JFQ 《食品质量 1745 - 4557 0146 - 9428 Hindawi 10.1155 / 2020/1752415 1752415 研究文章 Mycobiota的分子特征 曲霉属真菌物种 土鳖虫制成基于高通量测序的ITS1和凸轮沃克 https://orcid.org/0000 - 0002 - 7652 - 8878 白 凌 1 2 https://orcid.org/0000 - 0003 - 3951 - 4132 他 刘 2 余 Penghao 2 罗 Jiaoyang 2 杨 美华 2 一个 Xiangren 3 https://orcid.org/0000 - 0002 - 8861 - 9769 魏 Xiaoxing 1 3 Galimberti 安德里亚 1 生态环境工程学院 青海大学 西宁 青海810016 中国 qhu.edu.cn 2 药用植物研究所的发展 中国医学科学院北京协和医学院 北京100193年 中国 cams.ac.cn 3 临床实验室医学系 青海省人民医院 西宁 青海810007 中国 2020年 7 5 2020年 2020年 03 01 2020年 28 02 2020年 09年 03 2020年 7 5 2020年 2020年 版权©2020年灵白等。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

土鳖虫制成沃克是一个宝贵的中国传统动物医学首次记录 神农不同。先前的研究表明 大肠sinensis很容易被黄曲霉毒素污染(AFs),它是高度有毒真菌毒素,在收获的季节,存储和运输,从而构成很大的威胁消费者的健康。多数情况下,由这些AFs 曲霉属真菌物种。在这项研究中,我们对比传统文化稀释镀方法为真菌的高通量测序(高温超导)技术在中药鉴定 大肠sinensis。这两个方法内部转录间隔区1 (ITS1)和钙调蛋白(CaM)测序真菌分子识别。新凸轮引物设计在研究适合MiSeq PE300测序用于识别 曲霉属真菌物种在社区的DNA样本。更多的真菌的物种被发现 大肠sinensis基于高温超导样品使用培养的稀释比镀方法。总的来说,结合测序ITS1和凸轮检测是一种有效的方法和监测潜在的产毒素的 曲霉属真菌物种 大肠sinensis。总之,高温超导可以用来获取大量的测序数据对真菌污染动物医学,允许早期检测潜在的产毒素的真菌和确保有效的生产和安全 大肠sinensis。

 青海大学 2017 - zz - 15所示 中国科学院 中国医学科学院 2017 - i2m - 1 - 013 1。介绍

女性的身体干地面甲虫 土鳖虫制成沃克是一个宝贵的中国传统动物医学首次记录 神农不同也被用作中药(TCM)了数百年。收集昆虫,被开水烫死,干在阳光下或烘烤。由于其高蛋白质含量( 1和独特的品味,它也被认为是高档菜的一些餐馆和顾客。因此,需求增加 大肠sinensis在中国,它有一个巨大的市场潜力药品和食物。目前, 大肠sinensis提出了通过人工繁殖。

因为人工栽培 大肠sinensis通常是美联储有机腐殖质,如麦麸和腐烂的树叶,提要留在地面的肠道甲虫非常容易受到霉菌和真菌污染过程中收集,加工,运输,存储昆虫。根据市场调查, 大肠sinensis很容易被黄曲霉毒素污染( 2- - - - - - 4),影响药品的安全,威胁消费者的健康( 5, 6]。黄曲霉素是主要由生产 曲霉属真菌真菌( 7]。的早期检测 曲霉属真菌污染物 大肠sinensis可以防止真菌毒素进入消费市场。的快速发现 曲霉属真菌真菌具有重要意义,以确保有效中药的生产和安全。

的识别 曲霉属真菌sp.基于形态学和分子识别的物种。DNA条码技术已成为越来越重要的分子鉴定真菌和真菌生态研究。核rDNA内部转录间隔区(ITS)地区是官方的DNA条形码探索真菌多样性和社区在环境样品,因为该地区可以从最容易放大DNA样本与通用引物( 8)和识别的概率最高最广泛的真菌( 9]。然而,它的序列区分一些缺乏足够的变异 曲霉属真菌演化支( 10]。参孙等人推荐钙调蛋白(CaM)作为二次识别的标志 曲霉属真菌sp。 11]。到目前为止,已经有研究凸轮使用有限 曲霉属真菌物种识别社区DNA样本。

随着高通量测序(高温超导)技术的发展,大规模研究真菌的数量发生在协会与植物( 12, 13)、动物( 14),和人类 15)增加了。在这里,我们设计了一个新的底漆CaMr1搭配CMD5 [ 16获得一个凸轮扩增子的长度不超过300个基点。的扩增子可以用于MiSeq PE300的分析 曲霉属真菌物种。我们在中药提取真菌群落DNA发生 大肠sinensis样品和使用高温超导技术基于ITS1和凸轮扩增子检查真菌微生物 曲霉属真菌sp 。我们也使用文化稀释电镀方法分离出真菌 大肠sinensis。与传统方法相比,这两个标记的高温超导结果表明结合ITS1和凸轮为确定真菌中医是非常有效的发现潜在的产毒素的 曲霉属真菌物种。

 2。材料和方法 2.1。样品制备

大肠sinensis购买从曹县(山东、中国)和验证玉林林教授(药用植物研究所开发,凸轮)。三个样品 大肠sinensis(ES1, ES2和胡状)是用于文化稀释电镀法和高温超导。

 2.2。培养稀释电镀方法

的三个 大肠sinensis样品(4 g)被包含40毫升无菌水和20瓶玻璃珠;瓶120 r.min发生了动摇−15分钟和允许站5分钟。悬架是稀释10−1∼10−6,1毫升的每个示例应用麦芽提取琼脂(MEA)中包含100 ppm氯霉素,每个稀释浓度三个重复。板块在25°C,培养和菌落数分为单孢子后七天。液态氮的收集菌丝和地面砂浆。M5真菌基因组DNA的DNA提取工具包(Mei5生物技术,中国),并使用其进行PCR引物(ITS1: TCCGTAGGTGAACCTGCGG ITS4: TCCTCCGCTTATTGATATGC) ( 8]和凸轮引物(CMD5: CCGAGTACAAGGARGCCTTC CMD6: CCGATRGAGGTCATRACGTGG) ( 16),分别。PCR产物测序使用Sanger测序。

 2.3。高温超导的方法 2.3.1。DNA提取

这三个 大肠sinensis样品,每个重达40 g,地面与液氮灰浆。社区总DNA提取4 g的粉末与M5真菌基因组DNA工具包(Mei5,中国)。DNA浓度测量与NanoDrop 2000(美国热科学)和≥20 ng· μl−1。的OD260年/ OD280年在1.8和2.0之间。提取的DNA是储存在−20°C为后续分析。

 2.3.2。ITS1和凸轮引物扩增

从每个样本中提取的DNA作为模板DNA 10 ng。因为整个区域范围从450年到700年,英国石油公司为高温超导太长,使用部分序列。引物ITS1-F (5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′) [ 17)和ITS2 (5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′) [ 8, 18)被用于放大ITS1地区。ITS1-F和ITS2被用来调查真菌群落的多样性和成分从环境样本经常在过去10年( 19- - - - - - 21]。引物CMD5和CaMr1 (5′-CCTTRGTRG TGA TYT GRC CT-3′,这项研究)被用于放大凸轮的一个环节。与反式pcr进行开始快速Pfu DNA聚合酶(TransGen,中国)。反应体系包含4 μL 5×Pfu缓冲快,2 μ0.8 L核苷酸(2.5毫米) μL的正向和反向引物,10 ng的模板DNA, 0.4 μL快速Pfu聚合酶,超纯水的最终体积20 μl .在下列条件下进行PCR扩增:95°C 5分钟;95°C 30年代,55°C 30年代,27的周期为45 s 72°C;并为10分钟72°C。实验中使用的所有样本,每个样本放大三倍。PCR产品相同的样本混合和琼脂糖凝胶电泳检测到2%,PCR是恢复Axy预科DNA凝胶回收设备(美国Axygen)。

 2.3.3。Illumina公司PE300测序和数据分析

使用Illumina公司的扩增子被测序MiSeq PE300平台(Illumina公司、美国),MiSeq试剂盒v3(600 -周期)(美国Illumina公司),由上海Biozeron生物技术有限公司(上海,中国)。

Illumina公司PE300测序数据首先包括有效的序列样本。基于重叠paired-end (PE)读取,拼接成一个序列配对阅读。最后,根据条形码和引物序列,每个样本的高质量的序列拼接得到的,和序列方向修正根据正向和反向条形码,和方向的底漆使用。嵌合体被移除,最后,一个有效的顺序文件。生物信息学手段每个样本的统计分析的辣子鸡是使用Usearch执行(version10: http://drive5.com/uparse/)软件在97%的相似水平的分类。

获得相对应的物种分类每个OTU RDP分类器( 22)是用于分类97%代表OTU序列的相似程度,并计算每个样本的社区组成,每个分类级别(家庭、属和物种)。香农指数的α多样性值( 23)( http://www.mothur.org/wiki/Shannon)和辛普森多样性指数( http://www.mothur.org/wiki/Simpson)计算使用mothur (v.1.30.1版本 http://www.mothur.org/wiki/Schloss_SOP Alpha_diversity)软件( 24]。丰富的物种和样品不同的测序数据比较了稀疏曲线( 25]。

 3所示。结果与讨论

培养的稀释镀方法在三个分离的真菌 大肠sinensis样品(ES1, ES2,胡状)。总共32真菌克隆收购从所有样本。我们从每个32提取基因组DNA克隆和测序和凸轮PCR产品利用Sanger测序。通过比较其与凸轮用爆炸序列与NCBI数据库工具,总共有六个真菌物种鉴定,包括 曲霉属真菌,candidus演变来pseudoglaucus, 答:红色的, 答:tubingensis, 青霉菌chrysogenum,和 Hyphopichia burtonii。

高温超导分析、社区DNA提取三种 大肠sinensis样品一式三份。总共9个DNA样本进行分析使用Illumina公司MiSeq PE300基于真菌的扩增子测序ITS1地区。扩增子的平均长度约为227个基点。共有394295个序列(表获得 1)。PE比对后,质量过滤和删除嵌合体和单件超过100000 ITS1序列从每个样本被恢复。香农稀疏序列分析表明,每个样本数据饱和(图 1)。共有286个辣子鸡被发现 大肠sinensis。分类学的和功能注释数据库NCBI核苷酸序列(Nt)是用来确定140年真菌属。在样品ES1和胡, 曲霉属真菌大多数真菌属,分别占96.9%和99.3%的属。然而,了解分类显示 答:红色的或 答:tubingensis,发现使用培养的稀释平板法。在示例ES1, 25%的序列被注释 曲霉属真菌部分 曲霉属真菌(原属 Eurotium(图),但不能确定物种 2)。

摘要高温超导的ITS1扩增子 大肠sinensis。

ES1 ES2 胡
序列 131405年 143763年 119127年
平均长度(bp) 225年 237年 218年
基地(bp) 29564446年 34174249年 26001838年
不。的辣子鸡 286年
92年 254年 23
不。的属 140年
48 130年 11

高温超导的评价数据基于ITS1扩增子。Shannon-Wiener曲线表明,真菌多样性水平深入测序在所有三个 大肠sinensis样品(a)。稀疏曲线表明,真菌物种的丰度增加而读取(b)的数量。

Genus-level真菌成分的百分比基于高温超导的ITS1扩增子三个 大肠sinensis样本。

使用高温超导平台,凸轮的一部分基因序列被用来识别定义 曲霉属真菌sp.在 大肠sinensis样本。在 曲霉属真菌sp,凸轮与前所述引物PCR产品获得的长度约为600个基点( 16),这对高温超导太长。这三个 大肠sinensis样本测序使用两个引物CMD5和CaMr1一式三份。扩增子的平均长度是249个基点。共有1026856个序列(表获得 2)。香农稀疏分析表明,每个样品的测序数据饱和(图 3)。共有193个辣子鸡被发现。分类学的和功能注释的序列数据库Nt时使用,只有13真菌属被发现。真菌属被测序凸轮的数量远远少于真菌属被ITS1序列的数量。这是因为凸轮序列是丰富的 曲霉属真菌sp。,而在其他真菌是罕见的。19 曲霉属真菌物种是基于CaM的高温超导(图的注释 4)。所有的四个 曲霉属真菌物种( 答:candidus, 答:pseudoglaucus, 答:红色的, 答:tubingensis发现使用培养的稀释平板法也发现高温超导基于CaM扩增子。此外,另一个15 曲霉属真菌物种被发现 大肠sinensis样本,包括潜在的产毒素的真菌 答:flavus。

高温超导的凸轮扩增子的摘要 大肠sinensis。

ES1 ES2 胡
序列 386069年 423179年 217608年
平均长度(bp) 247年 250年 250年
基地(bp) 95284351年 105669488年 54406592年
不。的辣子鸡 193年
169年 72年 60
不。的属 13
10 5 2

高温超导的评价数据基于CaM扩增子。Shannon-Wiener曲线表明,真菌多样性水平深入测序在所有三个 大肠sinensis样品(a)。稀疏曲线表明,真菌物种的丰度增加而读取(b)的数量。

的百分比 曲霉属真菌种基于高温超导的凸轮为所有三个扩增子 大肠sinensis样本。

它是主要的真菌条形码标记用于识别个别菌株和在环境样品分析真菌多样性 26]。除了普遍ITS1和ITS4引物,引物针对大部分地区发表在1990年代( 8, 17]。其他引物瞄准ITS1和ITS2地区最近旨在更好地利用高温超导( 18, 27- - - - - - 29日]。在这项研究中,我们使用了ITS1-F和ITS2引物生成PCR产品不超过300 bp在大小和适合高温超导。在区分真菌属扩增子是有效的 大肠制成。然而,一些研究已经表明,它是高度保守的序列 曲霉属真菌部分 曲霉属真菌(原属 Eurotium),不能用来区分不同物种 10]。凸轮是一个Ca2 +传感器参与大量的生物过程。在先前的研究中,凸轮序列被用来区分 曲霉属真菌物种。为了识别潜在的产毒素的 曲霉属真菌物种使用高温超导 大肠sinensis,我们设计了一个新的凸轮引物可用于高温超导的分析。因此,凸轮高温超导分析可以用来识别 曲霉属真菌物种在社区DNA样本,弥补ITS1不足。

ES1样本,10.9%序列注释 答:flavus;然而,它没有发现通过培养稀释镀方法。众所周知,当前不能培养真菌的比例非常高,可用人工条件下( 30.]。虽然我们粉碎了 大肠sinensis样本,真菌在肠道内残余饲料很难分离。高温超导可以更有效地识别内部真菌。

在胡的示例中,只有两个序列注释 答:flavus通过高温超导,而文化稀释镀方法不能分离 答:flavus从样本。跟踪量产毒素的 答:flavus在 大肠sinensis很难通过培养分离稀释镀方法。不当的存储条件下,潜在的产毒素的真菌可能会盛开 大肠sinensis。此外,高温超导技术只需要几个小时,而文化稀释镀方法需要近半个月。总的来说,高温超导的分析真菌微生物比早期发现潜在的产毒素的真菌的培养方法 大肠sinensis。我们的研究结果表明,高温超导高效识别产毒素的真菌在动物药品 大肠sinensis。

学习是很重要的 曲霉属真菌sp.食品和药品为了远离霉菌毒素。下一步发展的高温超导作为真菌毒素可能是屏幕检测黄曲霉毒素基因本身。黄曲霉毒素的生物合成途径已经被完全阐明,和两个基因的表达水平, aflS和 aflR调节结构基因的转录,黄曲霉毒素集群( 31日, 32]。两个基因的表达水平可能反映了黄曲霉毒素的生产水平。接下来,我们可以检测的表达 aflS或 aflR基于高温超导预测是否存在潜在的产毒素的真菌中医。

 4所示。结论

我们使用了文化稀释电镀法和高温超导研究的真菌组成三人 大肠sinensis样本。污染物真菌属物种的数量被高温超导显然远远高于使用培养的稀释镀方法获得的。基于高温超导的ITS1扩增子286辣子鸡注释140真菌属被发现。 曲霉属真菌在所有三个主要真菌属 大肠sinensis样本。共有19 曲霉属真菌基于高温超导的物种被发现凸轮扩增子。其中,只有四个 曲霉属真菌基于培养的物种被发现稀释镀方法。有一些序列 答:flavus通过高温超导ES1和胡状。结合高温超导的ITS1和凸轮是一种有效的监测预警方法在中医的潜在产毒素的真菌和真菌毒素。

 数据可用性

原始序列中可用的序列读取存档NCBI下加入PRJNA598990数量。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 确认

这项工作受到了国家重点实验室开放项目的高原生态和农业、青海大学(2017 - zz - 15),中科院“西部之光”项目,摄像头为医学科学创新基金(CIFMS,格兰特没有。2017 - i2m - 1 - 013)。

 张 N。 赵 Y。 史 Y。 陈 R。 傅 X。 赵 Y。 多肽提取 土鳖虫制成沃克通过酶消化减轻紫外线辐射诱导皮肤光老化 生物医学和药物治疗 2019年 112年 108636年 10.1016 / j.biopha.2019.108636 2 - s2.0 - 85061725939 张 W。 邹 y . H。 朱 l·G。 黄曲霉毒素的测定 土鳖虫通过高效液相色谱法 中国药店 2015年 26 30. 4269年 4271年 刘 l . N。 李 y L。 金 h . Y。 马 s . C。 测定黄曲霉毒素的动物药品通过immunoaffinity列和HPLC-FLD光化学衍生荧光检测 中国传统药物和草药 2017年 48 6 1220年 1224年 余 p . H。 张 l 秦 j . A。 王 j . H。 杨 s . H。 杨 m . H。 同时测定黄曲霉毒素B1, B2, G1, G2, M1, M2 土鳖虫Steleophaga通过immunoaffinity列清理和HPLC-FLD postcolumn光化学衍生化 中国《本草书 2019年 44 23 5083年 5087年 特纳 n W。 Bramhmbhatt H。 Szabo-Vezse M。 真菌毒素的测定分析方法:一个更新(2009 - 2014) 分析Chimica学报 2015年 27 3232年 3235年 应 g . Y。 赵 X。 王 j·L。 “药对”技术的应用和前景抗霉中药材的维护 中国中药杂志》上 2016年 41 2768年 2773年 佩恩 g。 布朗 m P。 遗传学和生理的黄曲霉毒素生物合成 年度回顾的植物病理学 1998年 36 1 329年 362年 10.1146 / annurev.phyto.36.1.329 2 - s2.0 - 0031715283 白色的 t·J。 布鲁斯 T。 李 年代。 泰勒 J。 英尼斯 m·A。 盖尔芬德 d . H。 Sninski J·J。 白色的 t·J。 放大和直接测序系统发生学的真菌的核糖体RNA基因 PCR协议指导方法和应用 1990年 圣地亚哥,加州,美国 学术出版社有限公司 Schoch c . L。 塞弗特 k。 Huhndorf 年代。 核核糖体内部转录间隔区(ITS)地区普遍为真菌DNA条形码标记 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 2012年 109年 6241年 6246年 10.1073 / pnas.1207508109 2 - s2.0 - 84863579045 陈 a·J。 Hubka V。 Frisvad j . C。 多相分类的 曲霉属真菌部分曲霉属真菌(以前 Eurotium),它发生在室内环境和食物 在真菌学的研究 2017年 88年 37 135年 10.1016 / j.simyco.2017.07.001 2 - s2.0 - 85027832946 参孙 r。 Visagie c . M。 Houbraken J。 属的发展史、鉴定和命名法 曲霉属真菌 在真菌学的研究 2014年 78年 141年 173年 10.1016 / j.simyco.2014.07.004 2 - s2.0 - 84908295357 穆勒 d·B。 沃格尔 C。 白 Y。 Vorholt j . A。 植物微生物群:系统性的见解和观点 年度回顾的遗传学 2016年 50 1 211年 234年 10.1146 / annurev -麝猫- 120215 - 034952 2 - s2.0 - 85000578269 黄 a . C。 江 T。 刘 y . X。 一个专门的代谢网络选择性地调节 拟南芥根微生物群 科学 2019年 364年 6440年 10.1126 / science.aau6389 2 - s2.0 - 85064072699 李 W.-J。 哈泽 K。 肠道microbiota-generated代谢物在动物健康和疾病 化学生物学性质 2014年 10 6 416年 424年 10.1038 / nchembio.1535 2 - s2.0 - 84901050860 Zmora N。 苏伊士 J。 Elinav E。 你是你吃什么:饮食、健康和肠道微生物群 自然评论胃肠病学和肝脏病学 2019年 16 1 35 56 10.1038 / s41575 - 018 - 0061 - 2 2 - s2.0 - 85054004386 在香港 S.-B。 去 S.-J。 胫骨 》。 Frisvad j . C。 参孙 r。 多相分类的 来自烟曲霉属真菌和相关的物种 Mycologia 2005年 97年 6 1316年 1329年 10.1080 / 15572536.2006.11832738 加尔省 M。 布鲁斯 t D。 担子菌与增强特异性引物——应用菌根的识别和生锈 分子生态学 1993年 2 2 113年 118年 10.1111 / j.1365 - 294 x.1993.tb00005.x 2 - s2.0 - 0027580147 马丁 k·J。 Rygiewicz p . T。 Fungal-specific引物为分析该地区的环境开发的DNA提取 BMC微生物学 2005年 5 1 28 10.1186 / 1471-2180-5-28 2 - s2.0 - 23044485088 Buee M。 帝国 M。 Murat C。 454焦磷酸测序分析的森林土壤揭示意外高真菌多样性 新植物学家 2009年 184年 2 449年 456年 10.1111 / j.1469-8137.2009.03003.x 2 - s2.0 - 70349482733 Ghannoum m·A。 Jurevic r . J。 穆克吉 p K。 描述的口腔真菌微生物(Mycobiome)在健康的个体 PLoS病原体 2010年 6 1 e1000713 10.1371 / journal.ppat.1000713 2 - s2.0 - 77649230349 McGuire k . L。 佩恩 s G。 帕尔默 m . I。 挖掘纽约市天际线:土壤真菌群落在绿色屋顶和城市公园 《公共科学图书馆•综合》 2013年 8 3 e58020 10.1371 / journal.pone.0068278 2 - s2.0 - 84879986164 王 Q。 嘉里蒂 g . M。 Tiedje j . M。 科尔 j . R。 核糖体rna序列的朴素贝叶斯分类器的快速分配到新的细菌分类 应用与环境微生物学 2007年 73年 16 5261年 5267年 10.1128 / aem.00062-07 2 - s2.0 - 34548293679 余 W。 盛 h·F。 比较细菌多样性水平的淡水,潮间带湿地,和海洋沉积物通过数以百万计的Illumina公司标签 应用与环境微生物学 2012年 78年 23 8264年 8271年 10.1128 / aem.01821-12 2 - s2.0 - 84870834756 城堡 p D。 Gevers D。 威斯克 s . L。 减少的影响PCR扩增和测序工件在16 s rRNA-based研究 《公共科学图书馆•综合》 2011年 6 12 e27310 10.1371 / journal.pone.0027310 2 - s2.0 - 83355173006 城堡 p D。 威斯克 s . L。 Ryabin T。 引入mothur:开源,独立于平台的,支持的软件描述和比较微生物群落 应用与环境微生物学 2009年 75年 23 7537年 7541年 10.1128 / aem.01541-09 2 - s2.0 - 72949107142 O ' brien h·E。 Parrent j·L。 杰克逊 j . A。 Moncalvo 人类。 Vilgalys R。 真菌社区大规模测序环境样品的分析 应用与环境微生物学 2005年 71年 9 5544年 5550年 10.1128 / aem.71.9.5544 - 5550.2005 2 - s2.0 - 25144516095 Bellemain E。 Carlsen T。 Brochmann C。 Coissac E。 Taberlet P。 Kauserud H。 其作为一个环境为真菌DNA条形码:在硅片的方法揭示了潜在的PCR偏见 BMC微生物学 2010年 10 1 189年 10.1186 / 1471-2180-10-189 2 - s2.0 - 77954336858 Ihrmark K。 Bodeker i t M。 Cruz-Martinez K。 新引物扩增真菌ITS2地区-评价454测序的人工和自然的社区 《微生物生态学 2012年 82年 3 666年 677年 10.1111 / j.1574-6941.2012.01437.x 2 - s2.0 - 84869886141 Op De Beeck M。 列文 B。 Busschaert P。 Declerck 年代。 Vangronsveld J。 Colpaert j . V。 比较和验证其引物对一些有用的真菌metabarcoding研究 《公共科学图书馆•综合》 2014年 9 6 e97629 10.1371 / journal.pone.0097629 2 - s2.0 - 84903128093 柯克 j·L。 Beaudette l。 哈特 M。 研究土壤微生物多样性的方法 《微生物方法 2004年 58 2 169年 188年 10.1016 / j.mimet.2004.04.006 2 - s2.0 - 3242731518 余 J。 常 P.-K。 埃利希 k . C。 集群在黄曲霉毒素生物合成途径基因 应用与环境微生物学 2004年 70年 3 1253年 1262年 10.1128 / aem.70.3.1253 - 1262.2004 2 - s2.0 - 12144286398 Belen P。 3月 R。 约书亚 D。 玛丽亚 j . A。 艾丽西亚 R。 基因表达是一个很好的指示器黄曲霉毒素污染的干腌火腿 食品微生物学 2017年 67年 31日 40 10.1016 / j.fm.2017.05.008 2 - s2.0 - 85019990080