1。介绍
Graves眼病(去),也称为坟墓”之影响,眼球运动之影响,或甲状腺眼病,是通过化妆毁容和潜在的该疾病。虽然去的病理生理学仍没有完全澄清,它被称为多个内生和环境因素之间复杂的相互作用过程(
1 - - - - - -
4 ]。吸烟是最重要的发展或恶化的环境和风险因素,风险的增加与当前每天抽烟的数量(
5 - - - - - -
7 ]。此外,吸烟与治疗反应不佳有关去(
8 - - - - - -
10 目前,戒烟是唯一的方法去预防
11 ,
12 ]。在这项研究中,普朗克et al .,一些adipocyte-related立即早期基因,白介素- 1 (IL)
β ,il - 6在吸烟者患有严重主动去与不吸烟者相比,表明吸烟激活通路与脂肪形成和炎症(
13 ]。然而,吸烟的有害影响的确切机制仍有待确定。已经提出,烟雾可能诱导活性氧的生成(ROS)轨道插座,通过直接接触周围的鼻窦或间接通过血液循环(
14 ]。香烟烟雾提取物(CSE)据报道,刺激脂肪细胞的分化培养的轨道成纤维细胞的协同加强与il - 1或ROS (
12 ,
14 ]。在我们之前的研究中,我们表明,ROS能诱导蛋白质表达结缔组织生长因子(CTGF),一个重要的纤维发生的因素,在培养的轨道成纤维细胞(
15 ]。本研究的目的是探讨氧化应激的变化,fibrotic-related基因表达
胞内细胞因子 在轨道的主要文化成纤维细胞对CSE的回应。我们也评估是否CSE-induced氧化应激,fibrotic-related基因表达
胞内细胞因子 去轨道成纤维细胞可以降低预处理细胞的抗氧化剂。
2。材料和方法
2.1。病人和组织收购
5患者的手术标本(GO1-GO5)在轨道减压手术(一个男人和四个女人;平均年龄:37年)和5岁,sex-matched患者的标本(N1-N5)(一个男人和四个女人;平均年龄:36年)接受检测不到发炎oculoplastic手术迹象条件被用于这项研究。所有标本收集符合赫尔辛基宣言和病人的知情同意。所有去实现稳定euthyroidism抗甲状腺药物的患者手术前至少6个月,维护的不活跃的阶段。此外,所有研究对象没有收到具体的治疗(全身性类固醇或放射治疗)。排除标准包括眼部疾病以外,饮酒,经常摄入抗氧化剂,和怀孕。此外,病人患有慢性或急性疾病,如糖尿病、高脂血症、肺疾病,肝脏,肾脏,癌症,内分泌功能紊乱,免疫或炎症性疾病,也被排除在外。
2.2。轨道成纤维细胞的主要文化
建立了轨道的主要文化成纤维细胞根据我们之前的研究
16 ]。短暂,轨道组织被切碎的无菌磷酸盐(PBS, pH值7.3),然后孵化与无菌溶液含有0.5%胶原酶和dispase (Sigma-Aldrich化工有限公司,圣路易斯,密苏里州,美国)24小时在一个孵化器充满5%公司的氛围2 并将其保持在37°C。消化的混合轨道被离心分离颗粒状组织在1000×g然后resuspended杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM,生命从Gibco购买技术,盖瑟斯堡,医学博士,美国)含10%胎牛血清的边后卫和鸡尾酒的抗生素(生物产业,基布兹拜特Haemek,以色列),这是由100 U /毫升青霉素g和100年
μ g / mL硫酸链霉素(生物产业,基布兹拜特Haemek,以色列)。培养的轨道成纤维细胞之间使用了第三和第五章节和细胞培养在同一通道号码被用于同一组实验。
2.3。香烟烟雾提取物(CSE)的制备
CSE准备与次要的修改(根据先前的研究
12 ,
14 ]。商业香烟(经久耐用的烟草包购买从台北,台湾)被用于这项研究中,每个香烟含有10毫克焦油和0.8毫克尼古丁。十块的香烟被pump-smoke机,连续抽这烟是用于生成200毫升prewarmed CSE-PBS解决方案。每个香烟抽了3分钟,CSE-PBS溶液的pH值调整到7.4,然后通过一个0.22 -
μ 米孔隙大小过滤(美国密理博公司,Billerica的)去除大颗粒和细菌。CSE CSE-PBS的解决方案是定义为100%,这个CSE将稀释后的DMEM实验。CSE准备是标准化通过测量吸光度的波长320 nm(光密度= 2.0 - -2.2),和吸光度的模式观察到波长320 nm显示不同制剂的CSE之间微不足道的变化。CSE浓度在目前的研究范围从0到15%。
2.4。治疗CSE的轨道成纤维细胞和抗氧化剂
洗后用PBS缓冲(pH值7.4)两次,轨道成纤维细胞治疗与不同浓度的CSE 24小时从1%到15%不等。调查CSE的效果是否可以被抗氧化剂,我们经过不同轨道成纤维细胞(NAC)或2毫米1毫米防治维生素C (VitC) 1小时,其次是5%的感应CSE治疗另一个24小时,分别。
2.5。测定细胞生存能力
细胞被台盼蓝排斥试验测量的可行性,并通过使用血细胞计数器计算。可行的细胞的数量确定的基础上,排除0.4%台盼蓝(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。相对细胞生存能力是由细胞的价值没有CSE规范化治疗,并表示为平均数±标准差结果从三个独立的实验。
2.6。ROS含量测量
二乙酸的探针2′,7′-dichlorofluorescin (DCFH-DA分子探针,尤金,或者美国)将被用来评估细胞内H2 O2 内容(
17 ]。孵化后的轨道成纤维细胞20
μ 在37°C M DCFH-DA 20分钟,细胞使胰蛋白酶化然后resuspended 0.5毫升的PBS缓冲(pH值7.4)和分析流式细胞分析仪(模型史诗XL-MCL, beckman coulter、迈阿密、FL,美国)。设置激发波长488 nm和发射荧光的强度10000细胞在525 nm记录频道FL1 DCFH-DA探针。由EXPO32数据进行了分析
™ 软件(美国beckman coulter、迈阿密、FL)。细胞内H2 O2 内容相比,细胞治疗作为相对的值与细胞没有H2 O2 或CSE治疗。
2.7。测定脂质过氧化
脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、成纤维细胞在培养轨道测量的光度分析工具包(MDA - 586;OxisResearch Inc .,波特兰,或美国)根据制造商的指示
18 ]。MDA与显色摄政N-methyl-2-phenylindole量化在反应中形成一个强烈的彩色carbocyanine染料最大吸光度在586海里。MDA方法是具体的,而不是其他脂质过氧化4-hydroxyalkenal等产品,因为他们不能产生显著的吸光度实验条件下在586海里。MDA标准曲线建立了通过使用MDA 0-50浓度范围的样本
μ M, MDA水平轨道成纤维细胞被归一化细胞数(106 细胞)。结果表示为平均数±标准差结果从三个独立的实验。
2.8。免疫印迹分析
一个整除的50
μ g蛋白在10% sds - page分离并涂抹到一块的PVDF膜(英国白金汉郡Amersham-Pharmacia生物技术有限公司)。阻塞后5%的脱脂牛奶TBST缓冲区(50 mM Tris-HCl、150毫米氯化钠和0.1%渐变20,pH值7.4)在室温1小时,另一个1小时的膜是孵化的主要抗体室温。与TBST缓冲洗涤三次后,细胞膜是孵化与辣根过氧化物酶(合)共轭二次抗体室温1小时。一种增强化学发光检测设备(英国白金汉郡Amersham-Pharmacia生物技术有限公司)是用于检测蛋白质信号富士x射线胶片(日本东京富士胶片Corp .),以及信号的强度被第三映象LabScan 6.0软件量化(通用电气医疗集团生物科学公司,皮斯卡塔韦,新泽西,美国)。HO-1抗体(sc - 10789)和CTGF (sc - 14939)购买的圣克鲁斯生物技术有限公司(美国CA)
β 肌动蛋白(# A1978)从Sigma-Aldrich购买化工有限公司(美国密苏里州),分别。所有数据都表示为均值±SD三个独立实验的结果。
2.9。实时反向Transcriptase-Polymerase连锁反应(rt - pcr)
fibrosis-related基因的表达水平是由SYBR green-based实时定量PCR。短暂,总细胞RNA从轨道成纤维细胞溶解产物提取后与氯仿溶液添加试剂盒试剂(美国密苏里州)。提取的RNA与异丙醇溶液沉淀,冰面上的干,而溶解在DEPC-H2 o . 5整除
μ g RNA是reverse-transcribed cDNA准备的rt - pcr试剂盒(Amersham生物科学,乌普萨拉,瑞典)42°C。定量rt - pcr进行使用SYBR绿色主设备(Sigma-Aldrich)根据制造商的指示
18 ]。引物对5′-CTCAACACGGGAAACCTCAC-3′, 5′-CGCTCCACCAACTAAGAACG-3 18 s rRNA′, 5′-CTGCAGGCTAGAGAAGCAGAG-3′, 5′-GATGCACTTTTTGCCCTTCT-3 CTGF′, 5′-CTGGCCGAAAATACATTGTAA-3′, 5′-CCACAGTCGGGTCAGGAG-3纤连蛋白′,5′-GGACATCCACTTCCACAGC-3′, 5′-GGTCATCGTCGCCTTCTC-3载脂蛋白J′,分别。每个基因的信使rna表达水平轨道成纤维细胞是规范化的mRNA水平18 s rRNA基因,分别。
2.10。测量细胞内细胞因子的内容
人类转化生长因子- 1 (TGF -
β 1;目录# DB100B)和interleukin-1
β (il - 1
β ;目录# DLB50)水平细胞培养上清液和酶联免疫吸附试验量化工具购买的研发系统,Inc .(明尼阿波利斯、锰)。简单地说,大约105 轨道成纤维细胞被播种在3.5厘米培养皿和孵化48小时37°C细胞孵化器与5%公司的氛围2 其次是治疗5% CSE 24小时,或细胞使用1毫米NAC或2毫米VitC 1小时后跟CSE治疗另一个24小时的感应,分别。根据制造商的建议和我们之前的研究
19 ),细胞培养上清液离心机在12000×g在4°C,和整除立即化验。标准TGF -
β 1和il - 1
β 被用于范围0 - 200 pg / mL,结果被表达的细胞数量和规范化为pg / 10吗4 细胞。
2.11。统计分析
Microsoft Excel 2010统计软件包和SigmaPlot软件12.3版本(Systat软件公司,圣何塞、钙、美国)被用来分析结果和数据被描述成意味着±标准差(SD)的结果从三个独立的实验。显著性水平的实验组和对照组之间的差异是由学生的决定
t
以及。时被认为是显著不同
p
∗
值< 0.05和
p
∗
∗
分别值< 0.01。
3所示。结果
3.1。CSE-Induced轨道成纤维细胞的细胞毒性和氧化应激
为了研究烟提取物在轨道成纤维细胞的细胞毒性效应,我们把轨道成纤维细胞与不同浓度的CSE 24小时。CSE的影响范围从0到15%的轨道成纤维细胞的可行性(GO1-GO5)和正常患者受试者(N1-N5),台盼蓝排斥试验确定,如图
1 。数据显示,正常,成纤维细胞减少剂量依赖性的方式,分别为(图
1(一) )。正常细胞生存能力之间的差异,轨道成纤维细胞显著治疗后5% CSE(图
1 (b) ,分别为85%和62%,
p
=
0.0374
)。另一方面,我们也观察到CSE-induced氧化应激和氧化反应的轨道成纤维细胞。治疗后的轨道成纤维细胞与不同浓度的CSE(0 - 15%) 24小时,细胞内ROS测量通过DCF染色流式细胞分析仪和血红素oxygenase-1 (HO-1)蛋白表达与免疫印迹都增加剂量依赖性的方式(图
2 )。
图1
容易受到香烟烟雾提取物(CSE)引起的细胞毒性去轨道成纤维细胞作为正常对照组的相比。(a)的轨道成纤维细胞治疗后患者(GO1-GO5)和年龄正常受试者(N1-N5)与不同浓度的CSE 24小时从0到15%,细胞生存能力是由台盼蓝排斥试验。(b)细胞生存能力的平均值5% CSE治疗是柱状图所示,和数据被描述成意味着±SD三个独立实验的结果(
p
∗
<
0.05
;
p
∗
∗
<
0.0
1
与集团)表示。
(一)
![]()
(b)
![]()
图2
CSE-induced氧化应激和氧化反应的剂量依赖性的方式去轨道成纤维细胞。(a)治疗后的轨道成纤维细胞与不同浓度的CSE 24小时从0到15%,细胞内ROS是衡量DCF染色流式细胞分析仪,和(b) HO-1蛋白表达是由蛋白质印迹。代表建立了直方图的基础上,从三个独立的实验结果,提出了和数据意味着±SD (
p
∗
<
0.05
;
p
∗
∗
<
0.0
1
没有CSE治疗)和对照组。
(一)
![]()
(b)
![]()
3.2。容易5% CSE-Induced氧化应激和氧化损伤的轨道成纤维细胞与正常对照组和保护作用的抗氧化剂
因为5%的曝光CSE可以显著减少去轨道成纤维细胞的细胞生存能力与正常对照组相比,我们决定治疗正常和轨道成纤维细胞与5% CSE在接下来的实验。治疗后的轨道与CSE 24小时5%,成纤维细胞的细胞内ROS衡量DCF染色明显增加正常和轨道成纤维细胞,分别(图
3(一个) ,
p
=
0.0347
和
p
=
0.0021
)。此外,脂质过氧化反应标记,丙二醛(MDA),也明显增加正常和轨道成纤维细胞,分别添加5%后CSE(图24小时
3 (b) ,
p
=
0.0186
和
p
=
0.0032
)。此外,我们注意到,诱导细胞内活性氧的比例和MDA水平治疗后5%的CSE更明显的轨道成纤维细胞比正常对照组,分别为(数字
3(一个) 和
3 (b) ,
p
=
0.0273
和
p
=
0.0075
)。另一方面,我们也观察到南京的保护作用和VitC CSE-induced氧化应激和氧化损伤的轨道成纤维细胞,分别。预培养与1毫米NAC VitC 1小时或2毫米,分别显著下降5% CSE-induced海拔的DCF染色的细胞内ROS测量轨道成纤维细胞(图
3 (c) ,
p
=
0.0451
和
p
=
0.0071
)。显著减少5% CSE-induced海拔走后的MDA含量也得到轨道成纤维细胞与1毫米preincubated NAC VitC或2毫米,分别(图
3 (d) ,
p
=
0.0382
和
p
=
0.0064
)。
图3
容易CSE-induced氧化应激和氧化损伤的轨道成纤维细胞与正常对照组相比,抗氧化剂的作用。(a)的轨道成纤维细胞治疗后患者(GO1-GO5)和正常受试者CSE 24小时(N1-N5) 5%,细胞内ROS和(b) MDA含量测定中描述的材料和方法。(c)预处理后的轨道成纤维细胞与1毫米NAC或2毫米维生素c (VitC) 1小时后跟的CSE 5%另一个24小时,细胞内ROS、MDA (d)水平测定。结果从三个独立的实验,数据提出了意味着±SD (
p
∗
<
0.05
;
p
∗
∗
<
0.0
1
与集团)表示。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
(d)
![]()
3.3。容易受到5% CSE-Induced Fibrosis-Related基因表达的变化去轨道成纤维细胞作为正常对照组的相比
以前,我们已经表明,升高细胞内氧化应激与fibrosis-related基因表达的增加轨道成纤维细胞(
15 ]。在这项研究中,我们进一步调查是否5% CSE-induced ROS可能导致fibrosis-related基因诱导表达的轨道成纤维细胞。由SYBR green-based rt - pcr,我们观察到显著提升fibrosis-related基因表达的水平包括载脂蛋白J,纤连蛋白,CTGF在正常和轨道成纤维细胞治疗后5%的CSE(表24小时
1 ,
p
=
0.0431
与
p
=
0.0085
,
p
=
0.0318
与
p
=
0.0033
,
p
=
0.0441
与
p
=
0064年
、职责)。此外,载脂蛋白的感应系数J,纤连蛋白,CSE CTGF 5%是更明显的轨道成纤维细胞比正常对照组(表
1 ,
p
=
0.0086
,
p
=
0.0031
,
p
=
0.0054
、职责)。
表1
fibrotic-related基因表达的诱导率在轨道成纤维细胞从正常受试者和患者5% CSE之前和之后的治疗。
Fibrosis-related基因
基底的水平
一个
5% CSE-treated
一个
诱导率(%)
p 价值
载脂蛋白J
正常(
n
=
5
)
108.36±5.63
135.49±9.74
125.83±11.74
0.0431
(
n
=
5
)
173.54±6.67
301.67±12.73
168.96±15.47
0.0085
p
=
0.0381
p
=
0.0086
纤连蛋白
正常(
n
=
5
)
105.38±5.83
147.37±9.47
139.84±14.37
0.0318
(
n
=
5
)
263.45±10.37
484.21±15.87
180.47±16.71
0.0033
p
=
0.0046
p
=
0.0031
CTGF
正常(
n
=
5
)
117.38±4.22
158.57±8.42
135.09±12.88
0.0441
(
n
=
5
)
223.07±14.17
379.22±14.85
169.74±11.53
0.0064
p
=
0.0074
p
=
0.0054
一个
的表达水平5正常受试者和5患者归一化到每个18 s rRNA基因表达其次是适应N1的表达式定义为100%。
3.4。抗氧化剂抑制5% CSE-Induced Fibrosis-Related基因表达的轨道成纤维细胞
调查是否5% CSE-induced fibrosis-related基因表达去轨道成纤维细胞可以被抗氧化剂,我们经过不同轨道的成纤维细胞与1毫米NAC或2毫米维生素C,分别为1小时之后,5%的CSE治疗。结果表明,预培养的细胞与1毫米NAC或2毫米VitC可以显著抑制5% CSE-induced fibrosis-related基因表达式包括载脂蛋白J,纤连蛋白,CTGF在轨道的成纤维细胞SYBR green-based rt - pcr(表
2 )。抑制率由1毫米NAC治疗载脂蛋白J,纤连蛋白,和CTGF是14%,17%,和13%,分别为(
p
=
0.0437
,
p
=
0.0251
,
p
=
0.0470
、职责)。去轨道成纤维细胞的抑制率由2毫米维生素C治疗载脂蛋白J,纤连蛋白,和CTGF是24%,28%,和27%,分别为(
p
=
0.0294
,
p
=
0.0085
,
p
=
0.0224
、职责)。因此,我们还研究了CSE-induced CTGF的表达水平蛋白质免疫印迹。结果表明,CTGF的蛋白表达显著增加的轨道后成纤维细胞添加5% CSE(图24小时
4 ,
p
=
0.0041
)。此外,预处理的成纤维细胞与2毫米VitC也可以抑制43%的海拔CTGF蛋白表达(图
4 ,
p
=
0.0371
)。
表2
5%的抑制率CSE-induced fibrotic-related基因表达抗氧化剂的轨道去患者成纤维细胞。
Fibrosis-related
5% CSE-treated
一个
1毫米NAC +
一个
抑制率(%)
2毫米VitC
一个
抑制率(%)
载脂蛋白J
(
n
=
5
)
285.17±22.47
245.18±20.33
14.02±3.27
217.32±18.53
23.79±8.47
p
=
0.0437
p
=
0.0294
纤连蛋白
(
n
=
5
)
496.35±28.64
412.11±26.72
16.96±4.48
355.38±23.29
28.40±5.05
p
=
0.0251
p
=
0.0085
CTGF
(
n
=
5
)
350.32±25.73
305.32±23.37
12.82±5.67
254.29±21.77
27.41±9.67
p
=
0.0470
p
=
0.0224
一个
的表达水平5正常受试者和5患者归一化到每个18 s rRNA基因表达其次是适应N1的表达式定义为100%。
图4
预处理抑制CSE-induced纤维化标志物的轨道成纤维细胞抗氧化剂。(a)经过预处理的轨道成纤维细胞来自患者(GO1-GO5) 2毫米VitC 1小时后跟的CSE 5%另一个24小时,CTGF蛋白表达是由免疫印迹,分别。(b)的水平CTGF蛋白表达是每个相应的规范化
β 肌动蛋白表达水平和调整GO1没有CSE和/或维生素C (VitC)治疗,CTGF的表达被定义为1.00。代表建立了直方图的基础上,从三个独立的实验结果,提出了和数据意味着±SD (
p
∗
<
0.05
;
p
∗
∗
<
0.0
1
与该集团没有CSE治疗)。Ctr:没有CSE治疗。
(一)
![]()
(b)
![]()
3.5。容易5% CSE-Induced轨道成纤维细胞,细胞内细胞因子的变化相比正常的控制和保护作用的抗氧化剂
胞内细胞因子刺激后的变化轨道成纤维细胞有5% CSE如表所示
3 。基底的TGF -水平
β 1和il - 1
β 在去轨道成纤维细胞明显高于正常对照组相比(
p
=
0.00
4
和
p
=
0.00
8
、职责)。此外,CSE诱导显著增加TGF -
β 1和il - 1
β 水平轨道成纤维细胞相比各自的控制(
p
=
0.00
6
和
p
=
0.005
、职责)。此外,TGF -的诱导率
β 1和il - 1
β 与5% CSE刺激后在轨道成纤维细胞比正常对照组(
p
=
0.00
8
和
p
=
0.00
3
、职责)。表
4 显示显著减少5% CSE-induced海拔的胞内TGF -
β 1和il - 1
β 去轨道成纤维细胞后使用1毫米NAC (
p
=
0.0
37
和
p
=
0.0
28
、职责)或2毫米VitC (
p
=
0.00
8
和
p
=
0.00
3
、职责)。
表3
胞内细胞因子的诱导率轨道成纤维细胞从正常受试者和患者5% CSE之前和之后的治疗。
细胞因子
基底的水平
5% CSE-treated
诱导率(%)
p 价值
TGF -
β 1 (pg / 10
4
细胞)
正常(
n = 5)
87.46±13.88
117.05±18.11
133.83±10.61
0.041
(
n = 5)
148.67±18.77
282.37±16.29
189.67±12.55
0.006
p
=
0.004
p
=
0.008
il - 1
β (pg / 10
4
细胞)
正常(
n
=
5
)
57.05±9.73
68.19±8.33
119.07±7.22
0.033
(
n
=
5
)
75.83±7.52
122.38±11.37
161.58±9.73
0.005
p
=
0.008
p
=
0.003
表4
5%的抑制率CSE-induced胞内细胞因子抗氧化剂的轨道成纤维细胞。
细胞因子
5% CSE-treated
1毫米南汽
抑制率(%)
2毫米VitC
抑制率(%)
TGF -
β 1 (pg / 10
4
细胞)
(
n
=
5
)
265.91±13.67
177.08±14.05
33.41±12.39
153.39±9.22
42.32±11.25
p
=
0.037
p
=
0.008
il - 1
β (pg / 10
4
细胞)
(
n
=
5
)
139.77±8.20
92.83±9.37
33.09±7.33
81.27±7.26
41.85±5.28
p
=
0.028
p
=
0.003
4所示。讨论
越来越多的证据表明氧化应激去[发展中扮演着重要的角色
17 ,
20. - - - - - -
22 ]。我们在这项研究证明CSE引发了更明显的氧化应激反应轨道成纤维细胞。更重要的是,这是第一个研究揭示,CSE可能诱发fibrosis-related基因表达,尤其是CTGF的轨道成纤维细胞与正常对照组相比。此外,预处理与南汽等抗氧化剂和维生素C可以带来显著的保护CSE对氧化损伤的影响,fibrosis-related基因的表达,诱导TGF -
β 1和il - 1
β 。
轨道成纤维细胞,细胞的一个主要目标,与许多GO-related病理条件,包括氧化应激(
14 ,
15 ,
23 ]。氧化应激也一直建议扮演一个角色在吸烟的有害影响
14 ]。目前的研究提供了证据,去轨道成纤维细胞更容易CSE-induced比正常对照组的细胞毒性和氧化应激。积累CSE-induced ROS可能导致更多的氧化损伤包括DNA氧化损伤和脂质过氧化反应,这就可以解释在某种程度上我们之前的观察,吸烟者明显高于尿8-hydroxy-2′脱氧鸟苷(8-OHdG)比不吸烟者去患者(
24 ]。此外,增加活性氧的生成,尤其是超氧化物阴离子和过氧化氢,可以刺激成纤维细胞增殖的轨道(
19 和诱导促炎细胞因子的生产
25 ),这都是关键的病理特征。此外,香烟smoke-mediated氧化应激可以招募炎症和免疫细胞如淋巴细胞、巨噬细胞和中性粒细胞激活一些促炎介质(
26 ),这可能会加剧炎症和组织重构的过程。
这种疾病的特点是去不仅通过炎症过程的早期,也通过组织重构和/或纤维化。尽管纤维化静止期了,它可能会导致大量的发病率,这往往是对传统医学治疗和需要手术干预。氧化应激被认为是一个因素,可以引起各种病理纤维化(
27 ,
28 ]。在目前的研究中,我们还注意到,香烟smoke-mediated氧化应激可以诱导fibrotic-related基因表达式包括载脂蛋白J,纤连蛋白,和CTGF轨道成纤维细胞,这些影响可以通过预处理抑制和抗氧化剂。载脂蛋白J、纤连蛋白和CTGF通常被称为纤维发生的重要因素。虽然还有待澄清的载脂蛋白J扮演纤维化生物标志物或发展的适应性反应纤维化的过程,CTGF已被证明是充分参与各种纤维化的发病机制障碍,例如肝、心、肾、眼纤维化(
29日 - - - - - -
32 ]。CTGF可以表现出不同的细胞功能,包括细胞外基质生产、细胞迁移、增殖和分化。重要的是,CTGF TGF -是至关重要的
β 介导fibroblast-myofibroblast分化转移和随后的细胞外基质的沉积
33 ),这可能导致组织重构和纤维化过程中去。它也被报道,可促进牙周纤维化尼古丁通过对CTGF的影响[从吸烟
34 ]。综上所述,先前的报告和我们的发现在这个研究可以部分解释为什么吸烟与严重和贫困对免疫抑制治疗。
我们之前显示低浓度的过氧化氢可以诱导促炎细胞因子的生产,如TGF -
β 1和il - 1
β 在去轨道成纤维细胞(
19 ]。这个研究进一步表明,5%的观察CSE TGF -诱导细胞内水平较高
β 1和il - 1
β 在轨道成纤维细胞比正常对照组。此外,CSE-induced海拔TGF - 5%
β 1和il - 1
β 在去轨道成纤维细胞被废除的抗氧化治疗。TGF -
β 1,一个强有力的纤维发生的因素,据报道,调节成纤维细胞的增殖和组织纤维化(
35 ,
36 ]。il - 1
β 一个重要的促炎细胞因子,促进透明质酸的合成在轨道成纤维细胞(
37 ]。纤维母细胞增殖、组织纤维化和透明质酸的积累都是重要的临床表现的病理特征。总的来说,这些发现表明,氧化应激中起着重要的作用在退化的影响去吸烟。
总之,本研究表明,成纤维细胞去夸大了对香烟烟雾提取物的挑战以及氧化应激增加,fibrosis-related基因表达和细胞内的TGF -水平
β 1和il - 1
β 。这一研究获得的结果为吸烟的影响提供一些线索去提供一个理论依据的潜力,合理使用抗氧化剂治疗。