线粒体功能障碍和氧化应激的特点主要因素参与复杂流程对应的激活apoptosis-mediated多巴胺能神经元的神经衰老(DA)在帕金森病(PD)。这里,我们评估了1-methyl-4-phenyl-1分子机制参与治疗,2,3,6-tetrahydopyridine——注射(MPTP药物-)醉酒PD小鼠模型,以应对绿原酸(注册会计师)。结果表明,注册会计师处理显著提高的运动协调MPTP-intoxicated老鼠。注册会计师也减轻线粒体复合体I活性下降IV和V,按照改善线粒体超氧化物歧化酶、谷胱甘肽水平的中脑MPTP-induced老鼠。注册会计师抑制proapoptotic蛋白质的活化包括伯灵顿和caspase-3,而提升抗凋亡蛋白的表达喜欢bcl - 2因此防止MPTP-mediated凋亡级联。研究还揭示了一种蛋白激酶的磷酸化状态改善,ERK1/2, GSK3
研究已经相当突出,老化扮演的一个主要因素的发病和进展的零星的形式为特征的神经退行性疾病帕金森病(PD)的逐步消耗多巴胺(DA)神经元以及路易小体的形成和积累主要在黑质致密部(SNpc)地区的中脑和纹状体 目前,帕金森病的主要治疗方法是多巴胺受体激动剂或左旋多巴仅仅提供救济和症状与长期使用导致禁用效率更低的波动和运动困难 各种细胞培养模型和PD动物模型已经开发使用环境神经毒素包括鱼藤酮,6-hydroxydopamine, 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine注射(MPTP药物)[ Akt和ERK信号通路发挥神经保护的关键部分通过细胞分化、增殖、生存和凋亡[
甘露醇、磷酸二氢钠、牛血清白蛋白(BSA)、氧化细胞色素c,洋地黄皂苷,磷酸氢二钠、氯化钾、氯化铵、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)从Sisco购买研究实验室(SRL,孟买,印度)。MPTP DABCO 5, 5-dithiobis 2-nitrobenzoic酸(DTNB),正常山羊血清(门店),绿原酸是来自Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。蔗糖和碳酸钠从默克(达姆施塔特,德国),购买和EGTA钠十二烷基硫酸盐(SDS)获得HiMedia(印度孟买)。Glycylglycine缓冲区,氟化钠,多聚甲醛,三羟甲基氨基甲烷缓冲液,和三氯乙酸从LobaChemie购买,印度。主要抗体Akt、p-Akt caspase-3, ERK, p-ERK,和bcl - 2从Abcam获得生命科学,Biogenuix Medsystems经纪有限公司(印度新德里)和GSK3主要抗体
实验使用男性瑞士白化小鼠( 实验动物随机分为四组:控制、MPTP MPTP +注册会计师,注册会计师( 注射的效果评估MPTP药物中毒运动机能障碍的帕金森小鼠模型,四个行为进行了测试,包括rotarod测试杆测试、木僵测试和拉力测试。 连续3天的培训给所有的动物组织的速度5 rpm rotarod测试。此后,时间对每个动物的rotarod最大5分钟记了下来。测试了四次,最后,老鼠的平均时间呆在rotarod记下了( 动作迟缓的PD小鼠模型通常是由这个测试评估( 平衡和肌肉力量测量通过执行牵引试验( 木僵状态的行为测试特征的肌肉僵硬的老鼠没有改变姿势,估计通过实施动物站在一个木制的平台,他们的后肢被放置在一个木头和前肢在地上(
差速离心是为了隔离从小鼠大脑线粒体颗粒(
配合物的测定》是由合并Sood等人的方法在我们的研究(
第四复杂活动是由测量氧化减少了复杂的细胞色素c四世在550海里(
格里菲斯和霍顿的方法被用来执行线粒体atp酶试验(
线粒体谷胱甘肽(减少)内容估计通过线粒体蛋白质样本(20
锰超氧化物歧化酶的活性(Mn-SOD)估计通过添加过氧化氢选择性地抑制铜/ Zn-SOD,为了区别于铜/ Zn-SOD酶的活动。反应混合物由碳酸钠(50毫米),EDTA(0.1毫米),Triton-X(0.6%),和电视台(90毫米)和盐酸羟胺
老鼠大脑的SN使用裂解缓冲(里帕)和均质搅拌2 h在4°C。匀浆是离心机(12000 rpm, 30分钟)来收集上层清液,和布拉德福德试验进行了量化的蛋白质浓度。总蛋白提取(50
从每组小鼠灌注牺牲使用戊巴比妥intracardially冷冻0.9%生理盐水和进一步使用4%多聚甲醛溶液(准备在0.1 M磷酸盐,pH值7.4)。再次,多聚甲醛(10%)被用来后缀大脑一夜之间,并进一步,30%蔗糖的解决方案是用来浸泡的大脑。使用标准的协议,进行免疫组织化学染色法对TH, p-Akt p-Erk1/2, p-GSK3
分析的数据是由单向方差分析(方差分析)使用Student-Newman-Keuls测试学生的双尾
从我们的研究结果表明,早期MPTP-intoxicated动物瀑布从rotarod相比控制(
在线粒体氧化磷酸化产生ATP能量,这个过程需要有组织行动的五个酶复合体位于内膜。灾难性的后果可以观察到任何缺陷在这些发电复合物,不仅因为ATP的损失,也由于下游功能损失。因此,注射的后果MPTP药物中毒小鼠大脑的能量代谢进行了研究。MPTP已知复杂我抑制剂的电子传递链(等)进行分析来研究其影响的活动各种呼吸链复合物。如图 注册会计师在线粒体复合物介导的变化》(a), IV (b)和V (c)电子传递链的中脑的老鼠。值的形式表示
进一步的增加氧化应激导致的减少功能等导致线粒体利用谷胱甘肽(mtGSH,减少)和减少Mn-SOD活动(数据 在各自的治疗组改变线粒体的抗氧化防御。(一)线粒体减少谷胱甘肽的水平。(b)线粒体超氧化物歧化酶的水平。值的形式表示
各种apoptosis-linked分子进行调查研究注册会计师MPTP-induced细胞凋亡率的影响(数据 (f)的相对表达伯灵顿,Cas-3 bcl - 2, p-Akt p-ERK1/2, p-GSK3
一种蛋白激酶的表达,GSK3 ERK1/2, 免疫组织化学染色分析p-Akt的表达在不同的实验组,每组SN。注册会计师管理增强p-Akt的表达在SN帕金森小鼠(20 x放大后染色)。值表示为 免疫组织化学染色分析p-GSK3的表达 免疫组织化学染色分析p-ERK1/2的表达在不同的实验组,每组SN。调节表达p-ERK1/2由于注册会计师管理在帕金森小鼠(20 x)。值表示为 GSK3
包含IHC TH进行评估的DA神经元的损失在SN MPTP-intoxicated老鼠(图 (a, b)免疫组织化学染色分析TH-positive DA神经元的表达在不同的实验组,每组SN。注册会计师保护TH-positive DA神经元在MPTP-induced老鼠。(一)10 x和(b) 20 x。在SN的老鼠TH免疫反应性。值表示为
PD出现由于多种因素,和各种途径相互作用诱导的神经毒性途径导致SN (DA神经元的损失 帕金森病的主要致病事件主要是氧化应激和线粒体功能障碍,和这两个进一步导致细胞凋亡的发生( 线粒体,细胞内的强国,扮演各种重要角色包括能源生产、释放活性氧和氮物种生产以及批判性调节细胞凋亡,与细胞衰老的生存是至关重要的因素。在病理改变,细胞色素c的泄漏和各种proapoptotic分子在细胞质中线粒体,线粒体膜透化作用的结果,引起的级联事件导致细胞死亡( 不同的细胞过程,如生长、增殖、存活和凋亡是由一些关键蛋白质的磷酸化如Akt、ERK1/2, GSK3 TH免疫反应性在这项研究进行检查CGA-mediated改变DA神经元的功能的SN MPTP-intoxicated帕金森小鼠模型( 因此,因此,我们的研究结果表明,注册会计师的神经保护效应是由GSK3
此研究表明,注册会计师的神经保护作用与MPTP-induced凋亡细胞死亡的老鼠。伯灵顿/ bcl - 2比例、线粒体功能障碍和表达caspase-3注射显著增加在MPTP药物中毒。此外,一种蛋白激酶的磷酸化,ERK1/2, GSK3
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
这项工作机构动物伦理委员会批准,BHU,印度瓦拉纳西。所有的努力都是尽量减少动物痛苦。
所有作者没有利益冲突的报告。
瑞士的构思和设计的研究,写了手稿,分析和解释数据。信噪比,HB, WZ ASR、HD和RS帮助动物的剂量,行为研究中,和手稿准备。SPS监督这项研究。所有作者阅读和批准最终的手稿。
SSS、信噪比、HB、RS WZ, ASR、和HD衷心感谢ICMR,开展UGC,印度生物技术部,CSIR, BHU,印度为各自的奖学金。作者也感谢生物化学系,IOS, BHU,提供基本的部门设施和种,BHU,中心仪器设备。