乔 肿瘤学杂志 1687 - 8469 1687 - 8450 Hindawi出版公司 950140年 10.1155 / 2011/950140 950140年 研究文章 CCND2甲基化可能反映了吸烟引起的肺癌癌前变化 Salskov 亚历山大 1 霍斯 斯蒂芬·E。 2 斯特恩 约书亚E。 3 冯 清华 3 约旦 c .戴安娜 3 恩斯 琳达 1 Rasey 珍妮特 4 陆 协福 3 Kiviat 南希·B。 3 Vesselle 休伯特 1 Keshamouni Venkateshwar 1 核医学分工 美国放射学 357115箱 医学院的 华盛顿大学 西雅图,华盛顿州98195 - 7115 美国 washington.edu 2 部门的流行病学 公共卫生学院的 华盛顿大学 西雅图,华盛顿州98195 - 7230 美国 washington.edu 3 病理学系 医学院的 华盛顿大学 西雅图,华盛顿州98195 - 6100 美国 washington.edu 4 放射肿瘤学部门 医学院的 华盛顿大学 西雅图,华盛顿州98195 - 9441 美国 washington.edu 2011年 22 02 2011年 2011年 12 11 2010年 12 01 2011年 26 01 2011年 2011年 版权©2011年亚历山大Salskov et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

仍是未知是否烟草烟雾诱发DNA甲基化是一个早期事件后期致癌或事件,特定于公开的癌组织。使用MethyLight化验,我们分析了316个肺组织样本151例癌症(121 ever-smokers和30不吸烟者)19个基因的甲基化之前观察到在nonsmall hypermethylated细胞肺癌。只有APC (39%)、CCND2(21%)、背景(7%),和RARB (4%) hypermethylated > 2%的这些癌症的主题。CCND2在ever-smokers hypermethylated更频繁(26%)比不吸烟者(3%)。CCND2甲基化也伴随着年龄的增加和上部叶样品位置。APC是经常hypermethylated ever-smokers(41%)和不吸烟者(30%)。snps和CDH13,男朋友,CDKN2A (p16) CDKN2B, DAPK1, IGFBP3, IGSF4, KCNH5, KCNH8,管理,OPCML, PCSK6, RASSF1, RUNX, TMS1很少hypermethylated各科(< 2%)。CCND2甲基化可能反映了吸烟引起的肺癌癌前变化。

 1。介绍

肺癌在美国每年造成更多死亡比乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌合并,估计约157300人死亡(2010年 1]。的最重要的危险因素是吸烟患肺癌和导致这些死亡的80 - 90% 2, 3]。

过去4到5年,已取得显著进展,阐明吸烟的致癌机制。使用动物模型,它已被证明,在60岁以上建立的致癌物质在香烟烟雾,20可以导致肺癌 4]。已经提出,这些致癌物质,当代谢,形成dna加合物可能直接导致基因改变如果不修理。当这些基因改变影响肿瘤抑制基因或肿瘤癌基因,他们可以促进细胞增殖和恶性转化 5]。研究肺癌患者清楚地表明,吸烟可以导致p53基因突变的收购和ras致癌基因( 6, 7]。此外,吸烟导致免疫抑制,提出了为肿瘤恶化(提供一个环境 8, 9]。

最近,DNA甲基化被认为是一种替代方法,表观遗传机制在肺癌基因沉默,除了基因突变。几个环境因素被认为引起异常的DNA甲基化,包括饮食因素、化疗药物和重金属 10]。烟草烟雾暴露与表达增加有关DNA甲基转移酶( 11- - - - - - 14]。符合这一观察,肺癌引起的重度吸烟者显示增加各种基因的甲基化,特别是CDKN2A p16和RASSF1,而较轻的吸烟者和非吸烟者( 15- - - - - - 27]。

然而,这些结果并不显示DNA甲基化是否发生早期或晚期的致癌作用。早期的致癌作用的变化(特别是有关吸烟)假设有点广泛发生在肺部,可能因此被检测到在良性肺组织,以及在任何出现的癌症 28- - - - - - 30.]。RASSF1,例如,频繁的甲基化CDKN2A CDH13,和其他的基因已经在癌症的痰样本观察吸烟者,这表明他们可能hypermethylated早期( 31日- - - - - - 34]。相比之下,后期更改在致癌作用被认为主要出现在公开的恶性组织。

我们最近分析了匹配癌与非癌性肺组织nonsmall细胞性肺癌(NSCLC)患者。我们观察到,在27个基因测试,大多数DNA甲基化是肿瘤特异性变化,因此在致癌作用可能是后期更改 35]。然而,在这些非小细胞肺癌患者,少量的基因,包括CCND2 APC,背景和RARB(表 1),也在部分hypermethylated良性肺组织,这表明一个或多个这些基因可能成为hypermethylated早期癌前变化。我们假设早期的DNA甲基化的变化,如果存在,可能与暴露于香烟烟雾中。此外,由于吸烟有关肺肿瘤和肺气肿已知不成比例地影响肺的上部叶( 36, 37),我们假设甲基化变化有关吸烟同样会更频繁的在上部叶,叶较低。

基因hypermethylated > 2%的非癌性肺组织。

雨果缩写 基因名字 函数
APC 腺瘤息肉病杆菌 细胞周期:抑制WNT信号途径,参与主轴装配和染色体分离,细胞粘附和细胞迁移 38]。
CCND2 细胞周期蛋白D2 细胞周期:调节到和CDK6进入s阶段( 39]
背景 钙粘蛋白1;钙粘蛋白(上皮) 细胞粘附,epithelial-mesenchymal过渡 40]
RARB 视黄酸受体β 调节细胞增殖和分化 41]
2。材料和方法 2.1。主题注册

所有程序进行了按照制度审查委员会和人体试验委员会批准。回顾性入学科目谁经历了肺手术(肺减容、肺移植,楔形活检,或叶切除术)良性的疾病包括肺气肿、慢性支气管炎、支气管扩张、肉芽肿性疾病,各种传染病,和囊性或肺纤维化,华盛顿大学医学中心(UWMC) 1995年7月1日至2005年7月1日。综述了所有标本的病理学家(CDJ)专家证实,他们代表非癌变的肺部组织。从受试者的临床数据聚集UWMC医疗记录,包括吸烟史和主肺的诊断。受试者排除下列原因:之前的诊断肺癌,肺组织进行甲基化分析不足,或未知的包年的吸烟。总共有372良性的肺组织样本159受试者识别DNA甲基化分析。

 2.2。DNA隔绝石蜡块

从每个块,六20 - μ部分是由二甲苯萃取剪切和清蜡。组织蛋白酶K消化使用产生的颗粒一夜之间,在48°C。基因组DNA被孤立的苯酚/氯仿抽提和乙醇沉淀。最后,使用QIAamp DNA纯化DNA minicolumn(试剂盒)根据制造商的指示。

 2.3。亚硫酸氢钠转换

如前所述在细节 42), 在体外完全甲基化DNA甲基化DNA控制和人类精子DNA (unmethylated DNA控制)与临床样本转换。简单地说, ~1 μg DNA修改5 mol / L亚硫酸氢钠,desulfonated氢氧化钠,然后纯化resuspended在80年 μL洗脱缓冲(EB;10更易与L Tris-HCl, pH值8.0)。

 2.4。DNA甲基化(MethyLight)测定

引物和探针MethyLight化验是专门为bisulfite-converted完全甲基化DNA。他们的序列已报告之前 35]。放大的亚硫酸氢转换beta-actin (ACTB) DNA用于标准化的数量输入DNA。样品为阴性ACTB被排除在甲基化分析。372年确定样本,56个(15%)被排除在外,因为他们对ACTB不利。样本的百分比排除亚硫酸氢后转换类似于吸烟者(15%)和非吸烟者(16%)。包含亚硫酸氢质粒转化ACTB基因已知浓度的稀释和作为一个量化的标准曲线。分析对于一个给定的一组样本只是认为是有效的,如果转换unmethylated人类精子DNA没有放大,而完全甲基化DNA放大转换。对于每一个轨迹,甲基化比例参考(PMR)计算除以样本的基因/引用比完全甲基化DNA的基因/参考比率控制( 43]。基因被认为是任何甲基化阳性PMR > 0%。

 2.5。统计方法

为对比组,提供独立的观察,我们随机选择一个组织块每代表每个主题的甲基化状况。评估潜在的差异基因甲基化的网站肺,搭配上、下叶组织样本中使用McNemar检验法测试受试者相比。评估单变量和多变量基因甲基化和独立变量之间的关系(吸烟、年龄、性别、叶的肺,包年和年辞职),我们从每个主题包括所有可用的组织样本,采用广义估计方程(天啊)。这种方法使分析数据和重复测量(每个主题从不同叶多个组织样本),占受试的相互关系。在选择一个模型,一个分对数链接使用,我们假定一个可交换的相关结构占intrasubject相关工作。参数估计是取幂提供优势比(或)和95%置信区间(CI)。双向0.05测试水平确定统计学意义分析。所有使用SAS 9.1版本进行分析(SAS研究所Inc .卡里,NC)。

 3所示。结果 3.1。研究人口和组织样本

我们回顾性招收了151名受试者贡献316可用病理学街区(表 2)。当时的手术,121名受试者被现任或前任吸烟者(ever-smokers),而30报道没有吸烟史(不)。在不吸烟者中,没有任何历史的癌症,手术之前或之后,产生了在这项研究中使用的组织。ever-smokers, 10个有癌症之前除了肺(结肠颈1乳腺癌、2、2、2前列腺,1睾丸,和2子宫)和所有癌症免费手术。四个ever-smokers开发了癌症之后的产生的癌症的手术的肺组织(结肠膀胱,1和2非小细胞肺癌,在2年之后,在5年之后)。临床数据表明,不吸烟者和ever-smokers做肺部手术由两个截然不同的群体。Ever-smokers明显比不吸烟者和44年(61年)。此外,ever-smokers的贡献从肺手术标本,71%有肺气肿的诊断,而只有10%的不吸烟者。

临床资料的151例癌症MethyLight测定肺组织。

不吸烟者( n = 30. ) Ever-smokers ( n = 121年 )
手术年龄(平均年±sd) 43.7±11.6 61.0±9.9
热带病 11 (37%) 2 (2%)
40至49 8 (27%) 14 (12%)
50-59 9 (30%) 33 (27%)
60 - 69 2 (7%) 43 (36%)
70 - 79 0 (0%) 29 (24%)
女性性别 18 (60%) 58 (48%)
吸烟包年
1-39 N /一个 50 (41%)
≥40 N /一个 71例(59%)
年辞职一个
0(当前) N /一个 15 (13%)
1 - 4 N /一个 31 (26%)
5 - 9 N /一个 27 (23%)
10 - 19 N /一个 30 (25%)
≥20 N /一个 17 (14%)
手术
肺减容 0 (0%) 57 (47%)
肺移植 9 (30%) 31 (26%)
楔形活组织检查 18 (60%) 24 (20%)
叶切除术 2 (7%) 5 (4%)
Bullectomy 0 (0%) 4 (3%)
侧 1 (3%) 0 (0%)
数量的样品评估
一个样本 17 (57%) 23 (19%)
多个样本 13 (43%) 98例(81%)
样品位置b
上部叶只 5 (17%) 60 (50%)
中部叶或海豆芽 6 (21%) 1 (1%)
下叶只 10 (34%) 21 (18%)
多叶 8 (28%) 37 (31%)
病因
肺气肿c 3 (10%) 86例(71%)
炎症条件d 13 (43%) 21 (17%)
传染病 4 (13%) 7 (6%)
囊性纤维化 5 (17%) 0 (0%)
肺动脉高压 1 (3%) 2 (2%)
结节病 1 (3%) 1 (1%)
淋巴样增生 1 (3%) 1 (1%)
梗塞 1 (3%) 1 (1%)
血管瘤 0 (0%) 1 (1%)
被困的肺 1 (3%) 0 (0%)
没有组织学异常 0 (0%) 1 (1%)

一个离开1年没有主题。

b示例4的位置未知样本3科目。

c有关详细信息,请参阅结果部分。

d炎症条件包括慢性支气管炎、支气管扩张、肺纤维化、肉芽肿性疾病。

我们分析316可用病理学块从这些151例,包括177上部叶样本,105下叶样本,30中部叶或海豆芽样本,4叶的起源尚不清楚。多个块ever-smokers可供98人(81%)和13(43%)的不吸烟者;从269年121年ever-smokers样本测试,而从30不吸烟者,47个样本测试。样本网站在ever-smokers差异很大,不吸烟者ever-smokers的50%,17%的不吸烟者相比,只贡献了样本上叶。这种差异是因为许多ever-smokers在我们的样例接受了肺气肿,肺减容手术时主要影响上肺区吸烟引起的。

 3.2。基因甲基化和吸烟状况

考虑一个随机的组织块/主题,只有APC (39%)、CCND2(21%)、背景(7%),和RARB (4%) hypermethylated在2%以上的主题(图 1)。所有剩余15基因(snps和CDH13,男朋友,CDKN2A (p16) CDKN2B, DAPK1, IGFBP3, IGSF4, KCNH5, KCNH8,管理,OPCML, PCSK6, RASSF1, RUNX,和TMS1) hypermethylated在不到2%的主题。CCND2 hypermethylated明显更频繁地与不吸烟者相比,ever-smokers(分别为26%和3%, P < 。 001年 )。APC在ever-smokers hypermethylated更频繁(41%和30%),但这并未达到统计学意义( P = 。 3 )。

四个基因的甲基化在非癌性肺组织。百分比的甲基化的四种基因(APC, CCND2、背景和RARB),由吸烟分层状态。样品被认为是任何甲基化阳性PMR > 0%。提供人口统计,每个主题是随机选择一个肺组织样本。其他15个基因测试hypermethylated在< 2%的受试者。

 3.3。相关的APC和Hypermethlation CCND2基因

APC和CCND2经常hypermethylated在同一个样本;179例(57%)为阴性样本两个基因,16(5%)为甲基化阳性CCND2,但不是APC, 68(22%)为甲基化阳性的APC但不是CCND2, 53(17%)样本阳性基因。CCND2明显与APC甲基甲基化在所有科目(或= 7.3,95% CI = 3.9 - -13.8),在吸烟者只有(或= 7.4,95% CI -14.0 = 3.9)。在不吸烟者,31例(66%)为阴性样本两个基因,APC 14(30%)阳性,2例(4%)阳性样本APC和CCND2。

 3.4。基因甲基化和临床和人口因素

在单变量啊所有标本(表的分析 3),CCND2甲基化的发生与一个积极的吸烟史,年龄的增加,和样本来源的上部和下部叶的肺。APC甲基化是大大减少频繁的女性和适度更频繁的在上部叶相比,下部叶但是没有明显关联到一个积极的吸烟史。在多变量模型中同时评估吸烟史、年龄、性别、和位置的样本(上部和下部叶)在所有科目,CCND2仍显著增加年龄的甲基化(或= 1.7,95% CI -2.4 = 1.2每10岁)和上部叶位置(或= 2.0,95% CI -3.8 = 1.0)。CCND2有点甲基化与积极的吸烟史(或= 2.8,95% CI = 0.6 - -12.1)但这没有达到统计学意义。

启动子甲基化的所有subjects-odds比率(95% CI)。

Ever-smokers与不吸烟者 每10岁 女性和男性 上部和下部叶
单变量一个
APC 1.3 (0.6 - -2.9) 1.1 (0.9 - -1.4) 0.6 (0.5 - -0.8) 1.6 (0.9 - -2.7)
CCND2 6.9 (1.6 - -29.8) 1.9 (1.4 - -2.7) 0.8 (0.6 - -1.1) 2.3 (1.2 - -4.4)
多元一个
APC 1.0 (0.4 - -2.6) 1.0 (0.8 - -1.3) 0.6 (0.4 - -0.8) 1.6 (1.0 - -2.8)
CCND2 2.8 (0.6 - -12.1) 1.7 (1.2 - -2.4) 0.8 (0.6 - -1.2) 2.0 (1.0 - -3.8)

一个联系临床参数和基因甲基化,评估在PMR > 0%,在所有316肺标本151例。

 3.5。基因甲基化和烟雾暴露的持续时间

在从121年的269个样本子集ever-smokers(表 4),APC甲基化与久吸烟或戒烟以来。在单变量啊分析中,CCND2甲基化与更大的包年显著相关,但与年辞职。然而,在多元哎呀分析同时评估包年,年辞职,年龄,性别,和位置的样本(上部和下部叶),CCND2不再是甲基化与包年(或= 1.0,95% CI -1.2 = 0.9 / 10包年)。

Ever-smokers only-odds比率启动子甲基化(95% CI)。

包年每10年 戒烟年每10年 每10岁 女性和男性 上部和下部叶
单变量一个
APC 1.0 (0.9 - -1.1) 0.9 (0.6 - -1.2) 1.1 (0.8 - -1.5) 0.6 (0.5 - -0.8) 2.0 (1.1 - -3.5)
CCND2 1.1 (1.0 - -1.3) 0.8 (0.6 - -1.1) 1.8 (1.3 - -2.6) 0.8 (0.6 - -1.1) 1.9 (1.0 - -3.5)
多元一个
APC 0.9 (0.8 - -1.1) 0.8 (0.6 - -1.2) 1.2 (0.8 - -1.7) 0.6 (0.4 - -0.8) 2.1 (1.1 - -4.0)
CCND2 1.0 (0.9 - -1.2) 0.8 (0.5 - -1.2) 1.8 (1.2 - -2.9) 0.9 (0.6 - -1.2) 1.7 (0.9 - -3.4)

一个269年临床参数之间的关联和基因甲基化与现在或过去的肺标本121例吸烟史。

 3.6。基因甲基化在上、下叶样品

众所周知,吸烟有关肺肿瘤和肺气肿不成比例地影响到肺上叶。因此,如果一个基因的甲基化与吸烟有关,我们可能期望找到更多甲基上叶样本下叶样品相比,ever-smokers之一。

检查所有269个样本ever-smokers(表 4),在单变量啊分析,APC(或= 2.0,95% CI = 1.1 - -3.5)和CCND2(或= 1.9,95% CI = 1.0 - -3.5)甲基化在上部比下部叶更常见。在多变量分析包括久,年辞职,年龄,性别,和上部和下部叶,APC甲基化仍显著相关,肺上叶样品位置(或= 2.1,95% CI = 1.1 - -4.0),而CCND2积极与上部叶减少到略低于统计显著性水平(或= 1.7,95% CI -3.4 = 0.9)。

在121年我们的队列,ever-smokers 30都上部和下部叶样品可用,并被包含在受试,两两比较。APC, 12 30对不和谐的甲基化状态(1积极和消极的),其中12 8显示APC在上层叶而不是甲基化下叶样品( P = 。 25 )。CCND2,只有7 30对不和谐的甲基化状态,其中只有3 7 hypermethylated上而不是降低叶( P = 。 7 )。因此,受试者太少不和谐的上部和下部叶样品中甲基化在受试比较收益率统计上有意义的结果。

 4所示。讨论

DNA甲基化是一个重要的事件在肺部致癌作用。然而,目前未知的DNA甲基化的变化是否早期事件,发生在以前正常肺组织或是否后期更改,只出现在明显的肿瘤细胞( 30.]。试图回答这些问题,我们测试了肺组织中DNA甲基化科目没有cancer-both吸烟者和nonsmokers-using 19基因,我们小组先前发现hypermethylated在某些nonsmall细胞肺癌( 35, 44]。这种独特的设计让我们学习,第一次描述DNA甲基化的不吸烟者的肺组织,并比较此概要的smoke-exposed肺。

重要的是,我们观察到CCND2,已知经常hypermethylated在肺癌组织中( 35, 44- - - - - - 47),在ever-smokers hypermethylated更频繁(26%)比不吸烟者(3%)。也正如预测的那样,在ever-smokers, CCND2 hypermethylated更频繁地在样本上叶,这是已知的受更多负面影响吸烟,肺癌、肺气肿等( 36, 37]。这些发现支持这样的结论,CCND2反映了早期肺癌、癌前变化由吸烟引起的。

CCND2编码细胞周期蛋白D2,蛋白参与细胞周期进展,认为作为监管机构的细胞周期蛋白依赖激酶4和细胞周期蛋白依赖激酶6从G1过渡到s阶段( 39]。CCND2甲基化似乎是常见的许多癌症。在乳腺癌研究最广泛,CCND2经常检测甲基化,但它似乎很少发现在正常乳腺组织( 48- - - - - - 54]。有趣的是,尽管CCND2甲基化(因此CCND2蛋白低表达)与不良预后有关在卵巢上皮细胞癌 55]和[肝癌的复发 56), 增加CCND2表达与预后不良有关弥漫型大b细胞淋巴瘤( 57]。

在肺,CCND2甲基化被发现在40 - 56%的非小细胞肺癌( 35, 44, 45, 47]。在良性肺组织,而马尼等人发现CCND2 18 0样品中甲基化( 45),我们之前调查发现CCND2甲基化与非小细胞肺癌患者的24%的非癌性肺组织( 35]。这匹配率在目前的研究中,观察到在癌症ever-smokers (26%)。可能,我们组观察到更高的CCND2癌症和癌症甲基化肺组织,因为我们使用MethyLight化验methylation-specific PCR (MSP),而是使用马尼et al。因此,我们可能检测到低水平的hypermethylated基因在癌症组织不是由MSP检测。差异也可能是由于不同的引物和探针用于分析,表明不同的序列区域调查。此外,久保等人没有观察到任何CCND2甲基化在30匹配良性肺组织但是应该注意的是,在这项研究中,70%的受试者不吸烟者,他们不会将产生重大的CCND2[甲基化 46]。

相结合,这些结果揭示了发展的速度CCND2肺,甲基化与患肺癌的风险。虽然CCND2甲基化是非常罕见的(3%)在我们当前研究的低风险组30不吸烟者,这是更频繁的高危人群ever-smokers(24 - 26%在我们当前和先前的研究),和最频繁的公开的非小细胞肺癌组织(40 - 56%)。这risk-stratified肺组织的发展表明,CCND2甲基化可能真正反映早期肺癌、癌前变化途中的癌症,这可能是由于吸烟的影响。

然而,我们的研究结果对于CCND2应当被视为初步这时,有几个原因。在多变量分析中,吸烟的影响地位CCND2甲基化后降低趋势水平意义考虑样本的影响位置(上部和下部叶)和时代主题。这可能发生,因为在我们的示例中,大多数吸烟者对肺气肿和肺手术为明显老群,更有可能造成样本上叶(肺气肿是最突出)。相比之下,非吸烟者是年轻和接受肺切除术为各种不同的疾病。这样显著相关的因素,多变量分析可能没有可靠地分离每个因素对基因甲基化的相对贡献。因此,观察到的差异的速度CCND2甲基化可能归因于任何这些因素或其他,不吸烟者之间的不同。肺气肿,例如,CCND2更可能尽管甲基化率显著CCND2甲基化也与其他诊断中发现吸烟者。虽然CCND2甲基化可能是独特的肺气肿病理生理学的一部分,更有可能是因为肺气肿反映严重吸烟引起的肺损伤。年龄对CCND2的影响还没有被甲基化研究之前在良性肺,尽管已报告多个基因的甲基化率增加随着年龄的增长,体内各种组织,包括背景和DAPK1在肺 58]。在良性乳腺上皮细胞 59和癌症的外周血样本学科 60)、先进的年龄没有观察到与CCND2甲基化。因此,年龄之间的关系和CCND2甲基化是未知的。在重的相对贡献时代,样本位置,和肺气肿状态CCND2甲基化,值得注意的是,吸烟史是迄今为止最强大的单一预测CCND2甲基单变量分析(或= 6.9,95% CI -29.8 = 1.6)。本研究的一个限制是,尽管我们的整体大量的151名被试,只有30不吸烟者。这经常发生因为不太接受肺切除术生产组织。这可能是部分原因在多变量分析中,我们观察到只有对吸烟的影响趋势水平意义CCND2甲基化。我们能够改善我们的统计力量有些通过使用广义估计方程(GEE)单变量和多变量分析,让我们进入多个组织块/主题时可用(多个观测),没有偏置的结果。然而,未来的研究应该寻求验证CCND2的低甲基化我们观察在不吸烟者。额外的限制我们的研究设计,所有受试者潜在的非癌肺肺的诊断,需要手术。因此,虽然观察基因甲基化与癌症无关,它绝对不能说代表健康的肺。 Finally, due to our study design, we only provide indirect evidence of interaction between smoking and CCND2 hypermethylation. Future studies utilizing animal models may be useful to elucidate the potential causal relationship between smoking and CCND2 hypermethylation.

在我们当前和先前的研究,CDKN2A (p16) hypermethylated在26%的癌症组织( 44),但很少hypermethylated良性肺组织,不管吸烟状态( 35]。然而,CDKN2A曾被甲基化特征作为一个早期事件在肺部致癌作用 28- - - - - - 30.),甲基化一般CDKN2A的痰样本中发现重度吸烟者没有肺癌( 32, 61年]。总的来说,一个非常广泛的甲基化率CDKN2A已经在文献中报道,非癌性肺组织。以及其他研究人员观察到的低利率CDKN2A甲基良性肺组织,我们的研究结果表明,CDKN2A实际上可能代表一个甲基化后致癌作用的变化( 62年- - - - - - 66年]。然而,令人惊讶的是大型差异研究可能与差异分析方法(包括PCR引物和特定的CpG岛)或患者群体。

 5。结论

CCND2甲基化可能是早期,吸烟引起的肺癌癌前变化;是非常罕见的在不吸烟者的肺组织,更频繁的吸烟者中,最频繁的在公开的非小细胞肺癌组织中。这个结论应该在未来的调查核实。此外,本研究支持我们之前调查的结论,尽管它们hypermethylated在许多NSCLC肿瘤组织,RASSF1, DAPK1,男朋友,CDH13,管理,KCNH5,在某种程度上是携带者和RARB,很少hypermethylated癌症肺癌,即使重要的烟草暴露( 35]。这些基因可能因此理解致癌的后期的线索。此外,如果CCND2或其他基因的甲基化代表了早期癌前变化,有可能是药物旨在扭转DNA甲基化可以用来防止与吸烟有关的致癌作用。

 利益冲突

没有宣布。

 承认

这项研究是由国家卫生研究院,国家癌症研究所资助nos。R01 CA115559 R01 CA107264, R01 CA80907。

 癌症的事实和数据 美国癌症协会,亚特兰大,乔治亚州,美国,2010年 疾病预防控制中心 2004年美国卫生局局长的报告:吸烟的健康后果 新南威尔士公共卫生通报 2004年 15 5 - 6 107年 疾病预防控制中心 年度smoking-attributable死亡率、潜在寿命损失年、和生产力losses-United州,1997 - 2001 发病率和死亡率每周报告 2005年 54 25 625年 628年 赫克特 美国年代。 吸烟致癌物质和肺癌 美国国家癌症研究所杂志》上 1999年 91年 14 1194年 1210年 2 - s2.0 - 0033591845 Straif K。 博安公司 R。 Grosse Y。 一种铝青铜 B。 El Ghissassi F。 Cogliano V。 Drewski D。 Partanen T。 Vahakangas K。 卡住了 我。 Borlak J。 Feron 诉J。 品牌 M . M。 Gustavsson P。 弗莱彻 T。 Arey J。 Beland f。 Burchiel 年代。 花 l 赫伯特 r。 穆赫塔尔 H。 Nesnow 年代。 写 t M。 Sinha R。 什 T。 致癌性多环芳烃 柳叶刀肿瘤学 2005年 6 12 931年 932年 2 - s2.0 - 28044440667 10.1016 / s1470 - 2045 (05) 70458 - 7 罗斯 j . A。 Nesnow 年代。 多环芳烃:DNA加合物之间的相关性和ras致癌基因突变 突变的研究 1999年 424年 1 - 2 155年 166年 2 - s2.0 - 0033535436 10.1016 / s0027 - 5107 (99) 00016 - 0 余 D。 柏林 j . A。 写 t M。 场 J。 活性氧产生的多环芳烃邻醌导致p53 change-in-function突变 化学毒物学研究 2002年 15 6 832年 842年 2 - s2.0 - 0035998283 10.1021 / tx010177m Frazer-Abel 答:一个。 Baksh 年代。 Fosmire s P。 威利斯 D。 皮尔斯 a . M。 Meylemans H。 林西克姆 d S。 Burakoff 美国J。 孔斯曲面 T。 Bellgrau D。 Modiano j·F。 尼古丁激活核转录因子的激活T细胞c2 (NFATc2)和阻止细胞周期进入T细胞 药理学和实验治疗学杂志》上 2004年 311年 2 758年 769年 2 - s2.0 - 6344256331 10.1124 / jpet.104.070060 卡尔拉 R。 辛格 s P。 野蛮人 s M。 雀 g . L。 Sopori m . L。 香烟烟雾对免疫反应的影响:慢性暴露于香烟烟雾中损害antigen-mediated信号在T细胞和耗尽IP3-sensitive Ca 2 + 商店 药理学和实验治疗学杂志》上 2000年 293年 1 166年 171年 2 - s2.0 - 0034029251 摩尔 l E。 黄 w . Y。 钟 J。 海斯 r B。 流行病学因素评估从癌症中环境因素改变了DNA甲基化 纽约科学院上 2003年 983年 181年 196年 2 - s2.0 - 0037354509 林 r·K。 许 h·S。 常 j·W。 陈 c . Y。 陈 j . T。 王 y . C。 改变DNA甲基转移酶的贡献 5 ′ CpG甲基化,在肺癌预后不良 肺癌 2007年 55 2 205年 213年 2 - s2.0 - 33846111256 10.1016 / j.lungcan.2006.10.022 Kwon y . M。 公园 j . H。 金 H。 垫片 y . M。 金 J。 汉 J。 公园 J。 金 d . H。 不同的易感性DNMT1表达增加了接触烟草烟雾根据组织学主要非小细胞肺癌 癌症研究和临床肿瘤学杂志》上 2007年 133年 4 219年 226年 2 - s2.0 - 33846954027 10.1007 / s00432 - 006 - 0160 - 2 刘 H。 周 Y。 伯格斯 s E。 Belinsky 美国一个。 刘 J。 吸烟引起的脱甲基prometastatic种能阻碍DNMT3B致癌基因的差别synuclein-gamma在肺癌细胞对这些 致癌基因 2007年 26 40 5900年 5910年 2 - s2.0 - 35148873511 10.1038 / sj.onc.1210400 Belinsky 美国一个。 Klinge d . M。 Stidley c。 伊萨 j . P。 赫尔曼 j·G。 3月 t·H。 Baylin 美国B。 抑制DNA甲基化和组蛋白脱乙酰作用阻止小鼠肺癌 癌症研究 2003年 63年 21 7089年 7093年 2 - s2.0 - 0242442588 金 H。 年轻的 MI。K。 金 美国K。 李 H。 公园 j . H。 年轻的 m . S。 汉 J。 公园 J。 金 d . H。 肿瘤特异性甲基化在支气管灌洗对非小细胞肺癌的早期检测 临床肿瘤学杂志 2004年 22 12 2363年 2370年 2 - s2.0 - 2942737264 10.1200 / JCO.2004.10.077 这个 年代。 Maruyama R。 这个 k . O。 McLerran D。 冯 Z。 福山 Y。 马尼 答:K。 Zochbauer-Muller 年代。 Tsukuda K。 Sugio K。 清水正孝 N。 清水正孝 K。 李 H。 陈 c . Y。 方 k . M。 Gilcrease M。 罗斯 j . A。 明娜 j . D。 Gazdar 答:F。 烟雾暴露,组织学类型和geography-related差异甲基化的非小细胞肺癌 国际癌症杂志》上 2003年 103年 2 153年 160年 2 - s2.0 - 0037427808 10.1002 / ijc.10787 这个 年代。 铃木 M。 津田 T。 这个 k . O。 Maruyama R。 Tsukuda K。 福山 Y。 Iizasa T。 藤泽 T。 清水正孝 N。 明娜 j . D。 Gazdar 答:F。 吸烟的剂量效应在非小细胞肺癌的异常甲基化 国际癌症杂志》上 2004年 110年 3 462年 464年 2 - s2.0 - 2442462112 10.1002 / ijc.20125 在香港 y S。 卢武铉 m . S。 金 n Y。 李 h·J。 金 h·K。 李 k . E。 夸克 j . Y。 金 j . Y。 甲基化的p16在韩国非小细胞肺癌患者 韩国医学科学杂志》上 2007年 22 S32 S37 2 - s2.0 - 36148990637 刘 Y。 局域网 Q。 齐格弗里德 j . M。 Luketich j . D。 Keohavong P。 异常基因启动子甲基化的p16和管理从吸烟和肺癌,从不吸烟肺癌患者 瘤形成 2006年 8 1 46 51 2 - s2.0 - 33646427172 10.1593 / neo.05586 近藤 K。 高桥 Y。 Hirose Y。 Nagao T。 Tsuyuguchi M。 桥本 M。 落 一个。 Monden Y。 Tangoku 一个。 p16的表达和异常甲基化与铬酸盐工人肺癌 肺癌 2006年 53 3 295年 302年 2 - s2.0 - 33746916117 10.1016 / j.lungcan.2006.05.022 Dammann R。 Strunnikova M。 Schagdarsurengin U。 Rastetter M。 Papritz M。 Hattenhorst 美国E。 霍夫曼 h·S。 西尔柏 r·E。 布达赫 年代。 汉森 G。 CpG岛甲基化,在肺癌肿瘤相关基因的表达 欧洲癌症杂志 2005年 41 8 1223年 1236年 2 - s2.0 - 21144453099 10.1016 / j.ejca.2005.02.020 Furonaka O。 竹岛 Y。 Awaya H。 石田 H。 Kohno N。 Inai K。 异常甲基化好,p15和p16基因和位置的主站点肺鳞状细胞癌 病理学国际 2004年 54 8 549年 555年 2 - s2.0 - 4344672497 10.1111 / j.1440-1827.2004.01663.x Tomizawa Y。 饭岛爱 H。 野本 T。 Iwasaki Y。 大谷 Y。 土屋 年代。 斋藤 R。 Dobashi K。 只是 T。 森 M。 RAR临床病理异常甲基化的意义 β2 p24三点,RASSF1A基因在3 . 3,3 p14.2 FHIT基因在非小细胞肺癌患者 肺癌 2004年 46 3 305年 312年 2 - s2.0 - 8444238560 10.1016 / j.lungcan.2004.05.003 铃木 M。 Shigematsu H。 羞愧的事 d S。 Sunaga N。 高桥 T。 Shivapurkar N。 Iizasa T。 明娜 j . D。 藤泽 T。 Gazdar 答:F。 甲基化和基因沉默的ras-related GTPase基因在肺癌和乳腺癌 《肿瘤外科 2007年 14 4 1397年 1404年 2 - s2.0 - 34047237085 10.1245 / s10434 - 006 - 9089 - 6 菊池 年代。 山田 D。 根据 T。 Maruyama T。 伊藤 一个。 Asamura H。 Matsuno Y。 Onizuka M。 村上 Y。 TSLC1 / IGSF4启动子甲基化与吸烟有关,主要nonsmall细胞肺癌预后不良 癌症 2006年 106年 8 1751年 1758年 2 - s2.0 - 33646021646 10.1002 / cncr.21800 神圣的 K·K。 拉 l . C。 Marron-Terada p·G。 Liechty k . C。 康 T。 施瓦兹 a·G。 Bocklage t·J。 孔斯曲面 t。 Gilliland f . D。 Belinsky 美国一个。 多重性启动子甲基化异常的肺腺癌从吸烟者和不吸烟者 国际癌症杂志》上 2005年 114年 3 400年 405年 2 - s2.0 - 20044383744 10.1002 / ijc.20761 Vaissiere T。 挂 r . J。 Zaridze D。 Moukeria 一个。 Cuenin C。 法索罗 V。 铁 G。 Paliwal 一个。 埃诺 P。 布伦南 P。 烤面包 J。 Boffetta P。 Herceg Z。 定量分析的DNA甲基化概要文件在肺癌识别特定基因的异常的DNA甲基化及其与性别和癌症的危险因素 癌症研究 2009年 69年 1 243年 252年 2 - s2.0 - 58249098396 10.1158 / 0008 - 5472. - 08 - 2489 Kersting M。 fiedl的用于检查电子邮件地址 C。 克劳斯 一个。 贝恩 M。 Pankow W。 时间 M。 微分的p16 (INK4a)启动子甲基化频率,k - ras基因p53突变,突变表皮剥脱的材料标记有症状的慢性吸烟者患肺癌的发展 临床肿瘤学杂志 2000年 18 18 3221年 3229年 2 - s2.0 - 0034666334 Belinsky 美国一个。 Nikula k·J。 帕米萨诺 w·A。 米歇尔 R。 Saccomanno G。 Gabrielson E。 Baylin 美国B。 赫尔曼 j·G。 p16的异常甲基化是肺癌的早期活动和早期诊断的潜在生物标志物 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 1998年 95年 20. 11891年 11896年 2 - s2.0 - 0032578509 克尔 k . M。 吉利莲 j·S。 哈根 j . A。 Laird p W。 Laird-Offringa 我一个。 DNA甲基化在肺腺癌的开发和发展 疾病标记 2007年 23 1 - 2 5 30. 2 - s2.0 - 33847373449 Zochbauer-Muller 年代。 林 年代。 这个 年代。 马尼 答:K。 这个 k . O。 Seidl 年代。 明娜 j . D。 Gazdar 答:F。 多个基因的异常甲基化上aerodigestive呼吸道上皮重度吸烟者 国际癌症杂志》上 2003年 107年 4 612年 616年 2 - s2.0 - 0142053910 10.1002 / ijc.11458 奇林乔内 R。 灵狮广告 C。 孔蒂 D。 马里安尼 l 警察 l Vignola a . M。 Pastorino U。 Sozzi G。 甲基化在肿瘤和肺癌患者的痰样本检测到螺旋计算机断层扫描:一个嵌套病例对照研究 国际癌症杂志》上 2006年 118年 5 1248年 1253年 2 - s2.0 - 31844452687 10.1002 / ijc.21473 乔治奥 E。 博季诺夫 R。 Tzimagiorgis G。 Anzel J。 Krikelis D。 Tsilikas C。 Sarikos G。 Destouni C。 Dimitriadou 一个。 Kouidou 年代。 异常的希腊肺癌患者p16启动子甲基化和吸烟者:与吸烟相关 欧洲癌症预防杂志》上 2007年 16 5 396年 402年 2 - s2.0 - 35148859298 10.1097/01. cej.0000236260.26265.d6 Belinsky 美国一个。 帕米萨诺 w·A。 Gilliland f . D。 骗子 l。 神圣的 K·K。 冬天 美国一个。 格里姆斯 m·J。 危害 h·J。 泰雷兹 c·S。 史密斯 t M。 没有实际意义 P P。 莱希 j·F。 Stidley c。 克罗威尔 r·E。 异常的启动子甲基化在支气管上皮和痰从现任和前任吸烟者 癌症研究 2002年 62年 8 2370年 2377年 2 - s2.0 - 0037089460 冯 Q。 霍斯 s E。 斯特恩 j·E。 恩斯 l 陆 H。 赵 m D。 约旦 c, D。 Kiviat n . B。 Vesselle H。 DNA甲基化在肿瘤和正常组织匹配的非小细胞肺癌患者 癌症流行病学生物标记和预防 2008年 17 3 645年 654年 2 - s2.0 - 41549108332 10.1158 / 1055 - 9965. - epi - 07 - 2518 李 j . M。 伯恩斯坦 一个。 p53突变增加抗电离辐射 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 1993年 90年 12 5742年 5746年 2 - s2.0 - 0027285380 拜尔 t E。 腔 j·E。 Rzepka t F。 肺癌的偏爱上叶:流行病学调查 美国国家癌症研究所杂志》上 1984年 72年 6 1271年 1275年 2 - s2.0 - 0021265474 汉森 c。 米勒 j . R。 非传统角色的腺瘤息肉病杆菌(APC)肿瘤抑制蛋白 基因 2005年 361年 1 - 2 1 12 2 - s2.0 - 27144552677 10.1016 / j.gene.2005.07.024 谢尔 c·J。 型细胞周期蛋白 生化科学趋势 1995年 20. 5 187年 190年 2 - s2.0 - 0029071657 10.1016 / s0968 - 0004 (00) 89005 - 2 琼 一个。 Gottardi c·J。 狂吠 答:S。 钙粘蛋白和癌症:钙粘着蛋白功能障碍促进肿瘤进展如何? 致癌基因 2008年 27 55 6920年 6929年 2 - s2.0 - 56749176437 10.1038 / onc.2008.343 阿尔瓦雷斯 年代。 日尔曼 P。 阿尔瓦雷斯 R。 Rodriguez-Barrios F。 Gronemeyer H。 de Lera a。R。 视黄酸受体的结构、功能和调节β,肿瘤抑制基因 国际生物化学和细胞生物学杂志》上 2007年 39 7 - 8 1406年 1415年 2 - s2.0 - 34447108899 10.1016 / j.biocel.2007.02.010 Weisenberger d . J。 Campan M。 长 t . I。 金 M。 森林 C。 Fiala E。 埃利希 M。 Laird p W。 重复的元素由MethyLight DNA甲基化分析 核酸的研究 2005年 33 21 6823年 6836年 2 - s2.0 - 29244490041 10.1093 / nar / gki987 欧洲航空防务与航天公司 c。 主 r . V。 Wickramasinghe K。 长 t . I。 Kurumboor 美国K。 伯恩斯坦 l 彼得斯 j . H。 DeMeester s R。 DeMeester t·R。 斯金纳 k。 Laird p W。 表观遗传模式在食管腺癌的进展 癌症研究 2001年 61年 8 3410年 3418年 2 - s2.0 - 0035870280 霍斯 s E。 斯特恩 j·E。 冯 Q。 恩斯 l·W。 Rasey j·S。 陆 H。 Kiviat n . B。 Vesselle H。 肿瘤DNA甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)患者与性别和组织学类型有关 肺癌 2010年 69年 2 172年 179年 2 - s2.0 - 77954143943 10.1016 / j.lungcan.2009.11.002 马尼 一个。 Rathi 一个。 Heda 年代。 Sugio K。 刘易斯 C。 坦克 V。 高桥 T。 罗斯 j . A。 明娜 j . D。 Euhus d . M。 Gazdar 答:F。 异常的细胞周期蛋白D2启动子的甲基化主要小细胞,nonsmall细胞肺癌和乳腺癌 国际癌症杂志》上 2003年 107年 3 341年 345年 2 - s2.0 - 0142059070 10.1002 / ijc.11393 久保 T。 山本 H。 Ichimura K。 吉大 M。 哈亚希 T。 大谷 H。 Tsukuda K。 佐野 Y。 Kiura K。 这个 年代。 DNA甲基化与支气管肺泡癌组件在小肺腺癌 肺癌 2009年 65年 3 328年 332年 2 - s2.0 - 67651224821 10.1016 / j.lungcan.2008.12.001 卡斯特罗 M。 macgenes@yahoo.com.au 格劳 l lgrau@cnio.es 普埃尔塔 P。 ppuerta@ext.cnio.es Gimenez l lilianab.gimenez@hotmail.com Venditti J。 JVENDITTI@hbritanico.com.ar Quadrelli 年代。 silvia.quadrelli@gmail.com Sanchez-Carbayo M。 mscarbayo@cnio.es 多路复用甲基化的肿瘤抑制基因,在肺癌临床结果 转化医学杂志》 2010年 8日,第86条 10.1186 / 1479-5876-8-86 Jeronimo C。 蒙泰罗 P。 恩里克 R。 Dinis-Ribeiro M。 科斯塔 我。 科斯塔 诉L。 菲利浦- l 卡瓦略 a . L。 霍克 m . O。 《国家 我。 忠实的 C。 特谢拉 m·R。 Sidransky D。 定量小面板的甲基化的基因增加细针吸活检的诊断准确性洗液的乳腺病变 乳腺癌研究和治疗 2008年 109年 1 27 34 2 - s2.0 - 42149087728 10.1007 / s10549 - 007 - 9620 - x 刘易斯 c . M。 克列尔 l R。 部 d . W。 Zochbauer-Muller 年代。 Milchgrub 年代。 纳夫塔利斯 e . Z。 利奇 a . M。 明娜 j . D。 Euhus d . M。 启动子甲基化良性乳腺上皮与预测乳腺癌的风险 临床癌症研究 2005年 11 1 166年 172年 2 - s2.0 - 11444266289 李 一个。 金 Y。 汉 K。 常 美国K。 有 m·J。 唱 i S。 检测肿瘤标志物癌胚抗原、APC,细胞周期蛋白D2在乳腺细针穿刺液 病理学和实验室医学档案 2004年 128年 11 1251年 1256年 2 - s2.0 - 7444263942 聚氨酯 r·T。 Laitala l E。 阿莱 p . M。 Fackler m·J。 Sukumar 年代。 克拉克 d . P。 甲基化分析的良性和恶性乳腺病变细胞病理学及其应用 现代病理学 2003年 16 11 1095年 1101年 2 - s2.0 - 0242439295 10.1097/01. mp.0000095782.79895.e2 莱曼 U。 兰格 F。 无用的人 H。 Glockner 年代。 Hasemeier B。 Kreipe H。 启动子甲基化在乳腺癌发展的量化评估 美国病理学杂志》 2002年 160年 2 605年 612年 2 - s2.0 - 0036170908 系统 E。 Umbricht c . B。 Korz D。 拉曼 V。 勒布 d . M。 Niranjan B。 Buluwela l Weitzman 美国一个。 标志着 J。 Sukumar 年代。 细胞周期蛋白损失D2表达在大多数乳腺癌与启动子甲基化有关 癌症研究 2001年 61年 6 2782年 2787年 2 - s2.0 - 0035866809 系统 E。 杜利 w . C。 Umbricht c . B。 罗森塔尔 D。 萨基 N。 Gabrielson E。 Soito 答:B。 挂 d . T。 Ljung b . M。 戴维森 n E。 Sukumar 年代。 检测乳腺癌细胞在导管灌洗液methylation-specific PCR 《柳叶刀》 2001年 357年 9265年 1335年 1336年 2 - s2.0 - 18844470774 10.1016 / s0140 - 6736 (00) 04501 - 3 佐久间 M。 Akahira j . I。 伊藤 K。 Niikura H。 守屋 T。 冈 K。 Sasano H。 Yaegashi N。 细胞周期蛋白D2基因的启动子甲基化状态与人类上皮卵巢癌预后不良有关 癌症科学 2007年 98年 3 380年 386年 2 - s2.0 - 33846675127 10.1111 / j.1349-7006.2007.00394.x Tsutsui M。 Iizuka N。 Moribe T。 三浦 T。 木村 N。 Tamatsukuri 年代。 Ishitsuka H。 藤田 Y。 Hamamoto驾 Y。 Tsunedomi R。 Iida M。 Tokuhisa Y。 坂本 K。 Tamesa T。 Sakaida 我。 奥卡河 M。 甲基化循环血液中细胞周期蛋白D2基因作为肝细胞癌的预后预测指标 我们共同Chimica学报 2010年 411年 7 - 8 516年 520年 2 - s2.0 - 77649190208 10.1016 / j.cca.2010.01.004 Lossos i S。 Czerwinski d·K。 Alizadeh 答:一个。 Wechser m·A。 Tibshirani R。 Botstein D。 莱维 R。 预测生存扩散large-B-cell淋巴瘤基于6个基因的表达 《新英格兰医学杂志》上 2004年 350年 18 1828年 1837年 2 - s2.0 - 2342587416 10.1056 / NEJMoa032520 Waki T。 (尽管) G。 佐藤 M。 Motoyama T。 与年龄相关的肿瘤抑制基因的甲基化和肿瘤基因:一个尸检样本分析 致癌基因 2003年 22 26 4128年 4133年 2 - s2.0 - 0038339107 10.1038 / sj.onc.1206651 Euhus d . M。 部 D。 Milchgrub 年代。 谢 x J。 扁 一个。 利奇 a . M。 刘易斯 c . M。 良性乳腺上皮细胞中DNA甲基化与年龄和乳腺癌的风险 癌症流行病学生物标记和预防 2008年 17 5 1051年 1059年 2 - s2.0 - 52649102557 10.1158 / 1055 - 9965. - epi - 07 - 2582 粗金刚石 M。 福特 j·G。 Papaiahgari 年代。 加尔萨 m·A。 李 j . I。 Loyo M。 Maldonado l 女王 年代。 麦卡弗里 l Howerton M。 Sidransky D。 爱默生 m·R。 艾哈迈德 年代。 威廉姆斯 c, D。 霍克 m . O。 生活方式因素之间的关联和CpG岛甲基化在癌症人口 癌症流行病学生物标记和预防 2009年 18 11 2984年 2991年 2 - s2.0 - 72749090135 10.1158 / 1055 - 9965. - epi - 08 - 1245 Belinsky 美国一个。 Liechty k . C。 绅士 f . D。 狼 h·J。 罗杰斯 J。 Vu K。 哈尼 J。 肯尼迪 t . C。 赫希 f·R。 米勒 Y。 富兰克林 w·A。 赫尔曼 j·G。 Baylin 美国B。 邦 p。 拜尔 T。 多个基因的启动子甲基化在痰先于肺癌高危人群发病率 癌症研究 2006年 66年 6 3338年 3344年 2 - s2.0 - 33645521023 10.1158 / 0008 - 5472. - 05 - 3408 Zochbauer-Muller 年代。 方 k . M。 马尼 答:K。 Geradts J。 Gazdar 答:F。 明娜 j . D。 多个异常基因启动子甲基化基因在非小细胞肺癌 癌症研究 2001年 61年 1 249年 255年 2 - s2.0 - 0035132145 Licchesi j·d·F。 Westra w·H。 妓女 c . M。 赫尔曼 j·G。 标志癌症基因的启动子甲基化在非典型腺瘤肺的增生 临床癌症研究 2008年 14 9 2570年 2578年 2 - s2.0 - 47949123984 10.1158 / 1078 - 0432. - ccr - 07 - 2033 悦 W。 — 年代。 太阳 Q。 Landreneau R。 郭 M。 周 W。 齐格弗里德 j . M。 余 J。 张 l 频繁RAMP2失活,EFEMP1和Dutt1肺癌的启动子甲基化 临床癌症研究 2007年 13 15 4336年 4344年 2 - s2.0 - 34547673238 10.1158 / 1078 - 0432. - ccr - 07 - 0015 Esteller M。 Sanchez-Cespedes M。 转售 R。 Sidransky D。 Baylin 美国B。 赫尔曼 j·G。 检测异常的肿瘤抑制基因的启动子甲基化与非小细胞肺癌病人血清DNA 癌症研究 1999年 59 1 67年 70年 2 - s2.0 - 0032894125 Yanagawa N。 (尽管) G。 Oizumi H。 高桥 N。 岛崎博士 Y。 Motoyama T。 肿瘤抑制基因启动子甲基化和肿瘤基因在非小细胞肺癌 癌症科学 2003年 94年 7 589年 592年 2 - s2.0 - 0042563143 10.1111 / j.1349-7006.2003.tb01487.x