JCE 癌症流行病学杂志 1687 - 8566 1687 - 8558 Hindawi出版公司 549041年 10.1155 / 2013/549041 549041年 临床研究 免疫组织化学分析波形蛋白在口腔黏膜下纤维化 Nayak Meghanand T。 1 辛格 Anjali 2 德赛 拉吉夫。 3 Vanaki 美国年代。 4 李欧塔 l。 1 口腔及颌面部病理学系 Vyas以及牙科学院和医院 焦特布尔 拉贾斯坦邦342011 印度 2 口腔医学系和放射学 Vyas以及牙科学院和医院 焦特布尔342011 印度 3 口腔及颌面部病理学系 Nair医院牙科学院 孟买400008 印度 4 口腔及颌面部病理学系 PMNM牙科学院和医院 Bagalkot 587101 印度 2013年 11 6 2013年 2013年 25 02 2013年 11 05年 2013年 28 05年 2013年 2013年 版权©2013 Meghanand Nayak et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。口腔黏膜下纤维化(OSF),癌前病变,特点是异常积累在口腔黏膜下层胶原纤维。波形蛋白是一个类2中间丝状体(如果)和主要表达间充质来源的细胞。还发现,波形蛋白是参与细胞生长,细胞循环,肿瘤分化。 客观的。这项研究的目的是比较波形蛋白的表达在不同组织学OSF的成绩。 材料和方法。评估的免疫组织化学表达波形蛋白在20温和OSF的情况下,20 OSF的严重病例,10例正常口腔颊粘膜。 结果。波形蛋白的整体染色强度显著增加统计( P < 0.01 )在OSF情况下正常控制。显著增加的染色强度波形蛋白也在严重的OSF的成纤维细胞( P = 0.03 )。 结论。考虑到明显波形蛋白表达在目前的研究中,未来的研究应该包括细胞骨架如果和其他纤维在OSF的成纤维细胞。

 1。介绍

槟榔果(一个),俗称“槟榔”,是印度最古老的咀嚼中之一,据估计,全世界约有6亿人使用一个( 1]。咀嚼的口腔健康后果是多种多样的。在诸多影响口腔结构,重要的是口腔粘膜下纤维化的发展(OSF)——潜在的恶性条件( 2]。

OSF的特点是异常积累在口腔黏膜下层胶原纤维。实验研究表明,ethanolic提取一个刺激胶原蛋白的合成在人类皮肤成纤维细胞( 3]。提取物也可以稳定胶原原纤维和渲染他们抵抗退化。与正常成纤维细胞相比,OSF成纤维细胞合成大量的胶原蛋白;他们有较高的胶原mRNA水平;他们生产I型胶原三聚物,抗降解[ 4]。

到目前为止,几乎没有研究探索可能的槟榔碱对细胞骨架成分的影响( 5, 6]。波形蛋白抗体识别57 kDa如果和标签不同的间充质细胞,包括黑色素细胞、淋巴细胞、内皮细胞、成纤维细胞( 7]。波形蛋白表达显著增强细胞生长,细胞循环,肿瘤分化,肿瘤发生过程中( 5]。虽然OSF被认为是一种癌前病变,波形蛋白表达的程度在人类颊粘膜在槟榔碱的存在并不清楚。

这项研究的目的是比较波形蛋白的表达在不同组织学OSF的成绩和相关的正常黏膜。此外,试图阐明可能波形蛋白在OSF的发病机制中的作用。

 2。对象和方法

研究进行了总数的40个病人访问作者的研究所和被诊断为有OSF临床和组织学检查。同意收集来自所有患者和批准的机构审查委员会。OSF的组织病理学评价和分级情况下进行标准由Pindborg和Sirsat [ 8]。10个样品的正常口腔黏膜(颊粘膜)采购从年龄和sex-matched主题构成了控制。

2.1。苏木精和伊红染色

Formalin-fixed石蜡包埋标本受到四个 μ米厚的部分,并与苏木精和伊红染色组织学证实临床诊断和其他评估。这些部分被用于OSF的评分。

 2.2。免疫组织化学的协议

Eight-micron-thick部分被在poly-L-lysine(锁相环)幻灯片和沾单克隆抗体(鼠标antivimentin Vim 3 b4, 1: 200;美国Dakopatts CA)使用标准avidin-biotin-peroxidase复杂的方法。酶和蛋白水解酶(蛋白酶K)预先消化完成更大的染色强度和均匀性formalin-fixed组织部分。Diaminobenzidine(民建联、酶)然后使用本地化的基质抗体绑定。准备与哈里斯苏木精复染色,安装与中性介质和光学显微镜下检查immunoperoxidase反应。阳性染色的扁桃体组织被视为积极的控制,而负染法的上皮组织被认为是消极的控制波形蛋白染色。

2.2.1。得分

vimentin-stained部分详细研究了由三个独立口腔病理学家和组织部分分级如下。

最初的部分被认为在低功率和结缔组织基质被分为两个区域——浅区和深区。每个区域分别被认为是和规模得分为0 - 3 0表示没有染色,1表示轻微染色,2表示温和的染色,3表示强烈的染色。

组织部分后来被认为在高功率和染色的细胞定位进行了研究。成纤维细胞和内皮细胞的染色是单独考虑,取得了规模的0 - 3 0表示没有染色,1表示轻微染色,2表示温和的染色,3表示强烈的染色。

染色的整体强度是指出在所有的情况下,取得了规模的0 - 4 0表示没有染色,1表示轻微染色,2表示温和的染色,3表示强烈的染色,和4表示最强烈的染色。

 2.3。统计分析

描述性数据,包括频率(分数的病例数0,1,2,3,4),意思是,和标准偏差确定的所有组。自评估染色做了基于分数,非参数方法,Mann-Whitney测试,用于成对比较。Interobservers精度是评估通过计算平均分数之间的三个观察员同时为多个组采用单向方差分析分析。对于所有的测试, P 值小于或等于0.05的被认为是具有统计学意义。所有的计算都是在个人电脑上完成使用Minitab软件(美国、v.16)。

 3所示。结果

总样本大小50例并纳入研究。40例OSF构成的研究组织和10例正常(图 1)被控制。年龄在18岁到45岁的OSF病例和初次性行为的平均年龄 26.9 ± 8.1 。总额的10例正常对照组,年龄在20岁至37年 24.9 ± 5.1 平均年龄。总数的40例病例的10%(4)在非常早期的阶段,40%(16)病例的早期阶段,40%(16)适度晚期的病例和10%(4)的情况下在疾病的晚期。非常早期的病例和早期病例呆在一起,视为轻度组疾病的总计20例(图 2)。中等发达国家和先进的病例组合,构成了严重集团总计剩下的20例(图 3)。分析比较染色模式在不同的团体。波形蛋白染色的得分分布在不同的本地化和整体强度表中表示 1, 2, 3, 4和 5。

波形蛋白分数在轻度OSF肤浅的本地化模式情况下,严重OSF病例和对照组。

集团 不。 评分(0 - 3) 平均数±标准差 轻微的v / s严重 轻微的v / s正常 严重的v / s正常
0 1 2 3
肤浅的 温和的 20. 2 8 2 8 1.8±1.1 P = 0.87 (n .) P = 0.25 (n .) P = 0.15 (n .)
严重的 20. 2 6 4 8 1.9±1.1
正常的 10 2 4 4 - - - - - - 1.2±0.8

波形蛋白分数在轻度OSF深度本地化模式情况下,严重OSF病例和对照组。

集团 不。 评分(0 - 3) 平均数±标准差 轻微的v / s严重 轻微的v / s正常 严重的v / s正常
0 1 2 3
深 温和的 20. 2 4 10 4 1.8±0.9 P = 0.51 (n .) P = 0.14 (n .) P < 0.05 (年代) ( 0.03 ]
严重的 20. - - - - - - 4 10 6 2.1±0.7
正常的 10 2 4 4 - - - - - - 1.2±0.8

波形蛋白的大量成纤维细胞在轻度OSF情况下,严重OSF病例和对照组。

集团 不。 评分(0 - 3) 平均数±标准差 轻微的v / s严重 轻微的v / s正常 严重的v / s正常
0 1 2 3
成纤维细胞 温和的 20. 2 2 4 12 2.3±1.1 P = 0.93 (n .) P = 0.06 (n .) P < 0.05 (年代) ( 0.03 ]
严重的 20. 2 - - - - - - 6 12 2.4±1.0
正常的 10 2 2 5 1 1.5±1.0

波形蛋白的大量内皮在轻度OSF情况下,严重OSF病例和对照组。

集团 不。 评分(0 - 3) 平均数±标准差 轻微的v / s严重 轻微的v / s正常 严重的v / s正常
0 1 2 3
内皮 温和的 20. 2 - - - - - - 4 14 2.5±1.0 P = 0.36 (n .) P < 0.01 (vs) ( 0.006 ] P < 0.01 (vs) ( 0.0011 ]
严重的 20. 2 - - - - - - - - - - - - 18 2.7±0.9
正常的 10 2 2 6 - - - - - - 1.4±0.8

模式的整体强度波形蛋白分数在轻度OSF情况下,严重OSF病例和对照组。

集团 不。 评分(0 - 4) 平均数±标准差 轻微的v / s严重 轻微的v / s正常 严重的v / s正常
0 1 2 3 4
整体强度 温和的 20. 2 - - - - - - 4 10 4 2.7±1.2 P = 0.17 (n .) P < 0.01 (vs) ( 0.007 ] P < 0.01 (vs) ( 0.002 ]
严重的 20. 2 - - - - - - - - - - - - 8 10 3.2±1.2
正常的 10 2 1 7 - - - - - - - - - - - - 1.5±0.8

(一)正常颊粘膜下H / E染色。(b)正常颊粘膜下波形蛋白免疫组织化学染色。在多数间充质来源的细胞波形蛋白表达,包括成纤维细胞、内皮细胞。

口腔粘膜下纤维化(a)轻微的情况下的H / E染色。口腔黏膜下纤维化(b)轻微的情况下波形蛋白免疫组织化学染色。注意在内皮细胞波形蛋白染色强度明显增加与正常人相比。

(一)严重的口腔黏膜下纤维化H / E染色。(b)严重的口腔黏膜下纤维化下波形蛋白免疫组织化学染色。注意牙龈的强烈的波形蛋白染色区和结缔组织基质的更深层次的区域。

染色的强度是得分系统在不同地区的结缔组织;即浅/牙龈区和深区分别被认为是。单个细胞染色还指出,染色强度分级的模式分别为成纤维细胞和内皮。这些等级是由单独一个病理学家和两个口腔病理学家。后来分数相比interobservers信心和一个非常高的保密记录显示得分的方法是可靠的。0 - 3的成绩分级规模组织本地化(浅和深)和细胞定位(成纤维细胞和内皮细胞),而分数范围0 - 4被记录为整体强度。

温和的情况下的表面分数平均1.8标准差为1.1的分数在严重病例平均平均1.9,标准差为1.1。正常情况下没有任何激烈的染色分数3但与偏差的平均得分为1.2分0.8。Mann-Whitney测试显示轻微和严重病例之间没有显著差异,温和的和正常的情况下,严重的和正常的情况下。

深分数为轻微的病例 1.8 ± 0.9 而严重病例的分数意味着平均为2.1,标准差为0.7。正常情况下没有任何强烈的染色和平均分数1.2偏差为0.8。的显著差异 P 值指出之间的严重和正常情况下虽然其他组织没有任何明显的差异。

成纤维细胞的染色模式记录和评分2.3意味着2.4指出OSF的温和的情况下虽然打进了严重的病例明显超过正常情况下的得分为1.5分。的 P 严重病例和正常价值计算是统计学意义以0.03的得分。

内皮显示强烈的染色模式在温和的情况下,严重的OSF但没有病例显示强烈的染色在正常情况下。2.5的平均评分记录在温和的情况下,在正常情况下2.7在严重的情况下,1.4。的 P 价值之间非常重要的温和与正常和严重与正常的情况下。

整体强度的模式是在0到4分。温和病例显示,10箱的强度模式3和4在四种情况下意味着平均为2.7,标准差为1.2。严重的病例显示强烈的染色与3 8例和得分4分十场均3.2偏差为1.2。正常情况下没有表现出强烈的染色在任何情况下,只显示2分14例。平均分数为正常变异为0.8 1.5例。的 P 价值是非常重要的在温和的情况下和正常以及严重的病例和正常。

 4所示。讨论

OSF的发病机理和治疗是有争议的话题,自从施瓦兹( 9)在1952年首次描述的条件。在1980年,Pindborg OSF估计大约有250000例在印度,但估计在2002年增加到200万例,疾病增加8倍( 9]。随着使用gutka /盘马沙拉产品在印度,OSF病例的数量已经大大增加了。OSF是一种特殊的疾病被认为是一个癌变前的状态;然而它演示了一个变量生物行为和应对任何治疗仍然是一个令人沮丧。近年来一些流行病学研究已经强调了在OSF的病因的作用。

槟榔碱,的主要生物碱,被报道为致病因素之一OSF患者的染色体畸变( 10]。使用人类成纤维细胞组织培养实验获得OSF主题显示海拔胶原蛋白合成170%相比,控制文化( 3]。它已经表明,槟榔碱和arecaidine促进胶原蛋白形成的 11]。稳定胶原酶降解的胶原蛋白和预防口腔黏膜和服务员赖氨酰化氧活动的增加导致细胞外基质成分积累在OSF [ 12]。

大多数脊椎动物细胞的细胞骨架由微丝、微管,如果。如果起着支持或一般结构的作用 13]。波形蛋白是一个类2,如果主要是表达间充质来源的细胞和最丰富的如果 14]。在牙科组织,它一直在immunolocalized牙周韧带成纤维细胞和牙髓,成和成纤维细胞的牙乳头和牙科在牙齿发育卵泡( 15]。提出了波形蛋白的功能包括调节细胞依附,亚细胞组织和信号转导的核质膜。有人建议,波形蛋白表达在体外是去分化的标志( 16, 17]。

研究表明,槟榔碱诱发胶原蛋白的形成,表明细胞毒性也刺激双链核酸合成( 10)和细胞形态学改变。这种变化在细胞形态学牵连到槟榔碱在细胞骨架与干涉相关干扰细胞有丝分裂和胞内运输机制。槟榔碱的影响在波形蛋白在正常人体口腔黏膜成纤维细胞的研究以前很少有作者。

Antivimentin抗体已经使用以前研究OSF的染色强度情况下( 5]。染色强度的变化在arecoline-induced OSF没有明确记录和本地化根据个体的组织或细胞染色。因此,本研究旨在注意波形蛋白的表达在正常的人类颊粘膜成纤维细胞,并与各种组织的成纤维细胞的高表达等级的OSF患者使用免疫组织化学方法。本研究旨在阐明波形蛋白的可能作用在OSF的发病机理。

antivimentin抗体(克隆:Vim 3 b4)免疫组织化学染色在我们目前的研究中使用。这个克隆克隆V9首选,由其他研究人员使用( 5),如Vim 3 b4克隆有一个额外的优势,它污渍formalin-fixed组织部分( 7]。这个过程还涉及使用蛋白酶K预先消化的酶或抗原检索。在我们的研究中获得的染色模式是注意到更多的统一和更大的染色强度。

松散的结缔组织从正常口腔粘膜由编织固有层暴露胶原束细网状模式下上皮和固有层中粗模式更深。波形蛋白标记在周围的胶原纤维略,更主要是炎症细胞( 7]。

显著差异指出在成纤维细胞染色分数之间的正常和OSF的病例。但是可能的结果的差异的存在亚型的纤维母细胞更容易受到外部刺激或基因调制。这表明在OSF的增加强度模式情况下在我们的研究中是类似于其他研究( 5]。这些数据表明,潜在的波形蛋白参与OSF的发病机理。虽然这些发现的全部意义仍有待阐明,研究表明,如果在OSF情况下的表达是一个复杂的现象。如果被认为是细胞内的主要结构的作用。波形蛋白的表达似乎不仅密切相关的类型和阶段分化也基本性质的细胞动力学和联系( 13]。我们建议我们的研究结果可能提前OSF的可能发病机制的理解。

 5。结论

疾病的发病机理和发生仍是一个未解之谜。这种疾病是一个很好的模型来研究病理纤维化和有相似的组织学其他病理纤维化身体其它部位的照片。需要的是建立一个成功的治疗方法来治疗疾病,这只能通过了解疾病的病理生理学过程。研究指向的研究应该考虑胞浆内细胞器和细胞骨架的研究成纤维细胞的组件。在培养细胞波形蛋白的作用,体内的细胞,仍然是模糊的。特别需要进一步研究检测波形蛋白基因转录和知道OSF的发展仅仅由于增加改变从头合成,波形蛋白的沉积构成。考虑到明显的波形蛋白表达在目前的研究中,未来的研究还应该包括细胞骨架如果和其他纤维,这可能是一个潜在的治疗OSF的目标。

 利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 承认

作者要感谢博士马约莉科雷亚,圣约翰医学院病理学系班加罗尔,印度为她的专业知识和扩展帮助免疫组织化学和分析工作的幻灯片。

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