个人电脑 前列腺癌 2090-312x. 2090-3111 印度发布公司 10.1155 / 2014/129582 129582 研究文章 的作用 P73.前列腺癌中二核苷酸多态性与p73蛋白亚型平衡 Carastro. L. Michael. 1 林 惠仪 2 公园 炫 3. http://orcid.org/0000-0003-2233-7168 金 Donghwa 4 http://orcid.org/0000-0001-8281-5999 Radlein 塞琳娜 3. 汉普顿 Kaia K。 1 哈坎 ardeshir. 5 Zachariah. 先生 6 Pow-Sang. 胡里奥 7 公园 杰扬 3. Eggener 斯科特E. 1 坦帕大学化学，生物化学与物理系 坦帕，佛罗里达州33606 美国 ut.edu 2 生物统计部 佛罗里达州坦帕市莫菲特癌症中心33612 美国 moffitt.org 3. 癌症流行病学 莫菲特癌症中心 佛罗里达州坦帕市木兰花路12902号，邮编33612 美国 moffitt.org 4 分子肿瘤科 佛罗里达州坦帕市莫菲特癌症中心33612 美国 moffitt.org 5 解剖病理学系 佛罗里达州坦帕市莫菲特癌症中心33612 美国 moffitt.org 6 泌尿生殖项目，詹姆斯·海利VA医院 坦帕，FL 33612 美国 7 泌尿生殖项目，莫菲特癌症中心 坦帕，FL 33612 美国 moffitt.org 2014年 6 7 2014年 2014年 10. 03. 2014年 21. 05. 2014年 22. 05. 2014年 6 7 2014年 2014年 版权所有©2014 L. Michael Carastro等人。 这是一篇在知识共享署名许可下发布的开放存取的文章，它允许在任何媒体上无限制地使用、传播和复制，只要原始作品被适当地引用。

背景．目前缺乏前列腺癌（PCA）风险的分子标志物。在这里，我们在外显子2中解决了二核苷酸多态性（DNP）的潜在关联 P73.基因与PCa风险/进展的关系，并在含有a的细胞中检测p73蛋白亚型水平的任何中断 P73.DNP等位基因。 方法．我们调查了两者之间的联系 P73.通过拟合逻辑回归模型，对1292例病例和682例对照组进行DNP基因型、PCa风险/侵袭性和生存。 结果．尽管我们没有发现两者之间的联系 P73.DNP与PCa风险呈显著负相关 P73.检测到DNP和PCA侵袭性（AT / AT + GC / AT与GC / GC，或= 0.55,95％CL = 0.31-0.99）。还， P73.DNP与总死亡略微相关(主导模型，HR = 0.76, 95%Cl = 0.57-1.00， P ＝ 0.053 ），以及前列腺特异性死亡（HR = 0.69，95％的Cl = 0.45-1.06， P ＝ 0.09 ）.Western blot分析p73蛋白亚型表明细胞杂合子 P73.DNP相对于Tap73具有较低的Δnp73水平（ P < ０．００１ ）. 结论．我们的发现与之间的关联一致 P73.DNP和用于前列腺癌的侵袭性通过增加所表达TAp73 /ΔNp73蛋白同种型比低风险。

 1.介绍

前列腺癌是全球男性最常见的非皮肤恶性肿瘤。在美国，2014年的发病率为每10万名男性每年147.8例[ 1］.前列腺癌(PCa)的临床挑战之一是区分惰性和侵袭性疾病。这一区别对于促进临床治疗决策非常重要。例如，惰性疾病患者可归类为低风险患者，给予保守的管理和治疗，而侵袭性疾病患者可归类为高风险患者，给予即时治疗(手术、放疗和/或化疗)。

在本前前列腺特异性抗原（PSA）时代，大多数PCA病例现在在肿瘤限制在前列腺时诊断为早期阶段。自由基前列腺切除术是在大系列患者中具有良好结果的器官密闭前列腺肿瘤的参考。但是，约有20-30％的患者接受自由基前列腺切除术在手术后10年内发育肿瘤复发[ 2］.目前，PSA水平、临床分期和Gleason评分被用来评估预后和告知治疗方式[ 3.， 4］.尽管这些特征非常有用，但它们不能完全解释与治疗相关的个体间结果的差异[ 5］.因此，非常需要能够区分侵袭性疾病和非侵袭性疾病的生物标志物，这是非常重要的。

几种证据支持二核苷酸多态性（DNP）（DNP）（RS1801173）之间的关联 P73.基因和几种癌症类型的风险，但一些研究报告了突破性的结果[ 38.- - - - - - 41.］.这个特殊的 P73.DNP是G4C14到A4T14（ P73.DNP）（RS1801173）在外显子2的5'-UTR部分中连接的过渡变化。在8,017例各种癌症患者的META分析中，来自27个流行病学研究的10,610次，重点是各种癌症风险之间的潜在关联 P73.DNP，据报道 P73.DNP与结直肠癌和头颈癌的风险增加有关，但与肺癌、胃癌和食道癌无关，且PCa未被解决[ 40］.在另一项对26项研究中的8148名癌症患者和8150名对照者的联合分析中(其中一些与荟萃分析重叠)，发现两者之间存在正相关 P73.DNP、宫颈癌、结直肠癌、头颈癌和其他癌症，包括乳腺癌、子宫内膜癌、非霍奇金淋巴瘤和卵巢癌，但未涉及PCa [ 5］.到目前为止，只有一项小型研究( n ＝ 177 据报道，在印度北部的一个人群中，没有发现与此相关的病例 P73.有PCa风险的DNP [ 37.］.因此，我们研究了前列腺癌的风险/侵袭性和生存之间的潜在联系 P73.DNP使用了1292名PCa患者(1986年至2003年在莫菲特癌症中心接受手术治疗)和682名年龄匹配的健康男性对照组。

的 P73.该基因是p53肿瘤抑制家族的一个成员。p73肿瘤抑制基因表达的生物学是复杂的，并没有被完全理解。至少有14种p73蛋白的异构体翻译自多个mRNA变异 P73.基因( 42.］.将这些P73蛋白质同种型分为两种主要类别，TAP73和Δnp73，其在其N-termini中不同，并从两种不同的启动子转录，指定P1和P2（参见在线提供的补充材料中的补充图1 http://dx.doi.org/10.1155/2014/129582）.转录活性的TAp73亚型转录自P1启动子，包括包含1到3外显子的全长n端序列。然而，ΔNp73亚型是从启动子P2转录的，启动子P2在外显子4开始转录(补充图) 1 )，且不含n端反式活化(TA)结构域。因此，ΔNp73蛋白亚型对TAp73起主导负作用，因为ΔNp73亚型能够与TAp73以及p53形成四聚体，但不能激活p73或p53靶基因的转录[ 43.］.该Δnp73主导负机制解释了在人类癌症中检测到的牵引力Δnp73水平的观察[ 42.， 44.， 45.］.

存在的确切分子后果 P73.DNP等位基因尚不清楚。同样，机制 P73.DNP影响癌症的风险也未可知。因为这 P73.DNP位于5'-UTR内的外显子2 P73.基因和两个之间的谎言 P73.基因启动子（参考图1），我们推测，这 P73.DNP可能对p73 n端蛋白亚型平衡有影响，可能是由于 P73.基因启动子的利用和/或TAp73 mRNA的稳定性或翻译效率或其他未知的分子机制。因此，我们研究了癌细胞中相对p73亚型蛋白的水平，然后识别了TAp73/ΔNp73蛋白亚型比值与p73 DNP (rs1801173)基因型状态之间的相关性。

 2.患者和方法 2．1.研究参与者和数据收集

研究人群包括从1986年到2003年在莫菲特癌症中心接受前列腺切除术的1292例患者(1232名白种人和60名非洲裔美国人)。病例为前列腺癌患者，年龄36-84岁，经病理证实为原发性浸润性前列腺癌，行根治性前列腺切除术。从莫菲特肿瘤登记处和医疗记录中获取人口统计学和临床信息，包括诊断时的年龄、Gleason评分、TNM分期和随访时间。截至2011年9月30日的死亡日期、死因和重要状态信息来自医疗记录和莫菲特肿瘤登记处，该登记处跟踪在莫菲特癌症中心诊断或初步治疗的病例。此外，还可以从医疗记录中获得预处理血清PSA水平、前列腺包膜浸润、手术边缘状态、精囊浸润和淋巴结状态等信息。复发定义为PSA水平升高(>0.2 ng/mL)、临床转移或PCa相关死亡。该研究由南佛罗里达大学(坦帕，佛罗里达州)的机构审查委员会批准，所有参与者都给出了书面知情同意。

健康对照组包括682名受试者(595名白种人和87名非洲裔美国人)，他们前往莫菲特终身癌症筛查中心或詹姆斯A. Haley VA医院(坦帕，佛罗里达州)。对照组均为男性，既往无癌症诊断。

 2.2。基因组DNA制备和基因分型<斜体> P73 </斜体> DNP

基因组DNA从莫菲特癌症中心组织核心设施获得的血液/口腔样本(对照)或福尔马林固定石蜡包埋的正常前列腺组织块(病例)中制备。根据制造商的建议，使用DNeasy组织试剂盒(Qiagen, Valencia, CA)提取DNA。根据制造商的建议，使用PureLink基因组DNA分离试剂盒(Invitrogen-Life Technologies)从细胞培养中提取培养细胞系的基因组DNA样本。基因组DNA样本使用NanoDrop (Thermo Scientific)进行定量。所有来自患者样本和细胞系的基因组DNA样本均保存在−80°C。

的 P73.DNP的测定使用市售TaqMan Real-Time PCR等位基因鉴别试剂盒(Life Technologies;检测ID号C_16180356_10)和TaqMan基因表达检测主混合(Applied Biosystems-Life Technologies;零件号4369016)，根据制造商的协议。基因分型检测(20 μl反应体积）包括20ng基因组DNA，并使用7900Ht快速实时PCR系统进行（应用生物系统 - 寿命技术）进行。

 2.3。细胞系

组织培养细胞系HepG2，HCT116，H1299，的Caco-2，HEK293，JEKO-1，的Jurkat和BEAS-2B是从ATCC获得的。其他组织培养细胞系中使用的HeLa，MCF7，和H460分别友情提供（DK）。All cell lines, except H460, Jurkat, and JEKO-1, were maintained in DMEM supplemented with 10% FBS, 100 U penicillin, and 100  μ克/毫升链霉素。H460、Jurkat和JEKO-1细胞系在添加10%热灭活胎牛血清、100 U青霉素和100 μ克/毫升链霉素。所有细胞系在37°C和5% CO条件下培养2．

 ２.４.西方的分析

根据制造商的协议，在含有Halt蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Thermo Scientific)的RIPA (Thermo Scientific)缓冲液中裂解，从组织培养细胞中获得总蛋白样品。蛋白样品用BCA蛋白检测试剂盒(Thermo Scientific)定量，10% SDS-PAGE拆分，然后电转移到PVDF (Bio-Rad, Hercules, CA)的1XTris-Glycine (Bio-Rad, Hercules, CA)/20% MeOH的免疫印迹膜上。用1XPBS/5%脱脂乳/0.1% Tween-20/0.02% NaN阻断印迹膜3.．用1:200 (v/v)稀释的p73亚型特异性一抗单克隆抗体或1:1000 (v/v)稀释的抗肌动蛋白一抗多克隆抗体检测封闭膜1小时，然后用不含NaN的三种不同的封闭液冲洗3.10分钟。通过次级抗体 - 辣根过氧化物酶（HRP）缀合物在1：5000稀释的情况下在没有南部的阻塞溶液中检测初级抗体3.1人力资源。用次级抗体- hrp偶联物探查后，用1XPBS/0.1% Tween-20洗涤5次，10分钟。免疫反应蛋白使用Amersham ECL Prime Western Blotting检测试剂(GE Healthcare Life Sciences)进行化学发光检测，并通过荧光成像进行可视化。western分析检测到的p73亚型和肌动蛋白条带使用ImageJ64 ( http://rsbweb.nih.gov/ij/docs/install/osx.html.)，计算TAp73/ΔNp73的相对表达水平比值，计算公式为:TAp73/ΔNp73 = ((TAp73/actin)/(ΔNp73/actin))。

 2.5。抗体

用于检测p73蛋白亚型的主要抗体为ΔNp73单克隆抗体(克隆38C674;和抗全长TAp73的单克隆抗体(克隆5B429;圣克鲁斯生物技术公司，达拉斯，德克萨斯州，美国)。用山羊一抗多克隆抗体检测肌动蛋白(I-19;圣克鲁斯生物技术公司，达拉斯，德克萨斯州，美国)。利用次级抗体- hrp偶联物检测p73亚型特异性单克隆抗体(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)和抗肌动蛋白山羊多克隆抗体(Rockland Immunochemicals, Gilbertsville, PA, USA)。

 2.6。统计分析

描述性统计用于总结参与者的人口统计和临床特征。的 P73.DNP基因型（rs1801173）是使用由疾病状态的描述性统计（风险和复发），存活（前列腺癌特异性生存期和总生存期），和特征（Gleason评分和临床分期），患者的结果总结。后勤回归被用于评估 P73.DNP基因型与双预后相关，包括前列腺癌风险(是/否)、复发(是/否)、Gleason评分(8-10 vs≤7)和TNM分期(III-IV vs I-II)。

对于情况下，总生存和前列腺癌特异性存活率进行了评价。总生存期定义为从手术治疗到死亡日期的日期的时候，由于任何原因。对于谁不死亡患者中，死亡时间在最后一次接触的时间审查。用于评估与总体存活相关的DNP，采用Kaplan-Meier法生成由基因型类别的总体存活曲线。Cox比例风险模型被用来研究对年龄的关联。风险比及其95％置信区间将被计算。

在竞争风险的方法应用于分析 P73.DNP基因型与前列腺癌特异性死亡相关前列腺癌特异性死亡时间定义为从手术治疗日期到前列腺癌特异性死亡日期的时间。其他原因导致的死亡被视为一种相互竞争的风险。产生了特定疾病死亡的累积发病率曲线图。累积发生率是指在给定时间点观察到某一特定事件的个体在此时间点之前没有经历过任何事件的概率。使用竞争风险回归评估与疾病特异性死亡相关的DNP基因型，并根据诊断时的年龄进行调整[ 46.］.主要等位基因被认为是参考等位基因，所有模型都根据年龄进行调整，即病例诊断时的年龄和对照组入诊时的年龄。考虑了不同的遗传模型(log-additive和dominant)。由于非裔美国人的样本量有限，我们没有评估隐性模型。

根据可行性确定样本量。显著水平为0.05，功率为80%。样本量为1,827名白种人(1,232例和595例对照)，最低可检测OR为1.2。样本量为147名非洲裔美国人(60例和87例对照)，最低可检测OR为1.6。

我们已经评估了p73蛋白亚型比率和 P73.肿瘤细胞系的DNP基因型 t以及。对照组基因型分布与Hardy-Weinberg平衡的偏差采用精确检验。统计学检验为双侧，alpha水平<0.05认为有统计学意义。所有的统计分析使用SAS 9.2 (SAS Institute, Cary, NC)和竞争风险方法的cmprsk R软件包进行。

 3.结果

表格 1提供的前列腺癌患者和对照的描述性特性。往往非洲裔患者比白人患者年轻（ P < ０．００１ ）.Gleason评分、临床分期和复发病例比例在两个种族中的分布相似。如预期的那样，两个种族中病例的PSA水平均显著高于对照组( P < ０．００１ ）.

按疾病状况和资料来源分类的研究对象特征。

白种人, N （％） 非洲裔美国人、 N （％）
情况下,( n ＝ 1232 ） 控制,( n ＝ 595. ） 情况下,( n ＝ 60. ） 控制,( n ＝ 87 ）
年龄1 平均数±标准差 60.0 ± 7．4 61.3 ± 9．6 56.4 ± 7．4 57.3 ± 9．2
格里森评分 ≤6. 628 (60.6) N / A. 34（60.6） N / A.
7 348（33.6） 19日(33.9)
8-10 60（5.8） 3（5.3）
阶段 1 55（4.5） N / A. 2 (3.4) N / A.
2 955（78.3） 48 (81.4)
3. 201 (16.5) 9 (15.2)
4 9 (0.7) 0 (0.0)
PSA水平 7．5 ± 9．1 1.1 ± 1.1 5．1 ± 3.1 1.3. ± 1.4
递归式 没有 905 (73.6) N / A. 43 (71.7) N / A.
是的 325（26.4） 17（28.3）
死亡 活着 975 (79.9) 54 (90.0)
PCa死亡 106（8.7） 2 (3.3)
其他死亡案例 139 (11.4) 4 (6.7)
婚姻状况 离婚了 80 (6.6) 5 (8.3)
结婚了 1057 (87.0) 49 (81.7)
分离 4 (0.3) 1 (1.7)
丧偶的 21（1.7） 0（0）
单 53（4.4） 5 (8.3)
重量（kg） 88.4 ± 14．6 93.6 ± 21.6 90.5 ± 14．2 92.5 ± 18.7
高度（m） 1.76 ± 0.07 1.76 ± 0.18 1.77 ± 0．06 1．75 ± 0.21

1 在诊断在入学的控制情况和年龄年龄。

 3.1。<斜体> p73 </斜体> DNP和前列腺癌敏感性和进展

基因型分布 P73.对照组中DNP是用一个Hardy-Weinberg平衡一致 P 使用精确测试，白种人的值为0.903，非洲裔美国人的值为1.0。在公开数据中，该DNP在白种人中的次要等位基因频率(MAF)相似(见表) 2）.MAF的种族差异 P73.在对照组中观察到DNP (rs1801173):白种人和非裔美国人分别为22%和11% ( P < ０．００１ )(表 2）.

基因型与前列腺癌风险、侵袭性和生存率的关系。

因素 比赛 GC / GC GC / AT 在/ dom1 或(95%置信区间)2 P 价值 添加剂1 或(95%置信区间)2 P 价值
案例/控制 白色 750/357. 202分之417 65/27 1.00 (0.82 - -1.23) 0.995 1.02（0.86-1.21） 0.82
黑色的 49/68 9/16 2／1 0.87 (0.37 - -2.04) 0.75 1.00（0.49-2.07） 0.99
递归式Y / N 白色 205/544 100/316 20/45 0.86 (0.66 - -1.12) ０．２５ 0.92（0.74-1.15） 0.48
黑色的 14/35 3/6 0／2 0.97 (0.21 - -4.36) 0.97 0.76 (0.22 - -2.69) 0.68
格里森8 - 10 /≤7 白色 44/589 14/336 2/51 0.55 (0.31- - - - - - 0.99） 0.04 0.61 (0.37 - -1.02) 0．06
黑色的 2/43 1/8 0／2 2.16 (0.17 - -26.99) 0.55 1.36（0.19-9.92） 0.76
阶段3和4/1和2 白色 129/615 70/342 53分之11 0.97（0.71-1.31） 0.83 0.98（0.76-1.26） 0.85
黑色的 8/40 1/8 0／2 0.46 (0.05 - -4.63) 0.51 0.43 (0.06 - -3.07) ０．４０
HR（95％CI）3. P 价值 HR（95％CI）3. P 价值
整体死亡死亡/活着 白色 160/590. 348分之68 17/48 0.76 (0.57- - - - - - 1.00) ０．０５ 0.87（0.68-1.10） 0．24
黑色的 5/44 1/8 0／2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
具体死亡其他/ PCa /活着 白色 88/72/590 40/28/338 11/6/47 0.84（0.58-1.21）4 0.35 0.93 (0.67 - -1.28)4 0.64
0.69（0.45-1.06）5 0.09 0.81（0.55-1.20）5 0.29
黑色的 3/2/44 1/0/8 0/0/2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

1 DOM：主导（AT / AT + GC / AT与GC / GC）;添加：日志添加剂（按/ at / at）。

2或:优势比;置信区间:置信区间;年龄调整Logistic模型。

3.人力资源:风险比;总体死亡采用Cox模型;对于特定死亡，竞争风险回归;所有模型都根据年龄进行了调整。

4其他死亡病例与活着。

5死亡还是活着

为了确定这种遗传变异是否与前列腺癌风险增加有关，我们比较了前列腺癌病例和对照组的基因型频率。在两个种族组中，PCa风险未被修改 P73.DNP(每AT/AT基因型的加性模型，白种人:OR = 1.02, 95%CI = 0.86-1.21，非洲裔美国人:OR = 1.00, 95%CI = 0.49-2.07) 2）.

我们调查的一个角色 P73.DNP在前列腺癌进展和侵略性。的 P73.DNP与高艾奇赛得分显着相关[ 37.， 40， 41.](优势模型，优势比(OR) = 0.55, 95%置信区间(CI) = 0.31-0.99) 2）.在非裔美国患者中未观察到类似的关联。有趣的是, P73.DNP与总死亡略微相关(主导模型，危险比(HR) = 0.76, 95%CI = 0.57-1.00， P ＝ 0.053 )和PCa特异性死亡(HR = 0.69, 95%CI = 0.45-1.06， P ＝ 0.09 、表 2图 1）.由于样本量小，未对非裔美国人患者进行生存分析。

rs1801173与总生存率(a)和前列腺癌特异性生存率(b)之间的关系 P73.调查了前列腺癌进展和侵略性的DNP。P73 DNP与整体死亡略微相关（显性模型，危险比（HR）= 0.76,95％CI = 0.57-1.00， P ＝ 0．0 53. 通过Cox回归调整为年龄）以及PCA特异性死亡（HR = 0.69,95％CI = 0.45-1.06， P ＝ 0.09 通过年龄调整后的竞争风险回归)。

 ３．２．<italic>p73</italic> DNP基因型和癌症细胞系中p73蛋白亚型比

我们评估了P73蛋白质同种型比率之间的相关性的可能性 P73.在培养的癌细胞株中观察到DNP基因型。从11株培养的细胞系中分离出基因组DNA P73.测定DNP基因型 3.）.从这些癌细胞系中分离出总细胞蛋白质样品，并进行P73蛋白N-末端同种型西方绿草分析，用于Tap73和Δnp73，同时以蛋白质负载对照（图）平行印迹 2(一个)和 2 (b)）.使用ImageJ64程序对TAp73亚型、ΔNp73亚型和actin western blotting数据进行量化。这些值被用来计算p73蛋白的n端亚型(以TAp73/ΔNp73的形式)相对于肌动蛋白对照组的比率。肿瘤细胞系数据与杂合子细胞系中相对于ΔNp73的TAp73蛋白水平高于野生型相一致(见表) 3.图 3.， P < ０．００１ ）.值得注意的是，分析的唯一的癌症细胞系是纯合子多态性的 P73.DNP, CaCO-2，不含可检测的p73蛋白(图 2 (b)）.

P73.DNP基因型和 P73.肿瘤细胞系的亚型表达比率。

细胞系 P73.DNP基因型 TAp73 /ΔNp 73 ＊
HCT116. GC / GC 0.68
海拉 GC / GC 0.95
H460 GC / GC 0.74
HEK293 GC / GC 0.72
MCF7 GC / GC 0.97
H1299 GC / GC 0.69
JEKO-1 GC / GC 0.84
BEAS-2B GC / GC 0.86
Jurkat GC / AT 1．40
HepG2 GC / AT 1．39
Caco-2 在/ N / A.

细胞系用于基因分型 P73.DNP状态和西方分析 P73.蛋白N末端的同种型和β-肌动蛋白。* TAp73 /ΔNp73蛋白同种型水平从图西部数据确定 2(一个)和 2 (b)通过使用ImageJ64定量蛋白质条带。使用actin水平作为负载对照校正相对TAp73/ΔNp73蛋白异型比，并使用以下公式计算:TAp73/ΔNp73 = ((TAp73/actin)/(ΔNp73/actin))。

癌细胞系中p73蛋白的N-末端的同种型的分析西。从图癌细胞系裂解物的蛋白质 2(一个)(1.25 μg /嗯）和图 2 (b)(7.50 μ将G /孔）在10％SDS-PAGE凝胶上解析，将分离的蛋白质电转移到PVDF膜上，然后用针对拖曳TAP73或ΔnP73的P73同种型单克隆抗体进行免疫印迹（IB）。作为阳性载荷控制，用山羊多克隆抗体免疫肌动蛋白。使用适当的次级抗体 - 辣根过氧化物酶缀合物和增强的化学发光方法检测初级抗体，然后进行荧光法（IB =原发生物西抗）。

癌细胞系裂解物中的相对Tap73 /Δnp73蛋白质同种型与GC / GC和GC /基因型的裂解物。从图中的Western印迹数据中确定Tap73 /Δnp73蛋白质同种型水平 2(一个)和 2 (b)．这些p73蛋白异构体水平用于计算表中报告的相对比值值 3.．盒绘制的Tap73 /ΔNP73蛋白质同种型比率值的平均值。

 4.讨论

在这项研究中，我们调查了吗？ P73.DNP与modified相关 P73.基因表达，以及确定任何与PCa风险/进展的关联(表 2）.我们观察到， P73.在白种人男性中，DNP与高Gleason评分显著相关。此外，我们对肿瘤细胞株中TAp73和ΔNp73蛋白亚型的分析数据表明，在杂合子细胞株中表达的TAp73/ΔNp73蛋白亚型的比例相对增加 P73.DNP与细胞系野生类型相比 P73.DNP(表 3.,图 3.）.

多项研究已经确定了 P73.DNP作为多种癌症部位的危险因素，包括膀胱[ 6]， 胸部 [ 8颈),( 12.],结直肠[ 15.),肝脏( 26.)、肺( 27.， 28.， 32.),淋巴瘤( 34.]，头部和颈部癌症[ 20.， 23.， 24.］.然而，其他研究也报道了肺[ 29.]及头颈癌[ 19.］.此外，许多研究报告乳房没有关联[ 7， 9， 10.颈),( 11.],结直肠[ 13.， 14.， 16.),子宫内膜 17.]，头和颈部[ 13.， 18.， 19.， 21.， 22.]，胃[ 13.， 25.),卵巢 36.黑色素瘤[ 35.和肺[ 30.， 31.， 33.]癌症（表 4）.最近的荟萃分析表明， P73.一般来说，DNP与各种癌症风险有关[ 38.- - - - - - 41.］.这些不一致的结果可能是由于不同种族群体和环境因素的不同MAF。目前，只有一项研究（ n ＝ 177 病例)，没有报告PCa风险与 P73.DNP [ 37.］.这是第一个探讨前列腺癌侵袭性和前列腺癌之间潜在关联的研究 P73.DNP。

关联研究综述 P73.DNP在各种癌症网站1．

地点 人口 案例/控制 或(95%置信区间) 参考
膀胱 印度 200/200 1.54（1.02- - - - - - 2.33) ［ 6］
乳房 中国人 178分之170 0.77 (0.50 - - - - - -1.19） ［ 7］
乳房 中国人 170/0 2.76 （ 1.17 - - - - - - 6.49 ） 2 ［ 8］
乳房 日本人 200/282 0.82 (0.57 - -1.19) ［ 9］
乳房 法国白 34分之59 2.46（0.92-6.58） ［ 10.］
颈 葡萄牙语 176/141 1.01 (0.63 - -1.62) ［ 11.］
颈 日本人 112/442 1.51 (1.00- - - - - - 2.30) ［ 12.］
结直肠 日本人 147/235 0.85 (0.56 - -1.29) ［ 13.］
结直肠 突尼斯 150/204 1.09 (0.71 - -1.66) ［ 14.］
结直肠 朝鲜文 383/469 1.50 (1.14- - - - - - 1.96) ［ 15.］
结直肠 瑞典 179/260 0.92 (0.53 - -1.53) ［ 16.］
子宫内膜 日本人 114/442 1.36 (0.90 - -2.06) ［ 17.］
食管 中国人 348/630. 1.02 (0.78 - -1.34) ［ 18.］
食管 日本人 102/235 0.64（0.40-1.04） ［ 13.］
食管 英国白人 152分之84 0.90 (0.53 - -1.53) ［ 19.］
H＆N. 美国白 708/1229. 1.31 (1.09- - - - - - 1.58) ［ 20.］
H＆N. 意大利人 283/295 1.36（0.95-1.93） ［ 21.］
H＆N. 美国白人 326/349 1.06 (0.78 - -1.45) ［ 22.］
口服 印度 303/319. 2.38（1.73- - - - - - 3.29) ［ 23.］
Oropharyngeal. 美国混合 309/0 2.10 （ 1．20 - - - - - - 3.80 ） 2，3 ［ 24.］
胃 意大利人 114/295 0.94 (0.58 - -1.54) ［ 25.］
胃 日本人 235分之144 0.88 (0.58 - -1.34) ［ 13.］
肝 中国人 476/526 2.19 （ 1．25 - - - - - - 3.83 ） 4 ［ 26.］
肺 中国人 293/380 1.48 (1.08- - - - - - 2.02) ［ 27.］
肺 美国白 1054/1139 1.34 (1.13- - - - - - 1.59) ［ 28.］
肺 中国人 588分之425 0.67 (0.52- - - - - - 0.86) ［ 29.］
肺 朝鲜文 582/582 1.13 (0.90 - -1.43) ［ 30.， 31.］
肺 美国白 863/852. 1.34 (1.10- - - - - - 1.64） ［ 32.］
肺 日本人 189/235 0.91 (0.62 - -1.34) ［ 33.］
淋巴瘤 日本人 103/440 1.61 (1.04- - - - - - 2.47) ［ 34.］
黑色瘤 白人 805/838 1.05（0.86-1.28） ［ 35.］
卵巢 中国人 257/257 0.81（0.95-1.18） ［ 36.］
前列腺 印度 177/265 1.21 (0.80 - -1.86) ［ 37.］

1 分析基于显性模型（AT / AT + GC /与GC / GC）。

2情况下。

3.HPV16 +与HPV16-。

4HbsAg-positive个人。

一些研究发现，与正常组织相比，肿瘤组织和肿瘤来源细胞系中两种主要p73 n端异构体的相对丰度发生了中断[ 47.， 48.］.在许多癌症类型中，由于相对较高的ΔNp73水平，TAp73和ΔNp73表达之间的平衡被改变[ 44.］.转录不活跃的ΔNp73以一种主要的负方式对TAp73转录活性和p53起作用[ 44.］.此主导负效果被认为与背后ΔNp73相关的肿瘤促进性能。一些报道已经检测到在通过mRNA和肿瘤组织中免疫组织化学染色的实时PCR分析TAp73 /ΔNp73表达的比值的改变相比于正常组织[ 48.， 49.］.因此，我们讨论了两者之间关联的可能性 P73.DNP基因型和P73蛋白质同种型表达率通过分析已知为p73-阳性的几种癌细胞系。

的 P73.DNP，外显子2的推定的功能多态性，可以理论上影响推定的茎 - 环结构，从而影响p73蛋白的表达。一些研究报告之间的关联显著 P73.DNP (rs1801173)及多种癌症，包括前列腺癌[ 47.］.Arvanitis et al. [ 47.]报道p73蛋白亚型平衡在良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌中被破坏。这些结果表明p73蛋白亚型平衡的破坏可能是前列腺癌发生的关键。

其中一种生物学机制是 P73.DNP等位基因和前列腺癌的攻击性来自于我们的p73蛋白亚型的分子数据。我们西方分析（图 2(一个)和 2 (b))，表明ΔNp73在杂合子的细胞系中相对于TAp73降低 P73.DNP(表 3.图 3.）.因此，它的存在是合理的 P73.DNP等位基因导致前列腺癌组织ΔNp73蛋白水平相对降低，可预测降低前列腺癌侵袭或复发的风险。虽然唯一的细胞系(CaCO-2)被确定为纯合子多态 P73.DNP(表 3.）在我们的西方分析中含有可检测的P73蛋白质（图 2 (b))，我们不能排除CaCO-2细胞系中存在其他畸变的可能性 P73.等位基因，例如部分纯合缺失，如p53阴性NCI-H1299细胞系中存在的那样。需要进一步的分子研究来充分了解所用的分子机制 P73.DNP遗传变异可能导致ΔNp73相对于TAp73在PCa中的表达水平较低。

目前的研究的局限性在于非裔美国人人口和癌症细胞系的样本量小。因此，有必要进行更大规模的研究来证实蛋白表达与前列腺癌风险/进展之间的关系 P73.DNP是真实存在的，不是偶然发现的。此外，未来对前列腺癌组织来源的癌细胞系中p73蛋白亚型比率的研究可能会进一步深入了解两者之间的关系 P73.DNP基因型和p73蛋白亚型表达水平。

总之， P73.DNP可能影响前列腺癌和P73蛋白表达的侵蚀性。这些新颖调查结果是调查其重要性的更大的研究。识别 P73.DNP等位基因作为PCA攻击性的保护因素可能导致个性化干预策略，这可以适用于风险水平。

 利益冲突

提交人声明没有关于本文的出版物的利益冲突。

 致谢

本研究部分受到国家癌症研究所（R01CA128813，PI：Jong Y. Park）以及由坦帕大卫德罗大学研究教授的补助金（PI：L. Michael Carastro）。

 学院核武器。监测，成虫病和最终结果计划，2014年 西迪基 美国一个。 inman. B. A. Sengupta. 年代。 斯莱扎克 j . M。 Bergstralh e . J。 Leibovich B. C. Zincke H。 Blute m . L。 根治性前列腺切除术后肥胖与生存率:一项10年前瞻性队列研究 癌症 2006 107. 3. 521. 529. 2 - s2.0 - 33746301652 10.1002 / CNCR.22030 蒂特 A. E. 普雷斯蒂 j . C。 Jr。 阿伦森 w·J。 特里斯 m·K。 凯恩 C. J. aml C. L. 菲德兰德 S. J. 旨在预测生物化学复发（BCR）的拓图可以更好地预测比BCR更多临床相关的前列腺癌结果吗？搜索数据库组中的报告 泌尿外科 2013年 82 1 53. 58. 2 - s2.0 - 84879528265 10.1016 / j.urology.2012.10.090 赵 Y. M. 荣格 S. J. 赵 N。 金 蔡明俊。 Kattan m·W。 yu. C。 安 H。 RO. j . Y。 国际前列腺癌变异对临床局部前列腺癌生化复发预测列线图的影响 世界泌尿学杂志 2013年 1 7 2-S2.0-84878812074 10.1007 / S00345-013-1111-6 Iremashvili V. Soloway m . S。 佩莱斯 l 罗森博格 D. L. Manoharan M。 预测临床无显著性前列腺癌的列线图的比较验证 泌尿外科 2013年 81 6 1202 1208 2-S2.0-84878591132 10.1016 / J.Urology.2013.01.062 贾斯瓦尔 P. K. 辛格 V. 米塔尔 r D。 印度北部P21 31密码子多态性和P73基因二核苷酸多态性与膀胱癌易感性的研究 印度人类遗传学杂志 2013年 19. 3. 293. 300 周 X。 吴 C。 p73 G4C14-A4T14多态性与乳腺癌遗传易感性的关联:一项病例对照研究 医学肿瘤学 2012 29. 5 3216 3221 2 - s2.0 - 84880256794 周 X。 P73 G4C14-to-A4T14多态性与中国西南部的三阴性乳腺癌正相关 医学肿瘤学 2013年 30. 2、第515条 2-S2.0-84874170178 10.1007 / s12032 - 013 - 0515 - x 黄 X.-E。 Hamajima N。 Katsuda. N。 松尾 K。 Hirose K。 弘水谷 M。 岩田 H。 三浦 年代。 香 J。 Tokudome 年代。 日本田岛 K。 p53密码子Arg72Pro和p73 G4C 14- a4t14外显子2基因多态性与日本乳腺癌风险的关联 乳腺癌 2003 10. 4 307. 311. 2-S2.0-1542546270 10.1007 / BF02967650 Ahomadegbe j . C。 Tourpin 年代。 Kaghad M。 亚 l Vayssade M。 马修 m . C。 Rochard F。 Spielmann. M。 Tursz T. 头 D。 Riou的 G。 Bénard. J。 乳腺癌中P73基因的杂合性丧失，等位基因沉默和降低表达：炎症性乳腺癌中的改变患病率 致癌基因 2000 19. 47. 5413 5418 2 - s2.0 - 0034626724 Craveiro R。 布拉沃 我。 Catarino. R。 特谢拉 a . L。 索萨 H。 佩雷拉 D。 佩雷拉 H。 睿 M。 p73 g4c14 - a4t14多态性在宫颈癌易感性中的作用 DNA与细胞生物学 2012 31. 2 224 229 2 - s2.0 - 84856698297 10.1089 / dna.2011.1294 尼沃 y。 Hamajima N。 阿特拉 y。 山本 K。 Tamakoshi 一个。 斋藤 T. Hirose K。 Nakanishi. T. 那霸 一个。 Kuzuya K。 日本田岛 K。 EXON 2和P53 ARG72PRO在外显子2和P53 ARG72PRO的遗传多态性及日语宫颈癌的风险 癌症信件 2004 205 1 55. 60. 2-S2.0-10744222231 10.1016 / j.canlet.2003.11.014 Hamajima N。 松尾 K。 铃木 T. Nakamura. T. 松 一个。 Hatooka 年代。 筱田 M。 Kodera y。 yamamura. y。 平井伯昌 T. k T. 日本田岛 K。 在日本，p73 g4c14 - a4t14外显子2和p53 Arg72Pro多态性与消化道癌症风险没有关联 癌症信件 2002 181 1 81 85 2 - s2.0 - 18344393778 10.1016 / s0304 - 3835 (02) 00041 - 1 Arfaoui a . T。 Kriaa l . b . M。 el hadj. O. E. A. 本Hmida m·A。 Khiari. M。 Khalfallah. T. Gharbi l mzabi. 年代。 Bouraoui 年代。 突尼斯患者p73外显子2 GC/AT多态性与结直肠癌风险和生存的关系 菲尔绍档案 2010 457 3. 359. 368. 2-S2.0-77956920669. 10.1007 / s00428 - 010 - 0942 - 4 李 k . E。 在香港 y S。 金 B. G. 金 n Y。 李 k . M。 kwak. j . Y。 卢武铉 m . S。 P73 G4C14到A4T14多态性与结直肠癌风险和生存有关 世界胃肠病学杂志 2010 16. 35. 4448. 4454 2 - s2.0 - 77957595393 10.3748 / wjg.v16.i35.4448 具有 D。 Arbman G。 太阳 X. F. p73基因多态性与结直肠癌风险和生存的关系 致癌作用 2005 26. 1 103. 107. 2 - s2.0 - 13444272204 10.1093 / carcin / bgh305 尼沃 y。 Hirose K。 松尾 K。 日本田岛 K。 Ikoma y。 Nakanishi. T. 那霸 一个。 Kuzuya K。 Tamakoshi 一个。 Hamajima N。 日本受试者中p73 g4c14 - a4t14外显子2多态性和p53 Arg72Pro多态性与子宫内膜癌风险的关联 癌症信件 2005 219 2 183 190 2 - s2.0 - 13944275192 10.1016 / j.canlet.2004.10.018 通用电气 H。 王 Y. M. 曹 Y. Y. 陈 z F。 温 d·G。 郭 W. 王 N。 张 X. F. 李 y。 张 j . H。 在中国高发区，p73多态性与食管鳞状细胞癌的易感性无关 食道疾病 2007 20. 4 290. 296. 2 - s2.0 - 34447339918 10.1111 / j.1442-2050.2007.00672.x 瑞安 B. M. 麦克马纳斯 R。 达利 J. S. 纸盒 E。 基林 P. W. N. 雷诺兹 J. V. 凯莱赫 D。 常见的p73多态性与食管癌的发病率降低有关 英国癌症杂志 2001 85 10. 1499 1503. 2- s2.0-0035900801 10.1054 / bjoc.2001.2066 李 G。 Sturgis. e . M。 王 l E。 张伯伦 R M。 amos. C. I. Spitz. m·R。 El-Naggar. 答:K。 在香港 w·K。 魏 Q。 一个p73基因的外显子协会2 G4C14到A4T14多态性与头部和颈部的鳞状细胞癌的风险 致癌作用 2004 25. 10. 1911年 1916年 2- s2.0-6444224316 10.1093 / carcin / bgh197 加利 P。 Cadoni. G。 volante. M。 de feo. E。 爱茉莉 R。 Giorgio. 一个。 Arzani D。 萨鲁替蒂 G。 Ricciardi. G。 Boccia. 年代。 一项关于意大利人群中p53和p73多态性对头颈癌风险综合影响的病例对照研究 BMC癌症 2009 9，第137条 2 - s2.0 - 66749159056 10.1186 / 1471-2407-9-137 陈 X。 Sturgis. e . M。 El-Naggar. 答:K。 魏 Q。 李 G。 p53密码子72和p73 g4c14 - a4t14多态性对从不吸烟者hpv16相关口腔癌风险的综合影响 致癌作用 2008 29. 11. 2120 2125 2-S2.0-56049115354 10.1093 / carcin / bgn191 Misra C。 Majumder M。 Bajaj. 年代。 戈什 年代。 罗伊 B。 Roychoudhury 年代。 P53，P73和MDM2基因座的多态性调节烟草相关的白斑和口腔癌的风险 分子致癌作用 2009 48. 9 790. 800 2 - s2.0 - 69049099383 10.1002 / mc.20523 王 Z. Sturgis. e . M。 郭 W. 首歌 X。 张 F。 徐 l 魏 Q。 李 G。 p73和p53基因变异与hpv16阳性口咽癌的关系 《公共科学图书馆•综合》 2012 7 4 2- s2.0-84859853653 10.1371 / journal.pone.0035522 E35522 De Feo说 E。 佩尔夏尼 R。 La Greca 一个。 爱茉莉 R。 Arzani D。 Rausei 年代。 D 'Ugo D。 Magistrelli P。 范名女警 厘米。 Ricciardi. G。 Boccia. 年代。 p53和p73基因多态性对胃癌风险和进展影响的病例对照研究 突变的研究 2009 675 1-2 60. 65. 2-S2.0-64249166426 10.1016 / j.mrgentox.2009.02.009 邓 B。 刘 F。 魏 y。 罗 l 陈 X。 杨ydF4y2Ba l 李 B。 中国人群中p73外显子2 g4c14 - a4t14多态性与肝癌风险的关联 肿瘤生物学 2013年 34. 1 293. 299. 2 - s2.0 - 84872821309 10.1007 / s13277 - 012 - 0550 - 9 张 X。 李 X。 吴 Z. 林 F。 周 H。 p73 g4c14 - a4t14多态性与中国北方汉族肺癌发病风险相关 分子致癌作用 2013年 52. 5 387. 391. 2 - s2.0 - 84876117642 10.1002 / MC.21869 李 G。 王 l E。 张伯伦 R M。 amos. C. I. Spitz. m·R。 魏 Q。 p73 g4c14 - a4t14多态性与肺癌风险 癌症研究 2004 64. 19. 6863 6866. 2-S2.0-4944250785 0008 - 5472. - 10.1158 / - 04 - 1804 胡 Z. 苗族 X。 马 H。 棕褐色 W. 王 X。 陆 D。 魏 Q。 林 D。 沉 H。 p73基因二核苷酸多态性与肺癌在中国人群风险降低相关 国际癌症杂志 2005 114. 3. 455 460 2 - s2.0 - 14044259992 10.1002 / ijc.20746 崔 j·E。 康 H. G. 得知崔 m . H。 金 e . J。 李 w·K。 查 S. I. 金 C. H. 荣格 t·H。 公园 j . Y。 P73 G4C14到A4T14多态性与肺癌的韩国人口风险之间的关联 生化遗传学 2006 44. 11-12 543. 550. 2 - s2.0 - 39049176095 荣格ydF4y2Ba H. J. 公园 s . H。 李 w·K。 p73和MDM2多态性对肺癌风险的联合作用 分子致癌作用 2007 46. 2 100. 105. Schabath m B。 吴 X。 魏 Q。 李 G。 顾 J。 Spitz. m·R。 p53基因和p73基因多态性对肺癌的风险联合作用 癌症流行病学生物标志物和预防 2006 15. 1 158. 161. 2 - s2.0 - 33645453831 10.1158 / 1055-9965.epi-05-0622 的节目 一个。 松尾 K。 Hamajima N。 伊藤 H。 Hatooka 年代。 Suyama M。 Mitsudomi T. 日本田岛 K。 非小细胞肺癌与吸烟的不同危险关系:TP53和TP73基因型的比较 亚太癌症预防杂志 2003 4 2 107. 112. 2 - s2.0 - 0142214542 HISHIDA. 一个。 松尾 K。 日本田岛 K。 Ogura M。 Kagami y。 塔基 H。 Morishima y。 Emi N。 Naoe T. Hamajima N。 P53 Arg72Pro的多态性，P73 G4C14到A4T14外显子2和p21 Ser31Arg和日本非霍奇金淋巴瘤的风险 白血病和淋巴瘤 2004 45. 5 957 964 2 - s2.0 - 11144357230 10.1080 / 10428190310001638878 李 C。 陈 K。 刘 Z. 王 l E。 Gershenwald. j·E。 李 j·E。 普罗佐 诉G。 Duvic M。 格里姆姆 大肠。 魏 Q。 TP53 Arg72Pro的多态性与皮肤黑色素瘤的风险有关，而p73 G4C14>A4TA4和p21 Ser31Arg的多态性无关 皮肤病学调查杂志 2008 128. 6 1585 1588 2 - s2.0 - 43749086239 10.1038 / sj.jid.5701186 康 年代。 王 D. J. 李 w·S。 王 N。 周 R M。 太阳 D. L. 段 Y. N. 李 美国Z。 李 X. F. 李 y。 p73和MDM2多态性与中国女性上皮性卵巢癌风险的关系 国际妇科癌症杂志 2009 19. 4 572. 577. 2 - s2.0 - 67651049049 10.1111 / IGC.013E3181A130AB 米塔尔 r D。 乔治 g . P。 Mishra. J。 米塔尔 T. 卡普尔 R。 P53和P73基因功能多态性在印度北部案例对照研究中的作用 医学研究档案 2011 42. 2 122. 127. 2 - s2.0 - 79955746694 10.1016 / j.arcmed.2011.03.001 王 l 高 R。 yu. l p73 g4c14 - a4t14多态性与癌症风险的联合分析 分子生物学报告 2012 39. 2 1731. 1738 2- s2.0-84860335596 10.1007 / s11033-011-0913-0 yu. X. J. 方 F。 谢 J。 TP73多态性（G4C14-A4T14）与癌症风险的关系：基于文献的荟萃分析 基因 2011 484 1-2 42. 46. 2 - s2.0 - 79960939739 10.1016 / j.gene.2011.05.022 刘 F。 刘 l 李 B。 魏 y G。 杨ydF4y2Ba l . N。 温 t F。 徐 m Q。 王 w·T。 杨 j . Y。 p73 G4C14-A4T14多态性与癌症风险:基于27个病例对照研究的荟萃分析 诱变 2011 26. 4 573. 581. 2 - s2.0 - 79959702329 10.1093 /防止发酵/ ger018 胡 y。 姜 l 郑 J。 你 y。 周 y。 焦 年代。 p73外显子2 g4c14 - a4t14多态性与癌症风险的关联:一项荟萃分析 DNA与细胞生物学 2012 31. 2 230 237 2 - s2.0 - 84863057018 10.1089 / dna.2011.1305 墨累 - Zmijewski F。 车道 D. P. 贝尔登 J.-C。 P53 /p63/p73亚型:协调细胞分化和应激反应的亚型组合 细胞死亡与分化 2006 13. 6 962 972 2 - s2.0 - 33646798450 10.1038 / sj.cdd.4401914 马拉巴斯 M。 Vikhanskaya F。 Broggini M。 P73:癌症中的一个明暗对照基因 欧洲癌症杂志 2007 43. 9 1361 1372 2-S2.0-34249907008 10.1016 / j.ejca.2007.01.042 贝利 s G。 克拉格 m . S。 汤森 P. A. 家庭摩擦为Δnp73对抗P73和P53 国际生物化学与细胞生物学 2011 43. 4 482 486 2 - s2.0 - 79952101568 10.1016 / J.Biocel.201012.022 Zaika A. I. 斜盘 N。 erters. s . H。 SANSOME C。 约瑟夫 T. W. 珍珠 M。 Chalas E。 摩尔 美国米。 δNp73是野生型p53和TAp73的显性负抑制因子，在人类肿瘤中上调 实验医学杂志 2002 196 6 765. 780. 2 - s2.0 - 0037119631 10.1084 / jem.20020179 细 J.P。 灰色的 R. J. 竞争风险子分布的比例风险模型 美国统计协会杂志 1999 94 446 496. 509. 2 - s2.0 - 1542532754 Arvanitis d . A。 联族 E。 Soulitzis N。 Delakas D。 Spandidos d . A。 良性前列腺增生和前列腺癌中p73亚型平衡失调 肿瘤的报道 2004 12. 5 1131 1137 2- s2.0-16544383365 关 M。 陈 y。 ΔNp73在前列腺良恶性肿瘤中的异常表达:与Gleason评分的相关性 临床病理学杂志 2005 58. 11. 1175 1179. 2-S2.0-27644458185 10.1136 / jcp.2005.026955 Arfaoui a . T。 Mahmoud. l . k . B。 亨迪达 A. B. Khiari. M。 穆罕默德 a . L。 沙尔 我。 Khalfallah. T. Regaya S. M. Bouraoui 年代。 突尼斯患者中p73多态性与全长(TAp73)和nh2截尾(ΔNp73)亚型免疫组化谱的关系 应用免疫组化和分子形态学 2010 18. 6 546. 554. 2 - s2.0 - 78650447622 10.1097 / pai.0b013e3181e9fe58