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JEPH

环境和公共卫生杂志》上

1687 - 9813 1687 - 9805

Hindawi出版公司

986460年

10.1155 / 2010/986460

986460年

研究文章

部分纯化和表征的作用方式Enterocin S37:产生的细菌素粪肠球菌S37隔绝家禽粪便

Belguesmia

Y。

¹ Choiset

Y。

² 普雷沃斯特

H。

¹ Dalgalarrondo

M。

² Chobert

人类。

² 干涸

D。

^1、3 卡彭特

大卫O。

^{1

ONIRIS。法国Veterinaire

Agroalimentaire et de l 'alimentation Nantes-Atlantique

街Geraudiere,英国石油公司82225年、44322年南特Cedex 3

法国

oniris-nantes.fr} ^{2

你1268年生物聚合物组合的交互

运动队函数et des的相互作用蛋白质Laitieres

INRA,英国石油公司71627年、44316年南特Cedex 3

法国

nantes.inra.fr} ^{3

生殖卫生风险研究和生物技术部门

UPSP dg 5301

Nantes-Atlantic国家兽医学院、食品科学与工程(ONIRIS)

ONIRIS La Chantrerie BP 40706

44307年南特Cedex 03

法国

oniris-nantes.fr}

2010年

14 07年 2010年

2010年 12 05年 2010年 22 06 2010年

2010年

这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

本研究的目的是净化的作用方式和描述enterocin S37,产生的细菌素粪肠球菌S37,应变最近从鸡粪便分离。Enterocin S37 4和5之间有一个分子量由kDa。1 h后它仍然活跃 80年 o C 在pH值从4.0到9.0不等。此外,浮在表面的游离粪肠球菌S37和纯化enterocin S37活跃对革兰氏阳性细菌包括单核细胞增多性李斯特氏菌缝隙, l . innocuaF, 粪肠球菌JH2-2, 短乳F145。的净化enterocin S37是由硫酸铵沉淀后由疏水作用色谱法程序。治疗enterocin S37与蛋白酶K, α 胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶证实其蛋白质的性质,而与溶菌酶和脂肪酶的治疗导致没有变更的活动。Enterocin S37是疏水的,反李斯特菌损耗和可能作用的细胞内K+离子在行动 K 三磷酸腺苷频道。本研究有助于获得更多的见解enterocins的作用方式。 1。介绍<gydF4y2Ba/title> <p>细菌素是由细菌核糖体合成抗菌肽生产值得相当大的兴趣作为自然和无毒食品防腐剂以及潜在的使用在人类和兽医应用程序,和在动物生产领域<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B10"> 1<gydF4y2Ba/xref>]。1976年泰格等<gydF4y2Baitalic> 。<gydF4y2Ba/italic>细菌素定义为蛋白质的化合物可以杀死细菌密切相关但现在认识到,细菌素也可以有活动在属(广谱)[<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 2<gydF4y2Ba/xref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B37"> 4<gydF4y2Ba/xref>]。目标菌株的抗菌药物敏感性任何细菌素可能取决于它生长的生态条件随着盐浓度的变化,pH值、膜的破坏分子,或诱导文化,和大量的其他环境参数可以产生重大影响<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B19"> 5<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B34"> 6<gydF4y2Ba/xref>]。革兰氏阳性细菌素的分类困难的因为他们的异质性,因此,呈现为革兰氏阳性细菌素的数量继续增加,分类方案必须不断发展(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B10"> 1<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>Klaenhammer [<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B24"> 8<gydF4y2Ba/xref>)建议四类细菌素包括类我或lantibiotics小membrane-active肽(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M4"> <mml:mrow> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>5 kDa)包含不同寻常的氨基酸lanthionine或<gydF4y2Baitalic> β<gydF4y2Ba/italic>甲基lanthionine(因此得名lantibiotics)和脱水的残留物。乳酸链球菌肽是最特征的类细菌素。二类定义为小热稳定nonlanthionine包含膜活性肽以Gly-Gly处理网站的存在细菌素前体,两亲性螺旋的存在与不同数量的疏水性和温和的高热稳定性。这些都进一步细分为三个子组命名子类花絮”,这是<gydF4y2Baitalic> 李斯特菌<gydF4y2Ba/italic>在氨基活性肽和YGNGV盒(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>];IIb子类:poration复合体组成的两种蛋白质的肽活动(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B4"> 10<gydF4y2Ba/xref>]和子类IIc,含有硫醇激活肽需要减少cysteyl残留活动(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B24"> 8<gydF4y2Ba/xref>]。第三类是大热不稳定蛋白,常常与酶活性和最后四级,这是由复杂的蛋白质。然而,最近的报告分类只有三个主要类(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B5"> 11<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>许多<gydF4y2Baitalic> 肠球菌<gydF4y2Ba/italic>压力来自不同生态系统被认为是广泛的食源性病原体的拮抗剂(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 12<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B27"> 13<gydF4y2Ba/xref>]。肠球菌的菌株产生的细菌素异构结构和差异显示在他们的行动模式<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B14"> 14<gydF4y2Ba/xref>]。大多数细菌素生产商不仅从肠球菌的菌株不同类型的食物,但也从肉鸡<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 2<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B37"> 4<gydF4y2Ba/xref>)和动物分泌物(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B38"> 15<gydF4y2Ba/xref>]。在文献中报道,这些细菌素表现出高的一些活动对广泛的细菌包括革兰氏阳性细菌,<gydF4y2Baitalic> 葡萄球菌<gydF4y2Ba/italic>和<gydF4y2Baitalic> 链球菌<gydF4y2Ba/italic>和革兰氏阴性细菌<gydF4y2Baitalic> 弯曲杆菌<gydF4y2Ba/italic>或<gydF4y2Baitalic> 沙门氏菌<gydF4y2Ba/italic>,医学感兴趣的品种<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 2<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B37"> 4<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B16"> 16<gydF4y2Ba/xref>]。能够产生这样一个biocompound可能发挥作用在nonbacteriocin生产者提供一个生态优势菌株。以前,我们有孤立的<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>从鸡肉下降<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 7<gydF4y2Ba/xref>)这似乎是细菌素生产商。在这项工作中,我们采取的纯化和表征这种肽的作用方式命名enterocin S37。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="section" id="sec2"> <title>2。材料和方法<gydF4y2Ba/title> <sec sec-type="subsection" id="sec2.1"> <title>2.1。细菌素生产商应变<gydF4y2Ba/title> <p> <italic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37隔绝家禽粪便收集在一个法国农场位于Ancenis(法国)以西<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 7<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37被测序整个16 s rRNA基因(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 7<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37显示在第一个实例对抗针对菌株属于<gydF4y2Baitalic> 李斯特菌<gydF4y2Ba/italic>和<gydF4y2Baitalic> 弯曲杆菌<gydF4y2Ba/italic>物种(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 7<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec2.2"> <title>2.2。抗菌活性<gydF4y2Ba/title> <p>的抗菌活动enterocin S37评估对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌中列出的表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab1"> 1<gydF4y2Ba/xref>。浮在表面的游离(CFS)和部分纯化enterocin S37,硫酸铵沉淀和连续两个反相高效液相色谱法(rp)的步骤,以评估使用对抗目标菌株中列出的表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab1"> 1<gydF4y2Ba/xref>。<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37,<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>JH2-2,<gydF4y2Baitalic> 短乳<gydF4y2Ba/italic>F1.114,<gydF4y2Baitalic> 磅bulgaricus<gydF4y2Ba/italic>340年,<gydF4y2Baitalic> 磅短<gydF4y2Ba/italic>F145,<gydF4y2Baitalic> 假单胞菌sp<gydF4y2Ba/italic>。131年,<gydF4y2Baitalic> 大肠杆菌<gydF4y2Ba/italic>CIP 76.24,<gydF4y2Baitalic> 沙门氏菌蒙得维的亚,Sal。血清<gydF4y2Ba/italic>血清型<gydF4y2Baitalic> 肠炎<gydF4y2Ba/italic>CIP 81.3,<gydF4y2Baitalic> 葡萄球菌epidermidis<gydF4y2Ba/italic>CIP 68.21,<gydF4y2Baitalic> 蜡样芽胞杆菌<gydF4y2Ba/italic>CIP 78.3<gydF4y2Baitalic> ,<gydF4y2Ba/italic>和<gydF4y2Baitalic> 明串珠菌属mesenteroides<gydF4y2Ba/italic>无性系种群<gydF4y2Baitalic> 。mesenteroides<gydF4y2Ba/italic>DSM 20240人生长在脑心浸液肉汤(BHI)中(AES, Bruz法国),同时<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙,<gydF4y2Baitalic> l . innocua<gydF4y2Ba/italic>F是生长在Elliker介质(AES)。<gydF4y2Baitalic> 空肠弯曲杆菌<gydF4y2Ba/italic>国家反恐怖主义中心的11168年是生长在布鲁氏菌培养基(AES)。<gydF4y2Ba/p> <table-wrap id="tab1"> <label>表1<gydF4y2Ba/label> <p>抗菌活动部分纯化enterocin S37。<gydF4y2Ba/p> <table> <thead> <tr> <th align="left">菌株<gydF4y2Ba/th> <th align="center">参考<gydF4y2Ba/th> <th align="center">源和参考<gydF4y2Ba/th> <th align="center">Enterocin S37<gydF4y2Ba/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left"> <italic> 粪肠球菌<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">S37<gydF4y2Ba/td> <td align="center">(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 7<gydF4y2Ba/xref>]<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M5"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 粪肠球菌<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">JH2-2<gydF4y2Ba/td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <bold> +<gydF4y2Ba/bold></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 单核细胞增多性李斯特氏菌<gydF4y2Ba/italic>缝隙<gydF4y2Ba/td> <td align="center">107776年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">CIP(法国巴黎)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <bold> + + +<gydF4y2Ba/bold></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 英诺克李斯特菌<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">F<gydF4y2Ba/td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <bold> + +<gydF4y2Ba/bold></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 乳酸菌bulgaricus<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">340年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M6"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 磅短<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">F1.114<gydF4y2Ba/td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <bold> + +<gydF4y2Ba/bold></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 磅短<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">F145<gydF4y2Ba/td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <bold> +<gydF4y2Ba/bold></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 假单胞菌sp<gydF4y2Ba/italic>。<gydF4y2Ba/td> <td align="center">131年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M7"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 大肠杆菌<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">76.24<gydF4y2Ba/td> <td align="center">CIP(法国巴黎)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M8"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 蒙得维的亚沙门氏菌<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center"></td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M9"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 萨尔。血清<gydF4y2Ba/italic>血清型<gydF4y2Baitalic> 肠炎<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">81.3<gydF4y2Ba/td> <td align="center">CIP(法国巴黎)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M10"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 葡萄球菌epidermidis<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">68.21<gydF4y2Ba/td> <td align="center">CIP(法国巴黎)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M11"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 空肠弯曲杆菌<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">11168年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">据国家反恐怖主义中心(英国伦敦)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M12"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 蜡样芽胞杆菌<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">78.3<gydF4y2Ba/td> <td align="center">CIP(法国巴黎)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M13"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 明串珠菌属mesenteroides<gydF4y2Ba/italic>无性系种群<gydF4y2Baitalic> 。mesenteroides<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center">20240年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">德国布伦瑞克(DSM)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M14"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 链球菌haemolyticus<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center"></td> <td align="center">实验室集合<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M15"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p>-:没有抑制,+:抑菌圈直径小于3毫米,+ +:抑菌圈直径由3至6毫米,+ + +:抑菌圈直径大于6毫米。<gydF4y2Ba/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> <p>抗菌活性测定的众所周知的琼脂扩散试验(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。为此,100年<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M16"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>L在一夜之间文化的目标菌株添加到20毫升Elliker或BHI软琼脂培养基已经包含0.8% (w / v)的琼脂(Biokar诊断、博韦、法国)。井进行固体琼脂和50<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M17"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>l(每个样品测试井涌。培养皿是在室温下,在无菌条件下,1 h在孵化前18 h在适当的温度下根据目标菌株进行测试。经过这段时间的孵化,抗菌活性检测通过观察周围的抑制区包含慢性疲劳综合症。应该注意的是,上层清液通过离心法在15000 g在30分钟<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M18"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 4<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C,通宵的文化<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>生长在<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M19"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 37<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>对18到24 h, C德曼Rogosa夏普(夫人)中<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B6"> 17<gydF4y2Ba/xref>)(AES)。CFS被添加1 N氢氧化钠中和,透过0.2<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M20"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>m膜(缝匠肌、哥廷根、德国)。<gydF4y2Ba/p> <p>计算任意单元(AU)所描述的Batdorj et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。连续两倍稀释的样本进行磷酸盐缓冲剂(25毫米K<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>HPO<gydF4y2Basub>4<gydF4y2Ba/sub>25毫米KH<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>阿宝<gydF4y2Basub>4<gydF4y2Ba/sub>7)透过pH值0.2<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M21"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>m膜(缝匠肌)。这些样本被琼脂扩散试验测试<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙应变,如前所述。一个任意单位被定义为最低稀释的倒数,没有显示增长目标的压力。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec2.3"> <title>2.3。细菌素纯化<gydF4y2Ba/title> <p>CFS中和过滤(400毫升)沉淀和硫酸铵饱和溶液的80%。三个不同的分数被恢复和resuspended 40毫升的磷酸盐缓冲剂(25毫米K<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>HPO<gydF4y2Basub>4<gydF4y2Ba/sub>25毫米KH<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>阿宝<gydF4y2Basub>4<gydF4y2Ba/sub>pH值7);活跃的一个应用rp -列(环礁上15 MP3<gydF4y2Baitalic> ;<gydF4y2Ba/italic>250毫米×10毫米Interchim Montlucon,法国)以前平衡与溶剂(0.05%,v / v,三氟乙酸(组织))。使用梯度洗脱是由从0%溶剂B (0.045%, v / v,组织,80%乙腈)100%溶剂B在45分钟。调整到3 ml.min流量<gydF4y2Basup>1<gydF4y2Ba/sup>和吸光度被记录在220和280海里。分数10毫升的收集和测试他们的抗菌活性。乙腈是删除从活跃的分数Speed-Vac集中器(SC110A,莎凡特)和pH值调整到6.8使用磷酸盐缓冲剂(50 mM;pH值7)。活动分数汇集,细菌素的纯化,rp -继续与年水域联盟设备软件(美国马Millford)。集中细菌素(80<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M22"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>l)注入分析C<gydF4y2Basub>18<gydF4y2Ba/sub>列(对称300;5<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M23"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>m;300球;150×4.6毫米,水域,Guyancourt,法国在0%溶剂C(0.045%)平衡组织在H<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>乙腈溶剂D O)和50% (80%,20% H<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>啊,0.05%的组织)。与线性梯度进行洗脱溶剂从30%到100% D在30分钟。流量被调整至0.8毫升分钟<gydF4y2Basup>1<gydF4y2Ba/sup>。筛选了山峰被检测到分光光度法测量吸光度之间的210和300 nm光敏二极管阵列检测器(PDA 996;水域)和手动收集。分数被集中在一个Speed-Vac集中器。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec2.4"> <title>2.4。酶的影响,pH值及热处理对细菌素的抗菌活性<gydF4y2Ba/title> <p>的影响<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M24"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>胰凝乳蛋白酶(1<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M25"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)、木瓜蛋白酶(1<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M26"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)、蛋白酶K(0.5毫克/毫升<gydF4y2Basup>1<gydF4y2Ba/sup>),溶菌酶(2<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M27"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)和脂肪酶(1<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M28"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)(所有的酶都来自Sigma-Aldrich、德国)的抗菌活性enterocin S37被描述的琼脂扩散试验检查Batdorj et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。CFS是处理上述酶1 h<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M29"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 37<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>c . pH稳定性研究作为描述行et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 2<gydF4y2Ba/xref>]。因此,10毫升的样品(CFS)调整pH值从3到10 1 N盐酸或1 N的氢氧化钠。获得的分数为2 h孵化<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M30"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 37<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>c .这段孵化后,每个处理样品的抗菌活性是由琼脂扩散试验(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。的稳定性enterocin S37于100年就读于高温加热<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M31"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>l的上层清液<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M32"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 80年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C为15分钟,<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M33"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 80年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>1 h和C<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M34"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 90年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C,持续15分钟。在冰,冷却后每个样本检测其对抗通过琼脂扩散试验(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec2.5"> <title>2.5。十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)<gydF4y2Ba/title> <p>为了确定表面的分子质量enterocin S37, sds - page凝胶切成两部分。凝胶的一部分包含分子标记和样本通过硝酸银染色方法染色(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B2"> 18<gydF4y2Ba/xref>),而剩下的部分,只包含样本,与定期更换无菌MilliQ广泛洗水。第二部分的凝胶用于直接检测抗菌活性与软琼脂覆盖(0.8%)播种与应变指标<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>一夜之间缝隙和孵化<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M35"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> </mml:mi> <mml:mn> 37<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec2.6"> <title>2.6。发展Bacteriocin-Resistant变异Enterocin S37<gydF4y2Ba/title> <p>耐药变异enterocin S37被逐步发达的文化<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙在<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M36"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 30.<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C在大豆胰蛋白酶的肉汤(Biokar诊断)补充0.6% (w / v)酵母提取物(La Courneuve Organotechnie SA,法国),叫TSYE肉汤(TSYEB)。Enterocin S37添加2 - 4 - 6 - 8和10倍最小抑制浓度(MIC)。麦克风的决心<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>据Naghmouchi缝隙et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B30"> 19<gydF4y2Ba/xref>)使用标ELx808 (BioTek仪器,坏Friedrichshall,德国)。耐药变异的稳定性检查超过50代。后在TSYEB 50代的增长<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M37"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 30.<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C,菌株接种在含有enterocin TSYEB S37麦克风在10倍。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec2.7"> <title>2.7。影响K <一口> + < /一口>频道调节器<gydF4y2Ba/title> <p> <italic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>生长在缝隙及其bacteriocin-resistant变体<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M38"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 30.<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C 24 h在TSYEB enterocin S37在5<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M39"> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>和K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>频道调节器如pinacidil(π)10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M40"> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>,cromakalim (Cro) 10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M41"> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>和格列吡嗪(Gli) 10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M42"> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>结合enterocin S37每个K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>信道调制器也意识到在类似的条件。所有这些K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>频道调节器获得从Sigma-Aldrich(德国)。增长监控通过测量光密度在595 nm (OD<gydF4y2Basub>595年<gydF4y2Ba/sub>250年)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M43"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>l刚接种培养基放入微型板块井(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B30"> 19<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>抑制活动(IA) enterocin S37在每个K的存在与否<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>信道调制器Naghmouchi所描述的计算等<gydF4y2Baitalic> 。<gydF4y2Ba/italic>(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B30"> 19<gydF4y2Ba/xref>]。显然,IA的比例= 100 - 100 (OD<gydF4y2Basub>595年<gydF4y2Ba/sub>(x) / OD<gydF4y2Basub>595年<gydF4y2Ba/sub>(我))(在指数增长)。价值(x)是文化包含抑制剂,(我)是无拘束的控制文化。数据被表示为变化百分比在IA获得enterocin S37 / K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>信道调制器。<gydF4y2Ba/p> </sec> </sec> <sec sec-type="section" id="sec3"> <title>3所示。结果<gydF4y2Ba/title> <sec sec-type="subsection" id="sec3.1"> <title>3.1。谱的活动Enterocin S37<gydF4y2Ba/title> <p>慢性疲劳综合症的<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37显示活动对<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>JH2-2,<gydF4y2Baitalic> 磅短<gydF4y2Ba/italic>F1.114,<gydF4y2Baitalic> 磅短<gydF4y2Ba/italic>F145,<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙,<gydF4y2Baitalic> l . innocua<gydF4y2Ba/italic>f .然而,没有抗菌活性检测与其余菌株中列出的表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab1"> 1<gydF4y2Ba/xref>。令人惊讶的是,反<gydF4y2Baitalic> 弯曲杆菌<gydF4y2Ba/italic>活动之前观察到(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 7<gydF4y2Ba/xref>)是没有恢复在本研究认为不稳定特征(表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab1"> 1<gydF4y2Ba/xref>)。此外,观察到的活动<gydF4y2Baitalic> 肠球菌<gydF4y2Ba/italic>属有趣的是为了产生新颖的知识在这属免疫蛋白和抗力移转。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec3.2"> <title>3.2。酶和物理化学治疗对Enterocin S37活动<gydF4y2Ba/title> <p>慢性疲劳综合症的<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37显示活动对目标菌株<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>JH2-2,<gydF4y2Baitalic> 磅短<gydF4y2Ba/italic>F1.114,<gydF4y2Baitalic> 磅短<gydF4y2Ba/italic>F145,<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙,<gydF4y2Baitalic> l . innocua<gydF4y2Ba/italic>F即使治疗与脂肪酶(1毫克<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M44"> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)和溶菌酶(2毫克<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M45"> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)。的抗菌活性观察脂酶和溶菌酶治疗类似于观察到的未经处理的上层清液作为积极的控制。然而,治疗蛋白水解酶,如<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M46"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K的损失导致细菌素活动(表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab2"> 2<gydF4y2Ba/xref>)。抗菌活性的稳定性enterocin S37完好无损后加热治疗(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M47"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 80年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>1 h和C<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M48"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 90年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C在pH值为15分钟),从4到9(表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab2"> 2<gydF4y2Ba/xref>)。试图减少公认的二硫桥(s) enterocin S37进行<gydF4y2Baitalic> 二硫苏糖醇<gydF4y2Ba/italic>德国(σ);实验不是决定性的,因为这种化合物的毒性,即使在低浓度下,对目标菌株。<gydF4y2Ba/p> <table-wrap id="tab2"> <label>表2<gydF4y2Ba/label> <p>酶的影响、pH值和热处理的抗菌活性enterocin S37反对<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙,<gydF4y2Baitalic> l . innocua<gydF4y2Ba/italic>F。<gydF4y2Ba/p> <table> <thead> <tr> <th align="left" rowspan="2">治疗<gydF4y2Ba/th> <th align="center" colspan="2">测试压力<gydF4y2Ba/th> </tr> <tr> <th align="center"> <italic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙<gydF4y2Ba/th> <th align="center"> <italic> l . innocua<gydF4y2Ba/italic>F<gydF4y2Ba/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left"> <italic> 酶<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center"></td> <td align="center"></td> </tr> <tr> <td align="left"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M49"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>胰凝乳蛋白酶(1<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M50"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M51"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M52"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left">蛋白酶K (0.5<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M53"> <mml:mi> </mml:mi> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M54"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M55"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left">木瓜蛋白酶(1<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M56"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M57"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M58"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left">溶菌酶(2<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M59"> <mml:mi> </mml:mi> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">脂肪酶(1<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M60"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="center" colspan="3"> <hr></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 抗菌的稳定性评估enterocin S37在不同pH值<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center"></td> <td align="center"></td> </tr> <tr> <td align="left">3.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M61"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M62"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left">4.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">5.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">6.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">7.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">8.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">9.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">10.0<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M63"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M64"> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="center" colspan="3"> <hr></td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> 加热后抗菌活性<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center"></td> <td align="center"></td> </tr> <tr> <td align="left"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M65"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 80年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C, 15分钟<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M66"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 80年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C, 60分钟<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M67"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mn> 90年<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> °<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>C, 15分钟<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> <td align="center">+<gydF4y2Ba/td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p>+:抗菌活性检测;<gydF4y2Baitalic> −<gydF4y2Ba/italic>:无抗菌活性。<gydF4y2Ba/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec3.3"> <title>3.3。净化Enterocin S37<gydF4y2Ba/title> <p>细菌素是由三步纯化方法包括硫酸铵沉淀和两个产物。第一阶段由硫酸铵沉淀在80%,使集中活动分数10倍(v / v);随后,活跃的分数是通过连续两个rp -列。活跃的分数(那些表现出抗菌活性)筛选了乙腈洗脱缓冲包含80%的60%,20%的H<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>啊,和0.05%的组织。每个活动部分收集的纯度检查每一步后sds - page(表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab3"> 3<gydF4y2Ba/xref>,图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>)。<gydF4y2Ba/p> <table-wrap id="tab3"> <label>表3<gydF4y2Ba/label> <p>净化enterocin S37所产生的<gydF4y2Baitalic> 粪肠球菌<gydF4y2Ba/italic>S37。<gydF4y2Ba/p> <table> <thead> <tr> <th align="left">净化步骤<gydF4y2Ba/th> <th align="center">卷(毫升)<gydF4y2Ba/th> <th align="center">蛋白质浓度(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M68"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>g<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M69"> <mml:mrow> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>毫升<gydF4y2Basup>1<gydF4y2Ba/sup>)<gydF4y2Ba/th> <th align="center">活动(非盟<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M70"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mi> *<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:math> </inline-formula>毫升<gydF4y2Basup>1<gydF4y2Ba/sup>)<gydF4y2Ba/th> <th align="center">特定的活动(非盟<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M71"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mi> *<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:math> </inline-formula>g<gydF4y2Basup>1<gydF4y2Ba/sup>)<gydF4y2Ba/th> <th align="center">净化的因素<gydF4y2Ba/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">过滤文化上层清液<gydF4y2Ba/td> <td align="center">400年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">10647 .94<gydF4y2Ba/td> <td align="center">400年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">0.03<gydF4y2Ba/td> <td align="center">1<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">硫酸铵沉淀<gydF4y2Ba/td> <td align="center">40<gydF4y2Ba/td> <td align="center">5079 .03点<gydF4y2Ba/td> <td align="center">12800年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">2.52<gydF4y2Ba/td> <td align="center">84年<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">第一个反<gydF4y2Ba/td> <td align="center">10<gydF4y2Ba/td> <td align="center">56.64<gydF4y2Ba/td> <td align="center">51200年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">903.95<gydF4y2Ba/td> <td align="center">30132年<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">第二次反<gydF4y2Ba/td> <td align="center">1<gydF4y2Ba/td> <td align="center">32.88<gydF4y2Ba/td> <td align="center">51200年<gydF4y2Ba/td> <td align="center">1557 .17<gydF4y2Ba/td> <td align="center">51906年<gydF4y2Ba/td> </tr> </tbody> </table> <table-wrap-foot> <fn> <p> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M72"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mi> *<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>计算任意单位所描述的Batdorj et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </fn> </table-wrap-foot> </table-wrap> <fig id="fig1"> <label>图1<gydF4y2Ba/label> <p>Tricine-sodium十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(针刺)。(一)Silver-stained凝胶。巷1:分子量标记;巷2:文化的上层清液<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37;巷3:热量和过滤的浮在表面的文化<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37;巷4:硫酸铵沉淀后主动收集的一部分;巷5:活跃高峰后获得的第一个产物;巷6:活跃的产物峰之后获得第二。(b)的凝胶覆盖<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙的抗菌活性来确定纯化enterocin S37;巷7:活跃高峰后获得的第一个产物;巷8:活跃的产物峰之后获得第二。(c)琼脂扩散试验。1:负控制(磷酸盐缓冲剂);2:加热和过滤的浮在表面的文化<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>S37;3:硫酸铵沉淀后主动收集的一部分;4:活跃高峰后获得的第一个产物;5:活跃的产物峰之后获得第二。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jeph/2010/986460.fig.001"></graphic> </fig> <p>细菌素似乎4和6之间的分子量组成kDa(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>(一)),及其配件与抑制区观察到在sds - page(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>(b))。为了这个目的,获得的电泳凝胶迁移nondenaturing条件下镀后直接在Elliker软琼脂(0.9%)接种<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙卷转移(v / v)为1%。其他乐队揭示了蛋白质电泳无抗菌活性。每个样品的抗菌活性,获得在净化过程中,也检查了琼脂扩散试验在培养皿中(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>(c))<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec sec-type="subsection" id="sec3.4"> <title>3.4。影响K <一口> + < /一口>频道调节器<gydF4y2Ba/title> <p>两个K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>通道活化剂(pinacidil和cromakalim)和抑制剂(格列吡嗪)的生长影响不同<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙及其bacteriocin-resistant变体enterocin S37获得在这个研究。如图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig2"> 2<gydF4y2Ba/xref>,最高的影响归因于enterocin S37 (5<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M73"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>)和pinacidil (10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M74"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>)。效应的组合enterocin S37 cromakalim (10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M75"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>)和格列吡嗪(10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M76"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>)是不那么重要<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙bacteriocin-resistant变体。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig2"> <label>图2<gydF4y2Ba/label> <p>抑制活性的<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙敏感菌株及其变异耐药后接触enterocin S37独自(EntS37;5<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M77"> <mml:mtext> 毫克<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)和K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>频道调节器:pinacidil(π;10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M78"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>),cromakalim(阴极射线示波器;10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M79"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mo> </mml:mo> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>)和格列吡嗪(Gli;10<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M80"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>)。的意思是三个独立的测量值。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/jeph/2010/986460.fig.002"></graphic> </fig> </sec> </sec> <sec sec-type="section" id="sec4"> <title>4所示。讨论<gydF4y2Ba/title> <p>Enterococci已知是普遍的。对大多数肠球菌的物种,主要栖息地的胃肠道是动物和人类,他们可以在数字高达10<gydF4y2Basup>8<gydF4y2Ba/sup>cfu / g的粪便(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B25"> 20.<gydF4y2Ba/xref>]。Enterococci动物源食品中被发现(牛奶、奶酪和发酵香肠),蔬菜和植物材料(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B20"> 21<gydF4y2Ba/xref>]。另外这些自然栖息地,它们与院内感染(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B39"> 22<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>据报道许多enterococci叫做enterocins产生细菌素,这是多方面的,有伟大的多样性在他们的结构,对许多微生物和活跃,尤其是食源性病原体和微生物的环境和医疗利益(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 2<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B37"> 4<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B14"> 14<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B17"> 23<gydF4y2Ba/xref>]。Theppangna et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B38"> 15<gydF4y2Ba/xref>研究了一组139株<gydF4y2Baitalic> 大肠都有效<gydF4y2Ba/italic>和<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>对自己的能力产生enterocins和他们得出结论,51%的隔离是生产商的enterocins和46%的人能够产生多个enterocin。菌株生产enterocins携带至少一个结构基因编码最enterocins (<gydF4y2Baitalic> entA<gydF4y2Ba/italic>,<gydF4y2Baitalic> 外向<gydF4y2Ba/italic>,<gydF4y2Baitalic> entL50AB<gydF4y2Ba/italic>和<gydF4y2Baitalic> cylL<gydF4y2Ba/italic>)[<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B38"> 15<gydF4y2Ba/xref>]。其他研究指出的重要性<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>作为enterocins[来源<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B7"> 24<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B8"> 25<gydF4y2Ba/xref>]。综上所述,这些研究表明肠球菌的菌株的分布和重要性。应该指出,大多数enterocins迄今为止研究表现出活动对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B24"> 8<gydF4y2Ba/xref>]。我们有进行隔离和表征enterocin命名enterocin S37,所产生的<gydF4y2Baitalic> 粪大肠<gydF4y2Ba/italic>最近从鸡粪便分离(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 7<gydF4y2Ba/xref>]。Enterocin S37似乎是有趣的关于其活动对食源性病原体<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙和随意<gydF4y2Baitalic> 空肠弯曲杆菌<gydF4y2Ba/italic>国家反恐怖主义中心的11168(表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab1"> 1<gydF4y2Ba/xref>)。然而,反<gydF4y2Baitalic> 弯曲杆菌<gydF4y2Ba/italic>活动仍不稳定,不如最近观察到的其他细菌素的重要文献中报道(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 2<gydF4y2Ba/xref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B37"> 4<gydF4y2Ba/xref>]。从这项研究中收集的数据让我们想到的可能性enterocin S37是一个类活动花絮细菌素,作为这个肽(i)是反的<gydF4y2Baitalic> 李斯特菌<gydF4y2Ba/italic>,(ii)的分子量<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M81"> <mml:mrow> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>10 kDa,(3)是对蛋白酶敏感,(iv)稳定在不同的pH值和高温。<gydF4y2Ba/p> <p>净化的结果表明enterocin S37高度疏水。活动增加几个折叠(从400年<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M82"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 非盟<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>到51200年<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M83"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 非盟<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mtext> 毫升<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>在净化过程中)(表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab3"> 3<gydF4y2Ba/xref>),与一个特定活动的增加,达到1557 .17点<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M84"> <mml:mrow> <mml:msup> <mml:mrow> <mml:mtext> 非盟<gydF4y2Ba/mml:mtext> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mtext> g<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> - - - - - -<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 1<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>。这一现象在很大程度上是前面描述的结果去除抑制化合物(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B11"> 26<gydF4y2Ba/xref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B33"> 28<gydF4y2Ba/xref>]。部分纯化的光谱enterocin S37观察与CFS是相同的,但与更强的活动(数据没有显示)。<gydF4y2Ba/p> <p>第一次,K的影响<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>频道调节器enterocin活动揭示了在这个研究。这一目标,我们使用两个K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>通道活化剂(cromakalim和pinacidil)和一个K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>通道阻断剂(格列吡嗪)。Cromakalim被证明行动ATP-sensitive钾离子通道,造成膜超极化,把他们的膜电位远离阈值<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 29日<gydF4y2Ba/xref>]。在药理学领域,使用cromakalim治疗高血压被报道(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 29日<gydF4y2Ba/xref>]。Pinacidil氰基胍药,打开ATP-sensitive钾离子通道(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B21"> 30.<gydF4y2Ba/xref>]。最后,描述了格列吡嗪影响细胞通过部分挡住了K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>渠道,减少K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>导,导致膜的去极化,导致Ca<gydF4y2Basup>+ +<gydF4y2Ba/sup>通过电压特异性钙离子涌入<gydF4y2Basup>+ +<gydF4y2Ba/sup>渠道,导致细胞内钙浓度的上升<gydF4y2Basup>+ +<gydF4y2Ba/sup>离子(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B13"> 31日<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B36"> 32<gydF4y2Ba/xref>]。此外,cromakalim的影响和格列吡嗪敏感和耐药的增长<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>菌株进行了研究,导致整体疲软。因此,抑制野生型表型(敏感)cromakalim和格列吡嗪估计为14.29%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M85"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>17.14%和1.38<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M86"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>4.08而抑制突变株(耐药表型)评估到4.46%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M87"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>8.93%和3.53<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M88"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>1.06。Pinacidil显示high-inhibitory活动野生型(86.79%)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M89"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>1.78)和有趣的而不是突变株(19.64%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M90"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>4.02)。<gydF4y2Ba/p> <p>的组合enterocin S37和不同K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>频道调节器暗示的含义enterocin S37消耗细胞内的K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>水平,一个行动<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M91"> <mml:mrow> <mml:msub> <mml:mrow> <mml:mtext> K<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mtext> 三磷酸腺苷<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> </mml:msub> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>渠道而不是K<gydF4y2Basub>v<gydF4y2Ba/sub>频道。这些数据与乳酸链球菌肽原吻合良好,其抗菌活动连接<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M92"> <mml:mrow> <mml:msub> <mml:mrow> <mml:mtext> K<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mtext> 三磷酸腺苷<gydF4y2Ba/mml:mtext> </mml:mrow> </mml:msub> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>失去渠道与原有的所有细胞内K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>和ATP (<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B30"> 19<gydF4y2Ba/xref>]。至于enterocin 48和enterocin P [<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B18"> 33<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B23"> 34<gydF4y2Ba/xref>],enterocin S37当然是负责任的不受控制的流出细胞内K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>和影响敏感细胞的增长。耐药变异能够增长但略受影响的组合enterocin S37 / K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>调节器,除了pinacidil,抑制作用已达到49.79%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M93"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>3.36,而不是之前的23.84%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M94"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>24.11%和7.73<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M95"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>7.07当cromakalim和格列吡嗪分别补充说,(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig2"> 2<gydF4y2Ba/xref>)。<gydF4y2Ba/p> <p>也建立了许多细菌素,包括enterocins,与膜脂质形成气孔和随后的细胞内成分的损失,由此在细胞死亡<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B3"> 35<gydF4y2Ba/xref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B31"> 39<gydF4y2Ba/xref>]。膜的脂质成分似乎发挥重要作用在细菌素活动的效率<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B3"> 35<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B15"> 36<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B29"> 38<gydF4y2Ba/xref>]。Enterocin S37本身并不影响的bacteriocin-resistant变体的增长<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙。然而,结合enterocin S37 / K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>频道调节器强烈耐药变异的生长的影响。否则,K<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>频道调节器增强的抑制活动enterocin S37敏感菌株<gydF4y2Baitalic> l . monocytogenes<gydF4y2Ba/italic>缝隙,值达到92.86%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M96"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>94.29%和5.90<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M97"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>4.55当enterocin S37结合格列吡嗪和pinacidil,分别。cromakalim和enterocin S37导致84.29%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M98"> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi> </mml:mi> </mml:math> </inline-formula>2.5抑制敏感菌株的生长;这个数据等于获得enterocin S37仅84.21%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M99"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>5.87(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig2"> 2<gydF4y2Ba/xref>)。然而,在耐药菌株的情况下,当enterocin S37结合pinacidil, high-inhibitory活动(49.79%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M100"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>观察3.36)相比的组合cromakalim + enterocin S37 (23.84%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M101"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>7.73)和enterocin S37 +格列吡嗪(24.11%<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M102"> <mml:mrow> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>7.07)(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig2"> 2<gydF4y2Ba/xref>)。<gydF4y2Ba/p> <p>的行动方式enterocin S37可能引发的潜在与细胞膜相互作用。胺基酸序列的测定enterocin S37正在考虑之中。<gydF4y2Ba/p> </sec> <back> <glossary> <title>缩写<gydF4y2Ba/title> <glossary> <def-list> <def-item> <term> 国际马铃薯中心:<gydF4y2Ba/term> <def> <p>收藏的巴斯德研究所(法国巴黎)<gydF4y2Ba/p> </def> </def-item> <def-item> <term> DSM:<gydF4y2Ba/term> <def> <p>DeutschSammlung冯Mikroorganismenund Zellkulturen(德国布伦瑞克)<gydF4y2Ba/p> </def> </def-item> <def-item> <term> 据国家反恐怖主义中心:<gydF4y2Ba/term> <def> <p>国家的集合类型菌株(英国伦敦)。<gydF4y2Ba/p> </def> </def-item> </def-list> </glossary> </glossary> <ack> <title>确认<gydF4y2Ba/title> <p>作者要感谢教授安东尼奥Galvez批判阅读的论文。y Belguesmia接受者的博士奖学金颁发洛杉矶地区支付de la卢瓦尔河(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="http://www.paysdelaloire.fr/"> http://www.paysdelaloire.fr/<gydF4y2Ba/ext-link>)。<gydF4y2Ba/p> </ack> <ref-list> <ref id="B10" content-type="book"> <label>1<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="book"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 干涸<gydF4y2Ba/surname> <given-names> D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Rebuffat<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 年代。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <source> <italic> 原核和抗菌肽:从基因生物技术<gydF4y2Ba/italic> <year> 2010年<gydF4y2Ba/year> <publisher-loc> 纽约,纽约,美国<gydF4y2Ba/publisher-loc> <publisher-name> 施普林格<gydF4y2Ba/publisher-name> </nlm-citation> </ref> <ref id="B26" content-type="article"> <label>2<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 行<gydF4y2Ba/surname> <given-names> j·E。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Svetoch<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 大肠。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Eruslanov<gydF4y2Ba/surname> <given-names> b . 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