胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。由于其阴险的发病和当前缺乏有效的早期诊断的分子标记,病人常常发现先进,导致5年生存率小于25%。局部和远处转移的胃癌的主要原因是胃癌患者生存率较低。胃癌侵袭转移是一个复杂的过程,涉及多个因素,如肿瘤生物学行为,转移器官的转移途径和特点。和个体遗传因素起着重要的作用。单核苷酸多态性(SNP)是指多态性引起的DNA序列在基因组单核苷酸的变化,这是最常见的人类遗传变异占超过90%的所有已知的多态性( 1]。单核苷酸多态性(SNPs)可以调节基因的功能和表达和遗传研究已经成为一个有效的工具和手段。 TNFRSF11(肿瘤坏死因子(配体)总科member11),也称为OPGL (osteoprotegerin配体)和RANKL (NF -κB配体的受体激活剂),是一种II型跨膜蛋白表达表面的骨髓基质细胞,成骨细胞,T淋巴细胞等。 2- - - - - - 4]。 TNFRSF11表达在不同的人体器官,如肝脏、骨骼、肌肉、肠道、肾上腺等组织( 5]。 TNFRSF11(排名)最初识别和演示了扮演一个角色在骨溶解和淋巴结发展主要通过功能等级/ RANKL /通路( 6]。

最近,排名/ RANKL /功能系统已经观察到发挥关键作用在肿瘤细胞迁移和入侵 7- - - - - - 9]。研究表明, TNFRSF11(排名)表达在多种肿瘤组织,如骨肉瘤( 10, 11),软骨肉瘤( 12],乳腺癌[ 13),前列腺癌( 14, 15],肾癌[ 16)、口腔鳞状细胞癌( 17),肺癌 18),甲状腺癌( 19),和黑素瘤 20.]。然而,的表达 TNFRSF11在胃癌细胞很少报道,也没有报告之间的关系 TNFRSF11基因多态性与胃癌。因此,本研究采用病例对照方法比较的基因型和等位基因 TNFRSF11基因 rs9533156和 rs2277438在胃癌患者和健康对照组,分析之间的关系 TNFRSF11基因多态性与胃癌易感性。同时,结合患者的临床参数,如性别、年龄、吸烟史、饮酒史,我们可以综合分析它们之间的相关性从而提供一个理论依据胃癌的早期筛查和早期治疗。

共有577名患者(病例组)与胃癌承认镇江市第一人民医院从2013年5月到2017年6月被包括在内。病例组的平均年龄为61.34±11.097年,其中包括394名男性和183名女性,他们是中国人,汉族。所有病例的临床和病理确诊为胃癌,和所有例原发性胃癌,排除次要或复发性肿瘤和其他恶性肿瘤。所有的患者接受放疗或化疗。共有678名健康体育考生从镇江市第一人民医院的体检中心被选为对照组。对照组的人的平均年龄为62.31±7.549岁,其中包括456名男性和222名女性。对照组的人没有以前遗传史的肿瘤。对照组与病例组的性别和年龄(没有统计上的显著差异 t两组之间以及年龄和性别的分布( P > 0.05 ),两组之间没有血缘关系。

我们跟着丁等的方法。 21]。相关疾病历史信息收集的所有研究对象的研究人员以前都统一培训。此外,复式和逻辑校对被用来确保输入信息的准确性。提供的实验设备是镇江市第一人民医院中心实验室,和主要试剂的采购Furui生物工程有限公司,有限公司,上海。整个实验过程指导,由专业和授权实验室技术运营商减少任何可能的错误可能发生在整个过程中,提高结果的准确性。2毫升周围静脉的血从两组研究对象收集后由专业护士严格消毒的原则。然后,周边与EDTA抗凝血样处理和储存在−20°C,供以后使用。等离子体的离心机后,根据提供的指令提取基因组DNA。在被应用于进一步的实验,提取基因组DNA的纯度需要确定。任何不符合的样品比需求被丢弃。 The genomic DNA was extracted again until the ratios of OD280/OD230 and OD260/OD280 reached the normal ratio requirements for the experiment. Therefore, it can be ensured that the extracted DNA samples all met the experimental requirements. Primer Premier 5 software was applied in combination with the NCBI database to design upper and lower primers and snapshot extension primers of TNFRSF11基因 rs9533156和 rs2277438,分别。的引物合成技术的帮助Furui生物工程有限公司,有限公司,上海。 TNFRSF11-rs9533156F: 5′- AACTGTATCATCAGCTTCGTGT3′。G + C含量为40.91%,与Tm值为57.81°C。 TNFRSF11- - - - - - rs9533156R: 5′- TGAAGGTGACATTGAGCGAGG3′。G + C含量为52.38%,与Tm值为60.34°C。190个基点的长度的产品是通过PCR扩增。T NFRSF11- - - - - - rs2277438F: 5′- CCTGTGGATGATAGTCAGTTACTCG3′。G + C含量是48.00%,和Tm值是60.51%。 TNFRSF11-rs2277438R: 5′- AGGAGGAGAAACAGTAAGGACG3′。G + C含量为50.00%,与Tm值是59.17%。产品的长度是201个基点的PCR扩增。PCR扩增对扩展产品被ExoI纯化和FastAP反应,执行和基因分型后ABI3730XL测序仪。Allele-specific底漆与ddNTP扩展了用荧光染料标记使用快照方法检测基因多态性。快照方法主要包括三个基本步骤:扩增,引物延伸,和分析。基因型或GeneMapper软件专为观察到的颜色和峰值片段长度范围可用于自动化等位基因分析。质量控制,5%的样本随机选择进行复查,以确保测试结果的准确性。

分析的数据使用SPSS 20.0软件(SPSS Inc .,芝加哥,伊利诺斯州,美国)。基因型的频率分布在对照组和病例组测试使用哈迪温伯格遗传平衡试验。卡方检验是用来比较基因型和等位基因频率分布之间的相关性和NSCL / P和计算 X²价值和 P 价值。二元逻辑回归分析用于计算比值比(或)及其95%可信区间(CI)分析相对风险引起的疾病的基因或等位基因多态的网站。统计测试都是双面的概率测试; P < 0.05 被认为是具有统计学意义。

结果在表 1显示的基本信息 TNFRSF11基因 rs9533156和 rs2277438多态性:对照组的基因型频率分布哈迪温伯格平衡( P 值HWE,所有 P > 0.05 、表 1)。

结果在表 2展示研究对象的特点,包括人口和环境危险因素。抽烟率要高得多的病例组与对照组(分别为34.49%和27.29%, P = 0.006 )。人口统计数据(年龄和性别)配合的非常好( P = 0.635 和 P = 0.698 分别)。表明吸烟与胃癌的发生和发展。饮酒率较低的情况下组与对照组相比,但两组之间没有统计上的显著差异(分别为21.49%和23.30%, P = 0.443 )。

结果在表 3显示的频率分布和逻辑回归分析 rs2277438多态性的 TNFSF11基因在胃癌和对照组显示,野生型AA作为引用类型,以及AG)的频率分布杂合的突变类型 rs2269700是在对照组高于组(43.76% > 41.19%)。然而,尽管两组之间的差异没有统计学意义( P = 0.310 ),调整后逻辑回归分析基于性别、年龄、吸烟、饮酒,仍然没有统计学差异,但接近比回归前的结果的差异( P = 0.263 )。GG纯合突变体的频率分布也不是统计学意义( P = 0.919 ),逻辑回归调整后没有统计学差异( P = 0.427 )。在占主导地位的模型中,AG) + GG突变的频率分布无统计学意义的病例对照集团( P = 0.947 ),回归调整后的差异没有统计学意义( P = 0.228 )。在隐性的模型中,频率分布没有统计上的不同( P = 0.822 )。根据性别、年龄、吸烟和饮酒,逻辑回归分析后,仍有两组之间无统计学差异( P = 0.681 )。

结果在表 4显示频率分布和逻辑回归分析的结果 TNFRSF11基因 rs9533156在胃癌和对照组显示,两组之间的差异与野生型TT为引用类型是统计学意义( P = 0.044 ),逻辑回归分析后的数据具有统计上的显著差异调整根据性别、年龄、吸烟和饮酒( P = 0.039 )。没有统计上的显著差异在CC纯合突变的频率分布( P = 0.318 ),并没有统计上的显著差异在逻辑回归分析( P = 0.294 )。在主要的分布模型\隐性模型,没有统计学差异( P = 0.062 ;0.056)。根据逻辑回归分析,仍然没有统计学差异( P = 0.918 ;0.909)。

结果在表 5表明,相比之下,一个等位基因的频率分布在rs2277438 G等位基因是在组低于对照组(29.84% < 31.50%),但差异无统计学意义( P = 0.372 )。同时,C等位基因的频率分布rs9533156病例对照组没有统计学意义( P = 0.264 )。

结果在表 6表明,根据分层结果的多态性 TNFRSF11基因rs2277438表明,与野生型AA基因型的引用,没有统计学意义的分布杂合的AG)和纯合子TT。主要模型和隐性模型,基因分布的差异没有统计学意义。,未发现显著差异在野生型TC,纯合子TT,占主导地位的模型,和隐性模型分层分析后,根据性别、年龄、吸烟和饮酒的因素。

表 7总结的结果之间的关系 TNFRSF11rs9533156基因多态性和GC风险分层分析。老年人(≥62岁)组,TC的杂合突变的频率分布是统计学上不同的两组之间( P = 0.002 ),胃癌的风险TC组高于TT型的1.83倍。TC突变突变可能是胃癌的危险因素。c-dominated优势模型,TC + CC的频率分布是统计学上不同的两组之间( P = 0.004 ),患胃癌的风险在TC + CC组高于TT组的1.70倍。c-dominated TC + CC组可能是一个风险因素。不抽烟的人组TC的杂合突变的频率分布是统计学上不同的两组之间( P = 0.017 ),胃癌的风险TC组高于TT型的1.49倍。c-dominated优势模型,TC + CC的频率分布是统计学上不同的两组之间( P = 0.016 ),患胃癌的风险在TC + CC组高于TT组的1.46倍。群的发病率,TC的杂合突变的频率分布是统计学上不同的两组之间( P = 0.043 ),胃癌的风险TC组高于TT型的1.37倍。c-dominated优势模型,TC + CC的频率分布是统计学上不同的两组之间( P = 0.037 ),患胃癌的风险在TC + CC组高于TT组的1.36倍。

结果在表 8表明, TNFSF11基因 rs9533156网站变异和胃癌的临床因素分析结果表明,与肿瘤大小< 2 cm组,患者肿瘤大小≥2厘米和携带 rs9533156网站的突变有更高的频率分布,差异具有统计学意义( P = 0.022 )。这表明, rs9533156突变可能与胃癌的大小。的频率分布与nonhyperglycemic组相比,高血糖(糖尿病组)患者也携带 rs9533156突变是更高,差异具有统计学意义( P < 0.001 )。这表明高血糖 rs9533156网站突变有关胃癌的危险因素。没有显著的相关性 rs9533156和位置、分化和病理类型的胃癌。然而,没有统计之间的联系 rs2277438位点变异和胃癌的临床因素。

胃癌是一种多因素疾病,包括饮食、遗传因素、环境因素、免疫因素、感染和炎症。SNP能调节基因功能和/或表达,和SNP-association研究可能为胃癌的发病机制提供重要的见解。目前,研究 TNFRSF11基因主要关注排名的效果和机制功能/ RANKL /骨骨质疏松和骨折愈合监管途径,而很少有研究TNFRSF11基因的多态性。Castilhos et al。 22)发现,上门牙的根长和上颌快速扩张,以及等位基因的功能基因和EARR rs3102724多态性,与EARR有关巴西的白人。Mrozikiewicz-Rakowska et al。 23)发现下面的变体 TNFRSF11 B(rs2073617 rs2073618 rs1872426、rs1032128 rs7464496, rs11573829,和rs1485286), COLEC10 (rs6993813和rs3134069),和 TNFSF11(rs9533156)存在等位基因频率的差异与性别、糖尿病足患者并显示相关型糖尿病,糖尿病足的病因。Casas-Avila et al。 24)发现,携带的GG基因型rs12585014需要在月经初潮后的风险更高(> 13年),其中可能涉及骨折的风险更大。rs3018362和rs12585014似乎并没有与髋部骨质疏松髋部骨折或墨西哥女性。天使等。 25]还发现协会- 643 c > T多态性与骨密度变异并在突尼斯妇女绝经后骨质疏松症的风险。瓶,Senousy [ 26)发现有RANKL-rs9533156和OPG-rs2073618之间的相互作用。功能更强的综合效应的单核苷酸多态性在RANKL和基因通过基因基因相互作用可能有助于预测乳腺癌的风险和预后。卢卡斯·科索等。 27)发现的功能可能是标记的多态性rs2073618与颞下颌关节关节僵硬的表现的风险。我们的团队( 28]还发现功能性SNP RNK rs 1805034 T > C的可能是一个指标对食管鳞状细胞癌(ESCC)。然而,之间的关系 TNFRSF11基因多态性与胃癌易感性尚未报道。

在这项研究中,我们选择577胃癌患者和678名健康志愿者探索之间的关系 TNFRSF11基因rs9533156 rs2277438位点和胃癌易感性在中国汉族人群。本研究发现,吸烟与胃癌的发生和发展,是胃癌的一个独立危险因素。然而,没有显著差异的分布两组之间的酒精消费。在这个医院GC的病例对照研究中,我们调查了协会 TNFRSF11基因rs9533156 rs2277438多态性与GC的风险。我们发现 TNFRSF11rs9533156 TC基因SNP是GC的风险大大增加。值得注意的是,老年人(> 62岁)携带的rs9533156 TC基因型 TNFSF11患者基因,不吸烟,不喝酒后的风险增加GC分层分析。

在进一步研究之间的关系 TNFSF11基因位点和胃癌的临床参数,我们发现rs9533156突变可能与胃癌的肿瘤大小。与组与肿瘤大小< 2厘米,患者肿瘤大小≥2厘米携带rs9533156突变同时有更高的频率分布,和数据具有统计上的显著差异。这也证实了我们之前的研究结论rs9533156 TC基因型可能是胃癌的危险因素。与nonhyperglycemia组相比,频率分布的高血糖(糖尿病组)患者携带rs9533156突变同时更高,数据具有统计上的显著差异。之间没有显著相关性rs9533156突变和肿瘤位置,和分化程度和病理类型。之间没有显著相关性rs2277438和胃癌的临床因素。

据我们所知,本研究是第一个显示显著的相关性 TNFRSF11rs9533156 TC基因型与胃癌易感性。虽然协会似乎具有统计学意义,研究结果需要被复制大型独立样本进一步证实的作用 TNFRSF11胃癌遗传易感性。几本研究需要解决的局限性。首先,病人和控制是从医院招募和可能,因此,不是普通人群的代表。第二,单核苷酸多态性研究可能无法提供全面的照片 TNFRSF11遗传变异性。第三, 幽门螺杆菌通常被认为是消化性溃疡的主要原因的疾病和胃腺癌。然而,由于病人临床信息不足,我们没有调查 幽门螺杆菌感染。因此,我们的分析受到限制。

然而,我们的研究发现,rs9533156的突变率 TNFSF11基因糖尿病胃癌患者较高,表明糖尿病可能与胃癌有关,和糖尿病患者胃癌的风险更高。以前的研究也发现,糖尿病患者有增加癌症的风险 29日]。然而,没有许多报告糖尿病和胃癌的关系。2型糖尿病是否会增加胃癌的风险仍然是有争议的。苗族et al。 30.]报道8559861参与者的数据的荟萃分析22群组研究,发现糖尿病是一个激励男性增加患胃癌的风险。然而,其他研究已经报道相互矛盾的结果,女性患癌症的风险。井上et al。 31日)在2011年进行了一组分析荟萃分析发现,与男性糖尿病患者相比,患有糖尿病的妇女有18%增加胃癌的风险。

2012年,美国和欧洲的学者认为2型糖尿病对胃癌有显著积极影响( 32, 33]。然而,汗等人先前认为2型糖尿病可以有效降低胃癌的发病率 34]。同时,在2015年的一项研究由徐et al .,之间没有显著相关性胃癌症和糖尿病的风险在男性和女性( 35]。增加胰岛素水平和胰岛素样生长因子1受体在糖尿病患者可以促进细胞分裂、抑制细胞凋亡,促进增殖和分化 36]。高血糖可以诱导细胞损伤,糖基化的物质能促进氧自由基的产生和DNA损伤( 37]。此外,葡萄糖可以作为能源促进胃癌的发展,特别是对快速增长的类型和高度恶性肿瘤。此外,糖尿病患者的免疫功能降低,内部环境是无序的,和慢性炎症和磺酰脲类等药物的使用,二甲双胍,胰岛素也会增加胃癌的风险。当然,导致这种相关性的机制尚不清楚,可能与多个通道。

总之,我们的研究表明,基因型变异的 TNFSF11rs9533156 TC基因可能与GC有关风险。确认我们的发现,组织生物学和大量复制的研究是必要的。