动物。特别是,受伤后伤口关闭3天的百分比24控制老鼠41和58%,分别在动物收到AT-SCs和AT-SCs表达SDF-1。在5天,价值68,分别和78%。全层伤口被完全封闭在7到10天AT-SCs-treated老鼠,而在控制,实现完整的治疗晚于穿孔后14天。

通过肉眼检查和免疫组织化学分析,我们确定了网站的存在GFP-positive管理细胞组织再生几天后管理(图 4)。进一步的研究来确定biodistribution和持久性管理细胞进行使用 在活的有机体内生物荧光成像技术(见下文)。

伤口面积的分析。总荧光显微镜下检查伤口管理GFP-labelled细胞后5天。原来放大10倍(a)和(b) (c)和40 x。反GFP免疫组织化学损伤部位2 (d)和5天受伤后管理GFP标记AT-SCs后(e)。比例尺d e 25 μm。

 3.4。追踪移植AT-SCs光点

后 在活的有机体内管理AT-SCs表达荧光素酶,我们通过实时监测荧光素酶的表达 在活的有机体内成像在整个动物,连同光照片,提供解剖学参考。检测到的强度信号 在活的有机体内成像可以精确量化,与luciferase-expressing细胞的存在,因此有效的细胞移植后管理。由于荧光素代谢需要ATP,只有活细胞表达荧光素酶能够产生一个信号。执行重复的能力分析在同一动物在不同时间点允许我们确定AT-SCs的动能在伤口处biodistribution和移植。

AT-SCs分离从腹股沟时尚垫luciferase-expressing老鼠。图 5显示了起源于BLI信号 7.5 × 10 5 细胞放置在96孔细胞培养板和相同的细胞在伤口局部管理网站。BLI信号的量化non-transduced细胞之间没有任何统计上的显著差异和运载体表达GFP AT-SCs转导SDF-1(图 5)的管理。BLI信号观察到的差异从细胞放置在一个96年后从相同的细胞组织培养和政府依赖鼠标的背,至少部分,大约三倍的面积差96孔的面积相比,活检。

AT-SCs表达荧光素酶的体外和体内成像,在时间为0。刚从luciferase-expressing分离出AT-SCs老鼠受到adenoviral-mediated基因转移((一)non-transduced;(b) Ad-mock-transduced;(c) SDF-1-transduced细胞)。AT-SCs被放置在一个96孔细胞培养板和BLI成像进行(插入每个图面板)。相同的细胞后接种小鼠高血糖的正确执行背病变和BLI重复。面板(d)显示了信号的量化。 请注意。的直径的96孔板是6.4毫米;活检打孔用来诱导受伤的直径是3.5毫米。数据表示为均值±SEM表明误差; n = 3 为每个组。

确定biodistribution传递细胞,一些动物牺牲1,10,15天后伤口感应和病变部位的局部管理AT-SCs表达荧光素酶。BLI执行之前和之后的牺牲受伤区域的鼠标和解剖。如图 6,细胞主要位于病变部位,以最小的蔓延的交付。此外,与皮肤上执行BLI解剖组织面临的CCD相机产生的信号一直低于一个获得块(图 6)。这反映了一个事实,接种细胞主要导致真皮和皮下组织再生和道只在一小部分的皮肤。我们发现一个积极的信号在该地区相应的皮肤和皮下的面积甚至在15天,当伤口完全愈合(图 6(c))。这显然表明接种细胞再生组织的移植和永久即使完全愈合。

在伤口处Biodistribution后局部管理AT-SCs表达荧光素酶。BLI成像代表动物的牺牲1 (a), 10 (b)和(c) 15天之后局部管理在伤口处luciferase-expressing细胞( n = 3 )。伤口周围的区域面临的皮肤切除和BLI执行两个CCD摄像机(b′′,和c′),在相反的方向(一个′′,b′′,和c′′)。在所有时间点,细胞主要位于病变区域以最小的传播从局部的网站管理。

嫁接接种细胞的动力学,表示为第0天BLI信号的百分比是报道的人物 7反向,它与伤口愈合的动力学观察图 3。大多数失去了信号与移植细胞在移植后第一天和第三天之间。大约10%的强度值0天保持从第三天到第十天,表明细胞移植。虽然下级,BLI信号检测单元管理也在14天后,表明细胞移植的组织再生。

持久性和移植后AT-SCs表达荧光素酶在伤口局部管理。糖尿病小鼠治疗受伤后AT-SCs隔绝luciferase-expressing老鼠。纵向分析由BLI治疗后不同时间点表明持久性的信号在伤口愈合的过程。代表图像的实验动物在不同的时间点( n = 6 )。数据显示的百分比值后局部管理的细胞(天0)值表示为均值±SEM误差线所示。

戏剧性的减少干细胞生存后政府的主要障碍阻碍细胞疗法的临床翻译协议。事实上,99%的移植细胞可能死亡的最初几天内移植由于宿主微环境的严酷,他们转移。这主要表现为氧气供应不足或营养基质和大量过剩的自由基( 42]。几个策略来促进供体细胞生存评估( 43]。特别是,预处理的间充质干细胞治疗重组SDF-1导致缺氧的条件下提高生存和增殖 在体外和 在活的有机体内( 44]。

的SDF-1 α/ CXCR4轴配体/受体调节几个关键的生物功能,包括增加细胞生长、增殖、迁移,生存,antiapoptosis和转录激活。特别是,它已经表明,超表达的趋化因子受体CXCR4增加人类脂肪tissue-derived基质细胞的迁移和增殖( 40]。如图 3,我们发现移植AT-SCs overexpressing SDF-1糖尿病动物的促进伤口愈合。有趣的是,我们之间确定一个统计上的显著差异BLI动物信号接收AT-SCs表达SDF-1相对于控制表达GFP,政府(图后1天 8)。这表明SDF-1过度增强生存/扩散管理细胞病变部位在这个时间点,导致有益的影响。然而,两组之间没有显著差异在之后的时间点观察(3、5、7、14天),这表明SDF-1 adenoviral-mediated过度未能改善长期细胞移植的实验模型。然而,SDF-1超表达可能促进prohealing影响真皮成纤维细胞和角质细胞病变周围的网站( 12, 21),导致改善治疗观察图 3。

局部AT-SCs表达荧光素酶和overexpressing SDF-1。SDF-1超表达促进增强生存/扩散管理细胞病变部位受伤后1天,细胞管理、评估的光点。值表示为均值±SEM表明误差; n = 3 ,* P < 。 001年 。

我们的结果显示病变部位AT-SCs政府在改善糖尿病动物的伤口愈合在几天内从伤口感应。BLI成像数据显示,一小部分细胞灌输和管理参与修复组织损伤部位。另一方面,道细胞的数量可能太低,不足以完全解释组织再生的机制。此外,一些证据表明,AT-SCs可能施加有益的影响也通过自分泌效应促进self-profileration和对真皮成纤维细胞通过旁分泌作用,keratonocytes病变周围的网站( 21]。

 4所示。结论

我们已经表明,局部管理AT-SCs提高糖尿病小鼠受损的伤口愈合。此外,使用BLI,我们能够遵循biodistribution和移植的动力学,生存,接种细胞的增殖,证明相对永久性的再生组织即使完全愈合。此外,我们的数据表明,伴随遗传操纵移植AT-SCs旨在促进SDF-1过度可能会进一步提高糖尿病伤口愈合受损。

 确认

这项工作是支持的欧盟FP6喉炎lshb - ct - 2005 - 512102,由意大利卫生部(没有。射频351467)。J.C.W.得到了国家卫生研究院的基金号。HL099117 EB009689。作者感谢s Artuso试训,g·比亚乔,s . Straino寻求帮助。

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