炎症性肠病(IBD)影响遗传倾向的人暴露于环境诱因( IBD的发病率增加与高动物蛋白的饮食有关。事实上,饮食模式之间的联系(脂肪或蛋白质)和克罗恩病(CD)的风险是来自日本的一项研究中发现 尽管n - 3和n-6 PUFA在人类营养是必不可少的,西方饮食的特点是一个不平衡的比例这两种类型的PUFA (n - 3 / n-6比率)。的确,亚油酸(洛杉矶,n-6 PUFA)消费显著增加(整个20世纪的三倍) 我们和其他人证明抗炎效果的n - 3多不饱和脂肪酸在啮齿动物炎症性肠病模型( 这项研究的目的是探讨膳食脂肪酸组成的影响在肠道炎症的发病之前管理2,4,6-trinitrobenzene磺酸(TNBS)。为此,老鼠再辅以饮食不同n - 3 / n-6 / n - 9比复制从务实的西方饮食饮食模式。
年轻Sprague-Dawley雄性老鼠重75 - 100克从Janvier购买(Le Genest圣岛,法国)和允许访问食物和水随意。1星期后适应环境,50大鼠随机分为实验组5;美联储控制(CTRL)组与控制饮食和收到车辆,而colitic团体包括TNBS, n - 3, n-6,和n - 9组与控制饮食喂养,n - 3饮食,n-6饮食,饮食和n - 9,分别收到TNBS结肠炎感应。体重每天都在研究变化进行了监测。实验饮食后4周(28天1),24小时接受食物的老鼠剥夺TNBS前或车辆管理。在结肠炎感应(0到2天),老鼠提供控制饮食。实验设计如图的概述 所有动物处理和治疗程序进行按照两个法国国家规定和欧盟条例(358年欧洲共同体官方杂志L 18/12/1986)和RML是由法国政府授权使用这种动物协议(授权n 76 - 106°)。
四种等热量的饮食和isolipidic实验准备和几个脂肪酸比例:
匹配的正常饮食均衡的饮食和n - 3 / n-6 / n - 9比率等于1:4:16作为脂肪比例推荐的膳食指南和文献中描述为一个均衡的饮食 n - 3饮食有一个n - 3 / n-6 / n - 9比率等于1:1:4。我们选择一个n - 3 / n-6比率等于1:1因为这个比例是饮食建议的目标在日本IBD患者临床试验( n-6饮食上西方饮食与n - 3 / n-6 / n - 9比1:16:16。饮食n-6 / n比率是人类西方饮食(约15 涂有n - 9的饮食也有类似的n - 3 / n-6比CTRL饮食但富含n - 9 MUFA。这个n / n - 9比率等于1:24与观察到人们遵循地中海饮食(比 详细的饮食成分如表所示 脂肪酸的合成实验饮食。
CTRL n - 3饮食 n-6饮食 涂有n - 9的饮食
饮食的脂肪(克/ 1000克) 49.7 49.4 49.7 49.8
饱和脂肪(g) 10.2 9.9 9.3 9.6
MUFA (g) 29.8 26.2 20.1 32.8
PUFA (g) 9.8 13.3 20.3 7.4
n-6脂肪酸(g) 7.9 7.3 19.1 6.1
n - 3脂肪酸(g) 1。8 6.1 1。2 1。3
n - 9脂肪酸(g) 29.3 25.8 19.8 32.2
n - 3 / n-6 / n - 9比率 1:16 1:1:4 1:十六16 1:4:24
管理TNBS (Sigma-Aldrich公司Saint-Quentin-Fallavier法国)是用于结肠炎感应如前所述
PBS、蛋白酶抑制剂的鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾酒买来Sigma-Aldrich (Saint-Quentin-Fallavier、法国)。4 - 12% NuPAGE凝胶和SeeBlue五彩缤纷的标准从英杰公司(法国- pontoise)。冷冻结肠癌样本均质在PBS 0.1%蛋白酶抑制剂鸡尾酒和1%磷酸酶抑制剂。匀浆离心机(12000
结肠样品在液氮冷冻和储存在−RNA制备前80°C。总RNA分离大鼠结肠标本使用商业RNA净化设备(SV总RNA隔离设备,Promega,麦迪逊,WI)和Muc2的mRNA表达(引物序列F: CCTTGCTCTGCCATACCCGT R: ACACTGGTCCTCTCCTCCCT)和TFF-3 (F: TAACCCTGCTGCTGGTCCTG R: GTTTGAAGCACCAGGGCACA)和内部控制(GAPDH)测量中存在。此外,toll样受体信号通路中的基因表达测定实时PCR阵列根据制造商的协议(pamm - 0018 zd SA生物科学,弗雷德里克,MD)在CFX96 thermocycler (Bio-Rad大力神,CA)。数据表达在褶皱的监管。褶皱的变化(折叠的区别)由方程计算2 (−∆∆CT)。褶皱的规定,软件转换褶皱变化值小于1(即基因表达下调)通过返回负倒数。
肿瘤坏死因子的浓度
蛋白水解的评估活动(caspase-like和chymotrypsin-like)是由spectrofluorometric微量滴定板荧光计(贝特密特拉神940磅,技术)使用fluorogenic蛋白酶体基质存在与否的特定的蛋白酶体抑制剂如前所述[
进行了统计比较使用GraphPadPrism 5。数据表示为±SEM。体重变化和食物摄入量与双向方差分析分析重复测量图基的事后测试。所有其他的变量进行了分析通过单向方差分析Bonferroni事后测试或克鲁斯卡尔-沃利斯检验。差异被认为是重要的
Colitic组较低体重相比,控制大鼠(
结肠体重/长度比率增加colitic老鼠相比,对照组( 炎症标记物的老鼠接受饮食不同在不饱和脂肪酸组成4周TNBS-induced结肠炎紧随其后。(一)结肠/重量长度在第二天。(b)结肠伊诺表达式代表凝胶在第二天。(c)结肠il - 6和TNF (d)
在结肠炎组,n - 3组较低相比,结肠伊诺TNBS集团(
在结肠炎组,n - 3组较低结肠cox - 2表达相比TNBS集团( 类二十烷酸在大鼠不同途径的不饱和脂肪酸组成4周TNBS-induced结肠炎紧随其后。(一)结肠cyclooxygenase-2代表凝胶(cox - 2)表达和(b)结肠LTB4生产在第二天。5-Aminosalicylic酸(5-ASA)使用积极的抗炎控制。数据从colitic老鼠相比,1路的方差分析其次是图基期末测验。 紧密连接蛋白claudin-1和occludin没有不同组间( 肠道屏障参数老鼠接受饮食不同在不饱和脂肪酸组成4周TNBS-induced结肠炎紧随其后。(a)结肠claudin-1表达式,(b) occludin的表情,(c)三叶草因子3 (TFF3) mRNA水平,并在第二天(d) MUC2 mRNA水平。(e)代表凝胶结肠claudin-1和occludin的表达式。5-Aminosalicylic酸(5-ASA)使用积极的抗炎控制。数据从colitic老鼠相比,1路的方差分析其次是图基期末测验。
胰凝乳蛋白酶和trypsin-like活动没有不同colitic人群(
结肠炎组,n - 3饮食调节IL-1A, TLR-2和MA2K3基因,而n - 9饮食调节地基因( 炎症通路PCR数组的老鼠接受饮食不同的不饱和脂肪酸成分TNBS-induced结肠炎紧随其后。从大鼠结肠RNA接受饮食不同在他们的不饱和脂肪酸成分TNBS-induced结肠炎的发病。结果相比,老鼠接受TNBS控制饮食。数据以粗体TNBS老鼠显著不同。
n - 3饮食 n-6饮食 涂有n - 9的饮食
褶皱监管
褶皱监管
褶皱监管
Il1a
1.33 0.224 1.50 0.157
Il1b 1.60 0.125 1.09 0.776 −1.03 0.879
Il12a −1.64 0.113 −1.12 0.532 −1.41 0.226
白细胞介素6 1.54 0.363 −2.76 0.219 −1.10 0.656
肿瘤坏死因子 1.40 0.138 1.32 0.260 1.24 0.393
Ifng 1.06 0.417 2.30 0.124 1.78 0.183
Il10 1.49 0.378 −1.36 0.793 1.16 0.776
Il1r1 1.39 0.205 1.26 0.446 1.11 0.864
Hmgb1 1.09 0.492
1.02 0.851
Map2k3
1.36 0.117 1。2 0.278
Il2 −1.27 0.904 4.23 0.258 3.13 0.275
Clec4e 1.46 0.372 −2.13 0.184 −1.37 0.724
英国网球协会 −1.04 0.572 −2.44 0.351 −1.09 0.952
Cd86 −1.11 0.569 −1.12 0.778 −1.52 0.163
”丛书 −1.05 0.345 −1.3 0.379 −1.32 0.214
Irf1 −1.32 0.451 1.08 0.988 1.02 0.693
小君 −1.37 0.340 1.09 0.762 −1.34 0.158
Tlr1 1.23 0.419 −1.05 0.803 1.06 0.654
Tlr2
1.18 0.320 1.16 0.371
Tlr3 −1.38 0.320 1.25 0.659 1.11 0.846
Tlr4 1.49 0.140 1.34 0.251
Tlr5 −1.09 0.805 1.18 0.815 1.49 0.758
Tlr6 1.26 0.381 1.02 0.855 1.05 0.960
Tlr7 −1.37 0.397 −1.44 0.207 −1.29 0.299
Tlr9识别 −1.24 0.802 −1.18 0.877 −1.47 0.285
大量实验研究发现抗炎作用的n - 3 PUFA在肠道炎症随机临床试验没能证明疗效[ 在目前的研究中,n - 3饮食下调结肠伊诺表达式(图 在目前的研究中,IL-1A基因表达调节了n - 3饮食(表 饮食n PUFA TLR2基因相比,控制饮食而增加n - 9饮食增加TLR4基因(表 饮食n-6增加高机动组的基因表达盒1 (HMGB1,表 除了il-1a MAP2k3, TLR基因,我们观察到只有温和的n - 3饮食在炎症基因表达的影响。与其他的研究中,我们旨在评估膳食影响n - 3 PUFA创世纪炎症而大量研究感兴趣的药理效应的n - 3 PUFA治疗的方式( 脂肪酸是HNF-4内源性配体 饮食PUFA并不影响屏障功能在我们的研究中。我们调查紧密连接蛋白MUC2和TFF3 mRNA水平,我们并没有发现任何显著的影响在组织(图 在目前的研究中,n - 3饮食组显示n / n-6比率等于1减毒在结肠炎症标记物。这种预防性的方法已经在小型临床试验进行测试。在日本的一项研究中,n - 3在IBD患者饮食治疗的功效已经评估( 同样的,在最近的流行病学研究,女人与审慎的饮食(特点是摄入更多的水果、蔬菜和鱼)风险降低CD [ 总之,谨慎的n - 3 / n-6比率高的饮食可能导致部分限制结肠炎创世纪。进一步的研究将是强制性的,以确定机制饮食效果更好的饮食建议定义一个科学原理。
作者宣称没有利益冲突。