JPATH 杂志的病原体 2090 - 3065 2090 - 3057 Hindawi 10.1155 / 2021/6165950 6165950 研究文章 抗疟活性 黑种草l .种子提取和选择的抵抗 鼠体内安卡在一个小鼠模型 https://orcid.org/0000 - 0002 - 7160 - 7374 Udu Rahma 1 https://orcid.org/0000 - 0001 - 9784 - 1698 Oyweri 工作 1 https://orcid.org/0000 - 0002 - 8059 - 4990 Gathirwa 耶利米 2 Yuste 穆 1 纯粹和应用科学 应用与健康科学学院 技术大学的蒙巴萨 邮政信箱90420 - 80100 蒙巴萨 肯尼亚 tum.ac.ke 2 传统医学和药物研究中心 肯尼亚医学研究所 邮政信箱54840 - 0002 内罗毕 肯尼亚 kemri.org 2021年 3 2 2021年 2021年 30. 6 2020年 10 12 2020年 21 1 2021年 3 2 2021年 2021年 版权©2021 Rahma Udu et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。化疗在疟疾控制起着至关重要的作用。然而,治疗的主要障碍已经崛起的寄生虫对大多数的抗疟药的耐药性。以青蒿素为基础的联合疗法(ACTs)仍然是目前最有效的抗疟药物。然而,疟原虫宽容行为现在越来越流行特别是在东南亚的传播的危险行为抵抗世界的其他地方。因此,这就产生了需要选择有效的抗疟药。因此,本研究试图确定潜在的抗疟,安全,和阻力提取物在小鼠模型的发展。 方法。Methanolic和乙酸乙酯提取物通过溶剂萃取。急性毒性的提取是化验 在活的有机体内。此外,两种提取物进行抗疟活性 在活的有机体内对 鼠体内ANKA株为期4天的抑制测试在500,250和125毫克/公斤/天。包装细胞体积计算来确定贫血表现。最后,持续药物实验在500毫克/公斤和DNA通过PCR进行放大。通过Sanger测序扩增子了。 结果。没有动物的毒性意识到2000毫克/公斤。重要的是,使用一个寄生虫血症抑制高75.52%和75.30%剂量500毫克/公斤methanolic和乙酸乙酯提取,分别。提取物能够逆转细胞体积减少。 黑种草防表型被选为延迟寄生虫间隙。然而,没有改变的核苷酸序列 Pb凋亡和 PbCRT的基因。 结论。结果提供房间为未来开发的植物作为抗疟。

 肯尼亚国家研究基金 1。介绍

抗击疟疾在大多数发展中国家特别是在撒哈拉沙漠以南的非洲地区仍令人担忧( 1]。2010年、2016年和2017年记录了2.39亿年,2.17亿年,和2.19亿疟疾病例,分别。疟疾在2010年造成607000人死亡。随后,2016年和451000年2017年,435000人死于这种疾病 2]。抗疟药物有相当减少疟疾死亡率和传播性 3]。世界卫生组织建议使用青蒿素的联合疗法(ACT),以克服耐药性。因此,期短一半青蒿素衍生物清除寄生虫的行动迅速,使用了不同的方式与父母长效药物,消除持久性寄生虫( 4]。目前,蒿甲醚lumefantrine (AL)组合是第一行药物治疗简单的疟疾在肯尼亚。尽管减少疟疾的行为能力,抵抗的情况下Thailand-Cambodia边境,东南亚,一直说。耐药菌株可能蔓延到非洲和世界其他地区。这需要新的有效的干预方法包括使用药用植物( 5- - - - - - 7]。喹诺酮类和青蒿素衍生物与传统草本植物( 8]。

抗性发展突出影响耐药突变体在不同的主机上。耐药性选择动物模型允许遗传和生理上的操作。串行技术(ST),使用药物剂量增加每通道最近被用来实现药物的压力。此外,2%的复发(2% RT)技术,采用高的唯一药物剂量在每个通道被使用( 9]。然而,Siregar et al。 10)取得atovaquone-resistant的选择 p .鼠菌株从完整治愈运行持续的治疗剂量,这就解释了在人类治疗失败。

估计122年现代对抗疗法的药物已经建立了从大约94个植物物种通过民族植物学的领导( 11]。民间药用植物被指是安全的。此外,他们在本地可用的、高效的和有一个友好的行动方式 12]。然而,需要更多的研究来验证这些说法( 13]。包括印度在内的亚洲、欧洲和非洲,欧洲和非洲海岸线,分别享有的药用价值 n .漂白亚麻纤维卷( 14, 15]。抗氧化、抗糖尿病的抗癌、抗炎和抗寄生虫的影响植物有记载 16- - - - - - 18]。重要的是,中东研究证实其抗疟疾活动很少或根本没有报告( 19]。然而,很少有报告显示ethanolic的抗疟作用,水和氯仿提取的 黑种草( 20.]。在其他地方,阿什克罗夫特et al。 21)记录methanolic植物和水提取物的活动 p .鼠(nk 65)感染。传统上,当地人在肯尼亚沿海省份组成的阿拉伯人,亚洲人,一样)使用种子的混合物煮水( 22, 23]。他们有规范化的想法饭后煮熟的种子,它已被证明是一个有前途的补救与疟疾相关的症状包括发冷、头痛、恶心、食欲和缺乏,等等。在这种情况下,研究试图找出是否 黑种草种子真正的治疗 疟原虫与疟疾寄生虫或症状。

鼠体内线被用来确定mefloquine凋亡基因的过度表达,这是与抗性有关 恶性疟原虫( 24]。这项研究被忽视 在体外化验的 恶性疟原虫由于其难以抵抗成立( 25]。这项研究是基于一个假设连续曝光的疟原虫相似的测试药物浓度在不同的动物宿主寄生虫发展挑战的方法克服测试药物的效果。

我们主要是筛选确定定性的植物化学成分的提取和抗疟活性 在活的有机体内。我们确定了细胞体积(PCV)与贫血的关系。此外,我们选择了稳定 n .漂白亚麻纤维卷防菌株由连续药物的压力 在活的有机体内和放大 Pbcrt和 Pb凋亡基因。最后,扩增子序列的测序和分析变化 Pbcrt和 Pb凋亡。

 2。材料和方法 2.1。植物收集、认证,并提取

一公斤 n .漂白亚麻纤维卷种子样本从收购Mwembe Tayari市场,蒙巴萨,用塑料袋包装(凭证标本。PAS0024)。沙特阿拉伯血统的种子。分类学者从KEMRI蒙巴萨和土著居民的传统使用植物帮助积极的识别。种子感动以及传统医学和药物研究中心,内罗毕进行处理。脱水的种子在地面使用电动实验室轧机(克里斯蒂和诺里斯有限公司切姆斯福德,英格兰)。甲醇和乙酸乙酯溶剂(600毫升)被用来提取400 g的地面材料。简明,400克的地面材料是由浸渍提取使用各自的600毫升溶剂在室温下48 h。植物浸泡过滤,用旋转蒸发器浓缩在减压干燥。获得的粗提取物进一步在真空干燥机摆脱任何可能的痕迹溶剂和后存储在−20°C到使用。

 2.2。动物伦理考虑,动物使用,寄生虫接种

为了进行动物实验,研究获得的许可以及动物保健和使用委员会(KEMRI / ACUC / 01.07.19)。动物保健和使用指南以及动物屋提供的人员。后的动物以人道的方式处理国际公认的原则。计23针是用来进行IP注入。的实验中,小鼠牺牲室的碳氧化(iv)。终于化为灰烬残骸。

6周大岁的男性瑞士白化小鼠体重20±2 g,成长在内罗毕以及动物设施,使用在所有的科目 在活的有机体内实验。动物主题使用敏感的电子天平称重。住房和喂养条件维护按照推荐以及标准。短暂,微型贷款特点II型的笼子里,品牌与实验细节,安排5实验动物笼在有空调的房间里在20°C室温。相对湿度保持在60 - 70%。他们相应的培养与商业啮齿动物饲料和水 随意。Chloroquine-sensitive p .鼠(ANKA株)寄生虫被用来赋予疟疾在老鼠身上。老鼠之前感染 p .鼠被用作捐赠者和寄生虫被连续串行腹腔内随后存活(IP)的血液。

 2.3。体内<斜体> < /斜体>急性毒性

的急性毒性研究是根据先前的研究进行一些修改( 26, 27]。简洁,五鼠笼适应实验室条件3天。四组老鼠食物匮乏,但配上干净的水随意前24小时口服不同剂量的测试提取。测试组收到一剂1000,1500和2000毫克/公斤体重/提取。消极的动物群体收到0.2毫升的车辆。在这项研究中,生理变化包括身体或/和四肢萎缩,减少汽车活动,呼吸异常,挣扎,头晕,食欲缺乏,粗糙的毛皮,痉挛在两条后腿和死亡率在24 h被检查。此外,类似的参数检查随后的14天。

 2.4。感染和剂量的动物

鼠标有30%来自供体寄生虫血症和生理盐水稀释到5×107寄生红细胞每毫升。瑞士白化小鼠(男性)重20±2 g感染0.2毫升血液(2×107 p .鼠寄生的红细胞)腹腔内,随机分为三个测试组和两个对照组的5。5毫克/公斤氯喹作为标准药物和生理盐水作为负控制( 8]。

2.4.1。为期四天的疟原虫抑制试验

彼得斯( 28)与轻微的修改协议是利用完成为期四天的寄生虫抑制试验。 p .鼠应变安卡被感染的血液从供体老鼠和1% (w / v)肝素。受感染的血液在生理盐水稀释大约108每毫升寄生红细胞。测试动物腹腔内注射0.2毫升,不分青红皂白地分为5。实验组口服治疗0.2 ml单剂125,250和500毫克/公斤的测试样品,在感染后2 h (D0) [ 29日]。正面和负面的对照组服用0.2毫升的CQ的车辆和5毫克/公斤,分别。老鼠先后治疗口服3天(D1、D2和D3)与相应的剂量。薄血涂片拍摄第五日(D4)从尾巴剪,固定在甲醇,沾10%吉姆沙染色剂( 30.]。寄生虫血症抑制决心按照Tona et al。( 27公式: (1) PS = 一个 − B 一个 × One hundred. , 在哪里 一个意思是寄生虫血症在负对照组4天 B是测试组的寄生虫血症。

每组平均生存时间(天),确定后30天的感染。

 2.5。测定了细胞体积

敏锐地调整协议强调了Mekonnen [ 31日)是用来确定包装细胞体积(PCV)测定。包装细胞体积艾滋病评估测试的有效性提取物抑制溶血间接从累积寄生虫血症与疟疾有关。简洁、血液收集每个老鼠的尾巴在肝素化microhematocrit毛细管的填充体积的四分之三。管子被密封胶密封,放置在一个microhematocrit离心机两端密封外。血液在12000转离心10分钟。每个鼠标的PCV测量在感染和第四天治疗后使用以下公式( 31日]: (2) PCV = 一定数量的血液中红细胞的体积 总血容量 × One hundred.

2.6。测定的寄生虫血症水平

薄尾血涂片的老鼠进行了为期4天的抑制试验。与无水甲醇固定后,幻灯片沾10%染色在pH值为7.2,持续15分钟。最后,幻灯片是轻轻地用蒸馏水洗净,在室温下晾干。他们在显微镜下看下100 x放大使用奥林巴斯显微镜油浸电力。寄生虫血症比例是使用以下公式计算 32]: (3) % 寄生虫血症 = 寄生的红细胞表面 红细胞表面的总数量 × One hundred.

2.7。平均生存时间的确定

30天随访时间实施监控在各自组实验动物死亡。发病率的死亡记录不管。平均生存时间(MST)每组小鼠的决心使用以下公式: (4) MST = 所有小鼠的存活时间和一群 天 老鼠的总数 。

2.8。施加药物选择压力和评估水平的阻力

实验运行每Kangethe轻微变化的 33)协议。简洁,腹腔内接种0.2毫升的寄生的红细胞进行5天每个剂量组小鼠0 (D0)。受感染的老鼠不及时治疗,直到寄生虫血症升至8%。因此,500毫克/公斤剂量测试提取被启动。治疗进行了如前所述在为期四天的抑制试验。寄生虫血症是监控,直到它达到10%以上可能导致动物死亡。老鼠然后选择使寄生的红细胞到下一个新的群5老鼠每个测试样本。这是接下来的15个周期,进行相同的测试药物浓度。阻力位决心使每5周期后(约一个月)。的艾德50和艾德90年值是通过绘制一个线性剂量反应曲线。的标准四天抑制测试允许评估指数的阻力,“肢体重复性劳损症的人50和肢体重复性劳损症90年(众所周知的比值50和艾德90年抵抗线的敏感,父行)。

肢体重复性劳损症的50和肢体重复性劳损症90年价值观分为四个分类,根据以往的研究工作( 34):(1)肢体重复性劳损症的人50/90= 1.0,敏感;(2)肢体重复性劳损症50/90= 1.01 - -10.0,轻微阻力;(3)肢体重复性劳损症50/90= 10.01 - -100.0,温和的阻力;和(4)肢体重复性劳损症的人50/90> 100.0,高电阻。

 2.9。低温贮藏的<斜体> P。鼠< /斜体>安卡寄生的红细胞

0.5毫升的2 - 8% p .鼠安卡PRBCs心脏穿刺收集在0.05毫升肝素。血液是温和与0.5毫升的甘油/生理盐水混合解决方案(包括20%甘油;在cryotubes v / v)。管被储存在4oC 10分钟和转移到−Muthui [80°C,说明了 35]。

 2.10。引物对分子的工作

现有文献的引物( 33使用引物3工具)进行评估来确定序列产品扩增和测序。

 2.11。体内制备<斜体> < /斜体>寄生虫DNA

一个协议了木等。 36)采用以最小的变化。每个寄生虫DNA制备获得50 μl (PRBCs发现绘画纸903™过滤器文件。DNA提取干血滴使用Chelex方法( 36]。寄生的红细胞从小鼠CQ充当积极的控制。DNA的浓度计算使用NanoDrop分光光度计。最后,DNA样本存储在−20°C等待产品放大。

 2.12。放大

采用改良的PCR计划( 33]。简而言之,在一个25 μl PCR, 1 μl每样本的基因组DNA作为模板来成功地放大 PbCRT和 Pb凋亡基因。其他组件包括核苷酸,MgCl2正向和反向引物,梦想Taq(热科学),并正确地优化循环条件如表示 1。PCR分析产品在1%琼脂糖凝胶和纯化使用ExoSAP-IT®(Affymetrix,圣克拉拉,CA)由制造商的协议。然后纯化产品排序按照大染料®终结者v3.1循环测序工具反应混合(美国应用生物系统公司)使用3500 xl音序器。生成的色谱图的正向和反向引物是削减使用ChromasPro软件(版本2.6.6)消除贫穷的读取。BioEdit软件版本7.0.5.3导入编辑写道。读取后进行了校准和组装成叠连群解决可能模棱两可的眼睛。MEGA-X软件启用评估遗传多态性的关系从PlasmoDB参考基因。使用的引物序列捕获在表 2和 3。

摘要PCR计划。

PCR扩增总结 温度(°C) /时间(分钟)
Pb阴极射线管 Pb凋亡
最初的变性 95°C, 5分钟 95°C, 5分钟
变性 95°C, 1分钟 95°C, 1分钟
退火温度 49°C, 45秒 48°C, 45秒
伸长 68°C, 6分钟 68°C, 5分钟
最终伸长 72°C, 10分钟 72°C, 10分钟
底漆(正向和反向) 0.25 pmol / μl每个 0.25 pmol / μl每个
Mgcl2(毫米) 2。0 1。5
核苷酸(毫米) 0.2 0.2
周期 35 35
无限的持有 4°C 4°C

Pb凋亡测序引物。

组1 PB MDR 1 f ATCAGGAGCTTCGTTGCCTA
PB MDR 1 r TCCATGCATAAACTTGAAATCG
组2 PB MDR 2 f CAATGTCGATAATTGAAGAAGCA
PB MDR 2 r CCATACCAAAATCCCAAAGC
集3 PB MDR 3 f GCTTTGGGATTTTGGTATGG
PB MDR 3 r TGTCGACAGCTGGTTTTCTG
组4 PB MDR 4 f TCGTCAAGTGGAAATGGTGA
PB MDR 4 r TCTGCAATCTCTTTTTCTTTTCG
集合5 PB MDR 5 f GCCCCTGGATTTTTATCGTC
PB MDR 5 r AGCAAATGTTCGCGTTGTAA
设置6 PB MDR 6 f TTACAACGCGAACATTTGCT
PB MDR 6 r TTTTCTTCTATCCCCTTTACTGTCA
组7 PB MDR 7 f AGTTGGAGAAACTGGATGTGG
PB MDR 7 r GATGTTGCATCACGCATTTC
制定了8个 PB MDR 8 f TTCGGTAAACAAGATGCAACA
PB MDR 8 r GGCTCTAGCAATAGCAACTCG
设置9 PB MDR 9 f GGTGGTCAAAAACAACGAGT
PB MDR 9 r GGGCTTGAACAAAAGATCCA

PbCRT测序引物。

组1 PbCRT 1 f GGA CAG有条件现金援助AAT AAC CAA TGG
PbCRT 4 r CTGAAGTAACAAAACTATAATTTCCC
组2 PbCRT 2 f 柠檬酸GGA AGA AGT GTC TGT
PbCRT 2 r 手枪亚美大陆煤层气有限公司棉酚AAA CTG CCA TC
集3 PbCRT 3 f GTG TTG GCA TGG柠檬酸AAA TG
PbCRT 3 r 结论GGT TTT CTT ACA GCA公布
组4 PbCRT 4 f TGTTAGTTGTATACAAGGACCAGC
PbCRT 4 r GTT AAT TCT GCT TCG GAG柠檬酸TTG
2.12.1。<斜体> Pb < /斜体>凋亡放大

以下引物组是用来放大的全部编码区 Pb凋亡基因:

PbMDR 1 f: ATCAGGAGCTTCGTTGCCTA

PbMDR 9 r: GGGCTTGAACAAAAGATCCA [ 33]。

2.12.2。<斜体> Pb < /斜体> CRT放大

的引物扩增的基因的编码区包括以下序列: PbCRT-1F: GGA CAG有条件现金援助AAT AAC CAA TGG PbTCG CRT-4R: GTT AAT TCT GCT GAG柠檬酸TTG [ 33]。

中提到的项目表 1采用从Kangethe 33)与小修改。

的 Pb凋亡测序引物提供的表 2得到从Kangethe 33]。

的 PbCRT测序引物提供的表 3得到从Kangethe 33]。

 2.13。初步定性植物化学的筛选

两个提取植物化学的研究是按照标准程序运行所述壳体等人,女子et al。 37, 38以最小的变化如下)。

2.13.1。检测生物碱

1 g的提取、稀盐酸是补充道。瓦格纳的测试:4滴瓦格纳试剂(碘化钾碘)被添加到准备样品。棕色/红色沉淀显示发展生物碱的存在。

 2.13.2。萜类化合物的检测

Salkowski测试:1 g的提取和2毫升氯仿。3毫升的浓硫酸是谨慎添加形成一层。组建一个红褐色接口表示萜类化合物的存在。

 2.13.3。皂苷的检测

泡沫测试:2毫升的水被添加到1 g的提取和动摇。持久的泡沫10分钟显示皂苷的存在。

 2.13.4。检测植物固醇

Salkowski测试:1 g的提取、2毫升氯仿和2毫升浓硫酸的添加和动摇。青黄色荧光红层的氯仿和酸表示固醇的存在。

 2.13.5。检测苷

1毫升的水被添加到1 g的提取和动摇。2毫升氢氧化钠的水溶液就补充道。黄色的外观显示苷的存在。

 2.13.6。检测酚类

氯化铁测试:1 g的提取处理4滴氯化铁溶液。形成蓝色黑色表明酚类化合物的存在。

 2.13.7。检测的单宁

凝胶测试:1 g的提取、2毫升1%明胶加入了包括氯化钠溶液。形成白色沉淀了单宁的存在。

 2.13.8。检测类黄酮

提取的碱性试剂测试:1 g 4滴氢氧化钠处理的解决方案。建立强烈的黄色,变成无色的稀盐酸,表明黄酮类化合物的存在。

 2.14。统计分析

在活的有机体内试验分析了使用Windows SPSS版本25。单向方差分析(方差分析)其次是图基的诚实的显著差异事后测试是用来建立评估统计学意义 在活的有机体内化验。一个 P 小于0.05被认为是具有统计学意义的价值。DNA序列和预测的氨基酸序列进行了分析和肌肉使用Mega-X软件算法的搜索爆炸©软件在NCBI网站和PlasmoDB版本11。

 2.15。伦理批准

研究得到的批准以及科学和伦理审查单位(塞鲁)协议以及数量/塞鲁CBRD / 191/3803。研究的每一个过程进行了按照KEMRI指南在动物保健和使用。同样,在实验动物使用指导原则和护理随访。

 3所示。结果 3.1。急性毒性研究

提取结果没有死亡的剂量2000毫克/公斤24 h内以及连续14天。此外,没有身体和行为的迹象over-toxicity如身体或/和肢体萎缩、减少汽车活动,呼吸异常,挣扎,头晕,食欲缺乏,粗糙的毛皮,痉挛在两条后腿。该建议的LD50提取高于2000毫克/公斤。

 3.2。体内<斜体> < /斜体>抗疟活性提取物对<斜体> P。鼠< /斜体>安卡

提取物的抗疟活性 p .鼠安卡表所示 4。% %寄生虫血症抑制寄生虫血症是成反比的测试组。寄生虫血症抑制活动表现出剂量依赖性的方式。在500毫克/公斤,提取显示最高的寄生虫减少活动。有很大一部分寄生虫血症测试和负对照组之间的差异( P < 0.001 )。然而,有一个小的差别chemosuppression积极的控制和两个提取物。有趣的是,提取延长生存时间的动物治疗后关闭( P < 0.001 )比消极的控制。

的寄生虫血症、%寄生虫血症抑制和治疗后生存时间终止。

药物/提取 剂量(毫克/公斤) 平均数±标准差寄生虫血症(%) %抑制寄生虫 平均生存时间(天)
甲醇 125年 7.18±0.73 56.29 10.50±0.58
250年 5.58±0.39 66.05 11.25±0.96
500年 4.03±0.67 75.52 16.25±0.96
层 125年 6.75±0.31 59.02 11.00±0.82
250年 4.72±0.19 71.27 12.40±1.14
500年 4.04±0.87 75.3 15.60±1.52
CQ 1.20±0.23 92.59 28.25±1.50
车辆 16.45±3.08 5.00±0.82

∗ 结果表示为平均数±标准差。

 3.3。测量细胞体积

包装细胞体积(PCV)值被用来显示贫血由于严重的疟疾。PCV值显示下降值,即:,49.80±2.78in the negative control as compared to test groups that were above 53 which indicates anemia. Therefore, the positive control and the extracts were able to reverse PCV reduction by preventing hemolysis arising from cumulative parasite manifestation. The data are captured in Table 5。

细胞体积D0, D4包装。

动物组 剂量 PCV-D0 PCV-D4 变化百分比
控制 0.2车辆 53.40±2.30 49.80±2.78 −6.74
CQ 5毫克/公斤 52.40±2.07 55.00±1.87 4.96
甲醇 125毫克/公斤 53.00±1.00 53.00±1.58 0.00
250毫克/公斤 51.75±1.50 53.25±0.50 2.90
500毫克/公斤 52.40±1.82 53.60±2.88 2.29
控制 0.2毫升的车辆 53.80±2.78 49.80±1.64 −7.43
CQ 5毫克/公斤 53.80±2.78 55.80±1.92 3.72
层 125毫克/公斤 53.20±3.03 53.60±1.52 0.75
250毫克/公斤 56.25±3.86 56.75±2.99 0.41
500毫克/公斤 52.40±2.30 53.00±1.58 1.15

∗ PCV表示为均值±标准差。

 3.4。阻力指数的价值观和ED50 ED90 Methanolic和乙酸乙酯提取物在为期4天的测试测量药物选择压力试验

在周期0,50对于methanolic提取0.92毫克/毫升,艾德90年为82.99毫克/毫升。值得注意的是,艾德50和艾德90年年代上升周期的数量增加。然而,阻力指数5值略有上升th以较慢的速度。肢体重复性劳损症的50和肢体重复性劳损症90年值分别为2.30和1.01,表明,在通道5,有抗性发展较慢。特别是,在11所示th通道,艾德50和艾德90年值是稳步增加肢体重复性劳损症值为6.8和1.32,分别说明轻微阻力的发展。有趣的是,在16日通过50和艾德90年25.02毫克/毫升和130.92毫克/毫升,分别。同样的趋势在RSI值与肢体重复性劳损症的人50的27.2和肢体重复性劳损症90年1.58。肢体重复性劳损症的升级提高50在16通道可以表示温和的阻力。根据埃德50年代,27倍差异敏感(周期0)和抵抗线(周期16)methanolic提取的 n .漂白亚麻纤维卷是记录。在周期0,ED产生的乙酸乙酯提取物50和艾德90年0.77和78.04毫克/毫升的价值观。在通道5,有轻微的增加50和艾德90年值分别为2.67和79.10毫克/毫升,。然而,有稳定的增长50和艾德90年值和轻微肢体重复性劳损症的崛起50和肢体重复性劳损症90年值分别为6.35和1.15,显示轻微阻力的发展。值得注意的是,在16通道,艾德50拍摄高生产肢体重复性劳损症50的13.03和肢体重复性劳损症90年1.43。因此,肢体重复性劳损症的价值50在周期16表明中度抗性高于10但小于100。此外,艾德50结果,此差异敏感(周期0)和抵抗线的乙酸乙酯提取物(周期16) n .漂白亚麻纤维卷而著称。上述结果在表 6和 7。数据 1和 2提供一条直线的剂量反应曲线chemosuppression与methanolic和乙酸乙酯提取物的浓度,分别展示50和艾德90年在通道16。

总结的ED50 ED90(毫克/ ml.day)和阻力指数methanolic提取测量的值在为期4天的测试药物选择压力试验。

通过没有 Methanolic提取
艾德50 肢体重复性劳损症 艾德90年 肢体重复性劳损症
父行 0.92 1 82.99 1
5th 2.12 2.30 83.82 1.01
11th 6.26 6.8 109.33 1.32
16th 25.02 27.2 130.92 1.58

总结的ED50 ED90(毫克/ ml.day)和阻力指数的乙酸乙酯提取测量值在为期4天的测试药物选择压力试验。

通过没有 乙酸乙酯提取
艾德50 肢体重复性劳损症 艾德90年 肢体重复性劳损症
父行 0.77 1 78.04 1
5th 2.67 3.47 79.10 1.01
11th 4.89 6.35 89.84 1.15
16th 10.03 13.03 111.63 1.43

艾德50和艾德90年在16通道(methanolic提取 p .鼠安卡)。

艾德50和艾德90年在16通道(乙酸乙酯提取 p .鼠安卡)。

 3.5。测序结果

没有多态的整个编码区域的变化 Pb凋亡和 PbCRT的基因。这是总结的比较分析与参考序列基因的基因。

 3.6。定性调查植物化学的五项提取<斜体> N。< /斜体马唐>

我们发现提取的植物化学物质调查除了乙酸乙酯提取物中酚类。然而,类黄酮、生物碱、皂苷、萜类化合物强烈。丹宁酸、甾醇类、苷是弱。植物化学的分析的结果,分别提取收益率呈现在表 8。

定性的五项提取植物化学的调查 n .漂白亚麻纤维卷。

植物化学的 层 甲醇
酚类 − +
类黄酮 + + + +
丹宁酸 + +
固醇 + +
生物碱 + + + +
皂苷 + + + +
配糖体 + +
萜类化合物 + + + +
提取收益率(%) 3.00 2.75

∗ (+ +)强烈,(+)弱,和(−)缺席。提取收益率表示为百分数(%)。

 4所示。讨论

许多药用植物包含各种化合物作为人类疾病的可能的药物来源管理( 39]。CQ等大多数已知的抗疟药青蒿素甲氟喹合成,最近产品被发现使用啮齿动物疟疾模型( 8]。在理性的药物发现的植物来源, 在体外和/或 在活的有机体内进行化验。一般来说, 在活的有机体内测试更实用、更快速、更便宜 在体外化验( 40- - - - - - 42]。分子方法也可以把他们更准确,并提供一个更大的图片被调查产品的未来的意义( 43, 44]。

完美的抗疟治疗疟疾寄生虫展品选择性和治疗活动没有间接毒性在主机。急性毒性调查确定没有死亡的剂量2000毫克/公斤体重在第一个24小时,接下来的14天。此外,没有身体和行为的记录表明over-toxicity迹象。调查的迹象,包括缩小身体或/和肢体,减少汽车活动,呼吸异常,挣扎,头晕,食欲缺乏,粗糙的毛皮,痉挛两条后腿,解释为陈et al。 45并不包括在他们的研究。成功完成为期4天的抑制试验没有导致死亡的解释了提取物的安全性。这清楚地表明,致死剂量能够杀死至少一半的实验种群(LD50)高于2000毫克/公斤体重。在其他地方,Al-Sheddi et al。 46)确定 n .漂白亚麻纤维卷在低浓度表现出没有细胞毒性与更高的浓度。从本质上说,植物在动物宿主的影响反映的人类。因此,植物可以很容易地利用人类宿主只在降低浓度。

本研究使用 p .鼠安卡, 在活的有机体内模型涵盖临床方面根除感染治疗结果的预测。的 在活的有机体内评估显示明显的剂量依赖性降低寄生虫血症比例相比,测试组的负对照组( P < 0.001 )。因此,在提取500毫克/公斤,methanolic疟原虫抑制达到75.3%和75.52,乙酸乙酯,分别。在低剂量125毫克/公斤,寄生虫methanolic抑制能力为56.29和59.02%,乙酸乙酯,分别。看来活性抗疟化合物主要集中在高剂量。这种寄生虫在第四天还原能力是最高的。这是由于高水平的提取四天由于持续管理和,因此,大部分被吸收到动物的身体系统。这表明原油的化学成分提取弱或不受生物转化,生物降解能力,生理因素,生物利用度的主机。明显,实验动物的存活时间延长而负控制动物。然而,动物的存活时间处理CQ比测试明显的动物。这可能是由于这样的事实:CQ相比是一个纯化合物的粗提取物可能很容易在动物体内代谢。 Elsewhere, Kangethe worked with artemisinin extracts and confirmed that the crude extracts find their way quickly out of the host bodies [ 33]。

次生代谢物药物建立中发挥着至关重要的作用。生物碱、皂甙、黄酮和单宁记录抗菌效力在很多选中的药用植物( 47]。我们的研究发现:黄酮类、单宁固醇类、生物碱、皂苷、糖甙,除了酚类和萜类化合物。植物化学的结果符合的人士等。 48)和阿什克罗夫特et al。 21]。 黑种草已被证明具有抗氧化活性( 21]。蒙蒂et al。 49]解释疟原虫抗氧化活性的相关性。抗氧化活性防止血红素聚合;因此,有毒unpolymerized血红素杀死疟原虫。在不同的研究中,生物碱已被证明具有抗疟活性,阻碍蛋白质合成 疟原虫寄生虫( 50]。此外,皂苷、黄酮和单宁作为自由基食腐动物,对抗疟疾寄生虫引起的氧化损伤( 51]。哈西姆和El-Kiey 52)指出,单宁与蛋白质疏水力量防止微生物酶活性和运输的蛋白质。类黄酮与抑制核酸基地 疟原虫周期( 53]。在不同的研究中,一种天然产品百里香醌,隔绝 n .漂白亚麻纤维卷,已被证明具有抗疟活性由于其抗氧化性质和没有不良反应( 54]。据我们了解,工厂必须发布报道抗疟能力由于单独或结合植物化学的(年代)。

贫血是疟疾的症状之一。贫血水平直接与疟疾的严重程度成正比。人类和小鼠模型在贫血密切联系表达由于生物组成的相似性( 55]。包装细胞体积值成反比贫血由于疟疾( 21]。有增加PCV值在测试提取从53.00±1.58,53.60±2.88 methanolic提取和53.00±1.58,53.60±1.52乙酸乙酯提取。结果表明增加PCV值在测试提取与消极的控制,但相比没有统计学意义与积极的控制。这表明测试提取物能够忍受红细胞的溶血,导致贫血。阿什克罗夫特的研究同意,et al。 21), n .漂白亚麻纤维卷提取证明PCV值增加。有趣的是,Kaur et al。 55]发现皂甙有强烈的溶血效应可能减少了PCV值。我们的测试提取物被证明拥有一种强烈的皂甙在表的存在 8这开辟了一个非常有趣的方面未来的调查结果的差异和考尔et al。 55]。

Coquelin et al。 56)建立,当寄生虫进入红细胞,他们易受药物。这可能是轻微的抵抗的原因发展建立通道5本研究。这项研究的结果同意先前的研究由肖et al。 57),连续政府持续的剂量每通道循环导致耐药性。在16通道,我们能够确定适度的阻力。不过,从药物试验的压力,稳定的耐药表型表现出从显微镜下检测延迟寄生虫间隙blood-phase感染治疗后3天。预计寄生虫死在暴露在一个活跃的药物与发现。有趣的是,年轻的环和老年阶段的寄生虫药物暴露72 h后幸存下来。与这种现象一致,美国Menard et al。 58]表明青蒿素未能明确寄生虫药物暴露的48小时。他们最后分离出一种耐药表型的形式连续32通道后延迟寄生虫间隙。后,我们注意到没有多态变化的位置这两个基因的核苷酸序列: Pb凋亡和 PbCRT。这些结果同意先前的研究使用lumefantrine和耐哌喹运行 p .鼠安卡,显示没有变化的编码序列 PbCRT和 Pb凋亡基因( 59]。同样,Kangethe无法确定一个可辨认的突变的40周期药物的压力 在活的有机体内( 33] 。这两个基因影响药物活动获得突变和拷贝数的变化和表达水平耐药 恶性疟原虫( 60]。然而,阻力机制 恶性疟原虫和 p .鼠可能是多样化的。我们因此理由的遗传变异程度 在活的有机体内并不完全依赖的 体外恶性疟原虫由于不同生物组织。此外,我们建议 p .鼠安卡反应 n的可能是不局限于 Pb凋亡和 PbCRT的基因。因此,独特的方式可能有影响 Pb凋亡和 PbCRT不是建立一个可行的突变基因。

 5。结论

黑种草提取显示显著( P < 0.05 在所有抗疟评估)寄生虫血症减少活动。毒性研究证明植物的安全治疗疟疾。为期4天的寄生虫抑制试验药物普遍存在的压力 Pb凋亡和 Pbcrt基因使方向对未来科学利用植物阻力的确定机制。建议药物压力应该持续更长一段使用纯植物化学的化合物 n .漂白亚麻纤维卷选择高 n .漂白亚麻纤维卷耐药(RSI > 100行)。稳定性研究的抗线也应该执行。重复的不完整的治疗由Nuralitha et al。 61年)也可以采用与连续药物压力推迟耐药性的出现,从而理解不断变化的新趋势 疟原虫基因组。未来的研究还应该实现药物浓度在药物压力的逐步增加。我们终于证明使用 n .漂白亚麻纤维卷植物通常在蒙巴萨民间医药。

 数据可用性

数据支持本研究的结果包括在本文中。

 同意

同意出版被允许由KEMRI审查单位。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 作者的贡献

俄文和詹开发建议和设计研究。俄文,詹和乔进行数据收集,数据分析和解释。乔准备手稿草案。所有作者参与了评论并同意提交的手稿。

 确认

这项工作得到了肯尼亚国家研究基金。作者感谢国家研究基金(肯尼亚)资助这项研究。作者非常感谢蒙巴萨科技大学允许发展的工作。作者欣赏以及政府,特别是生物技术和研究发展中心主任(CBRD)和传统医学和药物研究中心主任(CTMDR)建立空间实验室。最后但并非最不重要,作者价值蒙巴萨当地居民的参与提供信息的传统使用的植物。

 补充材料

补充材料包括 在活的有机体内和分子实验。Giemsa-stained幻灯片的图片来确定寄生虫和药物抑制提供了增长。涂片染色蓝色/粉色被证实感染了疟疾。凝胶的照片提供的两个基因在调查中也显示正确的乐队的基因。

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