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jnume.据/journal-id>

营养与代谢杂志据/journal-title>

2090-0732.据/issn> 2090-0724据/issn>

印度发布公司据/publisher-name>

757205据/article-id> 10.1155 / 2012/757205据/article-id> 757205据/article-id>

研究文章据/subject>

对脂肪酸氧化和极低密度脂蛋白的分泌代谢综合征的大鼠模型高糖和高脂肪食物的作用是相反的据/article-title>

Cahova.据/surname> 蒙大利亚据/given-names> 达坎娃据/surname> 海伦娜据/given-names> Palenickova据/surname> eliska.据/given-names> 帕帕科娃据/surname> Zuzana据/given-names> Kazdova.据/surname> Ludmila.据/given-names> Pagliassotti据/surname> m据/given-names>

代谢和糖尿病科据/addr-line> 临床与实验医学研究所据/addr-line> Videnska 1958/9，布拉格4,14021布拉格据/addr-line> 捷克共和国据/country>

2012年据/year>

17.据/day> 10.据/month> 2012年据/year>

2012年据/volume> 17.据/day> 07.据/month> 2012年据/year> 14.据/day> 09.据/month> 2012年据/year> 20.据/day> 09.据/month> 2012年据/year>

这是在Creative Commons归因许可下分发的开放式访问文章，其允许在任何介质中不受限制地使用，分发和再现，只要正确引用了原始工作。据/license-p>

目的据/italic>．为了确定两种不同饮食（高蔗糖（HS）和高脂（HF））对潜在的代谢途径的影响，可能导致脂肪变性的发育：（1）肝溶酶体和肝素可释放的脂肪酶的活性;（2）脂肪酸（FFA）氧化;（3）FFA合成据italic> 德诺维据/italic>;（4）VLDL输出据italic> 体内据/italic>在代谢综合征（Mets）的大鼠模型中，遗传性高钙化血症（HHTG）大鼠喂养HS或HF饮食。据italic> 结果据/italic>．两种饮食导致肝脏（HF> HS）中的三酰基甘油（标签）积累。两组中，通过溶酶体脂肪酶的细胞内标签脂肪分解，并与肝标签含量正相关。饮食型在使用代谢途径中的饮食型细胞内标签衍生的脂肪酸分配，因为HS喂养vldl分泌和下调的FFA氧化，而HF饮食完全相反。FFA.据italic> 德诺维据/italic>在HS组（FED»捕获）中，在HF组完全消除的同时显着增强葡萄糖的合成。据italic> 结论据/italic>．我们发现，在大鼠容易发生Mets相关疾病的发展膳食诱导的脂肪变性不仅仅是损害标签降解的结果，而且取决于根据饮食组合物的其他机制（升高的FFA合成或减毒VLDL分泌）。据/p> 1.介绍据/title> <p>代谢综合征（METS）也称为胰岛素抵抗综合征的特征是心细镜耐性危险症的组合，包括胰岛素抵抗，葡萄糖不耐受，血脂血症，非酒精性脂肪肝病和高血压[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B1"> 1据/xref>]与2型糖尿病发展的显着增加有关[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B2"> 2据/xref>]肝脏部分易受异位脂肪堆积的影响，异位脂肪堆积是代谢综合征最重要的病因之一，非酒精性脂肪肝（NAFLD）目前被认为是代谢综合征的肝脏表现。据/p> <p>肝脂肪变性源于TAG获取和清除的不平衡。对肝甘油三酯积累的传统解释是肥胖和胰岛素抵抗导致脂肪细胞释放FFA增加。脂肪细胞质量增加，甘油三酯水解增加，这是通过激素敏感型脂肪酸的活性增强实现的脂肪酶有助于血浆FFA水平的升高。到目前为止，尚未描述FFA转运到肝细胞的具体调节，因此认为肝脏FFA摄取率受枪调节，因此与血浆FFA浓度成正比。尽管如此，Kalopissis和她的同事进行了详细的研究工作人员发现，在脂肪喂养的大鼠中，细胞对据sup>14.据/sup>通过肝细胞进行C-酸酯据italic> 在体外据/italic>尽管肝脏中有重大标签积累，但减少了。定性地在不同代谢背景（Wistar，Zucker Lean，Zucker肥胖）上观察到这种现象，并且仅在其表现的范围内不同[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B3"> 3.据/xref>-据XR.ef ref-type="bibr" rid="B5"> 5.据/xref>］.这些观察结果表明的肝甘油三酯含量的调节不仅是单独血浆FFA输送的功能，但是，其它肝内机制（即，胞内TAG击穿的调节，氧化和酯化之间的FFA的划分，据italic> 德诺维据/italic>脂肪酸合成，标签分泌调控）确定脂肪变性发展。据/p> <p>毫无疑问，膳食因素是NAFLD表型的重要贡献者之一，膳食推荐是当前健康促进趋势的重要工具。从这个观点来看，详细了解不同饮食对肝标签代谢的代谢途径网络的影响基本上是必要的。应特别注意膳食组成与特定遗传/代谢背景的相互作用。据/p> <p>遗传性高钙化血症（HHTG）大鼠，我们的研究主题显示大多数METS症状，包括高甘油脂血症，葡萄糖耐量受损，高胰岛素血症，胰岛素抵抗力和增加的血压（参见在DOI提供的补充材料S1：10.1155 / 2012/757205）.这种表型也表现为甚至没有营养刺激，但高蔗糖喂养进一步加剧了这些症状[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B6"> 6.据/xref>］.本研究的目的是确定两种不同的饮食（高蔗糖和高脂）对潜在的代谢途径的影响，专门对遗传背景有贡献的脂肪变性，特别容易发生糖尿病症状的发作．我们专注于以下代谢过程：（1）调节肝脏（Lipa; EC3.1.1.13）和肝素可释放（HL; EC 3.1.1.3）脂肪酶的肝脏的肝脏细胞内标签降解的机制;（2）将释放的FFA分区氧化和分泌物之间的标签;（3）在FFA上据italic> 德诺维据/italic>合成。据/p> </sec> <sec id="sec2"> <title>2.材料和方法据/title> <sec id="sec2.1"> <title>2.1。动物和实验方案据/title> <p>雄性遗传性高甘油三酯大鼠(HHTg)被置于温控室内，光照周期为12:12-h，暗期为下午6点至早上6点。动物可以自由饮水和饮食，除非另有说明。HHTg大鼠品系原选自本实验室Wistar品系大鼠[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B7"> 7.据/xref>］.所有实验均按照捷克共和国动物保护法311/1997进行，该法律符合欧洲共同体理事会关于使用实验动物的建议86/609/ECC，并得到临床和实验医学研究所伦理委员会的批准。据/p> <p>从3个月开始（b。wt。据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M1"> <mml:mn> 281据/mml:mn> <mml:mo> ±据/mml:mo> <mml:mn> 3.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula> g), all animals were fed either a high sucrose diet (HS: 70 cal% as sucrose; 20 cal% as protein, 10 cal % as carbohydrate), a high-fat diet (HF: 70 cal% as saturated fat, 20 cal% as protein, 10 cal % as carbohydrate) or a standard laboratory chow diet (SD) for 4 weeks. All diets were isocaloric. (see Supplementary Material S2). Groups designed as “fed” had free access to the diet until termination and the groups designed as “fasted” were food deprived for the last 24 hours.据/p> </sec> <sec id="sec2.2"> <title>2.2。<BOLD>测定肝脏葡萄糖中脂肪酸合成DE NOVO <ITALIC>体外> </ BOLD>据/title> <p>禁食或喂食的大鼠在上午9-10点被安乐死，它们的肝脏切片(大约为。1毫米厚度,据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M2"> <mml:mn> 150.据/mml:mn> <mml:mo> ±据/mml:mo> <mml:mn> 25.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula> mg) were rapidly dissected. The tissues were incubated for 2 hours in a Krebs-Ringer bicarbonate buffer supplemented with 5 mmol/L unlabelled “cold” glucose, D-[U-据sup>14.据/sup>C-]葡萄糖（比活性20 据italic> μ.据/italic>CI / mmol）和2％牛血清白蛋白，气相95％O据sub>2据/sub>和5％的co据sub>2据/sub>．使用摇动水浴在密封的小瓶中在37℃下进行所有孵育。估计据sup>14.据/sup>如前所述进行C-葡萄糖掺入总脂质含量[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B8"> 8.据/xref>］.简而言之，肝切片从温育培养基中取出，在生理溶液中，并立即放入CH据sub>3.据/sub>CL。使用Teflon杵均化器溶解组织块，加入甲醇（CH据sub>3.据/sub>Cl：甲醇2：1）和脂质根据Folcch等人在4℃下萃取过夜。[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B9"> 9.据/xref>］.第二天除去残留组织和澄清的提取物吸收用于进一步分析。将等分试样蒸发，重新溶于闪烁液和它的放射性通过闪烁计数测量。据/p> <p>为了将葡萄糖（甘油与酰基部分）掺入中性脂质的葡萄糖（甘油与酰基部分）中，在70℃下在乙醇15％氢氧化钾中蒸发并皂化的澄清提取物。通过加入5.4米H终止皂化据sub>2据/sub>所以据sub>4.据/sub>．冷却至室温后，将释放的脂肪酸反复萃取到石油醚中。蒸发汇集的石油醚级分，在闪烁液中重构，通过闪烁计数测量放射性。掺入甘油残基中的放射性量被计算为掺入中性脂质的总活性的差异和相同等分等分试样的石油醚部分。据/p> </sec> <sec id="sec2.3"> <title>2.3.体外测定肝切片中细胞内TAG衍生脂肪酸的代谢据/title> <p>细胞质标签的标记据italic> 体内据/italic>如Francone等人所述进行。[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B10"> 10.据/xref>］.大鼠静脉注射20 据italic> μ.据/italic>CI.据sup>14.据/sup>C-棕榈酸络合至4％白蛋白轻度乙醚麻醉下。这animals were euthanised 90 min later and the preparation of liver slices was carried out as described above. For determination of据sup>14.据/sup>C-棕榈酸氧化与CO据sub>2，据/sub>实验在带有中心孔的玻璃瓶中进行。用橡胶塞盖住小瓶，并通过添加0.5%终止反应 0.5毫升 M H据sub>2据/sub>所以据sub>4.据/sub>虽然用Hyamine氢氧化物浸泡的滤纸条被添加到中央井中进行收集据sup>14.据/sup>CO.据sub>2据/sub>.TCA（三羧酸循环）中间物含量是在150分钟内通过UltraTurax（德国施陶芬IKA Worke）均化后在孵育的肝切片中测量的根据Kawamura和Kishimoto的说法，将匀浆提取到石油醚中，通过闪烁计数法对水部分中剩余的放射性进行计数[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B11"> 11.据/xref>]该馏分表示主要是TCA循环中间体（> 80％）和次要部分是从FFA经由TCA循环（<20％）衍生的氨基酸。这据sup>14.据/sup>在孵育培养基的叶绿蓟提取物中测定C-棕榈酸掺入分泌标签中。转换据sup>14.据/sup>根据叶绿素提取后孵育介质的含水分数中的放射性评估，根据孵化介质的水分水分中的放射性评估C-棕榈酸进入分泌的水溶性氧化产物（即，主要是酮体）。据/p> </sec> <sec id="sec2.4"> <title>2.4。脂肪酶测定：外源基质据/title> <p>从新鲜组织中提取2%的匀浆或亚细胞馏分，测定脂肪酶活性。将0.5 g肝脏匀浆于2.5 mL匀浆缓冲液中(0.25 M蔗糖;0.001 EDTA据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M3"> <mml:mtext> ph据/mml:mtext> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 7.4据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>;肝素7 IU / ml）在Teflon杵均化器上。匀浆通过尼龙网，简单地离心以除去粗杂质（800g，5分钟，4℃）并在冰上保持直至进行脂肪酶测定（最大1小时）。通过以10 000g离心15分钟，得到亚细胞级分。据/p> <p>除了使用的缓冲液之外，制备酸或碱性脂肪酶测定的反应介质。据sup>3.据/sup>在甲酚中加入88毫克（100 据italic> μ.据/italic>在氮气流下蒸发冷硅藻土和溶剂。用150mM NaCl和0.05％Triton X-100溶解在4ml 0.1M缓冲液（醋酸盐缓冲液pH = 9.5）中溶于4ml 0.1M缓冲液（醋酸盐缓冲液pH = 9.5）中。将整个混合物乳化在Hielle Sunicator Up200s上，连续3分钟冰/水浴上的振幅1。40 据italic> μ.据/italic>将匀浆或亚细胞级分在30℃下孵育60分钟，160 据italic> μ.据/italic>L振荡水浴中的反应介质。在反应终止后，根据Belfrage和Vaughan提取释放的脂肪酸[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B12"> 12.据/xref>]并计数放射性。据/p> </sec> <sec id="sec2.5"> <title>2.5。脂肪酶测定：内源性基质据/title> <p>这种方法利用溶酶体脂肪酶和细胞内基质的细胞内定位的协调变化。如上所述制备肝匀浆和亚细胞级分，以防止溶酶体破坏的异渗透性条件。仅在测定期间分数分离后诱导溶酶体的裂解。将20％匀浆混合1：1，乙酸0.2M乙酸盐缓冲液据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M4"> <mml:mtext> ph据/mml:mtext> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 4．5据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>并在30℃下在摇动水浴中孵育60分钟。将反应混合物萃取到氯仿 - 甲醇 - 甲醇中，并分离相1M NaCl。蒸发叶绿素相的等分试样，100 据italic> μ.据/italic>L krebs-ringer磷酸盐缓冲液据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M5"> <mml:mo stretchy="false"> （据/mml:mo> <mml:mtext> ph据/mml:mtext> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 7.6据/mml:mn> <mml:mo stretchy="false"> ）据/mml:mo> </mml:math> </inline-formula>含有6％的溶液中加入FFA无BSA。将管在摇动培养箱中于37℃温育2小时。在最终KRF / BSA溶液FFA浓度使用市售的试剂盒进行测定。为了检查FFA溶解的效率清空管液用新鲜KRB + 6％BSA，然后100 据italic> μ.据/italic>加入L的叶绿素。用薄层色谱法分离，未检出游离脂肪酸。据/p> </sec> <sec id="sec2.6"> <title>2.6。标签入口率的测定成等离子体据/title> <p>根据Otway和Robinson估计标签入门率估计了流通量[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B13"> 13.据/xref>］.简而言之，大鼠终止24小时，然后通过尾静脉在光醚麻醉下静脉内静脉内静脉内给出1ml 10％Triton WR-1339，在0.9％NaCl或0.9％NaCl中。Triton WR-1339是烷芳基聚醚阴离子洗涤剂，其阻断血管内D <1.006g / ml脂蛋白的去除。通过主动脉刺穿通过放气以通过放血穿刺在接受Triton或0.9％NaCl后90分钟处死动物。已经证明，在静脉注射WR 1339之后，血浆中甘油三酯的浓度为3小时，因此在施加后90分钟在线性范围内的时间点。从下式计算甘油三酯入口（分泌）进入血浆的速率：据/p> <p>TAG进入率（据italic> μ.据/italic>摩尔。100 g b。wt。据sup>-1据/sup>．人力资源据sup>-1据/sup>)=[（T据sub>90.据/sub>- T的据sub>0.据/sub>）/1.5]×v×（w / 100），其中t据sub>0.据/sub>是血浆浓度TAG（据italic> μ.据/italic>Triton管理前的Mol / ml），T据sub>90.据/sub>是血浆浓度TAG（据italic> μ.据/italic>Mol / ml）在研究结束时，V是等离子体体积（ml），W是体重。等离子体体积确定为3.86ml / 100g体WT [据XR.ef ref-type="bibr" rid="B14"> 14.据/xref>］.据/p> </sec> <sec id="sec2.7"> <title>2.7。组织中的甘油三酯含量据/title> <p>将脂质从1mL H中均化的1g新鲜组织中提取。据sub>2据/sub>O. 0.2 mL匀浆用15 mL 2:1氯仿:甲醇萃取24小时。通过加入6 mL KH将有机相和水相分离据sub>2据/sub>宝据sub>4.据/sub>并以3000rpm离心20分钟。将1ml有机相完全干燥，重悬于100 据italic> μ.据/italic>L的异丙醇和10据italic> μ.据/italic>L的用于分析。使用市售的试剂盒（普利瓦-Lachema诊断，捷克共和国）测定在该等分试样中的甘油三酯浓度。据/p> </sec> <sec id="sec2.8"> <title>2.8。生物化学分析据/title> <p>壬酸化脂肪酸，胰岛素，甘油三酯和葡萄糖血清含量和据italic> β据/italic>-羟基丁酸的测定使用市售试剂盒(FFA: FFA half microtest, Roche Diagnostics, GmbH Germany;甘油三酯:捷克Pliva-Lachema诊断公司;葡萄糖:捷克Pliva-Lachema诊断学;胰岛素:Mercodia、瑞典;据italic> β据/italic>-HydroxyButyrate：Ranbut，Randox，英国）。据/p> </sec> <sec id="sec2.9"> <title>2.9.化学品据/title> <p>所有材料都是试剂级。据sup>14.据/sup>C-棕榈酸和据sup>3.据/sup>h -三油烯购自阿姆沙姆，D-[U-据sup>14.据/sup>C-]葡萄糖购自UVVVR，布拉格。FFA自由牛血清白蛋白（分数V）购自Serva，棕榈酸和来自Fluka的Triolein，所有其他化学物质都是从Sigma捷克共和国购买的。据/p> </sec> <sec id="sec2.10"> <title>2.10。统计分析据/title> <p>数据显示为多个测定的平均值±SEM。使用ANOVA和Tukey-KRamer多重比较测试进行统计分析（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M6"> <mml:mrow> <mml:mi> N据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>= 5-7）。在水平的情况下，差异被认为是统计学意义据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M7"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>计算皮尔逊相关系数，以评估脂肪酶活性与肝甘油三酯含量、脂肪酶活性与酮体生成之间的可能关系。据/p> </sec> </sec> <sec id="sec3"> <title>结果据/title> <sec id="sec3.1"> <title>3.1。实验组特征据/title> <p>在前两周内，HS和HF饮食（HF> HS）上的动物的重量迅速升高，然后重量增益的速率显着降低。所有测试的饮食都是异蜂理，HF和HS组体重越快地增加，在饮食给药的前两周内反映了更高的食物摄入量（参见补充材料S3）。在标准饮食上的动物中，这参数甚至在整个实验中（图据XR.ef ref-type="fig" rid="fig1"> 1据/xref>）.在过去两周的饮食施用期间，所有三组的食物摄入量和体重增加的速率相当。与SD组（HF> HS> SD）相比，HS和HF饮食中的最终体重和附睾脂肪垫的重量较高，喂养动物（HF> HS> SD）（表据XR.ef ref-type="table" rid="tab1"> 1据/xref>）.空腹血糖和胰岛素血症只有HF组增加。对血清甘油三酯水平的HS和HF饮食的效果是相对于标准饮食而HF饮食已轻微降血脂作用（进料S-TAG下降30％相对-HS饮食显著增加两者禁食和进食甘油三酯血症，据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M8"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)血清游离脂肪酸含量的变化趋势相似。两种饮食都显著增加了禁食时的酮体生成（HF>HS），但只有HF饮食导致了喂食状态下酮体生成的增加。HS和HF喂养后，禁食动物的肝脏三酰甘油含量分别增加105%和280%。在标准饮食中，喂食和禁食状态下的肝脏三酰甘油含量相同，但在HS组中，喂食状态下的肝脏TAG含量显著低于禁食状态。相反，HF组的趋势相反，禁食动物的肝脏三酰甘油含量实际上高于喂食动物（表1）据XR.ef ref-type="table" rid="tab2"> 2据/xref>）.据/p> <table-wrap id="tab1"> <label>表格1据/label> <p>实验组的特点。据/p> <table> <thead> <tr> <th align="left"></th> <th align="center"></th> <th align="center">pred 据break></break>价值据/th> <th align="center">SD. 据break></break>（晚期饮食）据/th> <th align="center">HS. 据break></break>（晚期饮食）据/th> <th align="center">高频据break></break>（晚期饮食）据/th> <th align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M9"> <mml:mrow> <mml:mi mathvariant="normal"> P.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula> <break></break>HS与SD据/th> <th align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M10"> <mml:mrow> <mml:mi mathvariant="normal"> P.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula> <break></break>HF与SD据/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">体重（g）据/td> <td align="center"></td> <td align="center">281 ± 3据/td> <td align="center">311±4 ***据/td> <td align="center">335±15 ***据/td> <td align="center">364±10 ***据/td> <td align="center"><0.05据/td> <td align="center"><0.001据/td> </tr> <tr> <td align="left">附睾脂肪（g）据/td> <td align="center"></td> <td align="center">-据/td> <td align="center">2.8±0.2据/td> <td align="center">3.8±0.3 *据/td> <td align="center">5.5±0.5 ***据/td> <td align="center"><0.05据/td> <td align="center"><0.001据/td> </tr> <tr> <td align="left" rowspan="2">S-葡萄糖（MMOL / L）据/td> <td align="center">禁食据/td> <td align="center">4.5±0.2据/td> <td align="center">4.6±0.1据/td> <td align="center">4.5±0.05据/td> <td align="center">5.4±0.05 *据/td> <td align="center">N.S.据/td> <td align="center"><0.05据/td> </tr> <tr> <td align="center">美联储据/td> <td align="center">6.2±0.2据/td> <td align="center">6±0.1据/td> <td align="center">11.4±0.1 ***据/td> <td align="center">7.6±0.4 *据/td> <td align="center"><0.001据/td> <td align="center"><0.05据/td> </tr> <tr> <td align="left" rowspan="2">S-胰岛素（PMOL / L）据/td> <td align="center">禁食据/td> <td align="center">126±18据/td> <td align="center">135±21据/td> <td align="center">155±12.据/td> <td align="center">204±20 *据/td> <td align="center">N.S.据/td> <td align="center"><0.05据/td> </tr> <tr> <td align="center">美联储据/td> <td align="center">155±20.据/td> <td align="center">158±15.据/td> <td align="center">342±29 ***据/td> <td align="center">127±18据/td> <td align="center"><0.001据/td> <td align="center">N.S.据/td> </tr> <tr> <td align="left" rowspan="2">s-tag（mmol / l）据/td> <td align="center">禁食据/td> <td align="center">1.3±0.25据/td> <td align="center">1.5±0.3据/td> <td align="center">4.9±0.5 ***据/td> <td align="center">1.4±0.3据/td> <td align="center"><0.001据/td> <td align="center">N.S.据/td> </tr> <tr> <td align="center">美联储据/td> <td align="center">2±0.4据/td> <td align="center">2.4±0.2据/td> <td align="center">7.2 ± 0.4***据/td> <td align="center">1.8±0.2据/td> <td align="center"><0.001据/td> <td align="center"><0.05据/td> </tr> <tr> <td align="left" rowspan="2">S-FFA（毫摩尔/ L）据/td> <td align="center">禁食据/td> <td align="center">0.65±0.03据/td> <td align="center">0.7±0.05据/td> <td align="center">1 ± 0.09*据/td> <td align="center">0.6±0.08据/td> <td align="center"><0.05据/td> <td align="center">N.S.据/td> </tr> <tr> <td align="center">美联储据/td> <td align="center">0.38±0.02据/td> <td align="center">0.4±0.02据/td> <td align="center">1.3±0.1 ***据/td> <td align="center">0.45±0.07据/td> <td align="center"><0.001据/td> <td align="center">N.S.据/td> </tr> <tr> <td align="left" rowspan="2">S-据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M11"> <mml:mrow> <mml:mi> β据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>羟基丁酸据break></break>（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M12"> <mml:mrow> <mml:mi> μ.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>mol / l）据/td> <td align="center">禁食据/td> <td align="center">1.2±0.04据/td> <td align="center">1.3±0.05据/td> <td align="center">2.2±0.14 **据/td> <td align="center">3.8±0.2 ***据/td> <td align="center"><0.01据/td> <td align="center"><0.001据/td> </tr> <tr> <td align="center">美联储据/td> <td align="center">0.02±0.01据/td> <td align="center">0.02±0.01据/td> <td align="center">0.03±0.02据/td> <td align="center">0.45±0.05 ***据/td> <td align="center">N.S.据/td> <td align="center"><0.001据/td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p>数据作为平均值±SEM给出，据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M13"> <mml:mi> N据/mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 6.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>．＊据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M14"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>，**据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M15"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.01据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>，***据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M16"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>在饮食之后的比例前。据/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> <table-wrap id="tab2"> <label>表2据/label> <p>肝脏甘油三酯含量。据/p> <table> <thead> <tr> <th align="left">饮食据/th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">SD.据/td> <td align="center">3.7±0.3据/td> <td align="center">3.7±0.2据/td> </tr> <tr> <td align="left">HS.据/td> <td align="center">7.6±0.6 **据/td> <td align="center">4.8±0.2据sup>†据/sup></td> </tr> <tr> <td align="left">高频据/td> <td align="center">14±1.1据sup>###据/sup></td> <td align="center">20.8±2.3据sup>XXX.据/sup></td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p>提供数据据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M17"> <mml:mrow> <mml:mi> μ.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>摩尔·克据sup>-1据/sup>湿重，表示为平均值±SEM，据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M18"> <mml:mi> N据/mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 6.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>．据/p> </fn> <fn> <p>**据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M19"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.01据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HS禁食与SD禁食;据sup>†据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M20"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>喂养的HS与SD喂养;据sup>###据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M21"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF禁食与SD禁食;据sup>XXX.据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M22"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF供给与SD馈。据/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> <fig id="fig1"> <label>图1据/label> <p>SD，HSD或HFD大鼠体重的演变。从进料期开始到第4周结束时每周测量体重三次。平均值±S.E.代表每组中获得的。* SD和HSD之间的显着差异据italic> P.据/italic><0.05以上;据sup>＃据/sup>SD和HSD之间的显着差异据italic> P.据/italic><0.05或更少。据/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.001"></graphic> </fig> <p></p> <p></p> </sec> <sec id="sec3.2"> <title>３．２．<bold>FFA Synthesis <italic>De Novo</italic></bold>据/title> <p>与SD组相比，喂食HS和HF饮食的大鼠肝脏含有更多甘油三酯。为了评估贡献据italic> 德诺维据/italic>从葡萄糖到升高标签含量的FFA合成，我们孵育从肝脏孵育的大鼠肝脏喂食每个特定饮食的存在据sup>14.据/sup>C标记的葡萄糖没有外源FFA和测量的葡萄糖掺入到总脂质，进TAG分子（即，葡萄糖酯化）的甘油部分和成TAG分子的（酰基部分即FFA合成据italic> 德诺维据/italic>）.如图所示据XR.ef ref-type="fig" rid="fig2"> 2据/xref>，FFA据italic> 德诺维据/italic>在HS组（FED»键）在HF组中完全根除时，合成在HS组中显着增强。据/p> <fig id="fig2"> <label>图2据/label> <p>葡萄糖掺入率肝片脂类据italic> 在体外据/italic>．葡萄糖的酯化的利用率和据italic> 德诺维据/italic>脂肪酸的合成与总脂质中葡萄糖的掺入在同一样品中测定（见第节）据XR.ef ref-type="sec" rid="sec2"> 2据/xref>).开放栏=禁食动物；封闭栏=喂食动物。所有数据均为平均值，据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M23"> <mml:mi> N据/mml:mi> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 6.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>每个酒吧的个人孵化。***据italic> P.据/italic><0.001 Hs-禁食与SD禁食;据sup>††据/sup> <italic> P.据/italic><0.01，据sup>†††据/sup> <italic> P.据/italic><0.001 HS-Fed与SD喂养;据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M24"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mtext> X据/mml:mtext> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula> <italic> P.据/italic><0.05 HF喂养的对SD-送入。据/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.002"></graphic> </fig> </sec> <sec id="sec3.3"> <title>3．3.<bold>细胞内tag衍生脂肪酸在肝切片中的应用<italic> in Vitro</italic></bold>据/title> <p>为了估算从细胞内肝标签衍生的FFA的可访问性进行进一步代谢利用，我们通过注射造成的细胞溶质标签据sup>14.据/sup>C-棕榈酸据italic> 体内据/italic>并测量放射性掺入TCA中间体，CO据sub>2据/sub>肝脏切片中酮体（FFA氧化）和TAG分泌到培养基（VLDL分泌）中据italic> 在体外据/italic>90分钟后。如Francone等人报道。[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B15"> 15.据/xref>]，在放射性施用到静脉血后90分钟内发现近90％的放射性标签在细胞溶质标签中发现了90分钟，因此我们预计在该实验环境下，掺入氧化产物或VLDL中的大多数FFA必须从细胞内标签释放通过脂解。在SD喂养动物中，与来自禁食的动物制备的肝脏切片中，氧化和VLDL产生较低。HSD的给药导致TCA中间体和CO的显着衰减据sub>2据/sub>生产但禁食的keetogenesis在这个群体中有点突出（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M25"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>）与SD喂养动物相比。在HS喂养大鼠中的标签分泌显着高于另外两组，并且消除了折叠依赖性调节。在HFD组的肝脏切片中，我们没有发现饮食对TCA中间体和CO的任何影响据sub>2据/sub>生产，但在酮体生成在空腹被显著升高和喂养的动物（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M26"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>）.相比之下，将标签分泌到培养基中显着降低（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M27"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>）.总之，这些数据表明，饮食类型不深刻地影响FFA的总可用性代谢利用率，但它而影响氧化和极低密度脂蛋白的分泌之间的分区（表据XR.ef ref-type="table" rid="tab3"> 3.据/xref>）.据/p> <table-wrap id="tab3"> <label>表3据/label> <p>掺入细胞内标签衍生的据sup>14.据/sup>C棕榈酸进入CO据sub>2据/sub>，TCA中间体，分泌据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M28"> <mml:mrow> <mml:mi> β据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>- 羟基丁酸盐和分泌的肝切片分泌的三酰基甘油据italic> 在体外据/italic>．据/p> <table> <thead> <tr> <th align="left"></th> <th align="center" colspan="2">SD.据/th> <th align="center" colspan="2">HS.据/th> <th align="center" colspan="2">高频据/th> </tr> <tr> <th align="left"></th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">CO.据sub>2据/sub>（发布）据/td> <td align="center">16±1.2据/td> <td align="center">11.9±1据/td> <td align="center">11±1.5 *据/td> <td align="center">8.3±0.3据sup>†据/sup></td> <td align="center">15 ± 0.7据/td> <td align="center">9.8±0.8据/td> </tr> <tr> <td align="left">TCA中间体（细胞内）据/td> <td align="center">55.3±1.6据/td> <td align="center">41±3.4据/td> <td align="center">46.6±1.8 **据/td> <td align="center">25.7 ± 1.5据sup>†††据/sup></td> <td align="center">54.2±4.2据/td> <td align="center">40.3±1据/td> </tr> <tr> <td align="left"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M29"> <mml:mrow> <mml:mi> β据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>- 羟基丁酸盐（分泌）据/td> <td align="center">269±9.据/td> <td align="center">204±8.据/td> <td align="center">380±18 **据/td> <td align="center">178±15据/td> <td align="center">452±22.据sup>###据/sup></td> <td align="center">480±11.据sup>XXX.据/sup></td> </tr> <tr> <td align="left">TAG（分泌）据/td> <td align="center">581±35.据/td> <td align="center">401±44.据/td> <td align="center">713±29 **据/td> <td align="center">825±29.据sup>†††据/sup></td> <td align="center">314±16.据sup>###据/sup></td> <td align="center">286±35据sup>XX.据/sup></td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p>数据在每G组织中的Nmol棕榈酸中表达，并给出平均值±SEM据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M30"> <mml:mi> N据/mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 6.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>．＊据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M31"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>，**据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M32"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.01据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HS禁食与SD禁食;据sup>†据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M33"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>那据sup>†††据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M34"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>喂养的HS与SD喂养;据sup>###据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M35"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF禁食与SD禁食;据sup>XX.据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M36"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.01据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>那据sup>XXX.据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M37"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF供给与SD馈。据/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> <p></p> </sec> <sec id="sec3.4"> <title>3.4。碱性和酸性脂肪酶的活性据/title> <p>如上所述，细胞内标签降低据italic> 体内据/italic>在HS和HF施用动物的肝脏中。为了更详细地分析饮食对饮食对肝脏脂肪分解的影响，我们将两种肝脂肪酶的活性直接测量在外源基质上。在肝脏匀浆中，我们能够证明具有最佳pH 4.5和8-9的两个不同的脂肪酶。酸性脂肪酶可以鉴定为“溶酶体”（EC 3.1.1.13），而碱性被称为“肝脏”（EC 3.1.1.3）。这两种酶在细胞内分布和调节中不同，并且通过给药的饮食受到不同的影响。饮食对匀浆中脂肪酶活性的影响如图所示据XR.ef ref-type="fig" rid="fig3a"> 3(一个)据/xref>（Lysomal）和据XR.ef ref-type="fig" rid="fig3b"> 3 (b)据/xref>（肝）。在标准饮食，溶酶体酶的活性是在空腹更高，餐后郁闷，而肝脂酶活性没有美联储和禁食动物之间的不同。两种饮食增加溶酶体活性脂肪酶，但由不同的量。在HS饮食，溶酶体脂肪酶活性增加空腹，但在进食状态下保持不变。在溶酶体脂肪酶活性的HF饮食的刺激作用是显著较高，发现无论是在空腹和进食状态。由于禁食的规定被保存在喂食HS饮食的大鼠，但它的HF组中彻底根除。肝脂酶回应了测试的饮食控制不同。HS饮食无论是在空腹和餐后而导致其活性的显著下降的HF饮食增加了这种酶的活性。据/p> <fig-group id="fig3"> <p>溶酶体（a）和肝（B）的脂肪酶的肝匀浆从人工基质FFA释放测量的活性（据sup>3.据/sup>H-Triolein）。测量脂肪酶活性作为脂肪酸的释放据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M38"> <mml:mtext> ph据/mml:mtext> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 4．5据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>从据sup>3.据/sup>H三油精。开放的酒吧=被禁食的动物;关闭酒吧=喂动物。据sup>‡据/sup> <italic> P.据/italic><喂食vs禁食;＊据italic> P.据/italic><0.05 Hs-禁食与SD禁食;据sup>###据/sup> <italic> P.据/italic><0.001 HF禁食与SD禁食;据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M39"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mtext> XXX.据/mml:mtext> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula> <italic> P.据/italic><0.001 HF喂养的对SD-送入。据/p> <fig id="fig3a"> <label>（一种）据/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.003a"></graphic> </fig> <fig id="fig3b"> <label>（b）据/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.003b"></graphic> </fig> </fig-group> <p>肝脏匀浆10 000g的离心使我们能够将含有致密溶酶体（颗粒）的级分和含有胞质溶胶，总膜和光溶酶体（上清液）的馏分分离。在标准饮食中，大多数溶酶体脂肪酶活性（85％）在10 000g颗粒中定位，而大多数肝脂肪酶活性（禁食70％;喂食77％）被发现在10 000g上清液中。HS和HF饮食既不会影响肝脂肪酶的亚细胞分布，约。在所有实验设置中，在10 000g上清液中发现了75％的活性。就溶酶体脂肪酶而言，HF饮食将其活性的大部分重新分布到10 000g上清液中（表据XR.ef ref-type="table" rid="tab4"> 4.据/xref>）.该数据表明，在总活动以及细胞内定位方面，溶酶体脂肪酶受到HF饮食的显着影响。据/p> <table-wrap id="tab4"> <label>表4据/label> <p>肝脏脂肪酶活性的细胞内分布。据/p> <table> <thead> <tr> <th align="left"></th> <th align="center" colspan="4">溶酶体酶据/th> <th align="center" colspan="4">肝脂酶据/th> </tr> <tr> <th align="left">饮食据/th> <th align="center" colspan="2">10 000克沉积物据/th> <th align="center" colspan="2">10 000 g上清液据/th> <th align="center" colspan="2">10 000克沉积物据/th> <th align="center" colspan="2">10 000 g上清液据/th> </tr> <tr> <th align="left"></th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> <th align="center">禁食据/th> <th align="center">美联储据/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">SD.据/td> <td align="center">86±9.2据/td> <td align="center">85±2据/td> <td align="center">14±1.5据/td> <td align="center">15±2据/td> <td align="center">30±4据/td> <td align="center">23±2据/td> <td align="center">70±5.据/td> <td align="center">77±9.5据/td> </tr> <tr> <td align="left">HS.据/td> <td align="center">87 ± 6.8据/td> <td align="center">86±7.3据/td> <td align="center">13 ± 0.8据/td> <td align="center">14±3.6据/td> <td align="center">40±8.3据/td> <td align="center">38±7.3据/td> <td align="center">60±8.2.据/td> <td align="center">72±5据/td> </tr> <tr> <td align="left">高频据/td> <td align="center">82±4.据/td> <td align="center">75±3.据sup>XX.据/sup></td> <td align="center">18±2据sup>＃据/sup></td> <td align="center">25±2据sup>XX.据/sup></td> <td align="center">38±5.2据/td> <td align="center">24±3.1据/td> <td align="center">62±4.5据/td> <td align="center">76±7.据/td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p>数据以10000项活动总和的百分比表示 g从肝匀浆制备的沉淀物和上清液，据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M40"> <mml:mi> N据/mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 6.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>．据sup>＃据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M41"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.05据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF禁食与SD禁食;据sup>XX.据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M42"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.01据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF供给与SD馈。据/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> <p></p> <p>在内源性基质上测定溶酶体脂肪酶的活性据italic> 在体外据/italic>与肝三酰基甘油含量呈正相关。美联储中的这种相关性更强大据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M43"> <mml:mo stretchy="false"> （据/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> R.据/mml:mi> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mn> 2据/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi></mml:mi> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 0.97据/mml:mn> <mml:mo stretchy="false"> ）据/mml:mo> </mml:math> </inline-formula>比在空腹状态（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M44"> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> R.据/mml:mi> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mn> 2据/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 0.65据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>）（数字据XR.ef ref-type="fig" rid="fig4"> 4.据/xref>）.我们发现肝三酰基甘油和肝脂肪酶活性之间没有显着相关性（FED：据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M45"> <mml:mo stretchy="false"> （据/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> R.据/mml:mi> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mn> 2据/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> -据/mml:mo> <mml:mn> 0.据/mml:mn> <mml:mo> ．据/mml:mo> <mml:mn> 4.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>;禁食：据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M46"> <mml:mo stretchy="false"> （据/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> R.据/mml:mi> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mn> 2据/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> -据/mml:mo> <mml:mn> 0.据/mml:mn> <mml:mo> ．据/mml:mo> <mml:mn> 35.据/mml:mn> <mml:mo stretchy="false"> ）据/mml:mo> </mml:math> </inline-formula>(数据没有显示)。溶酶体脂肪酶活性与血清呈正相关据italic> β据/italic>禁食中的 - 羟基丁酸盐浓度（据italic> R.据/italic><sup>2据/sup>= 0.81），并馈送据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M47"> <mml:mo stretchy="false"> （据/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> R.据/mml:mi> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mn> 2据/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi></mml:mi> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 0.62据/mml:mn> <mml:mo stretchy="false"> ）据/mml:mo> </mml:math> </inline-formula>州（图据XR.ef ref-type="fig" rid="fig5"> 5.据/xref>）.在溶酶体脂肪酶的情况下，这些正相关表明该酶受细胞内底物的可用性影响，溶酶体脂肪酶作用释放的FFA至少对生酮是可用的。据/p> <fig-group id="fig4"> <p>粘膜体脂肪酶活性与腹腔三酰基甘油含量与捕获（A）和喂养（B）动物的相关性。溶酶体脂肪酶活性被确定为来自内源标签的FFA释放。打开圈= SD禁食;开放方= HS-禁食;打开三角形= HF禁食;封闭圈= SD喂食;闭方= HS-FED;封闭式三角形= HF-Fed。据/p> <fig id="fig4a"> <label>（一种）据/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.004a"></graphic> </fig> <fig id="fig4b"> <label>（b）据/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.004b"></graphic> </fig> </fig-group> <fig-group id="fig5"> <p>溶酶体脂肪酶活性与据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M48"> <mml:mrow> <mml:mi> β据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>血清中的 - 羟基丁酸含量。溶酶体脂肪酶活性被确定为来自内源标签的FFA释放。打开圈= SD禁食;开放方= HS-禁食;打开三角形= HF禁食;封闭圈= SD喂食;闭方= HS-FED;封闭式三角形= HF-Fed。据/p> <fig id="fig5a"> <label>（一种）据/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.005a"></graphic> </fig> <fig id="fig5b"> <label>（b）据/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jnme/2012/757205.fig.005b"></graphic> </fig> </fig-group> </sec> <sec id="sec3.5"> <title>3.5.VLDL生产据/title> <p>VLDL的生产速率据italic> 体内据/italic>使用Triton WR-1339估计。由于其对LPL的抑制作用，这种洗涤剂有效地阻断了血液中的脂蛋白清除，因此在这种情况下，血浆中标签的积累可能是肝脏的VLDL分泌率的有效衡量标准。如表所示据XR.ef ref-type="table" rid="tab5"> 5.据/xref>，在HS组中，标签入门率在HS组中强烈突出，同时在用HF饮食中施用的动物中显着减少。据/p> <table-wrap id="tab5"> <label>表5据/label> <p>HS和HF饮食对标签入学率的影响。据/p> <table> <thead> <tr> <th align="left"></th> <th align="center">SD.据/th> <th align="center">HS.据/th> <th align="center">高频据/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">标签据sub>0.据/sub>（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M49"> <mml:mrow> <mml:mi> μ.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>mol / ml）据/td> <td align="center">3.9±0.2据/td> <td align="center">6.4±0.5据sup>+++据/sup></td> <td align="center">3.0±0.1据sup>••，¶¶¶据/sup></td> </tr> <tr> <td align="left">标签据sub>90.据/sub>（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M50"> <mml:mrow> <mml:mi> μ.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>mol / ml）据/td> <td align="center">7.4±0.4据/td> <td align="center">11.7±0.75据sup>+++据/sup></td> <td align="center">5.2±0.44据sup>••，¶¶¶据/sup></td> </tr> <tr> <td align="left">TAG进入率（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M51"> <mml:mrow> <mml:mi> μ.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>mol·60 min据sup>-1据/sup>·公斤）据/td> <td align="center">11.2±0.7据/td> <td align="center">45.7±6.1据sup>+++据/sup></td> <td align="center">8.2±0.5据sup>••，¶¶¶据/sup></td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p>标签据sub>0.据/sub>：WR 1339给药前的三酰基甘油血清浓度;标签据sub>90.据/sub>：WR 1339给药后血清甘油三酯浓度90分钟。TAG条目率根据下式TAG条目率计算（据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M52"> <mml:mrow> <mml:mi> μ.据/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>摩尔·100 g b。wt。据sup>-1据/sup>·小时据sup>-1据/sup>)=[（T据sub>90.据/sub>-T.据sub>0.据/sub>）/1.5]×v×（w / 100）。数据给出了平均值±s...m.据inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M53"> <mml:mi> N据/mml:mi> <mml:mo> =据/mml:mo> <mml:mn> 6.据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>．据sup>+++据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M54"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HS与SD;据sup>###据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M55"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF禁食与SD禁食;据sup>••据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M56"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.01据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>HF与SD;据sup>¶¶¶据/sup> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M57"> <mml:mi> P.据/mml:mi> <mml:mo> 据据/mml:mo> <mml:mn> 0.001据/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>高频和海关。据/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> <p></p> </sec> </sec> <sec id="sec4"> <title>4。讨论据/title> <p>本研究的目的是有助于了解不同代谢途径在代谢综合征模型中由两种不同膳食操纵（HS和HF饮食）引起的肝脏脂肪变性的发挥作用。富含简单碳水化合物或脂肪的饮食迅速促进肝脏中的标签积聚。有人提出，脂肪变性的发展与细胞内标签水解的衰减有关。与此假设相比，我们的数据表明，脂肪解压缩，细胞内标签利用的第一步并不受HS或HF饮食的负面影响。我们表明，涉及细胞内标签降解的重要酶是溶酶体脂肪酶。此外，我们提供了证据表明，饮食诱导的肝脏脂肪变性的机制取决于饮食的常年组分。HS饮食诱导的脂肪变性与FFA合成的显着刺激有关据italic> 德诺维据/italic>，减少FFA氧化和来自肝脏的增强VLDL输出。相比之下，HF饮食相关的脂肪变性是下调的FFA合成特征据italic> 德诺维，据/italic>增加FFA氧化和VLDL输出显着受损。据/p> <p>尽管几十年来致力于在肝脏共识TAG代谢的研究仍没有特别的脂肪酶在细胞内降解TAG确切贡献的鉴定达到。在我们的研究中，我们侧重于目前在最适pH 8-9和酸溶酶体酶具有最佳pH值4.5肝肝素释放肝脂酶两种脂肪酶。在肝匀浆肝脂酶的活性增加了HS饮食，而是由HF进郁闷。肝脂酶似乎是由慢性高胰岛素血症诱发[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B16"> 16.据/xref>]这也与高糖有关。大量研究表明，胰岛素抵抗状态下肝脏脂肪酶的表达和活性增加，主要伴随内脏肥胖[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B17"> 17.据/xref>］.然而，归因于肝脂肪酶的大多数活动归因于肝细胞，即，促进LDL和残余乳糜微粒与LRP受体或参与HDL代谢的相互作用[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B18"> 18.据/xref>-据XR.ef ref-type="bibr" rid="B21"> 21.据/xref>］.此外，我们之前报道说，碱性脂肪酶不能降解肝脏匀浆中的内源标签，并且在酸性范围内发现唯一的脂肪溶解活性在酸性范围内据XR.ef ref-type="bibr" rid="B22"> 22.据/xref>]从这些发现来看，肝脏脂肪酶可能不参与内源性三酰甘油的动员。据/p> <p>溶酶体脂肪酶，首先由Vavřínková和Mosinger描述[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B23"> 23.据/xref>]，在溶酶体中局部化，其活性在生理条件下禁食升高[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B24"> 24.据/xref>］.在我们的实验中，这种调节模式仅在标准和HS饮食上的HHTG大鼠中保存，但通过HF饲料完全消除。HF和HS饮食均对溶酶体脂肪酶的活性具有刺激作用，但HF饮食的效果显着高于富含蔗糖的饮食的作用。HF饲养导致将部分溶酶体脂肪酶活性的易位以粒料中发现的活性以牺牲活性为上清液（高达25％）。该观察结果符合肝细胞中最近提出的溶酶体依赖标签降解机制[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B25"> 25.据/xref>那据XR.ef ref-type="bibr" rid="B26"> 26.据/xref>］.根据这一假设，脂滴通过自噬的过程被纳入到自噬(脂)溶酶体中，类似于胞质蛋白或受损细胞器的自噬。溶酶体活性从10 000 g颗粒转移到上清，因此可能反映了含TAG的低密度自噬多聚体的形成[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B27"> 27.据/xref>］.我们进一步发现酸性脂肪酶活性和肝脏匀浆标签含量之间的强正相关性。总之，这些数据表明标签劣化实际上在脂肪变性中增强，并且它由溶酶体脂肪酶介导。据/p> <p>相较于先前公布的假设，我们基于酸性脂肪酶活性的直接测量结果表明，肝内脂肪的积累不是受损动员细胞内甘油三酯店的后果。尽管这样，我们发现溶酶体脂肪酶活性和内源性甘油三酯（生酮作用）即使在这意味着所存储的甘油三酯是至少对某些代谢途径可访问的HF喂食组的氧化之间的正相关。由于肝细胞对细胞内分解甘油三酯的能力在两个饮食组实际募集的另一个因素必须解释HS对肝脏和循环甘油三酯积聚的不同影响和HF饮食。据/p> <p>有关饮食成分（碳水化合物与脂肪）对肝标签代谢作用的影响的广泛文献可用。有一个公平的共识，即富含碳水化合物的饮食和脂肪结果低，血清标签水平升高，增加了VLDL生产率，每次粒子的标签量的升高和碳水化合物/脂肪酸氧化的衰减[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B28"> 28.据/xref>-据XR.ef ref-type="bibr" rid="B32"> 32.据/xref>］.然而，对高碳水化合物摄入的敏感性是高度可变的。进行许多研究以鉴定可用于预测对碳水化合物喂养的敏感性的主题特征。性别如性别，标签浓度在HF饮食中，BMI和胰岛素浓度已经可变地显示单独预测饮食的效果，并且没有单一变量具有显着的预测值。对比，对比的效果非常显着已经证明了碳水化合物，与多糖相比，黑麦梭酶的效果远高得多，并且这种效果在异常和正常甘油血症科目中相似[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B33"> 33.据/xref>].在我们实验室进行的先前研究表明，HHTg大鼠对HS饮食更为敏感，但该饮食对TAG代谢的影响在HHTg和其正常甘油三酯对照组中基本相似，尽管其程度不同[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B34"> 34.据/xref>那据XR.ef ref-type="bibr" rid="B35"> 35.据/xref>］.据/p> <p>关于高脂肪饮食肝标签代谢的影响，特别是对VLDL分泌，更多样化。若干详细研究专注于这个问题并对精益和肥胖Zucker大鼠进行了90年代的Kalopissis Group。他们证明，以前的HF饲料（60克拉％作为脂肪，猪油）的初级肝细胞降低了外源脂肪酸的吸收和利用，并深受从细胞内标签释放的FFA的细胞内分配，以牺牲FFA氧化以牺牲VLDL分泌为代价（减少40-50％）和脂肪生成（80％抑制）[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B3"> 3.据/xref>-据XR.ef ref-type="bibr" rid="B5"> 5.据/xref>那据XR.ef ref-type="bibr" rid="B10"> 10.据/xref>］.注意，定性地，HFD对肝脏标签代谢对肝脏标签的影响是相同的，但在后者的变化程度更加明显。据/p> <p>尽管如此VLDL分泌的HF饮食诱导的抑制作用已被反复关注这一现象的原因的事实尚未完全阐明。葡萄糖的可用性在HF饮食受到严重降低相比于标准和HS饮食。其中的葡萄糖在肝水平的直接影响是极低密度脂蛋白的甘油三酯的分泌增多[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B36"> 36.据/xref>那据XR.ef ref-type="bibr" rid="B37"> 37.据/xref>］.Brown等人[据XR.ef ref-type="bibr" rid="B38"> 38.据/xref>[他们对原发性肝细胞的研究表明，葡萄糖介导的效果很多，涉及将三酰基甘油从细胞中的转运加上VLDL，随着肝脏中肠道和apob-100的净合成的增加而增加。基于该数据，我们可以推测测定肝脏中脂质积累的限制条件是肝脏输出的脂蛋白输出率取决于葡萄糖的可用性。然而，我们发现HF喂养大鼠的禁食血清葡萄糖略有增加，表明内源性葡萄糖产生的增加。这种葡萄糖是否可用于VLDL生产仍然是一个开放的问题。据/p> <p>在目前的研究中，我们关注的是在一个特别容易受饮食控制的模型中肝脂肪变性发展的机制。总之，我们提供的证据表明，在HHTg大鼠代谢综合征肝脂肪变性(无论是HS-或hf诱导)模型中，细胞内的TAG脂解障碍与此无关。相反，在这些条件下，溶酶体的TAG分解实际上增强了。虽然两种试验饲料的影响是定性的，而不是定量的，但在肝脏中相同的tag积累，其潜在机制是不同的。高糖饲粮可抑制脂肪酸氧化，同时增加TAG的分泌据italic> 德诺维据/italic>FFA合成。相比之下，在HF饮食的动物中，细胞内的tag来源的FFA主要被引导到氧化利用，即酮生成，而牺牲了分泌途径。这一发现强调了理解特定病例的确切机制的重要性，以便选择有效的治疗方法。据/p> </sec> <back> <ack> <title>承认据/title> <p>本研究得到了授予号的支持。来自GA CR的P301 / 11/2418和项目（卫生部，捷克）的研究组织00023001（Ikem，Prague，捷克共和国） - 施工支持。据/p> </ack> <ref-list> <ref id="B1" content-type="article"> <label>1据/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Sarafidis据/surname> <given-names> P. 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