OMCL 氧化医学和细胞寿命 1942 - 0994 1942 - 0900 Hindawi 10.1155 / 2021/7308897 7308897 研究文章 Olaparib:从实验克罗恩病临床应用PARP抑制剂保护和维护屏障完整性通过改善生物能疗法通过拯救在结肠上皮细胞糖酵解 https://orcid.org/0000 - 0002 - 8904 - 3976 Kovacs Dominika 1 https://orcid.org/0000 - 0001 - 7557 - 3004 Vantus 中提琴Bagone 1 https://orcid.org/0000 - 0003 - 0622 - 442 x 我们 人 1 https://orcid.org/0000 - 0001 - 6827 - 9894 卡尔曼 Nikoletta 1 https://orcid.org/0000 - 0002 - 5726 - 4731 Schicho 鲁道夫 2 3 https://orcid.org/0000 - 0002 - 1906 - 4333 Gallyas 费伦茨 1 4 5 https://orcid.org/0000 - 0002 - 7147 - 0080 Radnai Balazs 1 Matias Sarandy Mariaurea 1 生物化学和医学化学 医学院 佩奇大学 7624年佩奇 匈牙利 pte.hu 2 药理学分工 奥托Loewi研究中心 格拉茨医科大学的 Universitatsplatz 4 8010年格拉茨 奥地利 medunigraz.at 3 BioTechMed 8010年格拉茨 奥地利 biotechmedgraz.at 4 Szentagothai研究中心 佩奇大学 7624年佩奇 匈牙利 pte.hu 5 研究小组有Nuclear-Mitochondrial交互 1245年布达佩斯 匈牙利 2021年 15 9 2021年 2021年 18 4 2021年 24 8 2021年 15 9 2021年 2021年 版权©2021 Dominika Kovacs et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

克罗恩病(CD)是一种炎症性疾病的肠上皮屏障功能障碍和粘膜损伤的特征。保利(ADP-ribose)的活动polymerase-1 (PARP-1)是深入参与炎症的pathomechanism因为它导致能源枯竭和细胞内线粒体的失败。专注于上皮细胞的上皮屏障完整性和生物能疗法,我们调查是否临床应用PARP抑制剂olaparib可能改善实验CD。我们使用了口服PARP抑制剂olaparib 2, 4, 6-trinitrobenzene磺酸- (TNBS)诱导小鼠结肠炎模型。炎症评分、细胞因子水平,结肠组织学、血液分析、和肠道渗透性进行了研究。Caco-2单层培养是利用作为上皮屏障模型,我们使用qPCR和光学显微镜成像,并测量impedance-based屏障的完整性,FITC-dextran渗透率、细胞凋亡、线粒体耗氧率,和细胞外酸化率。Olaparib减少炎症评分,il - 1的浓度<我talic> β和il - 6、il - 10的水平,增强和降低TNBS-colitis肠道通透性。血液细胞比率,如淋巴细胞,单核细胞比率,血小板,淋巴细胞比率,嗜中性粒细胞和淋巴细胞比率提高了。在H2O2对待Caco-2单层,olaparib形态变化,降低屏障通透性,保护屏障的完整性。在氧化应激,olaparib增强糖酵解(细胞外酸化率),它改善线粒体功能(线粒体耦合效率、最大呼吸和呼吸产能闲置)在上皮细胞。Olaparib, PARP抑制剂用于人类癌症治疗,改善实验CD和保护肠道屏障的完整性,防止其充满活力的崩溃;因此,它可以被用来治疗克罗恩病。

 奥地利科学基金 P33325 国家研究、开发和创新基金 unkp - 20 - 5 - pte - 762 unkp - 19 - 4 pte - 405 马札尔人的Tudomanyos Akademia 财政部、匈牙利 波/ 00855/18/5 2.3.2 ginop - - 15 - 2016 - 00049 - g ginop - 2.3.3 15 - 2016 - 00025 欧盟 efop - 3.6.1 - 16 - 2016 - 00004 1。介绍

炎症性肠病(IBD)是一种慢性和不懈的肠道炎性疾病。超过100万居民在美国和欧洲的大约250万名患有炎症性肠病,和它的发病率是永久上升 1]。IBD展品两种主要形式,即溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)和它出现在冲突和缓解阶段( 2]。尽管加州大学和CD是两种截然不同的形式的炎症性肠病,他们分享上皮屏障功能障碍的现象。障碍失败往往导致肠道通透性增加,一个条件称为“肠漏”( 3]。在这个障碍,肠道微生物群可以直接进入结肠组织和诱导免疫细胞的激活导致慢性炎症( 4, 5]。肠道通透性增加的发起者不是清楚地阐明,但它通常是建议增加渗透率是改变能量代谢的结果和肠道上皮细胞的线粒体功能障碍(IEC) ( 6]。与conplastic鼠标菌株为例,调查,共享相同的核基因组但有不同的线粒体基因组,证明这些老鼠高粘膜呼吸链活动和ATP浓度升高开发不如那些激烈的结肠炎生产小数量的粘膜ATP ( 7]。在CD患者中,增加回肠黏膜渗透性是伴随着线粒体肿胀和ATP浓度下降( 8]。此外,复杂的活动二世(CII)线粒体电子传递链的一部分(等),发现被废除的UC患者结肠( 9]。另一组发现低水平的CI和文明在IBD患者与对照组相比,还测量了低ATP浓度( 10]。此外,增强乳酸水平被发现在CD患者与健康人相比,这与疾病活动( 11]。所有这些结果表明线粒体功能障碍,干扰氧化磷酸化和增强糖酵解活性的粘膜炎症性肠病病人。

在生理条件下,iec用丁酸作为主要能源来源( 12]。丁酸盐是由几个种类的微生物群,它是在iec通过异化<我talic> β氧化和柠檬酸循环(CAC) [ 13- - - - - - 15]。此外,脱氢酶的分解代谢的途径减少河畔+和时尚NADH + H+和FADH2促进减少线粒体呼吸链的CI和人民 16]。此后,CI、CIII和文明的质子泵内膜对面的矩阵膜间隙提高质子梯度( 16]。等年底文明消费O2并降低H2o .最后,质子梯度驱动FOF1ATP酶,从ADP和ATP的P我( 16]。

然而,在炎症、线粒体功能障碍和mitochondria-derived ROS增加。在这种情况下,iec开关的代谢氧化磷酸化(OXPHOS)有氧糖酵解( 13, 17]。在有氧糖酵解,葡萄糖转换乳酸没有耗氧量,虽然足够的氧气存在于细胞( 18]。在这种情况下,糖酵解产生ATP和,作为一个副产品,由丙酮酸合成乳酸是由乳酸脱氢酶( 17]。由于线粒体活性氧的主要来源( 19),分解代谢的通路通过糖酵解和乳酸脱氢酶绕过了线粒体和线粒体ROS不提要生成( 20.]。因此,细胞关闭线粒体保护自己免受线粒体ROS ( 21]。这个概念被发现加强促炎细胞因子(TNF -<我talic> α,il - 1<我talic> β和干扰素-<我talic> γ)增加了大鼠肠上皮细胞的糖酵解率,也引发了ATP营业额( 22]。也<我talic> c . rodentium有氧糖酵解和诱发小鼠感染增强sodium-glucose运输车4和乳酸脱氢酶a的水平同时,酶CAC和OXPHOS表达下调( 23]。最重要的是,一个强大的表达糖酵解酶被发现在IBD患者的结肠 24]。在活跃的CD,乳酸水平与对照组相比显著升高( 11]。因此,在结肠炎,有氧糖酵解成为ATP的主要来源。然而,在严重的炎症,激活酶的聚(ADP-ribose) -polymerase-1 (PARP-1)块糖酵解 25),即。,我tterminates the “last safe way” of energy production and forces the cells along the death pathway causing strong mucosal damage with severe ulceration and compromised barrier function.

PARP-1一直参与癌症发展和炎症。因此,PARP-1- / -老鼠保护在2、4、6-trinitrobenzene磺酸- (TNBS)诱导结肠炎( 26)和药理抑制剂PARP-1改善葡聚糖钠sulfate-induced [ 27和TNBS-induced结肠炎 28在啮齿动物)。PARP-1激活DNA损伤和催化polyADP-ribosylation使用NAD (PARylation)众多核蛋白质+作为底物( 29日]。这个过程是一个部分的DNA损伤反应导致DNA修复酶的激活( 30.]。然而,过度的PARP激活可以完全耗尽河畔+池,使细胞能量代谢不可能( 31日]。几行证据证明PARP激活不仅耗尽河畔+池也抑制了己糖激酶的酶,这种酶催化糖酵解的第一步( 25]。因此,抑制糖酵解无法养活CAC与乙酰辅酶a(由丙酮酸脱氢酶糖酵解成品丙酮酸),和CAC不能减少河畔+和时尚喂养线粒体等OXPHOS [ 32),因此PARP-induced线粒体功能异常产生,至少部分,从基质流量的减少糖酵解CAC等( 25]。以后,在严重的结肠炎,糖酵解是ATP的主要来源(因为线粒体关闭)( 21),同时也抑制了糖酵解PARP ( 25],iec与精力充沛的崩溃,他们不得不面对失去形成一个强大的能力和连续障碍( 7]。

在目前的研究中,我们调查是否olaparib, PARP抑制剂用于治疗人类癌症,有有益的影响在CD小鼠模型,因此,它是否可以被用来治疗CD。要回答这个问题,我们应用期间olaparib TNBS-induced实验性结肠炎模型。此外,由于iec的第一道防线的结肠癌和障碍中断是IBD的标志,我们使用Caco-2结肠上皮细胞屏障功能和能源生产调查<我talic> 在体外。

 2。材料和方法 2.1。动物和实验性结肠炎

男性CD1小鼠(美国杰克逊实验室,巴尔港,我)在SPF动物培育和维护设施部门的免疫学和生物技术,佩奇大学医学院。6 - 8周时,他们被运到我们的动物房设施和标准化的情况下适应了两周。标准实验室食物和水随意。实验过程是动物研究审查委员会批准佩奇大学医学院(许可证号码:BA02/2000-4/2017)。结肠炎的实验中,我们使用车辆(阿明费),TNBS, TNBS + olaparib (TNBS + olap)治疗组。总共72只动物被使用;1只老鼠死于实验前的评估。在我们的实验环境中,每组包含3 - 9的动物。我们执行3独立实验包括总共9 VEH 26 TNBS 9 olaparib TNBS + 20毫克,27 TNBS + 50毫克olaparib)。年龄(8 - 10周),sex-matched(男性),和bodyweight-matched (30 - 40 g)动物被随机分为组技术员。 During the experiments, mice were individually housed to avoid aggressive behavior. Individual housing was approved by the Animal Research Review Committee of the University of Pécs. The experimental period lasted in total for 4 days (Figure 1(一))。第一天,olaparib治疗开始(预处理),之后,我们每天服用一次3次(因此,总的来说,我们执行4 olaparib治疗)。0天,动物对待TNBS(1丸)和3天,小鼠麻醉和安乐死。Olaparib (AZD2281 MedChemExpress,新泽西,美国)是管理腹腔内注射(单)前一天TNBS挑战,其次是日常管理为3天的剂量20或50毫克/公斤体重。应用剂量的olaparib选择基于文献数据( 33]。车辆组包含4% DMSO溶液和30% PEG300无菌蒸馏水。12小时禁食后,老鼠和5%异氟烷麻醉(匈牙利百特有限公司,布达佩斯,匈牙利)在麻醉室100%的氧气。结肠炎是由一个感应intracolonic注入TNBS 100年(4毫克<我talic> μl 30%的乙醇;Sigma-Aldrich,密苏里州,美国)通过导管插入3厘米到结肠。VEH组同等体积的30%乙醇。在实验和动物体重每天牺牲后72小时TNBS管理。老鼠和5%异氟烷麻醉和斩首轻轻地专用手术剪刀收集尽可能高的干血。动物研究审查委员会批准的这项技术是大学的胸大肌。树干血液收集;冒号被移除,测量、加权和纵向剖开检测宏观结肠损伤。组织样本进行进一步的分析处理。治疗和宏观得分进行盲目的。

减毒TNBS-induced Olaparib治疗结肠炎小鼠。(一)实验协议TNBS-induced结肠炎和olaparib治疗。(b)体重变化(每只动物的初始体重的百分比)在每个实验小组。数据从一个表示为三个独立的实验<我nline-formula> 的意思是 ± 扫描电镜 (<我nline-formula> n = 4 7)。(c)代表图像的苏木精染色的结肠截面TNBS -和TNBS + olap(50)治疗的老鼠。箭头表示受影响最严重的结肠组织的一部分,黏膜下层。每个实验组(d)宏观得分。数据结合从2单独的实验(<我nline-formula> n = 9 -21)。(e)溃疡数目和长度(f)溃疡VEH TNBS, TNBS + olap(50)组。数据结合3个独立的实验(<我nline-formula> n = 9 -27)。(g)肠道渗透性测量的基础上FITC-dextran血样TNBS治疗后3天。数据从一个表示为三个独立的实验<我nline-formula> 的意思是 ± 扫描电镜 (<我nline-formula> n = 5 8);ns:不显著;<我nline-formula> ∗ P < 0.05 ,<我nline-formula> ∗ ∗ P < 0.01 ,<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ P < 0.001 。阿明费:车辆;TNBS: 2、4、6-trinitrobenzene磺酸;olap(50): 50毫克/公斤olaparib;olap(20): 20毫克/公斤olaparib。

 2.2。肠道通透性测量

肠道通透性是由测量的浓度异硫氰酸荧光素(FITC)右旋糖酐(40 kDa;在血清Sigma-Aldrich密苏里州,美国)。TNBS治疗3天后,FITC-dextran解决方案(100<我talic> μl 60毫克/毫升的解决方案)是intrarectally管理。血清收集1小时后管理和荧光强度都检测到Promega GloMax板读者(激发,490海里;发射,510 - 570 nm)。标准曲线生成的连续稀释FITC-dextran PBS。

 2.3。血液分析

端点的TNBS模型,小鼠和5%异氟烷麻醉和斩首轻轻地专用手术剪刀,直接和树干血液收集到microtainer管(正、匈牙利)包含EDTA抗凝。血液参数测定Sysmex xn - 1000 v Multispecies血液学分析仪(Sysmex美国公司,美国)在2小时的抽样。淋巴细胞,单核细胞比率(LMR),血小板淋巴细胞比率(PLR),中性粒细胞淋巴细胞比率(NLR)和中性粒细胞单核细胞比率(NMR)计算分别从每个动物的细胞绝对计数。

 2.4。宏观得分

结肠组织损伤评分由宏观评估评分系统前面描述的( 34]。简单地说,个人点添加溃疡为每个0.5厘米(0.5分),粘连(0点=缺席,1点= 1附着力,和2分= 2或更多粘连或器官粘连),结肠缩短,平均长度的基础上健康的结肠(1点= > 15%,2分= > 25%),壁厚(以毫米),一致性的凳子上,和便血的存在(出血、便血或腹泻总点增加1)。

 2.5。结肠组织的组织学

段的远端结肠钉持平到纸板与粘膜一面neutral-buffered 10%福尔马林固定至少24小时。组织脱水和嵌入在石蜡,和标准苏木精染色进行5<我talic> μ米厚的部分。为此,幻灯片deparaffinized,清除在二甲苯中,水化下行乙醇系列与苏木精染色解决方案根据吉尔II和清除自来水。图像是用一个奥林巴斯DP50相机和处理cellSens成像软件(奥林巴斯,维也纳,奥地利)。

 2.6。结肠组织的细胞因子水平

炎性细胞因子il - 1的水平<我talic> β、il - 6、TNF -<我talic> α,il - 10测定结肠组织。组织均质机械在提取缓冲补充蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Sigma-Aldrich,密苏里州,美国)。布拉德福德化验(美国加州Bio-Rad实验室)是用来测量总蛋白的浓度。随后,正常化的蛋白质浓度和细胞因子水平取决于执行Ready-Set-Go ELISA试剂盒(美国加州eBioscience)根据制造商的指示。

 2.7。上皮细胞培养

Caco-2人类结肠上皮细胞癌行从美国购买类型文化集合(美国弗吉尼亚写明ATCC)和鹰的最低基本培养基培养(Biosera、法国)补充20%胎牛血清(美国纽约康宁)和1%的非必要氨基酸溶液(Sigma-Aldrich,密苏里州,美国)。细胞被维护在包含5%的湿润孵化器有限公司2在37°C。

 2.8。RNA隔离和qPCR

总RNA提取Caco-2单层使用NucleoSpin RNA +工具包(Macherey-Nagel、德国)根据制造商的协议。这是量化使用Nanodrop分光光度计和量子位2.0荧光计(美国热费希尔科学)。1<我talic> μ克总RNA reverse-transcribed M-MuLV RT(最大值合成第一链cDNA装备,热费希尔科学、美国)。100 ng cDNA用于20<我talic> μl反应实时PCR使用Xceed qPCR SG 2×混合(Praha-Strašnice应用生物技术研究所,捷克共和国)和CFX96触摸实时PCR检测系统(美国Bio-Rad)。后40 PCR反应的周期,产品运行在1.5%琼脂糖凝胶使用20 bp DNA梯(Lonza、巴塞尔、瑞士)。数据分析<我talic> ΔCt方法。作为一个参考基因表达,我们使用<我talic> β肌动蛋白的表达。引物的研究基因表达如下:(i)<我talic> β肌动蛋白(121个基点):5<我nline-formula> ′ -GCATGGGTCAGAAGGATTCC-3<我nline-formula> ′ 5、反向<我nline-formula> ′ -CAGATTTTCTCCATGTCGTCCC-3<我nline-formula> ′ ;(2)PARP-1(109个基点):5<我nline-formula> ′ -CGAGTCGAGTACGCCAAGAG-3<我nline-formula> ′ 5、反向<我nline-formula> ′ -CATCAAACATGGGCGACTGC-3<我nline-formula> ′ ;(3)PARP-2(97个基点):5<我nline-formula> ′ -GCCAGCAAAAGGGTCTCTGA-3<我nline-formula> ′ 5、反向<我nline-formula> ′ -CATGAGCCTTCCCCACCTTG-3<我nline-formula> ′ ;及(iv) PARP-3(115个基点):5<我nline-formula> ′ -CCTGAGGCTCATGGAGAGTTG-3<我nline-formula> ′ 5、反向<我nline-formula> ′ -TGGAGCCATGGCCAAGAAAA-3<我nline-formula> ′ 。反应是在所有情况下的效率接近100%。

 2.9。Impedance-Based屏障完整性测量

首先,上皮屏障完整性决定通过测量阻抗使用xCELLigence RTCA DP实时细胞分析仪(美国加州究其生物科学)。Caco-2细胞被播种RTCA E-plates的密度(E-plate 16) 105细胞/。我们应用控制(CTRL)和H2O2或H2O2+ olaparib治疗组。实现confluency之后,单层膜治疗与不同浓度的H2O2(100,200,500,1000<我talic> μ或者olaparib(10米)<我talic> μ米)预处理,30分钟前H2O2。CTRL和H2O2治疗组接受相同数量的DMSO olaparib-treated细胞。细胞指数(CI)由设备24小时连续监控。

 2.10。FITC-Dextran上皮细胞通透性测定

磁导率是评估通过测量通量的FITC-dextran上层舱舱Transwell低板(0.4孔隙大小<我talic> μm;聚酯膜,康宁,纽约,美国)。Caco-2细胞生长,直到全部confluency 12 Transwell板块。在这里,我们应用相同的治疗组中描述impedance-based技术。细胞治疗的1000<我talic> μM H2O2或者使用10<我talic> μM olaparib 30分钟。24小时后,FITC-dextran解决方案(1毫克/毫升)被添加到参议院。1小时后,从众议院中收集和荧光强度检测到一个Promega GloMax板读者(美国Promega)在490 nm励磁和510 - 570 nm发射波长。

 2.11。测定细胞凋亡

鼠标膜联蛋白V &死细胞工具包(美国马萨诸塞州默克密理博)是用于生活的定量分析,早期、晚期凋亡和坏死细胞。Caco-2细胞被播种到6-well 10板的密度6细胞/。治疗和治疗组完全相同的如上所述FITC-dextran化验。治疗后24小时,细胞使胰蛋白酶化和收集;样品制备是按照制造商的建议执行。简单地说,100年<我talic> μ与100年L细胞悬液的孵化<我talic> μl缪斯膜联蛋白V &死细胞试剂的20分钟,在室温下在黑暗中。染色后,进行分析与缪斯细胞分析仪(流式细胞分析仪)。

 2.12。海马XFp细胞水压力测试

测量的耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)在海马XFp Caco-2层是由细胞外流量分析仪(美国加州安捷伦科技)。前一天化验,海马XFp传感器盒与XF Calibrant水化溶液,并保持在37°C有限公司2一夜之间无孵化器。Caco-2细胞被播种XFp Miniplates密度<我nline-formula> 1。5 × 10 4 细胞/。达到100%融合后的细胞处理准确描述FITC-dextran化验。治疗后,一个完整的生长介质换成了一个无缓冲的,无血清安捷伦XF基地试验介质,pH值7.4。XFp水压力测试工具是用来测试线粒体功能。寡霉素注射,羰基cyanide-4 (trifluoromethoxy)苯腙(FCCP),和鱼藤酮和抗霉素A允许确定生物能量学的关键参数:基础呼吸、ATP根据呼吸(ATP生产),最大呼吸,呼吸产能,nonmitochondrial呼吸、质子漏,耦合效率。寡霉素抑制FO亚基的FOF1atp合酶,从而表明ATP-linked OCR,即。,ATP合成的水平。ATP-linked呼吸基线计算的区别是OCR和OCR寡霉素注射后。分散nonmitochondrial呼吸的OCR FCCP注射后代表最大呼吸。FCCP线粒体解偶联剂,分离磷酸化的活性和氧化。在这种情况下,等可能与最大速度和消耗大量的O2不发展膜电位线粒体内膜的双方。多余的呼吸能力被定义为最大和基底呼吸之间的区别。鱼藤酮的混合物和抗霉素抑制CI和CIII分别;因此,线粒体等和O2消费被屏蔽。的最终浓度调节器是1<我talic> μm . OCR鱼藤酮/抗霉素注射后代表nonmitochondrial呼吸。ATP-linked呼吸除以基底呼吸揭示耦合效率。

 2.13。光学显微镜成像

Caco-2细胞被播种密度的106细胞/ 6-well板块。达到confluency后,层被完全描述FITC-dextran化验。24小时后,膜被evo XL可视化核心细胞成像系统(热费希尔科学、美国)使用20×目标。

 2.14。统计分析

实验数据分析了利用GraphPad棱镜软件(美国加州GraphPad软件有限公司)。统计组建立了学生之间的区别<我nline-formula> t 以及,Bonferroni调整;<我nline-formula> P 值小于0.05被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。Olaparib TNBS-Colitis改善老鼠

评估olaparib在实验性结肠炎的影响,我们使用了TNBS-colitis模型(图 1(一)),一个CD的小鼠模型 35]。Olaparib被用作预处理在20到50毫克/公斤体重剂量。一方面,olaparib未能显著改善减肥TNBS-challenged动物(图 1 (b))。但另一方面,减少炎症得分超过50毫克/公斤(~ 50%<我nline-formula> n = 21 ),而不是20毫克/公斤剂量(<我nline-formula> n = 9 )(图 1 (d))。因此,我们使用50毫克/公斤剂量进一步的实验。Olaparib阻碍组织学损伤在冒号(图 1 (c)),减少溃疡的数量(<我nline-formula> n = 27 )(图 1 (e))和他们的长度(<我nline-formula> n = 27 )(图 1 (f)),最重要的是,减少FITC-dextran渗透率(<我nline-formula> n = 8 )(图 1 (g))相比CTRL组(<我nline-formula> n = 5 )。炎性细胞因子水平也被调制。Olaparib降低il - 1<我talic> β(图 2(一个))和il - 6(图 2 (b)促炎细胞因子的水平,但增强抗炎il - 10(图生产 2 (c)在冒号()<我nline-formula> n = 13 )。有趣的是,我们找不到显著改变在肿瘤坏死因子-<我talic> α水平(图 2(一个))。我们也评估大量血液参数colitic老鼠(图 3(一个))。我们发现只有两个参数,即大量的淋巴细胞和单核细胞,显著调节治疗。与他人一致的发现在结肠炎模型,TNBS大大减少小鼠的淋巴细胞数量(<我nline-formula> n = 9 ),而olaparib抵消这种效应(<我nline-formula> n = 20. )。相比之下,单核细胞数量较高TNBS组(<我nline-formula> n = 9 ),而这是大大减少TNBS + olaparib组升高(图 3(一个))(<我nline-formula> n = 20. )。我们计算特定的血液细胞比率,这以前在CD[被改变 36基于个人血细胞计数。类似于CD,中性粒细胞淋巴细胞比率(NLR)(图 3 (e))和血小板淋巴细胞比率(PLR)(图 3 (c)在TNBS-colitis)都增加了,他们被olaparib治疗明显下降。再次,如CD,淋巴细胞,单核细胞比率(LMR)(图 3 (b))降低实验性结肠炎,PARP抑制剂的修改。不幸的是,TNBS-induced中性粒细胞单核细胞比例的变化(NMR)(图 3 (d)相比)没有达到统计学意义。然而,olaparib提高核磁共振相关TNBS-treated组。

Olaparib减少结肠促炎细胞因子(il - 1<我talic> β和il - 6)和增加抗炎细胞因子il - 10的水平。细胞因子(il - 1)的水平<我talic> β(b) il - 6, (c) il - 10和(d) TNF -<我talic> α。数据结合从2单独的实验(<我nline-formula> n = 9 -13),表示为<我nline-formula> 的意思是 ± 扫描电镜 ;ns:不显著;<我nline-formula> ∗ P < 0.05 ,<我nline-formula> ∗ ∗ P < 0.01 ,<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ P < 0.001 。阿明费:车辆;TNBS: 2、4、6-trinitrobenzene磺酸;olap(50): 50毫克/公斤olaparib。

Olaparib血液参数修改和改善血液细胞比率TNBS-treated老鼠。(一)血液参数的VEH TNBS, TNBS + olap(50)组。<我nline-formula> 的意思是 值 ± 扫描电镜 如表所示。不同字母A, B =每一行表示组间显著差异(<我nline-formula> P < 0.05 )。数据结合3个独立的实验(<我nline-formula> n = 9 -20)。(b)淋巴细胞,单核细胞比率(LMR), (c)血小板淋巴细胞比率(PLR), (d)中性粒细胞单核细胞比率(NMR) (e)、嗜中性粒细胞和淋巴细胞比率(NLR)值分别计算出每个鼠标之前平均测定。<我nline-formula> 的意思是 ± 扫描电镜 显示;ns:不显著;<我nline-formula> ∗ P < 0.05 ,<我nline-formula> ∗ ∗ P < 0.01 ,<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ P < 0.001 。数据结合从3单独的实验(<我nline-formula> n = 9 -20)。缩写:白细胞:白细胞数量;加拿大皇家银行:红细胞数量;血红蛋白:血红蛋白;HCT:血球容积计;”:意味着微粒体积;妇幼保健:意味着微粒血红蛋白;MCHC:意味着微粒血红蛋白浓度;PLT:血小板计数;RDW-SD:红细胞分布width-standard偏差; RDW-CV: red cell distribution width-coefficient of variation; PDW: platelet distribution width; MPV: mean platelet volume; P-LCR: platelet large cell ratio; PCT: procalcitonin; NRBC: nucleated red blood cells; NEUT: neutrophil count; LYMPH: lymphocyte count; MONO: monocyte count; EO: eosinophil count; BASO: basophil count.

 3.2。Caco-2结肠上皮细胞表达PARP-1, PARP-2 PARP-3

Olaparib已表现出抑制PARP酶家族的三名成员,即PARP-1 (<我nline-formula> 我 C 50 = 5 海里),PARP-2 (<我nline-formula> 我 C 50 = 1 海里),PARP-3 (<我nline-formula> 我 C 50 = 4 海里)( 37]。因此,我们调查了基底表达谱的三个目标亚型在未经处理的Caco-2细胞形成单层融合。我们检测到连续PARP-1、PARP-2 PARP-3 mRNA表达(数字 4(一)- - - - - - 4 (c)),但是使用不同的表达率(PARP-1 > PARP-2 > PARP-3)(图 4 (c))。在Caco-2细胞,PARP-1同种型是最高度表达。PARP-2和PARP-3 mRNA表达~ ~ 9倍和335倍左右弱PARP-1相比(图 4 (c))。

PARP-1、PARP-2 PARP-3表达Caco-2单层膜和高浓度的H2O2中断屏障的完整性。(一)代表PARP-1扩增曲线,PARP-2 PARP-3,<我talic> β肌动蛋白定量实时PCR(每个包含三个生物复制和三个技术复制生物复制(数据没有显示))。<我talic> β肌动蛋白基因作为参考。(b)琼脂糖凝胶电泳的PCR产物扩增(40后周期)中引入(a)。Nonquantitative基因扩增子可视化在1.5%琼脂糖凝胶。(产品尺寸:<我talic> β肌动蛋白:121个基点,PARP-1: 109个基点,PARP-2: 97年英国石油(bp)和PARP-3: 115个基点;尺寸标准从LONZA DNA阶梯,20 bp)。(c)相对基因表达的结果(2 ^ (-dCq的意思),在那里<我talic> β肌动蛋白表达被认为是100%(数据没有显示)。之间的相对差异(dCq)的平均Cq<我talic> β肌动蛋白和Cq每个样本均值(PARP-1、PARP-2 PARP-3)。(d)的影响2O2在不同浓度(100 - 1000年<我talic> μ米)的破坏上皮屏障Caco-2单层膜的完整性。电阻抗是每3分钟24小时监控与xCELLigence RTCA乐器。Impedance-related细胞指数(CI)值表示为三个独立的实验之一<我nline-formula> 的意思是 ± SD (<我nline-formula> n = 4 6)。

 3.3。Olaparib上皮屏障功能改善单层氧化应激

Caco-2单层膜被广泛用作肠上皮屏障模型( 38]。PARP-1活动以来,PARP-2 PARP-3亚型可以引起dna损伤( 39),氧化应激引起粘膜损伤在炎症性肠病( 40, 41),我们测试了不同H2O2浓度(100 - 1000年<我talic> μ在单层Caco-2 M)。我们评估impedance-based屏障完整性的技术(图 4 (d))。低浓度的H2O2(100 - 500<我talic> μ米)并没有大幅修改细胞指数(CI;计算从te阻抗值)意味着他们没有损害屏障的完整性。然而,1毫米H2O2迅速和永久CI有所下降。24小时后,1毫米H2O2强烈侵蚀上皮细胞单层(图 4 (d))。因此,在进一步的实验中,我们应用1毫米的浓度H2O2挑战障碍。Olaparib预处理、H前30分钟2O2曝光,提高CI相比,H2O2细胞治疗和保护单层完整性(图 5 (b))。来证实这些发现,我们还FITC-dextran执行<我talic> 反式上皮细胞通透性测定在同一个模型的端点impedance-based测量,24小时后孵化(图 5(一个))。我们发现~ 20倍增加FITC-dextran H后荧光强度2O2治疗(即。,F我TC-dextran could pass the monolayer) in relation to CTRL. In contrast, olaparib reduced H2O2全身FITC-dextran渗透率接近水平的控制(图 5(一个))。进一步完善我们的结果,我们执行显微成像和观察形态学变化后上皮单层结构的H2O2治疗。我们意识到,在一些地方破碎的单层,大概是死细胞,即单层的邻居失去了联系。Olaparib阻止这些形态变化和保持细胞作为屏障的组成部分在正常上皮表型(图 5 (c))。

Olaparib改善上皮屏障完整性在H2O2对待Caco-2单层膜。Caco-2层使用10<我talic> μM olaparib前30分钟1毫米H2O2治疗24小时在所有实验设置。CTRL和H2O2组接受相同数量的DMSO olaparib-treated细胞。(一)FITC-dextran上皮通透性测定。40 kDa FITC-dextran(1毫克/毫升)被添加到参议院Transwell板。1小时的潜伏期后,众议院的媒介是收集和测量荧光强度。数据结合从2单独的实验(<我nline-formula> n = 4 )。(b)电阻抗监测Caco-2层使用E-Plates和xCELLigence RTCA乐器。三个实验的数据从一个表示为<我nline-formula> 的意思是 ± SD (<我nline-formula> n = 4 6)。(c)代表光学显微镜的图像融合性的单层Caco-2 24小时后治疗。(d)测定细胞凋亡和坏死Caco-2层分析缪斯膜联蛋白V &死细胞。代表凋亡概要文件和现场的百分比,早期凋亡,凋亡后期,总凋亡,坏死细胞。数据结合从2单独的实验(<我nline-formula> n = 4 ),表示为<我nline-formula> 的意思是 ± SD ;ns:不显著;<我nline-formula> ∗ P < 0.05 ,<我nline-formula> ∗ ∗ P < 0.01 ,<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ P < 0.001 。

 3.4。Olaparib防止氧化应激在上皮屏障细胞死亡

评估是否氧化应激障碍障碍包括上皮细胞死亡我们进行了流式细胞术分析使用膜联蛋白V / 7-AAD标签(图 5 (d))。H2O2(1毫米)诱导显著增加7-AAD积极的死,基本上坏死细胞(细胞总数的5.87%;CTRL相比增长了4.89倍)。此外,它提高了膜联蛋白V / 7-AAD double-positive,晚期凋亡细胞数(细胞总数的31.9%;增长了6.86倍)。在我们的手中,H2O2对早期细胞凋亡无显著影响。Olaparib防止H2O2全身的细胞死亡。,我treduced necrotic cell death (1.25% of total cells; 4.70-fold decrease) and late apoptosis (5.73%; 5.17-fold decrease) almost to the level of CTRL (Figure 5 (d))。

 3.5。PARP抑制了糖酵解活性受到H <子> < /订阅> O <子> 2 < /订阅>治疗

在炎症,colonocytes开关氧化代谢(丁酸消费)有氧糖酵解,产生乳酸( 13, 17)(图 6(一))。因此,我们调查了糖酵解活动通过测量细胞外酸化率(ECAR),即、乳酸生产(图 6 (b)),两个小时后H2O2治疗早期阶段的氧化应激。H2O2造成一个戏剧性的崩溃基底ECAR (w / o寡霉素)和CTRL相比,由olaparib显著增强(图 6 (b)(1 - 3分的测量)和图 6 (c))。寡霉素治疗增加ECAR CTRL和H2O2+ olaparib-treated细胞比未经处理的(w / o寡霉素)组,但未能刺激酸化的H2O2受损的单层(图 6 (b)测量(4 - 6分)和图 6 (d))。FCCP、鱼藤酮、抗霉素A没有显著影响ECAR治疗组(图所示 6 (b)测量)(7分)。

Olaparib改善有氧糖酵解Caco-2层暴露在H2O2全身的氧化应激。海马XFp Caco-2层后水户执行压力测试使用10<我talic> μM olaparib 30分钟然后处理1000<我talic> μM H2O2为2小时。CTRL和H2O2组接受相同数量的DMSO olaparib-treated细胞。寡霉素(1<我talic> μFCCP(1米)<我talic> μ米),鱼藤酮和抗霉素A(1的混合物<我talic> μ在测量M)添加顺序。(a)示意图说明葡萄糖代谢。(b)细胞外酸化率(ECAR), (c)基底ECAR, (d) ECAR更改显示。ECAR变化计算ECAR寡霉素注射前后的区别。数据结合从2单独的实验(<我nline-formula> n = 4 );ns:不显著;<我nline-formula> ∗ P < 0.05 ,<我nline-formula> ∗ ∗ P < 0.01 ,<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ P < 0.001 。缩写:PDC:丙酮酸脱氢酶复合体;LDH:乳酸脱氢酶;CAC:柠檬酸循环;等:线粒体电子传递链;ECAR:细胞外酸化率;OCR:耗氧率;OXPHOS:氧化磷酸化。

 3.6。PARP抑制剂Olaparib保留线粒体呼吸2 H <子> < /订阅> 2 O <子> < /订阅>全身的压力

在生理条件下,丁酸盐是colonocytes [ATP的主要来源 12],丁酸盐代谢涉及动态线粒体等活动和连续OXPHOS [ 42]。因此,我们调查的活动等OXPHOS通过测量我们的上皮屏障模型的耗氧率(图 7(一))。首先,基础呼吸(OCR w / o寡霉素,绿地图 7(一))确定。H2O2减少相比,上皮细胞基底呼吸CTRL,和olaparib没有调节这种效应(图 7 (b)(1 - 3分的测量和数字 7 (c))表明olaparib基础呼吸作用没有影响。寡霉素治疗后,ATP根据OCR(光学字符识别与寡霉素、黄场图 7(一))可以测量反映OXPHOS和ATP生成的活性。寡霉素降低OCR和OXPHOS xoverall在实验三个组(图 7 (b)测量(4 - 6分)和图 7 (d)),但是H2O2治疗细胞消耗啊2甚至比控制在较小程度上,它提出了一个减少ATP生产。Olaparib没有显著影响ATP-linked OCR H2O2治疗细胞(图 7 (d))。此外,olaparib改善H2O2全身的耦合效率下降(图 7 (e))。相比之下,FCCP,线粒体解偶联剂,诱发最大呼吸(OCR FCCP,米色的场图 7(一)),提高OCR在所有三组不同的区段(图 7 (b)测量(7 - 10分))。我们发现最高的OCR CTRL,最低的H2O2全身的细胞而olaparib中和H的效果2O2(图 7 (b)测量(7 - 10分)和图 7 (f))。FCCP应用程序还确定备用呼吸能力(蓝场图 7(一))。多余的呼吸能力被H高度降低2O2CTRL相比,但olaparib减毒这减少(图 7 (g))。H2O2降低了质子漏(橙色字段在图 7(一))相比,CTRL,进一步减少了olaparib Caco-2细胞(图 7 (h))。

Olaparib保护线粒体功能Caco-2层受到H2O2全身的氧化应激。Caco-2层使用10<我talic> μM olaparib 30分钟然后处理1000<我talic> μM H2O2为2小时。CTRL和H2O2组接受相同数量的DMSO olaparib-treated细胞。海马XFp水户进行压力测试,当寡霉素(1<我talic> μFCCP(1米)<我talic> μ米),鱼藤酮和抗霉素A(1的混合物<我talic> μ米)顺序注射。(a)线粒体呼吸的关键参数来衡量海马XFp细胞外流量分析仪。(b)耗氧速率测量(OCR)。从2单独的实验表示为数据相结合<我nline-formula> 的意思是 ± SD (<我nline-formula> n = 4 )。生物能量学参数:(c)基底呼吸,(d) ATP生产,(e)耦合效率,(f)最大呼吸,(g)多余的呼吸能力,质子(h)泄漏计算。结果是用百分比表示的控制(<我nline-formula> 的意思是 ± SD 两个独立的实验中,<我nline-formula> n = 4 );ns:不显著;<我nline-formula> ∗ ∗ P < 0.01 ,<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ P < 0.001 。

 4所示。讨论

PARP抑制的抗炎作用是完全建立;然而,PARP抑制剂引入抗炎疾病的临床治疗尚未启动,因为长期使用的药物的潜在风险( 33]。在这项研究中,我们旨在提供实验支持定位PARP抑制剂(成功地应用在人类癌症治疗)的临床管理急性冲突时期的CD。为此,我们使用TNBS-induced实验小鼠结肠炎模型,这是被广泛接受为研究CD,因为他们有许多病理(临床、组织学和生化)特点 35]。此外,增强PARP-1表达式被发现结肠的啮齿动物( 43, 44)在实验性结肠炎模型,以及在IBD患者 45),这使得研究PARP抑制剂的模型更有价值。在这个报告中,我们明确地集中在上皮屏障功能,细胞生存,和生物能疗法;因此,我们使用一个Caco-2单层的<我talic> 在体外肠上皮屏障模型( 46]。我们证明olaparib改善炎症在TNBS-colitic老鼠和保护Caco-2上皮屏障由拯救糖酵解活性和氧化应激的保护线粒体功能的某些方面。

在最近的一次审查关于再利用PARP抑制剂的治疗nononcological疾病( 33),伯杰等人并不认为IBD那些慢性疾病,在假定的好处与再利用的风险为第一要务。然而,可用的临床前数据等炎症性肠病模型成功地利用过时的PARP抑制剂3-aminobenzamide [ 47]。我们的研究结果的<我talic> 在活的有机体内olaparib的抗炎作用,PARP抑制剂批准人类癌症治疗,可能证明临床试验启动更新这一治疗炎症性肠病的药物治疗。我们假设PARP抑制可能是有益的严重急性起病的CD,有害的溃疡和组织损伤是由粘膜细胞的活力的崩溃引起的。这可能是严重的药物nonresponders尤其如此,例如,那些三分之一的IBD患者主要不应对英夫利昔单抗(anti-TNF -<我talic> α马伯;常用药物在IBD) ( 48)或其他药物治疗。

我们证明olaparib TNBS-induced结肠炎小鼠改善,减少结肠组织学损伤,减少的数量和长度溃疡、抑制促炎细胞因子(il - 1生产<我talic> β,il - 6),但它增强了抗炎细胞因子il - 10的水平。炎性细胞因子参与结肠损伤的产生主要是由激活白细胞( 49]。这一事实PARP抑制减少白细胞浸润在实验性结肠炎结肠远特征( 50- - - - - - 52]。因此,我们在TNBS-colitis调查从外周血血液参数模型。几种类型的血细胞比例最近强调尽可能在炎症性肠病诊断参数( 36, 53]。特别是在CD, NLR和PLR诊断因素被认为是有价值的 36]。此外,NLR可能预测疾病严重程度( 54];然而,这一概念是讨论( 55]。详细NLR升高,PLR,减少LMR被发现在CD患者与对照组相比,核磁共振在不修改 36]。在我们的实验中,改变NLR, PLR LMR, NMR TNBS-treated老鼠跟着CD患者观察到的变化。此外,olaparib有效逆转CD-specific改变PLR LMR,最重要的是,它减少NLR。NLR被发现的一个重要预测英夫利昔单抗药物反应在CD患者( 56]。也就是说,英夫利昔单抗的抗炎功效与降低CD。NLR Olaparib相同的抗炎效应在我们TNBS-colitis模型突显了在CD治疗药物的潜力。

高架NLR也可以引用在CD患者氧化应激( 57),这是一个重要的诱导物PARP激活( 58]。在活跃的CD,过量的活性氧产生的免疫细胞。免疫细胞中活性氧的主要来源是H2O2生产( 59),和H2O2导致colonocytes DNA损伤( 60],触发PARP激活。高浓度的活性氧导致细胞凋亡的iec导致破坏结肠上皮屏障的完整性,这是一个明确的IBD的标志。因此,我们对待Caco-2单层与高浓度的H2O2(1毫米)来模仿一个强大的氧化stress-injured障碍,<我talic> 在体外。我们证明Caco-2单层细胞表达PARP-1 mRNA在很高程度上类似于结肠粘膜( 45]。此外,我们发现PARP-2 PARP-3表情,然而,在渐渐的失去更低的程度。即Caco-2细胞表达olaparib的mRNA的目标酶(PARP-1, PARP-2, PARP-3);此外,单层,这些细胞模拟肠道屏障( 46]。因此,Caco-2单层似乎是一个合适的模型来调查PARP-inhibition在屏障完整性的影响,<我talic> 在体外。我们的结果表明,olaparib保存Caco-2单层完整性在氧化应激和保护上皮细胞凋亡。这些发现表明结肠上皮细胞可能在TNBS-colitis olaparib的直接目标,和屏障保护可能是其抗炎作用的一个关键组成部分。

减少肠道通透性增加屏障完整性和典型的炎症性肠病的迹象。他们最近与上皮细胞死亡有关,线粒体功能障碍,在iec枯竭的能量代谢。在结肠炎iec产生ATP主要由有氧糖酵解。然而,overactivation PARP可能完全阻止糖酵解( 25]。研究代谢olaparib上皮细胞死亡的影响,我们诱导的氧化应激(1毫米H2O22小时)Caco-2单层和能量代谢的各种参数(图确定 8)。H2O2压力显著降低基底ECAR(基底糖酵解)和诱导Caco-2细胞活力的崩溃。H质子漏率低2O2治疗细胞相比,控制也反映出这种代谢失败,因为ATP需求降低了质子动力和降低质子漏 61年, 62年]。相比之下,olaparib显著增强ECAR H2O2处理细胞。强烈支持我们的研究结果发现,聚(ADP-ribose) (PAR)结合PAR-binding主题在己糖激酶和抑制从而减少糖酵解( 25]。这些数据表明,olaparib施加其影响通过抑制标准生产,从而防止PAR-mediated己糖激酶抑制和封锁的有氧糖酵解(图 8)。

插图olaparib认为机械效应的示意图。CAC:柠檬酸循环;OCR:耗氧率;OXPHOS:氧化磷酸化;ECAR:细胞外酸化率;PARP:保利(ADP-ribose)聚合酶。

寡霉素是一种FOF1块OXPHOS atp酶抑制剂。正如所料,在H ECAR寡霉素没有影响2O2治疗组;然而,它强烈增加ECAR H2O2+ olaparib-treated细胞。解释了这一发现可能是寡霉素阻塞ATP合成和细胞无法弥补缺乏ATP通过促进糖酵解H2O2治疗组,因为强烈的己糖激酶PARP-mediated镇压。然而,Olaparib阻止H PARP激活和糖酵解崩溃2O2+ olaparib-treated细胞(图 8即使在寡霉素的存在)。一个可以说氧化应激不仅本身可能会影响糖酵解酶和PARP激活调节糖酵解的活动。通过使用FCCP(线粒体解偶联剂)、鱼藤酮、抗霉素A(抑制剂等)线粒体能源生产是完全废除。在这种情况下,糖酵解仍然ATP(图的最终来源 8)。这一事实ECAR可能达到的水平CTRL细胞H2O2+ FCCP olaparib集团后,鱼藤酮和抗霉素治疗明显表明,糖酵解酶没有显著受到氧化应激的影响在我们的系统中,和糖酵解能量生产控制的PARP激活。因此,olaparib免受PARP-induced精力充沛崩溃通过改善有氧糖酵解在氧化应激(图 8)。

先前的研究表明,线粒体活性氧的主要来源是在iec炎症( 63年)和PARP-1激活氧化应激导致线粒体功能障碍( 25]。因此,我们想知道是否olaparib可以防止线粒体失败在我们的模型中。我们发现基底呼吸、线粒体ATP生产和nonmitochondrial耗氧量强烈阻碍在氧化应激,和olaparib不能扭转这些变化。然而,它增加最大呼吸,呼吸产能闲置,质子和耦合效率和减少泄漏。对理解这些结果,我们应该考虑的直接和间接影响H2O2CAC酶等复合物,FOF1atp酶和糖酵解PARP激活的影响等。

之前的研究使用DNA-alkylating代理N-methyl-N-nitroso-N-nitroguanidine (MNNG) PARP激活线粒体功能障碍[报道 25]。MNNG治疗导致降低基底OCR,最大OCR, ATP合成、和ECAR, PARP抑制显著逆转这些变化。最重要的是,他们发现政府的丙酮酸完全阻止MNNG-induced线粒体失败( 25]。也就是说,线粒体功能障碍是表达下调糖酵解的直接后果,即。,我tcompromised fuel supply for the CAC and ETC. Our results led to the same conclusion, namely, PARP activation reduced glycolysis and caused mitochondrial dysfunction (Figure 8)。

MNNG-induced PARP激活相比,我们发现抑制的酶并没有阻止H2O2全身的减少基础呼吸和线粒体ATP生产。另一方面,olaparib增强ECAR,即。,我teffectively prevented glycolytic collapse (Figure 8)。此外,它增加了最大呼吸,呼吸产能闲置,耦合效率,并降低质子漏,即。,它增加OXPHOS的功效。我们的结果之间的差异和之前的 25)可以被考虑到解决MNNG烷基化物DNA导致DNA断裂和PARP激活。H2O2然而,诱发氧化DNA damage-mediated PARP激活但CAC会导致直接的结构性障碍,等等,FOF1腺苷三磷酸酶组件附带损害。建立了H2O2恶化CAC活动和降低了质子动力,这是一个先决条件的线粒体丙酮酸运输( 64年]。此外,FOF1腺苷三磷酸酶报道是容易受到氧化应激( 65年, 66年]。此外,活性氧特别是H2O2可以直接阻止呼吸链的许多组件,如NADH脱氢酶或细胞色素c氧化酶( 65年]。我们发现最大的OCR H2O2+ olaparib治疗组不可能达到的最大OCR级别的控制细胞符合的观念等对氧化应激(图很敏感 8)。两组观察到的差异最大的ocr CAC可以氧化损伤的结果,等,和FOF1腺苷三磷酸酶组件在H2O2+ olaparib组。因为糖酵解燃料供给通路畅通在两组中,由于olaparib PARP抑制影响的H2O2+ olaparib组。此外,观察到增加最大OCR的H2O2+ olaparib组与H2O2集团可能源于PARylation等的直接控制。研究发现过度PARylated线粒体蛋白质,包括组件等。此外,parp抑制剂如3-aminobenzamide和烟酰胺阻止了H2O2全身的线粒体电子传递封锁在孤立的文明( 67年]。这些结果表明,PARP可能调节文明等活动,同时也提出了一个线粒体PARP抑制剂的目标。另一项研究中提出了一个关键的角色在线粒体能量体内平衡,并演示了CI PARP-1线粒体的目标PARP-1激活( 68年]。然而,应该指出的是,PARP-1或其他PARP亚型的存在线粒体中讨论。但是否出现在线粒体,PARP明显影响线粒体功能( 69年]。

 5。结论

总之,olaparib, PARP抑制剂用于人类肿瘤治疗,恢复生物能学结肠上皮细胞的糖酵解复活,并减少细胞死亡。上皮细胞的保护屏障功能改善的可能是一个原因,最终导致减少CD-like症状的发生率和严重程度在实验老鼠IBD模型。然而这些发现提供实验证据,再利用olaparib IBD治疗和突出其潜在的治疗CD;在炎症性肠病药物的临床应用需要进一步调查。

 数据可用性

本文数据基础是可用的。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 确认

这项工作是支持的欧盟,欧洲社会基金共同投资(efop - 3.6.1 - 16 - 2016 - 00004),由财政部,匈牙利(ginop 2.3.3 2.3.2 - 15 - 2016 - 00025和ginop - - 15 - 2016 - 00049 - g)。这项工作也支持Janos Bolyai匈牙利科学院的研究奖学金(BO / 00855/18/5 BR)和新的国家卓越项目的创新和技术的来源国家研究,开发和创新基金(unkp - 19 - 4 - pte - 405和unkp - 20 - 5 - pte BR - 762)。在实验室工作的RS由奥地利科学基金资助(FWF格兰特P33325)。

 卡普兰 G·G。 炎症性肠病的全球负担:从2015年到2025年 自然评论胃肠病学和肝脏病学 2015年 12 12 720年 727年 10.1038 / nrgastro.2015.150 2 - s2.0 - 84949091936 26323879 卡泽尔 一个。 Zeissig 年代。 布隆伯格 r S。 炎症性肠病 年度回顾的免疫学 2010年 28 1 573年 621年 10.1146 / annurev - immunol - 030409 - 101225 2 - s2.0 - 77952316009 20192811 花旗 年代。 肠道屏障抵御疾病 科学 2018年 359年 6380年 1097年 1098年 10.1126 / science.aat0835 2 - s2.0 - 85043294989 29590026 余 l .学术界。 微生物群失调和屏障功能障碍在炎症性肠病和结肠直肠癌:探索一个共同点的假设 生物医学科学杂志 2018年 25 1 79年 10.1186 / s12929 - 018 - 0483 - 8 2 - s2.0 - 85056383603 30413188 卡米尔 M。 马森 K。 史必 R。 范Meerveld b G。 凡尔纳 g . N。 肠道屏障功能健康,肠胃疾病 Neurogastroenterology &能动性 2012年 24 6 503年 512年 10.1111 / j.1365-2982.2012.01921.x 2 - s2.0 - 84861170097 22583600 早期 E。 Moschetta 一个。 哈勒 D。 线粒体功能,肠道上皮细胞内稳态的看门人 自然评论胃肠病学和肝脏病学 2018年 15 8 497年 516年 10.1038 / s41575 - 018 - 0021 - x 2 - s2.0 - 85047801158 29844587 酒吧 F。 Bochmann W。 Widok 一个。 冯Medem K。 由此 R。 Hirose M。 余 X。 Kalies K。 康尼锡 P。 玻姆 R。 Herdegen T。 Reinicke a . T。 包子 J。 莱纳特 H。 Fellermann K。 易卜拉欣 年代。 新浪 C。 线粒体基因多态性保护小鼠免受结肠炎 胃肠病学 2013年 145年 5 1055年 1063. e3 10.1053 / j.gastro.2013.07.015 2 - s2.0 - 84886774010 23872498 Soderholm j . D。 Olaison G。 彼得森 k . H。 弗兰岑 l E。 Lindmark T。 Wiren M。 Tagesson C。 Sjodahl R。 增强腔的刺激紧密连接渗透率的增加non-inflamed回肠的克罗恩病 肠道 2002年 50 3 307年 313年 10.1136 / gut.50.3.307 2 - s2.0 - 0036177947 11839706 桑塔 年代。 Rajamanickam 年代。 Motamarry 一个。 室利罗摩克里希纳 b S。 Amirtharaj j·G。 拉玛钱德朗 一个。 Pulimood 一个。 万卡特拉曼·莱马克里斯 一个。 线粒体电子传递链复杂的障碍在结肠粘膜溃疡性结肠炎 炎症性肠病 2012年 18 11 2158年 2168年 10.1002 / ibd.22926 2 - s2.0 - 84867579439 22374887 海勒 年代。 彭罗斯 h . M。 电缆 C。 降低线粒体活动colonocytes AMPK便利<我talic> α2-dependent炎症 美国实验生物学学会联合会杂志 2017年 3 2013年 2025年 蔡 J。 陈 H。 翁 M。 江 年代。 高 J。 血清水平的诊断与临床意义D-lactate和二胺氧化酶在克罗恩病的患者 胃肠病学研究和实践 2019年 2019年 7 10.1155 / 2019/8536952 8536952 31531016 Roediger w·E。 厌氧细菌的作用代谢结肠粘膜的福利的人 肠道 1980年 21 9 793年 798年 10.1136 / gut.21.9.793 2 - s2.0 - 0019128183 7429343 格洛弗 l E。 李 j·S。 科尔根 s P。 氧代谢和肠粘膜屏障监管 《临床研究杂志》上 2016年 2126年 3680年 3688年 10.1172 / jci84429 2 - s2.0 - 84991677503 马修森 n D。 Jenq R。 马修 答:V。 Koenigsknecht M。 Hanash 一个。 Toubai T。 Oravecz-Wilson K。 吴 s R。 太阳 Y。 罗西 C。 藤原 H。 Byun J。 Shono Y。 林德曼 C。 Calafiore M。 施密特 t M。 本田 K。 年轻的 诉B。 Pennathur 年代。 van den边缘 M。 Reddy P。 肠道microbiome-derived代谢物调节肠上皮细胞损伤和减轻移植物抗宿主病 自然免疫学 2016年 17 5 505年 513年 10.1038 / ni.3400 2 - s2.0 - 84961392222 26998764 哈默尔 h . M。 jonker D。 Venema K。 Vanhoutvin 年代。 Troost f·J。 介绍 r . J。 评论文章:丁酸对结肠功能的作用 滋养药理学和治疗 2008年 27 2 104年 119年 10.1111 / j.1365-2036.2007.03562.x 2 - s2.0 - 37149022209 17973645 Fernandez-Vizarra E。 Zeviani M。 线粒体疾病OXPHOS系统 2月的信 2021年 8 1062年 1106年 10.1002 / 1873 - 3468.13995 吉利斯 C . C。 休斯 e·R。 Spiga l 冬天 m·G。 朱 W。 Furtado de卡瓦略 T。 Chanin r B。 贝伦特 c . L。 Hooper l . V。 桑托斯 r . L。 冬天 s E。 Dysbiosis-associated改变宿主代谢产生乳酸支持_Salmonella_增长 细胞宿主和微生物 2018年 23 1 54 64. e6 10.1016 / j.chom.2017.11.006 2 - s2.0 - 85038815699 29276172 凯利 B。 奥尼尔 l·a·J。 代谢重编程在巨噬细胞和树突细胞的先天免疫 细胞研究 2015年 25 7 771年 784年 10.1038 / cr.2015.68 2 - s2.0 - 84942982260 26045163 Hadrava Vanova K。 克劳斯 M。 Neuzil J。 Rohlena J。 线粒体复合体II和活性氧在疾病和治疗 氧化还原的报告 2020年 25 1 26 32 10.1080 / 13510002.2020.1752002 32290794 品牌 k。 Hermfisse U。 由增殖细胞有氧糖酵解:保护性策略对抗活性氧 美国实验生物学学会联合会杂志 1997年 11 5 388年 395年 10.1096 / fasebj.11.5.9141507 9141507 Molavian h·R。 Kohandel M。 Sivaloganathan 年代。 高浓度的氢2O2使有氧糖酵解能量更有利于细胞呼吸 前沿生理学 2016年 7 362年 10.3389 / fphys.2016.00362 2 - s2.0 - 84988674592 伯格 年代。 Sappingto p . L。 Guzik l . J。 欺骗 r . L。 芬克 m P。 促炎细胞因子增加糖酵解率和腺苷三磷酸营业额在培养大鼠肠上皮细胞 危重病医学 2003年 3 1203年 1212年 10.1097/01. ccm.0000059647.92390.92 2 - s2.0 - 0037387640 卡森 D。 巴里 R。 霍普金斯 e . g . D。 Roumeliotis t . I。 Garcia-Weber D。 Mullineaux-Sanders C。 Elinav E。 Arrieumerlou C。 超 j·S。 弗兰克尔 G。 枸橼酸杆菌属rodentium诱发快速和独特的代谢和炎症反应在老鼠患上严重的疾病 细胞微生物学 2020年 22 1、文章e13126 10.1111 / cmi.13126 31610608 Vermeulen N。 Vermeire 年代。 Arijs 我。 米歇尔• G。 芭蕾舞 V。 Derua R。 Waelkens E。 Lommel l . V。 Schuit F。 Rutgeerts P。 Bossuyt X。 Seroreactivity对糖酵解酶在炎症性肠病 炎症性肠病 2011年 17 2 557年 564年 10.1002 / ibd.21388 2 - s2.0 - 78651341982 20629101 Andrabi 美国一个。 Umanah g·k·E。 常 C。 史蒂文斯 d . A。 Karuppagounder 美国年代。 他赢 j . P。 地方 G·G。 道森 诉L。 道森 t M。 保利(ADP-ribose) polymerase-dependent能源消耗发生通过抑制糖酵解 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 2014年 111年 28 10209年 10214年 10.1073 / pnas.1405158111 2 - s2.0 - 84904300961 24987120 Zingarelli B。 鳕鱼 p W。 伯勒斯 t·J。 Piraino G。 奥康纳 M。 Denenberg 一个。 激活蛋白1是通过控制调节信号通路和细胞凋亡保利(ADP-ribose) polymerase-1实验性结肠炎 免疫学 2004年 113年 4 509年 517年 10.1111 / j.1365-2567.2004.01991.x 2 - s2.0 - 9944235797 15554929 彭 年代。 沈 l 田 M.-X。 李 小时。 王 s。 聚ADP-ribose polymerase-1抑制剂改善硫酸葡聚糖sodium-induced结肠炎小鼠通过调节的平衡Th17 / Treg细胞和抑制NF -<我talic> κB信号通路 实验和医学治疗 2020年 21 134年 10.3892 / etm.2020.9566 Sanchez-Fidalgo 年代。 Villegas 我。 马丁 一个。 Sanchez-Hidalgo M。 阿拉de la Lastra C。 PARP抑制减少急性结肠炎症的老鼠 欧洲药理学杂志 2007年 563年 1 - 3 216年 223年 10.1016 / j.ejphar.2007.01.070 2 - s2.0 - 34247158656 17374531 金 d S。 Challa 年代。 琼斯 一个。 克劳斯 w . L。 parp和ADP-ribosylation RNA生物:从蛋白质翻译和proteostasis RNA表达和处理 基因与发展 2020年 34 5 - 6 302年 320年 10.1101 / gad.334433.119 32029452 Jubin T。 Kadam 一个。 Jariwala M。 Bhatt 年代。 Sutariya 年代。 Gani a。R。 Gautam 年代。 女王 R。 PARP家族:洞察功能方面的聚(ADP-ribose) polymerase-1细胞生长和生存 细胞增殖 2016年 49 4 421年 437年 10.1111 / cpr.12268 2 - s2.0 - 84978872873 27329285 与 年代。 Pioli C。 多方面的PARP-1在DNA修复和炎症的作用:在癌症和非癌疾病病理和治疗的影响 细胞 2019年 9 41 10.3390 / cells9010041 陈 Z。 杜德克 J。 Maack C。 霍夫曼 U。 药物抑制心肌梗死后GLUT1作为一种新的免疫治疗方法 生物化学杂志 2021年 190年,第114597条 10.1016 / j.bcp.2021.114597 伯杰 n。 贝松 v . C。 Boulares a . H。 伯克尔 一个。 Chiarugi 一个。 克拉克 r S。 科廷 n . J。 Cuzzocrea 年代。 道森 t M。 道森 诉L。 Hasko G。 Liaudet l 莫洛尼 F。 Pacher P。 Radermacher P。 Salzman a . L。 斯奈德 s . H。 索利亚诺 f·G。 Strosznajder r P。 Sumegi B。 Swanson r。 萨博 C。 PARP抑制剂的再利用的机会non-oncological疾病的治疗 英国药理学杂志》上的报告 2018年 175年 2 192年 222年 10.1111 / bph.13748 2 - s2.0 - 85016419081 28213892 Schicho R。 Bashashati M。 Bawa M。 麦克休 D。 阿富汗二月 D。 胡 h . M。 齐默 一个。 鲁茨 B。 Mackie K。 布拉德肖 h . B。 McCafferty d . M。 萨基 k。 斯托尔 M。 非典型大麻素o - 1602防止实验性结肠炎和抑制中性粒细胞招募 炎症性肠病 2011年 17 8 1651年 1664年 10.1002 / ibd.21538 2 - s2.0 - 79960275004 21744421 安东尼奥由于 E。 Margonis g。 留下的 一个。 Pikouli 一个。 Argiri P。 Karavokyros 我。 Papalois 一个。 Pikoulis E。 TNBS-induced结肠炎动物模型:概述 《医学和手术 2016年 11 9 15 10.1016 / j.amsu.2016.07.019 2 - s2.0 - 84984829207 27656280 冯 J.-R。 邱 X。 王 F。 陈 p F。 高 Q。 彭 y . N。 林 X。 刘 Q。 刘 J。 赵 Q。 李 J。 诊断价值的neutrophil-to-lymphocyte比和platelet-to-lymphocyte比在克罗恩病 胃肠病学研究和实践 2017年 2017年 5 3526460 10.1155 / 2017/3526460 2 - s2.0 - 85027184094 28798770 Oplustil奥康纳 l Rulten s . L。 克兰斯顿 a . N。 Odedra R。 布朗 H。 雅斯贝尔斯这样 j·E。 琼斯 l 骑士 C。 埃弗斯 B。 停 一个。 布拉德伯里 r·H。 Pajic M。 乔纳森蛾 年代。 jonker J。 Rudge D。 马丁 n·m·B。 为 k W。 刘 一个。 奥康纳 m·J。 PARP抑制剂AZD2461提供洞察的作用PARP3抑制合成杀伤力和耐受性与化疗在临床前模型 癌症研究 2016年 76年 20. 6084年 6094年 10.1158 / 0008 - 5472. - 15 - 3240 2 - s2.0 - 84991759944 27550455 Lea T。 Verhoeckx K。 销 P。 Lopez-Exposito 我。 Kleiveland C。 Lea T。 Mackie 一个。 Requena T。 Swiatecka D。 Wichers H。 Caco-2细胞系 Bioactives食品对健康的影响:体外和体外模型 2015年 可汗、瑞士 施普林格国际出版 霍克 n . C。 马球 l . M。 ADP-ribosylation:从人类疾病的分子机制 麝猫杂志 2020年 43 1、文章e20190075 补充1 10.1590 / 1678 - 4685 - gmb - 2019 - 0075 D 'Odorico 一个。 Bortolan 年代。 卡丁 R。 降低血浆抗氧化剂浓度和增加氧化DNA损伤在炎症性肠病 斯堪的纳维亚胃肠病学杂志》上 2001年 36 12 1289年 1294年 10.1080 / 003655201317097146 2 - s2.0 - 0034753659 11761019 Lih-Brody l 鲍威尔 s R。 科利尔 k P。 Reddy g . M。 Cerchia R。 卡恩 E。 斯曼 g S。 卡茨 年代。 弗洛伊德 r。 麦金利 m·J。 费雪 s E。 穆林 g . E。 增加氧化应激和抗氧化防御降低粘膜炎症性肠病 消化道疾病与科学 1996年 41 10 2078年 2086年 10.1007 / BF02093613 2 - s2.0 - 10344264959 8888724 Donohoe d·R。 汽车 N。 张 X。 太阳 W。 奥康奈尔 t M。 他们 m·K。 Bultman 美国J。 微生物和丁酸调节能量代谢和自噬在哺乳动物的结肠 细胞代谢 2011年 13 5 517年 526年 10.1016 / j.cmet.2011.02.018 2 - s2.0 - 79955579989 21531334 克雷斯波 我。 san miguel B。 普瑞斯 C。 Marroni N。 奎瓦斯 m·J。 Gonzalez-Gallego J。 Tunon m·J。 谷氨酰胺治疗变弱内质网应激和凋亡TNBS-induced结肠炎 《公共科学图书馆•综合》 2012年 7 11条e50407 10.1371 / journal.pone.0050407 2 - s2.0 - 84870335319 23209735 要 R R。 Klepsch V。 Macheiner 年代。 Arnhard K。 阿道夫 t E。 大的 C。 维塞尔 V。 斯特 一个。 莫泽 P。 Hermann-Kleiter N。 Baier G。 Oberacher H。 Tilg H。 Moschen a。R。 NAD代谢燃料人类和小鼠肠道炎症 肠道 2018年 67年 10 1813年 1823年 10.1136 / gutjnl - 2017 - 314241 2 - s2.0 - 85042566641 28877980 El-Emshaty h . M。 Abdelfatah 答:一个。 伊斯梅尔 H。 El-Taweel f·M。 El-Hemaly M . M。 潜在的聚(ADP-ribose) polymerase-1协会(PARP-1) CD133和G2 / M在结直肠癌发展作为独立的预测因子 生物化学信 2019年 14 1 156年 166年 10.21608 / blj.2019.63832 彭 l 他 Z。 陈 W。 Holzman i R。 林 J。 丁酸对肠屏障功能的影响在Caco-2细胞单层模型肠道屏障 儿科研究 2007年 61年 1 37 41 10.1203/01. pdr.0000250014.92242.f3 2 - s2.0 - 33846974390 17211138 Jijon h . B。 丘吉尔 T。 Malfair D。 Wessler 一个。 朱厄尔 l D。 帕森斯 h·G。 马森 k . L。 保利(ADP-ribose)聚合酶的抑制减弱炎症慢性结肠炎的典范 美国生理学杂志》上。胃肠道和肝脏生理 2000年 279年 3 G641 G651 10.1152 / ajpgi.2000.279.3.G641 10960365 Bjerrum j . T。 Steenholdt C。 安斯沃思 M。 尼尔森 o . H。 里德 m·a·C。 阿特金斯 K。 冈瑟 美国L。 郝 F。 王 Y。 代谢组学揭示一个可逆proatherogenic血脂在英夫利昔单抗治疗炎症性肠病 BMC医学 2017年 15 1 184年 10.1186 / s12916 - 017 - 0949 - 7 2 - s2.0 - 85031408391 29032767 选通脉冲 W。 大惊小怪 i . J。 促炎细胞因子和炎症性肠病的发病机制 胃肠病学 2011年 140年 6 1756年 1767. e1 10.1053 / j.gastro.2011.02.016 2 - s2.0 - 79955563439 21530742 Zingarelli B。 奥康纳 M。 鳕鱼 p W。 保利(ADP-ribose)聚合酶抑制剂调节信号转导途径在结肠炎 欧洲药理学杂志 2003年 469年 1 - 3 183年 194年 10.1016 / s0014 - 2999 (03) 01726 - 6 2 - s2.0 - 0038730507 12782201 Zingarelli B。 萨博 C。 Salzman a . L。 保利(ADP-ribose)合成酶抑制中性粒细胞的封锁招聘、氧化剂的一代,在小鼠结肠炎黏膜损伤 胃肠病学 1999年 116年 2 335年 345年 10.1016 / s0016 - 5085 (99) 70130 - 7 2 - s2.0 - 0032926291 9922314 di Paola R。 Mazzon E。 徐 W。 吉诺维斯 T。 Ferrraris D。 Muia C。 义 C。 张 J。 Cuzzocrea 年代。 治疗PARP-1抑制剂,GPI GPI 15427或16539年,改善模型大鼠肠道损伤结肠炎和冲击 欧洲药理学杂志 2005年 527年 1 - 3 163年 171年 10.1016 / j.ejphar.2005.09.055 2 - s2.0 - 28544450635 16310767 Celikbilek M。 多根 年代。 Ozbakır O。 Zararsız G。 Kucuk H。 Gursoy 年代。 Yurci 一个。 Guven K。 Yucesoy M。 Neutrophil-lymphocyte比率在溃疡性结肠炎疾病严重程度的预测 临床实验室分析杂志》上 2013年 27 1 72年 76年 10.1002 / jcla.21564 2 - s2.0 - 84872578676 23292894 康 W.-M。 朱 C.-Z。 杨 x x。 余 j . C。 马 z Q。 叶 X。 李 K。 刘 D。 应用Onodera预后营养指数和neutrophil-to -淋巴细胞比例风险评估克罗恩病的术后并发症 科学报告 2017年 7 1 8481年 10.1038 / s41598 - 017 - 09265 - 3 2 - s2.0 - 85027525856 28814767 高 S.-Q。 黄 L.-D。 戴 R.-J。 陈 D D。 胡 w·J。 山 y F。 Neutrophil-lymphocyte比率:一个有争议的标志在预测克罗恩氏病症状 国际临床与实验病理学杂志》上 2015年 8 11 14779年 14785年 26823804 Wlodarczyk m·K。 Sobolewska 答:E。 Stec-Michalska K。 Fichna J·J。 Wisniewska-Jarosinska m E。 Neutrophil-lymphocyte比率在克罗恩病病人预计持续对英夫利昔单抗治疗52周 《胃肠和肝脏疾病 2015年 24 127年 128年 Eraldemir F。 Musul M。 Duman 一个。 Oztas B。 Baydemir C。 助长 年代。 中性粒细胞、淋巴细胞和血小板之间的关系/淋巴细胞比率与氧化应激在活跃的克罗恩病的病人 Hippokratia 2016年 20. 4 368年 373年 29416312 皮珀尔 答:一个。 时 一个。 张 J。 斯奈德 s . H。 保利(ADP-ribose)聚合酶、一氧化氮和细胞死亡 药理科学趋势 1999年 20. 4 171年 181年 10.1016 / s0165 - 6147 (99) 01292 - 4 2 - s2.0 - 0032999788 10322503 Beltran) B。 号 P。 便 F。 Iborra M。 Bastida G。 马丁内斯 M。 Oʼ康纳 j·E。 赛斯 G。 Moret 我。 男妓 J。 线粒体功能障碍,持续的氧化损伤,过氧化氢酶抑制免疫细胞的幼稚和治疗克罗恩病ʼ年代疾病 炎症性肠病 2010年 16 1 76年 86年 10.1002 / ibd.21027 2 - s2.0 - 74049155086 19637347 Rosignoli P。 Fabiani R。 桑巴特鲁姆德 一个。 Spinozzi F。 Agea E。 贝利 m·A。 Morozzi G。 保护活动的丁酸盐氢peroxide-induced在孤立的人类colonocytes和HT29肿瘤细胞DNA损伤 致癌作用 2001年 22 10 1675年 1680年 10.1093 / carcin / 22.10.1675 11577008 品牌 m D。 简 L.-F。 Ainscow e·K。 罗尔夫 d·f·S。 波特 r·K。 线粒体质子泄漏的原因和功能 Biochimica et Biophysica学报(BBA)生物能疗法 1994年 1187年 2 132年 139年 10.1016 / 0005 - 2728 (94)90099 - x 2 - s2.0 - 0028071061 8075107 Wikstrom M。 Springett R。 热力学效率、可逆性和节能的耦合程度的线粒体呼吸链 通信生物学 2020年 3 1 451年 10.1038 / s42003 - 020 - 01192 - w 32811895 巴斯利卡塔 m·G。 佩佩 G。 拉伯 美国F。 Merciai F。 Ostacolo C。 Manfra M。 di亚诺 V。 它 G。 de维塔 D。 Marzocco 年代。 Campiglia P。 抗炎、抗氧化的脱水potato-derived生物活性化合物在肠道细胞 Int J摩尔Sci 2019年 20. 23 6087年 10.3390 / ijms20236087 31816826 添头 l Adam-Vizi V。 克雷布斯循环酶的抑制过氧化氢:一个关键的角色<我talic> α酮戊二酸脱氢酶在限制NADH氧化应激下生产 《神经科学杂志》上 2000年 20. 24 8972年 8979年 10.1523 / jneurosci.20 - 24 - 08972.2000 11124972 张 Y。 Marcillat O。 Giulivi C。 恩斯特 l 戴维斯 k . j . A。 线粒体电子传递链的氧化失活组件和atp酶。 《生物化学》杂志上 1990年 265年 27 16330年 16336年 10.1016 / s0021 - 9258 (17) 46227 - 2 利珀 G。 Comelli M。 Mazzilis D。 萨拉 f . D。 Mavelli 我。 线粒体F的失活1腺苷三磷酸酶由H2O2是由铁离子不紧密地绑定在蛋白质 生物化学和生物物理研究通信 1991年 181年 2 764年 770年 10.1016 / 0006 - 291 x (91) 91256 - c 2 - s2.0 - 0026357256 1836727 Halmosi R。 Berente Z。 Osz E。 托斯 K。 Literati-Nagy P。 Sumegi B。 保利(ADP-ribose)聚合酶抑制剂的效果ischemia-reperfusion-induced氧化细胞损伤和线粒体代谢Langendorff心中灌注系统 分子药理学 2001年 59 6 1497年 1505年 10.1124 / mol.59.6.1497 2 - s2.0 - 0034987156 11353811 Kadam 一个。 Jubin T。 Roychowdhury R。 Garg 一个。 Parmar N。 •帕立特 s P。 女王 R。 功能方面的见解保利(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1)在盘基网柄菌discoideum线粒体内稳态 细胞生物学 2020年 112年 8 222年 237年 10.1111 / boc.201900104 32324907 Tapodi 一个。 Bognar Z。 萨博 C。 Gallyas F。 Sumegi B。 Hocsak E。 PARP抑制诱发Akt-mediated cytoprotective影响通过形成mitochondria-targeted phospho-ATM-NEMO-Akt-mTOR signalosome 生化药理学 2018年 162年 98年 108年