JPATH 杂志的病原体 2090 - 3065 2090 - 3057 Hindawi出版公司 685193年 10.1155 / 2013/685193 685193年 研究文章 抗生素耐药性的 沙门氏菌spp。隔绝在巴西东北地区淡水虾养殖环境 卡瓦略 法蒂玛c T。 1 苏萨 Oscarina V。 1 卡瓦略 Edirsana m R。 1 而 埃内斯托 2 维埃拉 雷吉娜·h·s·F。 1 约翰逊 蒂莫西·J。 1 Laboratorio de Microbiologia环境e Pescado 皇家研究院Ciencias做3月(LABOMAR) 大学联邦做西阿拉 加拉卡斯Abolicao 3207, CEP 60165 - 081年,福塔雷萨 CE 巴西 ufc.br 2 Laboratorio de人畜共患病Bacterianas 皇家研究院Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) -Pavilhao罗查利马加拉卡斯巴西4365年,CEP 21040 - 360 Manguinhos-Rio, RJ 巴西 2013年 22 12 2013年 2013年 06 09年 2013年 24 10 2013年 2013年 版权©2013法蒂玛·c·t·卡瓦略等。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

本研究调查的存在和抗生素耐药性 沙门氏菌在虾养殖环境中种虫害在巴西东北地区。从两个农场饲养的水和沉积物的样本freshwater-acclimated 方面对虾检查的存在吗 沙门氏菌。后来, 沙门氏菌分离血清型,抗菌素耐药性是由磁盘扩散法,和抗性的质粒固化进行了隔离。共30例(16.12%)确诊的186隔离 沙门氏菌spp,属于五型: 年代。型Saintpaul, 年代。型对象的, 年代。巴拿马型, 年代。型Madelia, 年代。型Braenderup,连同2亚种: 美国血清型houtenae和 美国血清型血清。大约百分之二十三的隔离是对至少一种抗生素,和百分之二十的人至少两种抗生素产生抗药性。三个菌株分离水样(池塘和入口管)展出multiresistance氨苄青霉素、四环素、土霉素、呋喃妥英。其中一个有一个质粒抗呋喃妥英基因和氨苄青霉素。人类细菌致病性的发病率在虾养殖环境中,以及他们的耐药性模式显示在这项研究中,强调需要更严格的关注这一领域。

 1。介绍

虾在国际市场上日益增长的需求促进了内陆虾农业在过去的几十年。海洋虾位于远离海洋文化是一种新的和水产养殖的快速发展的行业 1]。然而,在海水和淡水虾养殖越来越容易受到细菌感染导致的病原体传播在水产养殖 2]。因此,许多农民已经不当使用抗生素来预防或治疗感染,导致antimicrobial-resistant菌株的传播在水生环境中( 3]。antimicrobial-resistant株发病率的增加也包含抗性基因与质粒的存在,为微生物种群提供更大的遗传的灵活性,允许他们在敌对的环境中适应和生存 4]。虾饲料的添加抗生素预防,治疗感染,或增长刺激导致耐药和致病菌株的延续 5]。

虾农场工人不仅经常暴露于抗生素的混合饲料,但他们也容易受到抗多种抗菌素的入侵细菌的污染,如 沙门氏菌患者。 沙门氏菌应使用抗生素治疗感染,有效对抗这些细菌( 6, 7]。

本研究的目的是调查的存在 沙门氏菌菌株在虾农场环境样品,确定分离株之间的抗菌素耐药性资料从池塘和进口运河虾场的巴西东北地区。

 2。材料和方法 2.1。抽样

样品在两个农场饲养freshwater-acclimated (A和B) 方面对虾位于河口Jaguaribe河(Jaguaruana城市,塞阿拉州,巴西)。总共几百和20个样本收集从虾农场在两个时期:从6月到2007年12月和2008年6月至9月。样品的数量是一样的在这两个时期,由水(30)和沉积物(30),从池塘和进口运河。

抽样覆盖完整的作物周期。水(2 L)收集在无菌琥珀瓶和过滤 在代替通过以下的层(5)无菌纱布。纱布当时沉浸在225毫升乳糖肉汤和孵化24小时35°C。

沉积物样品由四个次级样本从随机位置在池塘或入口管汇集成一个均匀的样品。25 g整除接种在225毫升乳糖肉汤和孵化24小时35°C。

 2.2。微生物分析

样本处理的存在 沙门氏菌通过使用3步技术被华莱士和Hammack [ 8]:浓缩Rappaport-Vassiliadis肉汤和连四硫酸盐汤;镀到选择性的媒体;Hektoen肠琼脂;和MacConkey琼脂(所有Difco)。可疑的 沙门氏菌殖民地从电镀中选择媒体和转移到trypticase大豆琼脂(TSA),三糖铁(TSI)琼脂,硫化赖氨酸铁琼脂(LIA)和吲哚运动性(SIM)琼脂(所有Difco)。隔离的典型反应是生物型鉴定 沙门氏菌根据勒小种和亚种和Popoff 9),血清型(使用O血清型和型)和H抗血清凝集试验,RJ、巴西Oswaldo Cruz研究所( 9]。

 2.3。抗菌药物敏感性试验

抗菌药物敏感性是由磁盘扩散法( 10)使用商用antibiotic-containing磁盘(LABORCLIN、巴西):氨苄西林(AMP;10 μg),四环素(春节;30 μg)、庆大霉素(创;10 μg)、氯霉素(曹;30 μg), florfenicol (FLF;30 μg)、环丙沙星(CIP;5 μg)、呋喃妥英(没用的人;300年 μg)和萘啶酸(NAL;30 μg),氧四环素磁盘(场外交易;30 μg)准备使用空白磁盘(6毫米,LABORCLIN)与抗生素溶液浸渍( 11]。这些抗生素检测根据他们的使用在医学、兽医和农业在巴西为疾病的预防和治疗。在控制测试中,使用以下参考菌株: 沙门氏菌爵士。Choleraesuis ATCC10708, 大肠杆菌ATCC25922, 铜绿假单胞菌ATCC27853, 金黄色葡萄球菌ATCC25293。

断点考虑florfenicol和氧四环素,两个虾养殖中常用抗生素预防和治疗传染病疫情,对氯霉素和四环素是相同的磁盘,分别按照CLSI [ 11]。

 2.4。质粒固化

菌株耐一个以上的抗生素被提交到质粒固化所述Molina-Aja et al。 12),使用Luria-Bertani肉汤(Difco)补充氯化钠和100年的0.85% μ吖啶橙染料的g / mL。敏感性测试后对抗生素的过程。

 2.5。抑制和杀菌浓度的测定

最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)测定菌株对抗菌测试磁盘扩散(Kirby-Bauer)根据肉汤稀释(macrodilution)技术使用Mueller-Hinton肉汤,Difco CLSI [ 11]。

 3所示。结果

沙门氏菌种虫害占30(16.12%)的186个疑似菌株。五型确定: 年代。爵士。Saintpaul ( n = 2 ), 年代。爵士。对象( n = 6 ), 年代。爵士。巴拿马( n = 3 ), 年代。爵士。Madelia ( n = 6 ), 年代。爵士。Braenderup ( n = 5 ),还有两个 美国血清亚种:houtenae ( n = 6 )和血清( n = 2 )。大多数 沙门氏菌压力来自农场B ( n = 24 / 80年 % )(表 1)。

抗菌素耐药性的亚种和型的 沙门氏菌血清隔绝水和沉积物样本池塘和两个freshwater-acclimated的入口管(Jaguaribe河) 方面对虾文化农场(A和B)、西阿拉、巴西。

起源 源 样本 隔离 Subspecies-Serovars 电阻剖面
一个农场 池塘 水 Sw1 年代。爵士。Saintpaul - - - - - -
沉积物 - - - - - - - - - - - - - - - - - -
入口管 水 Sw2 年代。爵士。Saintpaul - - - - - -
Sw3 年代。爵士。Madelia 场外,春节
Sw4 美国血清无性系种群。houtenae - - - - - -
Sw5 美国血清无性系种群。houtenae - - - - - -
送回 美国血清无性系种群。houtenae - - - - - -
沉积物 - - - - - - - - - - - - - - - - - -
农场B 池塘 水 Sw7 年代。爵士。对象的 - - - - - -
Sw8 年代。爵士。巴拿马 - - - - - -
Sw9 年代。爵士。对象的 - - - - - -
沉积物 - - - - - - - - - - - -
入口管 水 Sw10 年代。爵士。巴拿马 AMP
Sw11 年代。爵士。巴拿马 - - - - - -
Sw11a * 年代。爵士。巴拿马 春节,场外
Sw12 年代。爵士。Madelia - - - - - -
Sw13 年代。爵士。Madelia - - - - - -
Sw14 年代。爵士。Madelia - - - - - -
Sw15 年代。爵士。Madelia AMP,幼虫,场外,春节
沉积物 Ss16 年代。爵士。Braenderup AMP,幼虫,场外,春节
Ss17 年代。爵士。Braenderup AMP,幼虫,场外,春节
Ss18 年代。爵士。Braenderup - - - - - -
Ss19 年代。爵士。Braenderup - - - - - -
Ss20 年代。爵士。Braenderup - - - - - -
Ss21 美国血清无性系种群。血清 - - - - - -
Ss22 美国血清无性系种群。血清 - - - - - -
Ss23 年代。爵士。对象的 - - - - - -
Ss24 年代。爵士。对象的 - - - - - -
Ss25 年代。爵士。对象的 - - - - - -
Ss26 美国血清无性系种群。houtenae - - - - - -
Ss27 美国血清无性系种群。houtenae - - - - - -
Ss28 年代。爵士。对象的 - - - - - -
Ss29 年代。爵士。Madelia - - - - - -
Ss30 年代。爵士。Madelia - - - - - -

西南:水样 沙门氏菌;Ss: sediment-sample 沙门氏菌;Sw11a *:分组人口。

六个 沙门氏菌压力是对一个或多个以下抗生素:AMP,场外,春节,没用的人。在隔离中,三个multidrug-resistent菌株(Sw15、Ss16 Ss17)显示阻力三个抗生素类(青霉素、四环素和硝基呋喃)。的应变 沙门氏菌爵士。巴拿马(Sw11)容易受到所有抗生素的抗菌谱测试。隔离殖民地(分组人口、应变Sw11a)增长的抑菌圈内四环素磁盘(春节和OTC)(表 1)。

质粒固化的结果显示,大部分的抗生素耐药 沙门氏菌孵化后表达耐药表型与诱变剂(吖啶橙),表明这个概要文件可能是由染色体编码基因。只有一个治愈的 沙门氏菌(Ss17)失去了抵抗AMP和缺陷,表明这些基因与质粒有关。

麦克风对四环素(春节和场外)32岁之间不等 μg和64 μg菌株分离从河水农场从入口管(Sw3)和水(Sw10、Sw11和Sw15)和B (Ss16和Ss17)沉积物在农场。对四环素、MBC 64之间不等 μg和1024 μg (Sw10和Sw11a *)。麦克风和MBC AMP和没用的人超过640 μ克/毫升(表 2)。

最低抑制浓度(MIC)和杀菌(MBC)测试的抗生素耐药 沙门氏菌种虫害菌株分离水和沉积物样品的池塘和入口管在两freshwater-acclimated (Jaguaribe河) 方面对虾文化农场(A和B)、西阿拉、巴西。

位置 样本 隔离 浓度( μ g)
四环素 青霉素 硝基呋喃
春节 场外 AMP 没用的人
麦克风 MBC 麦克风 MBC 麦克风 MBC 麦克风 MBC
一个农场 入口管 Sw3 64年 256年 64年 128年 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
农场B 入口管 Sw10 64年 64年 64年 64年 640年 > 640 - - - - - - - - - - - -
Sw11a * 64年 256年 128年 1024年 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Sw15 128年 256年 64年 512年 > 640 > 640 6400年 > 12800
Ss16 64年 256年 64年 512年 > 640 > 640 6400年 > 12800
Ss17 64年 256年 64年 512年 > 640 > 640 12800年 > 12800

西南:水样 沙门氏菌;Ss: sediment-sample 沙门氏菌;-:测试不进行这种抗生素。

* 程序。

4所示。讨论

的存在 沙门氏菌种虫害在沿海和内陆虾文化环境在巴西东北地区已经被几位作者记录 13- - - - - - 15]。这些细菌的存在主要是相关的排放未经处理的废水直接排入当地水体以及水资源的重用,如有机肥料灌溉和水产养殖 16]。

在研究虾文化环境和畜牧业在印度,Bhaskar et al。 1)发现 沙门氏菌在所有样本,但浓度差与细菌的排泄物污染指标。这可能表明, 沙门氏菌属于原地微生物群。根据赖利et al。 17],池塘与未经处理的粪便施肥的主要来源 沙门氏菌虾农场沉积物中的污染。然而,这种做法是不采用巴西虾农民;事实上,根据布里托等。 18),在巴西东北地区池塘受精主要是尿素和过磷酸钙三倍,和更少的经常与硝酸盐、磷酸盐和硫酸盐。的存在 沙门氏菌在巴西水产养殖因此归因于污水排放的存在和/或周边地区放牧动物农场。

沙门氏菌病,主要关注全球公共卫生的特点是高水平的风土性和发病率,和它是特别困难的,控制由于各种流行病学相关参数的多个来源的感染和疾病的传播在整个周期的路线( 19]。在巴西,十五食物沙门氏菌病暴发是正式注册在2000年和2008年之间相关的各种各样的食物来源( 20.]。

这项研究的结果已经公布两个公共卫生问题:(1)耐药的存在 沙门氏菌菌株在巴西东北部虾文化和(2)的可能性 沙门氏菌通过食用受污染的虾感染人类,随着经济损失由于减少对国际市场的出口与高标准的控制病原体的生产和处理系统。

耐抗生素菌株的隔离可能建议使用药物在水生环境。连续和不当使用的抗生素可能会增加耐药菌株的发病率和弹性,从而影响人类的食品安全和创造人类沙门氏菌病治疗的一大难题。在许多国家,畜牧业的不负责任的使用抗生素是细菌耐药性增加的主要原因( 21- - - - - - 23]。事实上,卡贝略港( 24]讨论了选择压力的作用的抗生素药物残留在水产养殖池塘沉积物微生物组成。

绑定的抗生素沉积物颗粒延迟其生物降解和解释环境中的长期永久的药物。药物NIT集团自2003年以来被禁止从兽医实践和食品生产(农业部、规范。09年)[ 25虾,NIT-resistant细菌仍是孤立的农场沉积物。可以验证耐高浓度的抗生素(NIT和AMP) 沙门氏菌在农场种虫害孤立从水和沉积物样品(表B 2)。

应该注意的是,OTC-resistant 沙门氏菌在这项研究中也观察到。事实上,这种抗生素广泛使用虾农民在该地区细菌性疾病的治疗在虾文化( 26]。由于低吸收,推荐剂量的5 - 10倍的平均剂量用于医疗保健。因此,大多数场外管理在水产养殖池塘沉淀物中不可避免地积累 27]。四环素和土霉素对金属离子结合位点,尤其是镁和钙( 28]。当服用四环素在盐水,ion-binding可以减少生物活性( 29日]。的虾场采样研究坐落在淡水环境中,但入口水(从Jaguaribe河)是比较困难的,表明相对丰富的钙和镁离子( 30.]。换句话说,使用的淡水虾养殖场的硬度在这项研究可能会干扰四环素的作用。

最后,在目前的研究结果显示的存在 沙门氏菌在培养freshwater-acclimated菌株耐抗菌素 l .对虾农场。人类细菌致病性的发病率在虾养殖环境中,以及他们的耐药性模式显示在这项研究中,强调需要更严格的关注这一领域。

 利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 确认

作者要感谢卫生部(SUS)财政支持。作者从FUNCAP也得到了支持,CNPq, LABOMAR /终极格斗冠军赛。

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