Palaemonetes kadiakensis收集在派克县Olustee溪,阿拉巴马州(31 38°56′′′N, 86°7′6′′W)。该站点是一个wadeable路边的位置,利用草虾感染的先前的研究 答:renale( 8]。宿主生物体获得了dip-netting沿着小河的两边。主机被运送到了特洛伊大学的水从该网站收集。虾被确定使用Pennak [ 11]。

虾是感染用解剖显微镜检查。 Alloglossidium renale位于触角的腺体(触角腺或肾脏)的主持人,这是位于触角尺度后,吉尔和前室头胸部的两侧。 Palaemonetes kadiakensis有一个半透明的外骨骼,使外部诊断成为可能。在早期的研究中,感染的患病率Olustee溪大约是13%,与虾经常举办多个吸虫在一个或两个触角腺[ 8]。凭证标本 答:renale从感染虾在这个位置沉积在贝茨维尔美国国家寄生虫集合,MD (USNPC 101574),在这个实验室的早期研究[ 8]。坏死寄生虫被确定为黑暗的群众基础的触角的尺度没有明显的子宫。

受感染的主机被删除的头胸部和缓冲福尔马林固定使用Bouin的固定剂或10%取决于特定的组织化学测试24小时使用。鱼( Pristipomoides aquilonaris)肠固定选择控制实验。然后组织脱水用50%,70%,95%,和两个100%异丙醇解,每24小时转移到Safeclear溶剂,一个60°C Safeclear-paraffin解决方案(1:1的比例),和两个60°C石蜡每24小时解决方案。组织是在石蜡块,切片在10 μ米厚度使用旋转式切片机(美国光学),并粘贴到一定不好过幻灯片。

从组织石蜡被Safeclear(三个变化,每30分钟)。组织水分在异丙醇:蒸馏水系列染色(表之前 1)。除了检查的基本解剖开始与哈里斯苏木精(HH),各种各样的污渍被选为酸性测试mucosubstances(阿尔新蓝pH值1.0(有所),阿尔新蓝pH值2.5 (AB2.5),甲苯胺蓝(TB)),中性糖(周期性acid-Schiff[不]),DNA(福尔根氏核反应或HCL-Schiff (FL))、蛋白质(ninhydrin-Schiff (NS),沃德的蛋白质染色(WPS)),脂质(四氧化锇(OS)),和酪氨酸/黑色素(ferro-ferricyanide (FF))。染色协议之后各种来源( 12, 13]。计数器污渍没有使用。永久使用标准的脱水,准备工作就绪清算和安装技术( 14]。塑料的部分组织在四氧化锇固定检查从材料准备一项研究[ 8]。照片是用尼康DXM 1200数码相机安装在尼康E600光学显微镜。图像调整亮度、对比度、伽马使用Adobe Photoshop元素来帮助染色的解释。组织化学结果分级使用这种半定量的范围:+ + +:强烈的污点,+ +:温和的污点,+:光染色,和−:没有污点。

哈里斯苏木精为解释的结果提供了基础组织化学染色(图 1)。的外合胞体虫没有细胞核,地表以下。没有一丝metacercarial囊肿壁之间观察到的主机触角腺管和皮肤寄生虫。这种寄生虫的实质是松散和染色。其他可识别的结构包括卵黄腺、吸盘、性腺、卵子,肠。

碳水化合物与有所染色,AB2.5、不是和结核病提供一致的结果。酸性mucosubstances沾AB污渍是目前主要的外层皮虫,肠道粘膜,和生殖管(图 2(一个))。实质是- AB的酸性糖渍。阿尔新蓝2.5还染色黏液状的物质之外的身体但被困在杯的当了。甲苯胺蓝显示外部粉红色或浅蓝色皮底部暗层,表明合胞体的带负电荷的物质。PAS反应整个蠕虫(图显示中性糖 2 (b)),外tegumental合胞体染色轻于地下区域。

蛋白质染色与NS和WPS是用来检查是否有外部分泌物可以发现遗迹或差metacercarial囊肿壁形成的。没有这样的外部分泌物检测,蛋白质的染色是一致的对大多数寄生虫(图中的结构 2 (c))。实质染色强度弱的NS PAS染色,尽管卵黄腺染色与NS强烈。

核染色用FL HH程序的结果证实,下面的皮肤是隐藏式的原子核外合胞体。原子核都分散在宽松的实质和被发现在典型的位置在其余的蠕虫。油滴被偶尔观察到的塑料部分蠕虫使用四氧化锇固定为EM。

酪氨酸等黑色素或黑色素组件检测到强烈的卵黄腺使用FF染色(图 2 (d))。另外,FF过程彩色鸡蛋壳材料。没有其他的寄生虫彩色正面。

哈里斯苏木精被用作染色 p . kadiakensis一般的触角腺的结构(图 1)。的微绒毛顶端的触角腺小管细胞和细胞质的小管细胞染色,与基底边界(图略暗染色 1 (b))。细胞核内的DNA的小管细胞染色的口吻。这一轮染色特点健康核结构明确的DNA核浆周围的岛屿。小管的管腔内容彩色轻。受损的小管细胞被压实,不立方形的。他们转换到鳞状细胞附近的寄生虫(图 1 (c)),可能由于蠕虫病毒的增长和压缩主机肾小管。在一些感染,大部分的触角腺被寄生虫,和蠕虫且紧邻肌肉或被一层薄薄的鳞状小管细胞分离层(图 1 (d))。苏木精染色显示,核的损坏,被夷为平地,密集的小管细胞,核浆没有大面积的光线。扁平的细胞核的身份被确认与FL DNA染色。

三个最重要的结果提供了组织化学过程触角腺小管染色:AB2.5,不是和FF。酸性染色的mucosubstances AB2.5透露了一个有趣的模式的触角腺小管细胞,染色的顶端microvillar边境被宣布和基底边境的细胞而不是主要躯体内的细胞(图 2(一个))。触角腺小管细胞的细胞核明显清楚这个污渍。这种染色模式存在于细胞接触寄生虫以及那些遥远的虫子,可能表明肾小管上的寄生虫的影响不大。例外染色模式应用于细胞由于身体创伤是紧凑和夷为平地。夷为平地和鳞状细胞,染色差异soma和边界的细胞没有可辨别的。PAS染色还透露更强烈的染色刷状缘和基底侧比细胞质内的小管细胞(数字 2 (b)和 3 (c))。AB2.5和PAS染色显示领域的小管细胞刷状缘刮掉的蠕虫虽然小管细胞完好无损。第三重要的组织化学的结果是缺乏黑色素由宿主反应,揭示了FF染色(图 2 (d))。这个测试很重要,十足类已知产生黑色素的触角腺的寄生虫感染。

一个坏死 答:renale恢复和加工各种污渍(表吗 4)。这种坏死蠕虫是无法辨认的材料与卵子和碎片的质量(图 3(一个))。布朗苏木精染色的内在质量,尽管寄生虫核和器官没有可识别的外观质量是完全改变了从健康的寄生虫。残余的外皮包围了质量和染色。损坏,鳞状主机小管细胞融合的残余外皮。小管坏死附近的管腔内容质量彩色轻。

寄生虫内部结构的完整性和HH面目全非与组织化学染色,这也显示测试。具体来说,有一个变化在寄生虫表面AB2.5染色不再强调了蠕虫的表面,和黑暗的染色外坏死质量不是和NS在场(数字 3 (b)和 3 (c))。PAS染色外表面出现的虫子皮和粘附宿主细胞,和NS染色可归因于外表面附着的宿主细胞。这些变化随着HH染色显示结构的崩溃。宿主组织不是擦伤或压缩显示小变化与碳水化合物污渍在主人的刷状缘和基底层被AB2.5强调,不是小管细胞。

值得注意的是,FF染色显示黑色素在坏死或酪氨酸产品质量的模式不同于完整的成虫。Ferro-ferricyanide染色质量内部坏死,坏死皮残留,和细胞质的绿色,而卵黄腺彩色强烈绿色(图 3 (d))。没有染色FF可归因于宿主组织。此外,没有任何污点透露,结构表明宿主反应甚至蠕虫在其死后,并没有给墙结构或隔离坏死寄生虫除了夷为平地主机小管细胞贴在表面的质量。