JIR 免疫学研究期刊》的研究 2314 - 7156 2314 - 8861 Hindawi 10.1155 / 2020/3965061 3965061 研究文章 触发免疫反应引起的抗原决定共价与Immunoadjuvant-Pulsed树突状细胞作为一个有前途的癌症疫苗 陈 Chumeng 1 https://orcid.org/0000 - 0001 - 9470 - 0224 Aldarouish Mohanad 2 3 4 李 乾隆 2 3 刘 Xiangzhen 2 3 汉 冯 4 刘 回族 4 https://orcid.org/0000 - 0002 - 3285 - 5009 钱 Qijun 1 2 3 4 Reche 佩德罗。 1 鑫源医学研究所和生物技术 大学生命科学和医学 浙江科技大学 杭州310018 中国 zstu.edu.cn 2 上海细胞疗法研究所 上海201805 中国 3 上海研发中心 上海细胞疗法组 上海201805 中国 4 免疫细胞分裂 上海细胞疗法组 上海201805 中国 2020年 4 4 2020年 2020年 21 12 2019年 03 03 2020年 11 03 2020年 4 4 2020年 2020年 版权©2020 Chumeng陈等。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

肽链型树突状细胞(DC)的成功癌症疫苗主要取决于利用肽和选择一个适当的佐剂。在此,我们旨在唤起广泛的免疫反应在immunoadjuvant同时针对多个抗原表位。三个合成抗原 ∗ 0201 -限制肽分别与HMGB1-derived肽(SAFFLFCSE,表示HB100 - 108)作为immunoadjuvant通过双精氨酸(RR)链接和加载到人类monocyte-derived DCs。肽吸收被免疫荧光显微镜和流式细胞仪检测。成熟和激活状态的脉冲DCs监控检测特定的标记和释放细胞因子的表达。peptide-pulsed DCs同种异体T细胞激活的能力评估了脱粒试验和分泌细胞因子检测。的溶解性活动效应T细胞对癌细胞体外分析乳酸脱氢酶(LDH)测定。结果显示,DCs有效吸收肽+ HB100 - 108并表示更高水平的表面标记(HLA-ABC, HLA-DR, CD80、CD86 CD83、CD40, CCR7)和促炎细胞因子(il - 6,干扰素- γ肿瘤坏死因子- α比控制DCs和il - 12),免费peptide-pulsed DCs,免费乙肝100 - 108脉冲直流组。此外,缩氨酸+ HB100 - 108/脉冲DCs能够激活同种异体T细胞和提高溶解性活动对胰腺癌细胞系(PANC-1)体外。这些发现表明,与乙肝抗原多肽共价相连100 - 108/脉冲DCs可能是一个有前途的战略来提高当前位于癌症疫苗。

 上海自然科学基金 19 zr1454200 1。介绍

树突状细胞(dc)的独特特征是最强大的抗原递呈细胞(apc)导致他们被认为是一个有前途的工具对癌症免疫疗法( 1]。在过去的几年里,已经被越来越多的兴趣肽,RNA和dna DC疫苗作为一种有效的方法对癌症免疫疗法由于其有前景的结果在实现意义和持久的治疗反应和轻微的不良事件( 2, 3]。肽链型疫苗提供了几个优势相比其他类型的癌症疫苗。他们很容易合成,在许多储存条件稳定的,安全的,他们可以提高有效的CD4和CD8免疫反应。然而,肽链型疫苗策略的成功主要取决于利用肽和选择适当的佐剂( 4]。

高机动组框1 (HMGB1)在哺乳动物中是高度保守的蛋白质,把核调节基因表达和释放细胞损伤和炎症( 5]。HMGB1两个dna结合蛋白组成的图案,盒,盒B,除了C尾巴( 6]。已经发现,HP91短肽氨基酸对应91 - 108 B盒子里,有能力提高DCs的成熟和激活,诱导促炎细胞因子il - 6和il - 12的分泌,并触发Th1细胞的极化 7- - - - - - 9]。萨斯博士和他的研究小组证明HP91可以通过其余函数作为辅助体内细胞和体液免疫反应( 10]。进一步的研究表明,该地区的HP91负责其免疫刺激性功能位于c端,对应氨基酸肽HMGB1的100 - 108 10, 11]。在这项研究中,我们表示这种短肽HB100 - 108。

众所周知,没有单一的抗原肽可能足以实现一种有效的抗肿瘤免疫反应。因此,多个抗原表位需要引起广泛的免疫反应( 12]。因此,结合多种肿瘤相关抗原(TAA)可能是一个更可取的策略引起强烈的抗肿瘤免疫应答。

大量的研究证实,肿瘤相关抗原后,存活素,人类表皮生长因子受体2 (Her2)和癌胚抗原(CEA),在多种肿瘤中,生存素的过表达在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、和黑素瘤 13- - - - - - 16];Her2过表达在乳腺癌、胃癌、卵巢、子宫浆液性子宫内膜癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、肺癌、子宫颈癌,头部和颈部,食道癌 17, 18];和CEA在胃、大肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌和胰腺癌 19]。

在这项研究中,人类monocyte-derived DCs (moDCs)脉冲和三个抗原肽,生存素,Her2,和CEA与HB共价相连100 - 108通过protease-sensitive链接器(双精氨酸(RR))。结果显示,与HB多肽共价相连100 - 108(表示为肽+ HB100 - 108)有效地由未成熟dc和显著诱导成熟和激活与自由肽没有乙肝100 - 108(表示peptides-HB100 - 108)。此外,缩氨酸+ HB100 - 108/脉冲DCs大大诱导同种异体T细胞的活化和溶解性活动,他们表现出对体外肿瘤细胞的细胞毒性。

 2。材料和方法 2.1。直流一代

Monocyte-derived DCs生成从外周血单核细胞(PBMC)标准聚蔗糖密度离心(通用电气医疗集团,乌普萨拉,瑞典)从病人隔离PBMCs leukapheresis样本。PBMCs镀在无血清AIM-V媒体(生活技术,大岛,纽约)和允许坚持0.22 μ德国m filter-capped培养瓶(TPP)。2小时后,不依从细胞被移除,随后和附着单核细胞培养6天AIM-V包含50 ng / ml rhIL-4(研发系统、明尼阿波利斯、MN)和100 ng / ml rhGM-CSF(赛诺菲,布里奇沃特,新泽西)。3天,一半的介质被新的取代介质包含gm - csf和il - 4。在一些实验中,一个包含100国际单位/毫升IFN -成熟的鸡尾酒 γ,30 μg / ml保利(我:C)和5 μg / ml R848用于成熟生成的DCs。

 2.2。合成肽

以下合成抗原 ∗ 0201 -限制肽,生存素(LTLGEFLKL), Her2 (RLLQETELV)、CEA (YLSGANLNL)和HB100 - 108(SAFFLFCSE),合成了纯度大于95%。合成后,前三肽与HB100 - 108通过protease-sensitive链接器(双精氨酸(RR)残留的序列)。预计,一旦DCs peptide-RR-HB内化100 - 108构造,细胞内蛋白酶会裂开的RR站点和肽和HB分开100 - 108从而可以提高的处理和表示吞没了肽( 20.]。肽是购自上海Top-peptide生物有限公司有限公司(上海,中国)。DCs检查他们的吞噬作用,肽±HB100 - 108是用FITC标记荧光染料n端。所有的肽都溶解在PBS。

 2.3。肽吸收试验

生成不成熟moDCs,如上所述,被播种在24-well板和脉冲分别合成肽±HB100 - 108耦合FITC (40 μ每个肽g / ml)为1小时37°C, 5%的公司2。与PBS三洗后,考察了细胞荧光显微镜和吸收是通过流式细胞仪分析量化。淬火细胞外FITC信号,50 μ克/毫升的台盼蓝之前添加到细胞悬液流式细胞术分析。Unpulsed DCs作为消极的控制。细胞被发现阳性FITC视为细胞已经成功地吞没了肽。

 2.4。流式细胞术

生成的DCs评估作为CD14的纯洁性- - - - - -CD11C+通过染色 1 × 10 6 细胞与anti-CD11C-APC anti-CD14-FITC (BD生物科学、圣地亚哥、钙、美国)。

不成熟的moDCs resuspended 1 × 10 6 细胞/毫升和含有肽±HB100 - 108(40 μ每个肽)或40 g / ml μ自由HB的g / ml100 - 108在37°C, 5%的公司2。一小时后,脉冲DCs被清洗和培养过夜。下面的单克隆抗体(mab)被用来描述dc的成熟和激活状态:anti-HLA-ABC-PE, anti-HLA-DR-PE / Cy7 anti-CD80-PE, anti-CD86-APC, anti-CD83-APC, anti-CD40-Alexa萤石700和anti-CCR7-PE / Cy7 (BioLegend、圣地亚哥、钙、美国)。Isotype-matched荧光抗体作为消极的控制。细胞培养与抗体在4°C 30分钟。洗后,样品被检测到FACSCalibur分析器(美国BD生物科学,圣何塞,CA)。数据分析FlowJo软件(TreeStar)。

 2.5。酶联免疫吸附试验(ELISA)

不成熟的moDCs resuspended 1 × 10 6 细胞/毫升和含有肽±HB100 - 108(40 μ每个肽)或只有40 g / ml μ自由HB的g / ml100 - 108在37°C, 5%的公司2。一小时后,脉冲DCs洗,培养48小时。可以发现分泌il - 12的il - 12酶联免疫试剂盒(嘉汉生物、中国)根据制造商的协议。样品的光学密度(OD)是评估在550 nm使用微量滴定板分光光度计(美国贝克曼库尔特检测平台)。

 2.6。脱粒试验和细胞因子检测

肽±HB100 - 108/脉冲DCs中培养成熟的鸡尾酒(100国际单位/毫升IFN - γ,30 μg / ml保利(我:C)和5 μg / ml R848)为24小时。细胞被洗广泛和响应者同种异体T细胞在播种 直流 : T 细胞的比例1:10 18个小时。上层清液收集的文化,和细胞因子的生产检测用仪珠阵列(CBA)工具包(BD生物科学),遵循制造商的指示。

为CD107a脱粒试验,同种异体T细胞刺激与空DCs或肽±HB100 - 108/脉冲DCs ( 直流 : T 细胞的比例1:10)在GolgiStop(莫能菌素,BD)和anti-CD107a-APC马伯(BD Pharmingen)。孵化后12小时37°C,细胞被收集并沾anti-CD8-PE马伯(BD Pharmingen)并通过流式细胞术分析。

 2.7。癌症细胞

人类胰腺癌PANC-1细胞系(写明ATCC®crl - 1469™)在DMEM培养补充10%的边后卫和青霉素和链霉素37°C湿润有限公司5%2的气氛。

 2.8。细胞毒性检测

肽±HB100 - 108脉冲DCs在成熟的鸡尾酒成熟,与同种异体T细胞coculturing紧随其后 直流 : T 细胞的比率1:10 24小时。然后,收集T细胞为效应细胞,Panc-1细胞作为靶细胞。效应细胞包括负对照组(T细胞没有precoculturing DCs),空DC组(T细胞刺激nonpulsed DCs), peptides-HB100 - 108组(T细胞刺激与自由肽/脉冲DCs),和肽+ HB100 - 108组(T细胞刺激与HB与多肽共价相连100 - 108/脉冲DCs)。效应细胞和靶细胞(PANC-1癌症细胞株)的比率孵化5:1 4 h 37°C 96 -孔板。T细胞的活动与目标肿瘤细胞LDH测定的细胞毒性试验装备(Beyotime,中国)后,制造商的指示。的细胞毒性T细胞的比例计算特定细胞溶解使用以下公式: % 具体的 溶菌作用 = 效应 / 目标 释放 − 自发的 释放 / 最大 释放 − 自发的 释放 × One hundred. % 。给出的数据 意味着 ± 标准 偏差 。

 2.9。统计分析

统计分析进行了使用GraphPad Prism 5.0 (GraphPad软件,圣地亚哥,CA)。的 的意思是 ± SD 确定每个治疗组在个人实验。使用学生的组间差异进行了分析 t 以及, P < 0.05 被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。不成熟moDCs有效占用多肽共价与HB 100 - 108 <子> < /订阅>

在这项研究中,三个合成肽抗原(存活素、Her2和CEA)与HB共价相连100 - 108(如immunoadjuvant)通过双精氨酸(RR)残留protease-sensitive链接器(图 1(一))。检测是否与HB合成肽的共价连接100 - 108通过RR链接器可以通过DCs加速收购,细胞被孵化与生存素±HB100 - 108,Her2±HB100 - 108或东航±HB100 - 108在培养基1小时37°C。所有的肽和FITC共轭。流式细胞术结果显示DCs更有效地吸收肽与HB共价相连100 - 108比单身自由肽(图 1 (b))。DCs的高效吞噬肽+ HB100 - 108也证实了免疫荧光显微镜(图 1 (c))。这些发现表明HB100 - 108可以发挥重要作用的加速度由未成熟dc肽吞噬作用。

不成熟的DCs有效吞噬抗原多肽共价与HB100 - 108。(一)原理图说明了本研究中使用的合成肽。三个抗原 ∗ 0201 -限制肽(存活素、Her2和CEA)与HB共价相连100 - 108通过双精氨酸(RR)残留protease-sensitive链接器。(b)不成熟moDCs脉冲有40 μ克/毫升的FITC fluorochrome-conjugated肽±HB100 - 1081小时37°C。与PBS三洗后,吸收是通过流式细胞仪分析量化。淬火细胞外FITC信号,50 μ克/毫升的台盼蓝之前添加到细胞悬液流式细胞术分析。Unpulsed DCs作为消极的控制。(c)免疫荧光显微镜图像显示了FITC-peptides + HB的吸收100 - 108不成熟的moDCs。

 3.2。成熟的DCs和激活诱导多肽共价与HB 100 - 108 <子> < /订阅>

确定最优的浓度与HB多肽共价相连100 - 108的最高水平,促进DC的成熟和激活,细胞含有不同浓度的缩氨酸+ HB100 - 108(0、20、40、60 μ每个肽g / ml) 1小时。收集细胞,洗,培养过夜之后,通过流式细胞仪检测表面标记。数据表明,肽+ HB100 - 108诱导的表达水平HLA-ABC、HLA-DR CD80、CD83、CD40, CCR7在剂量依赖性的方式没有40到60之间的显著差异 μ克/毫升(补充图 1)。基于这些发现,40岁 μ克/毫升的肽+ HB100 - 108被用作最好集中在接下来的实验。

检测是否肽+ HB100 - 108可能诱发dc的成熟和激活,未成熟dc被分为四组:组(1)细胞不及时治疗;组(2)细胞孵化与自由肽:生存素,Her2,东航;组(3)细胞存活素+ HB孵化100 - 108Her2 +乙肝100 - 108,CEA + HB100 - 108;和组(4)细胞与免费HB孵化100 - 108。1小时后,细胞被收集,清洗,培养过夜之后,通过流式细胞仪检测表面标记。结果表明,肽+ HB100 - 108/脉冲DCs HLA-ABC的表达表现出显著增加,HLA-DR, CD80、CD86, CD83、CD40, CCR7相比其他三组。重要的是,免费乙肝100 - 108未能上调表达的标记脉冲DCs (HLA-DR和CD86除外)与控制和peptides-HB相比100 - 108(图/脉冲直流组 2)。这些数据表明,耦合与乙肝抗原肽100 - 108可以作为一种有效的策略来提高DCs的成熟和激活。

肽+乙肝100 - 108提高未成熟dc的成熟和激活。不成熟moDCs不及时治疗或脉冲与肽±HB100 - 108或免费乙肝100 - 108(每40 μg / ml)为1小时37°C。然后,细胞被清洗和培养过夜。HLA-ABC的表达、HLA-DR CD80、CD86, CD83、CD40, CCR7被流式细胞仪测量。结果代表了 的意思是 ± 扫描电镜 三个独立的实验。

 3.3。多肽共价与HB 100 - 108 <子> < /订阅> /脉冲dc分泌大量的促炎细胞因子水平

调查的能力与HB多肽共价相连100 - 108DCs增强促炎细胞因子的分泌,细胞被分成四组,作为上一节中提到的。1小时的潜伏期后,细胞被收集,清洗,培养48小时通过ELISA检测il - 12和24小时检测其他的细胞因子。收集上清液,il - 12水平使用流式细胞仪检测到一个CBA工具包。数据表明,肽+ HB100 - 108/脉冲dc分泌il - 6的水平(图丰富 3(一个)),干扰素- γ(图 3 (b))、肿瘤坏死因子- α(图 3 (c))和白介素(图 3 (d)相比其他三组。符合表面标记的结果,这些细胞因子的水平控制DCs之间的可比性,peptides-HB100 - 108和乙肝100 - 108组。这些结果表明,肽+ HB100 - 108有相当大的潜力,促进dc分泌促炎细胞因子,通过它们重要的T细胞反应的扭曲。

肽+乙肝100 - 108/脉冲dc分泌大量的促炎细胞因子水平。不成熟moDCs不及时治疗或脉冲与肽±HB100 - 108或免费乙肝100 - 108(每40 μg / ml)为1小时37°C。然后,细胞被洗和培养24小时,其次是检测的分泌il - 6 (a),干扰素- γ(b)和肿瘤坏死因子- α(c)在文化媒体仪珠阵列(CBA)工具包。(d)白介素48小时后被ELISA检测。结果代表了 的意思是 ± 扫描电镜 三个独立的实验。

 3.4。肽与HB 100 - 108 <子> < /订阅> /脉冲DCs引起同种异体T细胞产生一些细胞因子和诱导的溶解性活动CD8 + <一口> < /一口> T细胞

调查CD8的溶解性活动+T细胞同种异体T细胞与空DCs或肽cocultured±HB100 - 108/脉冲DCs 12小时anti-CD107a-APC马伯的存在;然后,细胞被沾anti-CD8-PE马伯,流式细胞术分析。如图 4(一),只有肽+ HB100 - 108/脉冲DCs能够诱导CD8的健壮的脱粒+T细胞,被表面标记CD107a的表达,表明这些T细胞可以分泌细胞毒性效应分子在遇到DC-loaded肽+ HB100 - 108,而空DCs和DC-loaded peptides-HB100 - 108未能提高CD8的脱粒+T细胞。

肽+乙肝100 - 108/脉冲DCs诱导CD8的脱粒+T细胞和增强的同种异体T细胞分泌炎性细胞因子。不成熟moDCs不及时治疗或脉冲与肽±HB100 - 108(每40 μg / ml)。细胞被清洗和成熟的24小时的成熟的鸡尾酒。(一)同种异体T细胞刺激与空DCs或肽±HB100 - 108/脉冲DCs T : 直流 细胞的比例5:1 GolgiStop和anti-CD107a-APC马伯的存在。孵化后12小时37°C,细胞被收集并沾anti-CD8-PE马伯,流式细胞术分析。(b)空DCs或肽±HB100 - 108/脉冲DCs cocultured与应答器同种异体T细胞 直流 : T 细胞的比例1:5 18个小时。上层清液收集的文化,和细胞因子的生产检测用仪珠阵列(CBA)工具包。结果代表了 的意思是 ± 扫描电镜 三个独立的实验。

评估DC-loaded肽的影响T淋巴细胞分泌的细胞因子,同种异体T细胞单独培养的是一种消极控制(组1)或与空cocultured DCs(组2),peptides-HB100 - 108/脉冲DCs(组3),或肽+ HB100 - 108/脉冲DCs(4组) 直流 : T 细胞的比率1:10。18小时后,分泌细胞因子被CBA工具包上层清液中检测到。数据显示的水平分泌il - 4、il - 6、TNF - α和干扰素- γ在4组(肽+ HB100 - 108/脉冲DCs / T细胞)明显高于其他三个小组。重要的是,分泌il - 10的水平在4组明显低于2组(空DCs / T细胞)和组3 (peptides-HB100 - 108(图/脉冲DCs / T细胞) 4 (b))。总的来说,这些结果表明,肽与HB共价相连100 - 108/脉冲DCs有力促进T细胞的溶解性活动,以及提高1型和2型细胞因子的分泌和减少抑制性细胞因子的分泌il - 10。

 3.5。肽与HB 100 - 108 <子> < /订阅> /脉冲DCs诱导T细胞的溶细胞活性与PANC-1细胞株体外

记录,胰腺肿瘤细胞表达高水平的生存素,Her2,东航抗原肽( 21]。测试是否肽±HB100 - 108/脉冲DCs可以诱导T细胞对肿瘤细胞的溶细胞活性体外,同种异体T细胞与空首先cocultured DCs(组2),peptides-HB100 - 108/脉冲DCs(组3),或肽+ HB100 - 108/脉冲DCs(4)组。治疗T细胞作为消极的控制(组1),24小时后收集T细胞为效应细胞和cocultured PANC-1癌症细胞作为靶细胞的比例5:1 ( E : T )。T细胞的活动与目标肿瘤细胞LDH测定的细胞毒性检测设备。作为显示在图 5肿瘤细胞溶解的百分比在肽/ HB100 - 108组高于负控制和空DC组。更重要的是,T细胞在肽+ HB100 - 108组显著诱导肿瘤细胞的裂解与其他三组相比,表明肽+ HB100 - 108/脉冲DCs可以刺激高溶细胞的活动对PANC-1体外T细胞。

T细胞刺激肽+ HB100 - 108/脉冲DCs施加相当大的PANC-1细胞株体外的细胞溶解。刺激后空DCs或肽±HB100 - 108/脉冲DCs 24小时或没有刺激,收集同种异体T细胞为效应细胞,PANC-1癌症细胞系作为靶细胞。目标细胞cocultured的效应细胞 T : E 1:5的比率。细胞溶解的活动进行测量乳酸脱氢酶(LDH)释放。这个实验已经完成一式三份和类似的结果重复三次。

 4所示。讨论

免疫疗法基于肽具有许多优势,包括简单的合成,低分子量、低毒性、肿瘤细胞的具体目标。然而,肽链型抗癌疫苗遇到一些局限性在临床设置由于几个原因包括以下几点:(1)有CD4的缺乏+T细胞的帮助,(2)肽容易退化,(3)他们可能诱导,(4)诱导震级较低或瞬态免疫反应,和(5)有功能障碍的DCs癌症( 4, 22]。

近年来,已经有越来越多的兴趣,癌症的华盛顿疫苗由于他们有前景的结果在实现有意义的治疗反应和安全性( 23]。它已被证明,相比之下合成短肽(SSPs),合成长肽(slp)有效处理和crosspresented DCs体内,导致两个CD4的启动+和CD8+T细胞反应( 24, 25]。几项研究表明,与短肽直接接种疫苗可能导致公差和无力,促进肿瘤细胞的生长 26, 27]。相比之下,前女友vivo-differentiated DCs含有短肽可能引起强大的体外和体内抗肿瘤免疫反应 28, 29日]。因此,DCs似乎是一个强大的肽链型疫苗载体。

如前所述,肽链型疫苗的成功主要取决于利用肽和选择一个适当的佐剂。,已经发现的共价连接辅助肿瘤相关抗原(taa)可能导致DCs在体外成熟和激活,诱导一种强有力的抗肿瘤免疫反应体内taa相比,他们身体与佐剂混合( 30., 31日]。

众所周知,toll样受体(TLR)配体有一个强有力的活动来提高DCs的成熟,促进他们表达促炎细胞因子和costimulatory分子( 32]。后来的研究表明,TLR配体可以有效地增加抗原crosspresentation在DCs的能力 33]。HMGB1蛋白已经被证明可以激活免疫细胞,诱导信号通过与不同的互动通常( 34]。因此,除了HMGB1蛋白或其衍生肽的肽链型亚单位疫苗可能是一个有前途的战略来提高crosspresentation crosspriming DCs。

在这项研究中,三个合成肽抗原,在多种癌症类型中,被共价与HMGB1-derived肽(HB100 - 108通过双R)作为immunoadjuvant链接器和加载到未成熟dc。本设计包括三个主要优点:(1)合成肽,(2)immunoadjuvant的共价连接,和(3)RR链接器,由DCs的蛋白酶裂解,从而可以促进和增强的处理和显示加载肽。

完善,只有成熟的DCs costimulate幼稚T细胞激活和因此需要承认peptide-MHC复合物通过T细胞受体和costimulatory分子之间的相互作用(CD40、CD80和CD86)对DCs和CD28目标T细胞受体( 35]。我们的数据表明,肽+ HB100 - 108(但不是peptides-HB100 - 108或免费乙肝100 - 108)/脉冲DCs表现出高水平的几个表面分子(HLA-DR, HLA-ABC、CD83、CD80、CD86和CD40),表明肽+ HB100 - 108可以有效地触发未成熟dc的成熟和激活。此外,缩氨酸+ HB100 - 108/脉冲CCR7、DCs表达高水平的中扮演着很重要的角色在DCs的迁移淋巴结幼稚T细胞激活和引起特异性免疫反应 36]。

众所周知,炎性细胞因子的分泌DC-loaded抗原起着关键作用的抗原诱导抗肿瘤免疫反应( 37]。在这项研究中,肽+ HB100 - 108(但不是peptides-HB100 - 108或免费乙肝100 - 108)/脉冲DCs分泌高水平的il - 6、TNF - α干扰素- γ,IL-12p70和低水平的il - 10。高水平和低水平的IL-12p70和il - 10,分别表明肽+ HB100 - 108/脉冲DCs向Th2可以诱导T细胞的分化表型( 38]。

这些发现与之前的研究一致表明自由HMGB-1-derived肽几乎没有影响dc的成熟和激活 31日]。他们也一致的结果研究表明,辅助共价链接到短肽抗原决定基识别可能会刺激高于同一分子的物理混合配方( 39, 40]。达到最大免疫刺激性影响,immunoadjuvant应该在近距离与抗原( 41]。我们的数据表明,肽+ HB100 - 108,但不是免费乙肝100 - 108,有效提高DCs的成熟和激活后迅速的吞噬作用。潜在的原因是,连接与乙肝抗原表位100 - 108可能促进肽multimerization并导致一个有效结合的受体DCs通过交联( 10]。提到很重要的直接接种疫苗,而不是来自体内的直流负载,肽+ HB100 - 108将提出的,相同的装甲运兵车,可以防止非特异性DC刺激。总之,乙肝100 - 108可能表现出协同效应与抗原多肽共价链接时,从而可能导致最大化抗肿瘤免疫反应。

一些研究表明,有效的DC疫苗应该最后激活抗原T细胞反应。因此,细胞因子分泌的能力是至关重要的确认T细胞的激活状态时遇到了抗原的dc ( 42]。在目前的研究中,我们发现,il - 4的表达il - 6、TNF - α和干扰素- γ但不是il - 10后显著增加T细胞与肽+ HB100 - 108/脉冲DCs,表明这种疫苗设计有能力对肿瘤抗原激活同种异体T细胞。

癌症疫苗的最终目标是驱动激活T细胞向肿瘤部位和选择性地杀死癌细胞。在这项研究中,T细胞激活的(生存素、Her2和CEA) + HB100 - 108/脉冲DCs显示显著高对PANC-1细胞株体外溶细胞的活动。这表明T细胞刺激肽+ HB100 - 108脉冲DCs可能发挥重要的抗原溶解在胰腺癌细胞表达生存素、Her2和CEA肽。

总之,我们的研究结果提供的证据表明,immunoadjuvant HB的共价连接抗原肽100 - 108由DCs有效吞噬,诱导他们完全成熟和激活。这些激活DCs激活同种异体T细胞的能力,提高他们对癌细胞的细胞溶解的活动。这项工作提出了一个有效的策略来改善华盛顿肽的免疫治疗和支持进一步的研究在临床试验中测试这种疫苗的功效。

 数据可用性

相关数据用于支持本研究的结果包括在本文中。

 伦理批准

这个研究是医学伦理委员会批准上海细胞疗法研究所和依法开展1964年赫尔辛基宣言》及其修正案晚些时候或类似的道德标准。

 的利益冲突

所有作者声明没有利益冲突有关的出版。

 作者的贡献

Chumeng陈和Mohanad Aldarouish贡献同样这项工作。

 确认

这项工作由上海市自然科学基金支持19 zr1454200。

 补充材料

补充图1:测定肽+乙肝的最佳浓度100 - 108促进DC的成熟和激活的最高水平。

 Patente t。 Pinho m P。 奥利维拉 答:一个。 伊万格丽斯塔 g . c . M。 Bergami-Santos p C。 Barbuto j . a . M。 人类树突细胞:他们的异质性和癌症免疫疗法临床应用潜力 免疫学前沿 2019年 9 3176年 10.3389 / fimmu.2018.03176 2 - s2.0 - 85061033924 陈 J。 李 h . Y。 王 D。 赵 J·J。 郭 x Z。 人类与放大MUC1 mRNA刺激树突细胞转染细胞毒性T淋巴细胞在体外对胰腺癌的反应 胃肠病学和肝脏病学杂志》上 2011年 26 10 1509年 1518年 10.1111 / j.1440-1746.2011.06778.x 2 - s2.0 - 80053119078 21950745 Mastelic-Gavillet B。 Balint K。 Boudousquie C。 甘农 p . O。 Kandalaft l E。 个性化的树突细胞vaccines-recent突破并鼓励临床结果 免疫学前沿 2019年 10 766年 10.3389 / fimmu.2019.00766 2 - s2.0 - 85065422582 Slingluff c . L。 Jr。 多肽疫苗的现在和未来对癌症:单个或多个,或长或短,单独或结合? 癌症杂志 2011年 17 5 343年 350年 10.1097 / PPO.0b013e318233e5b2 2 - s2.0 - 80053343794 21952285 叶 Y。 曾 Z。 金 T。 张 H。 熊 X。 顾 l 高迁移率的角色组框1在缺血性中风 细胞神经科学前沿 2019年 13 127年 10.3389 / fncel.2019.00127 2 - s2.0 - 85064189299 杨 H。 王 H。 Chavan 美国年代。 安德森 U。 高机动组盒蛋白1 (HMGB1):典型的内生的危险分子 分子医学 2015年 21 补充1 S6 S12 10.2119 / molmed.2015.00087 2 - s2.0 - 84945918494 26605648 Dumitriu 即。 约纳利 P。 比安奇 m E。 曼 答:一个。 Rovere-Querini P。 HMGB1与愤怒的要求人类血浆树突细胞的成熟 欧洲免疫学杂志 2005年 35 7 2184年 2190年 10.1002 / eji.200526066 2 - s2.0 - 22544445228 15915542 梅斯默 D。 杨 H。 Telusma G。 诺尔 F。 李 J。 梅斯默 B。 特蕾西 k·J。 Chiorazzi N。 机动性高蛋白质组框1:一个内源性信号树突状细胞的成熟和Th1极化 免疫学杂志 2004年 173年 1 307年 313年 10.4049 / jimmunol.173.1.307 2 - s2.0 - 2942700201 15210788 Telusma G。 达塔 年代。 Mihajlov 我。 马 W。 李 J。 杨 H。 纽曼 W。 梅斯默 b . T。 Minev B。 Schmidt-Wolf i G。 特蕾西 k·J。 Chiorazzi N。 梅斯默 D。 树突状细胞激活肽诱导的细胞因子配置文件 国际免疫学 2006年 18 11 1563年 1573年 10.1093 / intimm / dxl089 2 - s2.0 - 33750222704 16966494 萨斯博士 R。 Souza c。年代。 黄 c . T。 拉赫松 M。 女猎手 年代。 梅斯默 D。 HMGB1-derived肽作为辅助多肽和蛋白质抗原诱导免疫反应 疫苗 2010年 28 47 7556年 7562年 10.1016 / j.vaccine.2010.08.054 2 - s2.0 - 77958495785 20800114 萨斯博士 R。 梅斯默 B。 Futalan D。 Tor Y。 拉赫松 M。 丹尼尔斯 G。 女猎手 年代。 梅斯默 D。 活动的HMGB1-derived免疫刺激性肽Hp91驻留在螺旋c端部分和由二聚作用增强 分子免疫学 2014年 57 2 191年 199年 10.1038 / aps.2017.31 2 - s2.0 - 85020236327 28414197 de Oliveira l·m·F。 士气 m·G。 查维斯 答:a . M。 Cavalher a . M。 洛佩斯 答:S。 Diniz m d。O。 Schanoski 答:S。 德梅洛 r . L。 费雷拉 l . c, d。S。 de Oliveira m·l·S。 Demasi M。 何 p . L。 设计、免疫反应和抗肿瘤潜在的HPV16 E6E7主要疫苗 《公共科学图书馆•综合》 2015年 10 9条e0138686 10.1371 / journal.pone.0138686 2 - s2.0 - 84946594838 26390407 Monzo M。 罗塞尔 R。 Felip E。 Astudillo J。 桑切斯 J·J。 Maestre J。 马丁 C。 字体 一个。 Barnadas 一个。 很糟 一个。 生存素的一种新型抗凋亡基因表达,信使RNA在非小细胞肺癌预后标记 临床肿瘤学杂志 1999年 17 7 2100年 2104年 10.1200 / JCO.1999.17.7.2100 10561264 田中 K。 Iwamoto 年代。 百分度 G。 Nohara T。 Iwamoto M。 Tanigawa N。 生存素的表达及其在乳腺癌癌失去细胞凋亡的关系 临床癌症研究 2000年 6 1 127年 134年 10656440 Satoh K。 金子 K。 副大臣 M。 Masamune 一个。 Satoh 一个。 Shimosegawa T。 肿瘤坏死factor-related凋亡诱导配体及其受体表达和细胞凋亡的途径在人类胰腺癌 胰腺 2001年 23 3 251年 258年 10.1097 / 00006676-200110000-00005 2 - s2.0 - 0034812354 11590320 格罗斯曼 D。 McNiff j . M。 李 F。 阿尔提耶里 d . C。 细胞凋亡抑制剂的表达和定位、生存素在人类黑色素瘤 皮肤病学研究杂志》上 1999年 113年 6 1076年 1081年 10.1046 / j.1523-1747.1999.00776.x 2 - s2.0 - 0033397882 10594755 伊克巴尔 N。 伊克巴尔 N。 人类表皮生长因子受体2 (HER2)癌症:过度和治疗意义 分子生物学国际 2014年 2014年 9 852748年 10.1155 / 2014/852748 25276427 摘要 U。 Duesedau P。 Tsourlakis m . C。 Quaas 一个。 链接 b . C。 Schurr p·G。 Kaifi j . T。 格罗斯 美国J。 Yekebas e . F。 马克思 一个。 西蒙 R。 Izbicki j . R。 索特 G。 频繁的齐次her - 2放大在初级和转移性食管腺癌 现代病理学 2007年 20. 1 120年 129年 10.1038 / modpathol.3800712 2 - s2.0 - 33845689934 17143264 Hensel j . A。 Khattar V。 艾什顿 R。 Ponnazhagan 年代。 重组AAV-CEA结合肿瘤疫苗免疫佐剂减免宽容和提供保护性免疫 分子溶瘤治疗 2019年 12 41 48 10.1016 / j.omto.2018.12.004 2 - s2.0 - 85059679860 30666318 乌尔里希 j . T。 Cieplak W。 Paczkowski n . J。 泰勒 s M。 桑德森 s D。 诱导抗原特异性CTL反应人类C5a构象上偏向受体激动剂的过敏毒素分子佐剂 《免疫学 2000年 164年 10 5492年 5498年 10.4049 / jimmunol.164.10.5492 2 - s2.0 - 0034658633 10799917 道森 l F。 霍金斯 w·G。 Goedegebuure P。 胰腺癌免疫治疗的潜在目标 免疫疗法 2011年 3 4 517年 537年 10.2217 / imt.11.10 2 - s2.0 - 79953828406 21463193 李 W。 Joshi M。 Singhania 年代。 拉姆齐 K。 没吃 一个。 肽疫苗:进展和挑战 疫苗 2014年 2 3 515年 536年 10.3390 / vaccines2030515 2 - s2.0 - 85019447249 26344743 休伯 一个。 Dammeijer F。 Aerts j·g·j·V。 虽然 H。 当前状态的树突细胞免疫疗法:体外抗原加载不同的直流子集的机会吗? 免疫学前沿 2018年 9 2804年 10.3389 / fimmu.2018.02804 2 - s2.0 - 85058734813 猩红热 r。 Quakkelaar e . D。 雷德克 一个。 汗 年代。 营地 M。 Drijfhout j·W。 席尔瓦 a . L。 Jiskoot W。 车大厅 T。 范Veelen p。 詹森 G。 弗兰肯 K。 克鲁兹 l . J。 彻底打败 一个。 Oostendorp J。 范德伯格 s . H。 Ossendorp F。 Melief c . j . M。 树突细胞过程合成肽比蛋白质,提高抗原表达和t细胞活化 欧洲免疫学杂志 2013年 43 10 2554年 2565年 10.1002 / eji.201343324 2 - s2.0 - 84885723472 23836147 张 H。 在香港 H。 李 D。 马 年代。 迪 Y。 Stoten 一个。 黑格 N。 Di Gleria K。 余 Z。 徐 x N。 麦克 一个。 江 年代。 比较集中与完整的蛋白质肽用于访问保护CD8 cross-presentation通路+和CD4+T细胞 《生物化学》杂志上 2009年 284年 14 9184年 9191年 10.1074 / jbc.M809456200 2 - s2.0 - 66149119372 19193636 脚趾 r·E。 布鲁姆 r . J。 Offringa R。 清晨里 w·M。 Melief c·J。 增强肿瘤多肽疫苗接种后产物。 功能缺失引起的肿瘤特异性CTL肽疫苗接种肿瘤可能会导致无法拒绝 免疫学杂志 1996年 156年 3911年 3918年 8621930 脚趾 r·E。 Offringa R。 布鲁姆 r . J。 Melief c·J。 清晨里 w·M。 肽疫苗会导致增强通过特定的t细胞耐受诱导肿瘤的生长 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 1996年 93年 15 7855年 7860年 10.1073 / pnas.93.15.7855 2 - s2.0 - 0029798058 8755566 崔 y . J。 公园 美国J。 公园 y S。 公园 h·S。 杨 k . M。 Heo K。 EpCAM peptide-primed树突状细胞疫苗带来显著的抗肿瘤免疫在肝癌细胞 《公共科学图书馆•综合》 2018年 13 1、文章e0190638 10.1371 / journal.pone.0190638 2 - s2.0 - 85040007711 29298343 Lesterhuis w·J。 德弗里斯 i . J。 Schreibelt G。 Schuurhuis d . H。 Aarntzen e . H。 德布尔 一个。 Scharenborg n·M。 van de Rakt M。 寻找 e . J。 Figdor c·G。 Adema g . J。 下赌注者 c·J。 树突状细胞的免疫原性脉冲与东航肽或转染对疫苗接种的结直肠癌患者CEA信使rna 抗癌的研究 2010年 30. 12 5091年 5097年 21187495 赵 J。 锅 N。 黄 F。 Aldarouish M。 温 Z。 高 R。 张 Y。 胡 h . M。 沈 Y。 王 l . X。 Vx3-functionalized氧化铝纳米颗粒辅助ubiquitinated蛋白质的浓缩于癌症细胞增强癌症免疫疗法 Bioconjugate化学 2018年 29日 3 786年 794年 10.1021 / acs.bioconjchem.7b00578 2 - s2.0 - 85044178297 29382195 越南盾 年代。 徐 T。 王 P。 赵 P。 陈 M。 工程的self-adjuvanted iTEP-delivered CTL疫苗 Pharmacologica学报 2017年 38 6 914年 923年 10.1038 / aps.2017.31 2 - s2.0 - 85020236327 28414197 布兰科 P。 Palucka 答:K。 帕斯卡 V。 Banchereau J。 树突细胞和细胞因子在人类炎症和自身免疫性疾病 细胞因子和生长因子的评论 2008年 19 1 41 52 10.1016 / j.cytogfr.2007.10.004 2 - s2.0 - 39049088951 18258476 何 n I。 回族在草原 l·g·M。 Raaijmakers t·K。 Adema g . J。 佐剂增强cross-presentation树突细胞:更有效的疫苗的关键? 免疫学前沿 2018年 9 2874年 10.3389 / fimmu.2018.02874 2 - s2.0 - 85059927386 Anggayasti w . L。 Mancera r . L。 Bottomley 年代。 Helmerhorst E。 HMGB1 self-association及其可能的作用结合DNA和细胞膜受体 2月的信 2017年 591年 2 282年 294年 10.1002 / 1873 - 3468.12545 2 - s2.0 - 85010851173 28027393 列支敦斯登 T。 Dufait 我。 Lanna 一个。 Breckpot K。 Escors D。 调制co-stimulation在抗原表达增强癌症免疫疗法 免疫学、内分泌和代谢药物在药物化学 2012年 12 3 224年 235年 10.2174 / 187152212802001875 2 - s2.0 - 84866368223 萨班 d·R。 树突状细胞表达的趋化因子受体CCR7:角膜和眼表面炎症的关键球员 眼表面 2014年 12 2 87年 99年 10.1016 / j.jtos.2013.10.007 2 - s2.0 - 84901497806 24725321 加德纳 一个。 Ruffell B。 树突细胞和癌症免疫 免疫学的趋势 2016年 37 12 855年 865年 10.1016 / j.it.2016.09.006 2 - s2.0 - 84994074775 27793569 王 Y。 熊 X。 吴 D。 王 X。 温 B。 有效激活T细胞由人类monocyte-derived树突状细胞(HMDCs)脉冲与伯纳特氏立克次氏体外膜蛋白Com1但不是HspB-pulsed HMDCs BMC免疫学 2011年 12 1 52 10.1186 / 1471-2172-12-52 2 - s2.0 - 80052250022 Daftarian P。 夏朗 R。 哈克 W。 阿里 年代。 Longmate J。 目的地 J。 钻石 d . J。 小说轭合物的抗原决定基融合肽CpG-ODN显示增强的免疫原性和艾滋病毒识别 疫苗 2005年 23 26 3453年 3468年 10.1016 / j.vaccine.2005.01.093 2 - s2.0 - 17144383586 15837369 带给人 r . L。 谢尔 一个。 逾越节家宴 r。 疫苗佐剂:先天免疫工作 免疫力 2010年 33 4 492年 503年 10.1016 / j.immuni.2010.10.002 2 - s2.0 - 77958498224 21029960 波德 C。 赵 G。 Steinhagen F。 Kinjo T。 Klinman d . M。 CpG DNA作为疫苗佐剂 疫苗专家审查 2011年 10 4 499年 511年 10.1586 / erv.10.174 2 - s2.0 - 79955124819 21506647 文澜 O。 Rafael-Valdivia l Torrademe E。 洛佩兹 一个。 命运 V。 Sanchez-Cabus 年代。 Lopez-Pua Y。 Rimola 一个。 深色的 M。 细胞内干扰素- γ和表达- 2监测代理标记的急性排斥反应的风险和个人药物反应新创肝移植受者 细胞因子 2013年 61年 2 556年 564年 10.1016 / j.cyto.2012.10.026 2 - s2.0 - 84873150010 23265966