JAMC 分析方法在化学杂志》上 2090 - 8873 2090 - 8865 Hindawi 10.1155 / 2020/5165631 5165631 研究文章 识别和分析的组件在演变中颗粒和猕猴猴等离子体后口服UPLC / ESI-Q-TOF女士及其对PC12细胞的保护作用 郝 Erwei 1 2 3 https://orcid.org/0000 - 0002 - 3594 - 0268 秦 剑锋 1 2 魏 魏 1 2 https://orcid.org/0000 - 0002 - 2661 - 8314 苗族 建华 3 谢 杨ydF4y2Ba 1 2 庞ydF4y2Ba 翔龙 1 2 吴 Hangxuan 1 2 谢 金陵 1 2 风扇 Xiaosu 4 https://orcid.org/0000 - 0002 - 9239 - 3336 杜 停车棚 1 2 3 https://orcid.org/0000 - 0001 - 8251 - 220 x 侯 仙桃 1 2 3 https://orcid.org/0000 - 0003 - 2079 - 981 x 邓 两地 1 2 3 Tortora 卢卡 1 广西重点实验室对中药学的疗效研究 广西中医药大学 南宁 广西530200年 中国 gxtcm.com 2 协同创新中心的功能成分研究农业残留物 广西中医药大学 南宁 广西530200年 中国 gxtcm.com 3 博士后工作站 广西及药用植物 南宁530023 中国 4 农业大学实验中心 广西大学 南宁530005 中国 gxu.edu.cn 2020年 9 4 2020年 2020年 17 12 2019年 28 01 2020年 9 4 2020年 2020年 版权©2020 Erwei豪et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

演变中颗粒(YZG)是一种健康食品包含六个中药(中药)。在老鼠实验中改善记忆障碍。在这里,我们描述第一快速和敏感ultraperformance液相色谱/电喷雾四极杆飞行时间质谱(UPLC / ESI-Q-TOF MS)方法分析YZG等离子体。我们使用此技术研究猕猴猴等离子体。通过比较保留时间、MS和MS / MS数据参考化合物,70种化合物在YZG检测。其中,63被确定,包括60皂甙,2黄酮,1甲基酯。有33个皂苷、1黄酮和1甲基酯的等离子体。接下来,研究治疗YZG的性质,一些吸收组件的神经保护作用是评估使用PC12细胞损伤引起的 β25 - 35模型。结果表明,9个化合物保护PC12细胞从一个 β25 - 35细胞生存能力(%)为111.00±8.12 (G-Rb1), 102.20±4.22 (G-Rb2), 100.34±6.47 (G-Rd), 102.83±2.10 (G-Re), 101.68±7.64 (NG-Fa), 101.19±7.83 (NG-R1), 102.53±0.55 (NG-R2), 106.88±4.95 (gypenoside)和103.95±4.11 (gypenoside XLIX),分别与对照组(87.51±6.59)。这些结果可以揭示YZG真正的药效学基础并为后续研究提供了理论依据。它还可以为阿尔茨海默病的研究提供一些参考。

 广西科学研究与技术开发计划 GKG1355004-11 15-140-31 17-259-20 2017年ad19024 AD17195025 1。介绍

阿尔茨海默病(AD)是一种常见的慢性进行性神经退行性疾病导致记忆障碍,智力衰退,行为性格变性,残疾,和过早死亡 1- - - - - - 3]。广告在中国的患病率是3.21%(65岁及以上的人群中 4),超过700万中国人民生活在今天广告( 5]。广告不仅是一种严重的健康问题对老年人也是一个严重的社会问题。它是全球关注的。因此,开发新的药物来预防和治疗广告是至关重要的。淀粉样蛋白假说是AD发病机制的主要模型和导游的发展潜在的治疗方法。所有广告患者接受进步 β淀粉样蛋白沉积其次是周围神经炎的和神经胶质细胞病理学在大脑区域服务记忆和认知 6]。

传统中药(TCM)起着至关重要的作用在治疗阿尔茨海默病在中国。这是一个开发新药物的重要来源。许多组件的中药,如人参皂苷再保险(G-Re) [ 7],G-Rg3 [ 8),黄芩苷,G-Rb1 [ 9],G-Rg1 [ 10],G-Rf [ 11)进行了研究,对治疗有积极作用的广告。YZG 6中药健康食品组成,包括 人参c.a最大经济产量, 田七(傻瓜)f·h·陈, 绞股蓝皂(研究)。牧野, 淫羊藿brevicornu格言。 oxyphylla成分进行筛选。,和 桑属阿尔巴l .这是作为健康食品通过CFDA 2 2012年12月发行的中国专利。

我们最近在动物实验中显示YZG改善记忆障碍,和YZG可以保护PC12损伤引起的蛋白质 β25 - 35( 12- - - - - - 15];然而,活性成分尚不清楚( 16]。虽然中药包含许多组件,只有一些被吸收进入血液的生物活性。因此,等离子体中发现的组件可能是最活跃的。

猕猴是灵长类动物,类似于人类遗传学和病理生理学;因此,他们是一个有用的临床前模型( 17, 18]。因此,我们使用这个模型来评估中药。

中药通过多个组件施加的影响。化学成分的分析是一个关键的一步了解中药的治疗特性。Ultraperformance液体色谱-光谱法(UPLC-MS)方法已成为一个主要的工具来分析中药的化学成分,因为它提供了高速、可测量的质量范围宽,比例高的分辨率,同时定性分析能力,也广泛应用于分析 在活的有机体内代谢物。例如,UPLC-QTOF-MS技术被用来确定吸收成分及其代谢产物在老鼠biosamples [ 19),和在他们的研究中,一个ESI / APCI多模电离源用于质分析以识别皂素苷和皂素苷配基在单个运行( 20.]。在其他的研究中,基于LC-DAD-MS和UPLC-DAD-QTOF-MS方法、化学成分、代谢和药代动力学研究的草药也进行了 21, 22]。因此,我们建立了UPLC / ESI-Q-TOF女士YZG的化学成分的分析方法和吸收材料的等离子体在猕猴身上。此外,广告引起的细胞模型 β淀粉样蛋白是用来测试吸收组件对神经细胞的保护作用。总结了本研究的实验设计和工作流图 1。

实验设计和工作流在这项研究。

 2。材料和方法 2.1。化学物质、试剂和样品

UPLC-grade乙腈购买从默克公司(达姆施塔特,德国)。甲酸是购自Sigma-Aldrich(美国密苏里州)。亮氨酸脑啡肽是来自水公司(米尔福德,妈,美国)。蒸馏水是来自沃森的食品和饮料(广州)。

PC12细胞从江苏凯基生物生物技术公司购买,有限公司(中国南京)。人参皂苷Rb1,人参皂苷而已,人参皂苷Rb3,人参皂苷Rc,人参皂苷,人参皂苷,人参皂苷射频,人参皂苷Rg1, notoginsenoside R1, 20 年代)-notoginsenoside R2, notoginsenoside Fa,皂甙和皂甙XLIX是从成都必须购买生物技术有限公司有限公司(中国成都)。20 ( 年代)人参皂苷而已,加兰他敏哈佛商业评论,小檗碱从美国国立购买食品和药物控制(中国,北京)。这些化合物的结构如图 2。杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)和磷酸缓冲盐(PBS)从江苏凯基生物生物技术公司、购买有限公司(中国南京)。胎牛血清(的边后卫)、胰岛素和二甲亚砜(DMSO)从Gibco购买(热费希尔科学,Inc .,沃尔瑟姆,妈,美国)。淀粉样蛋白 β蛋白质片段25 - 35是购自Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。YZG是由广西Wanshoutang制药有限公司,有限公司,由水变成悬浮制定。

YZG的可能有效的化合物的化学结构。

 2.2。动物和治疗

六个健康雄性猕猴 猕猴属fascicularis;7岁,7.0±1.0公斤)是来自广西猕猴医学应用工程技术研究中心(广西)。所有实验按照规定实验动物管理的国家科学技术委员会颁发的中华人民共和国。实验动物协议是经广西中医药大学动物伦理委员会,和所有程序是按照有关规定和准则。

每只猴子被安置在一个暂停不锈钢笼子,并保持在一个标准的12 h光/ 12 h黑暗周期与自由水。动物的房间被保持在26°C和50% - -70%的相对湿度。经过认证的灵长类动物颗粒提供了饮食前猴子每天三次实验。水果是定期补充营养是标准的做法。

 2.3。血浆样品制备

六个猕猴禁食,除了水,12小时。每只猴子是口头管理YZG剂量为79.6克/公斤体重。2毫升的血液收集的静脉穿刺2 h后通过胃内的剂量填喂法。然后血液离心10分钟3000转/分钟4°C。甲醇(3毫升)在等离子体和涡1分钟,然后离心10分钟12000转/分钟4°C。上层清液是由固相萃取净化。净化液干下氮气在45°C。残留于100年解散 μL 70%的甲醇,然后在12000转/分钟离心10分钟在4°C;上层清液用作血浆样本。

 2.4。仪器和条件 2.4.1。色谱分析

分离过程是由水域ACQUITY UPLC我班系统(水公司,米尔福德,妈,美国)与Masslynx V4.1的控制软件。溶剂的流动相组成(HCOOH: H2O = 0.1: 100, v / vB (CH)和溶剂3CN);梯度洗脱程序如下:0 - 1分钟,10% b;1 - 14分钟,10% - -100% b;和14 - 17分钟,100% B 0.3毫升/分钟的流量。样品溶液的体积注入色谱系统1 μL,所有的分离进行了40°C。

 2.4.2。女士的条件

MS分析是由Xevo G2-XS飞行时间质谱仪加上一个ACQUITY UPLC我班系统(水公司,米尔福德,妈,美国)。电喷雾质谱的MS / MS实验操作E模式获取碎片在负模式。女士条件优化如下:收购质量范围从100年到1500年达0.5秒扫描时间;毛细管电压为2.0伏特;采样锥电压为50.0 V;源温度为100°C;反溶剂温度为350°C;锥气体流量是50.0升/小时;反溶剂气体流量为700.0 l /人力资源。数据收集在一个连续体,在收购质量纠正使用外部引用(LockSpray)组成的0.2 ng / mL解决亮氨酸脑啡肽的流量注入20 μL / min通过LockSpray界面生成参考离子在554.2615 Da ((mh)−)。所有收集的数据在质心模式是使用MassLynx V4.1软件(水公司,米尔福德,妈,美国)。

 2.5。主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)

原始数据峰值检测UPLC-TOF女士,主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)进行所有血液样本通过MarkerLynx MassLynx V4.1软件的应用程序管理器。峰值检测的质量窗口为0.05,保留时间窗口是0.2,强度阈值是50。帕累托法作为PCA和OPLS-DA数据标准化的方法。然后,我们选择的信号S-plot图的OPLS-DA具备下列条件: X设在> 0.001和 Y标志设在> 0.8。

 2.6。吸收组件的识别

我们比较保留时间和质量数据的标记数据的草药和选择相匹配的数据。同时,我们搜查了原始成分的中药材等离子质谱数据的样本。然后,我们分析这些数据的二级质谱信息,确定了它们的化学结构的基础上提供的信息碎片离子。

 2.7。细胞培养和MTS比色测定

PC12细胞在DMEM培养(江苏凯基生物生物科技集团有限公司;中国南京)补充10%的边后卫,在37°C公司为5%2。PC12细胞对数生长期被播种在384孔板(3×104细胞每口井)和孵化24小时37°C。接下来,100年 μL空白培养基的添加到正常对照组;100年 μ包含30 L的媒介 μ米一个 β25 - 35添加到模型对照组;100年 μ包含30 L的媒介 μ米一个 β25 - 35和250年 μg / mL YZG提取液添加到YZG组。氢溴酸加兰他敏组100人 μ包含30 L的媒介 μ米一个 β25 - 35和30 μ克/毫升氢溴酸加兰他敏。盐酸小檗碱组100人 μL中包含30 μ米一个 β25 - 35和12.5 μ克/毫升盐酸小檗碱。其他组与治疗 β25 - 35和部分吸收组件分别给100 μ包含30 L的媒介 μ米一个 β25 - 35和25 μg / mL组件。所有组织都是培养48 h。DMSO溶液的体积分数,每组不高于0.5%,每组和3重复的井。随后,10 μL MTS(1.90毫克/毫升)被添加到每个在37°C,孵化24 h。吸光度测量在480 nm使用分光光度计(多模板读者EnVisionXcite;PerkinElme公司,沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)。细胞生存能力是决定使用以下方程:细胞生存能力(%)= (OD 480海里(药物)/ OD 480海里(控制)]×100%。OD表明光密度。

 2.8。统计分析

所有数据给出的平均值±标准错误意味着从至少三个独立的实验。使用GraphPad Prism 5.0执行数据分析软件(GraphPad软件公司,拉霍亚,CA,美国)。统计显著性也决定通过一个双向方差分析。

 3所示。结果 3.1。优化UPLC / ESI-Q-TOF女士条件

解决YZG组件、列类型、温度、流动相进行了优化。一个ACQUITY UPLC本·C18柱(2.1毫米×100毫米,1.7 μ米,水公司,美国)被选为实验。它提供了一个良好的分辨率。减少宽度和峰值信号强度最大化,有机溶剂乙腈和甲醇等几个水缓冲区,流量,温度和列。最后,得到了最优分离条件。女士的条件进行了优化,最大限度地回应:毛细管电压、毛细管温度、碰撞能量,气体流。在消极的电离模式下,所有YZG分析物提取和等离子体显示灵敏度高。

 3.2。UPLC / ESI-Q-TOF MS分析YZG成分的样品和猕猴猴等离子体

YZG样本的总离子流图所示 3。发现了七十年的峰值在YZG使用UPLC / ESI-Q-TOF女士技巧;63化合物结构鉴定通过比较保留时间、MS和MS / MS数据参考化合物和文献中报道的。确定化合物如表所示 1。

抽搐的色谱YZG (a),样品在猕猴猴子的等离子体口服后YZG (b)和空白血浆-模式(c)。

选民从UPLC-ESI-Q-TOF-MS YZG识别。

不。 Rt 公式 [M + HCOO]−( 米/ z) (mh)−( 米/ z) 碎片离子( 米/ z) CMP 复合名称 参考
1 3.42 C42H72年O15 861.4843 815.4784 653.4254,491.2235,463.0880 √ Notoginsenoside米 ( 23]
2 3.62 C27H30.O16 609.1816 300.0555 √ 芦丁 ( 24]
3 3.72 C8H8O5 183.0308 124.0211 √ 没食子酸甲基酯 ( 25]
4 4.22 C48H82年O19 1007.5439 961.5380 997.5126,799.4825,637.4305,475.1966 √ Notoginsenoside R3 / R6/20-O-Glucoginsenoside射频 ( 23]
5 4.28 C40H70年O8 723.5082 677.5007 740.4865,475.1963,417.1550,284.0329 ∗ 未知的
6 4.47 C43H83年O12 836.5914 790.5905 853.5441 ∗ 未知的
7 4.55 C48H82年O19 1007.5439 961.5406 997.5145,799.4846,637.4318,475.3790 √ Notoginsenoside R3 / R6/20-O-Glucoginsenoside射频 ( 23]
8 4.57 C32H38O15 707.2444 661.2957 1323.5775,724.2191,499.1783 ∗ Baohuoside一 ∆
9 4.61 C47H80年O18 977.5385 931.5317 799.4850,637.4321,475.3785 √ Notoginsenoside R1 ( 26]
10 4.81 C48H82年O18 991.5449 945.5477 799.4883,637.4339,619.4214,475.3792 √ 人参皂苷是 ( 27]
11 4.85 C42H72年O14 845.4936 799.4833 637.4339,475.3792 √ 人参皂苷Rg1 ( 27]
12 5.24 C39H50O20. 883.2853 837.2800 675.2280,529.2005,513.1791,367.1183 ∗ Epimedin A1 ∆
13 5.29 C15H10O7 301.0683 273.0429,245.0488,229.0532,179.0065,151.0179,121.0346 ∗ 槲皮素 ∆
14 5.31 C38H48O19 807.2960 645.2173,513.1818,366.1090 ∗ Epimedin B ∆
15 5.38 C38H50O19 867.2896 821.2642 659.2647,513.1761,366.1201,351.0912,323.0849,151.0094,106.6611 ∗ Epimedin C ∆
16 5.40 C38H50O19 867.3390 821.2833 659.2668,366.1226 ∗ Epimedin一 ∆
17 5.53 C27H30.O10 513.1833 367.1188,351.0876,323.0917,151.0109,145.0312 ∗ 同分异构体(47) ∆
18 5.53 C33H40O15 721.2323 675.2302 529.1712,513.1846,367.1266 ∗ Icariin ∆
19 5.64 C48H82年O19 1007.5430 961.5372 799.4822,637.3738 √ Notoginsenoside N / R6 ( 28]
20. 5.67 C54H92年O23 1153.6027 1107.5963 945.5418,799.4827,637.4309,475.1394, ∗ 人参皂苷Re8 ( 29日]
21 5.90 C59HOne hundred.O27 1285.6840 1239.6516 1107.5920,945.5372,783.4835,621.4189,459.3343 √ Notoginsenoside足总 ∆
22 6.09 C42H72年O14 845.4875 799.4935 637.4294,619.5074,475.3772 √ 人参皂苷射频 ( 28]
23 6.11 C54H92年O23 1153.6823 1107.6227 945.5391,783.4855,621.4235,459.3650 √ 人参皂苷Rb1 ( 30.]
24 6.21 C52H86年O21 1091.5645 1045.7167 913.5291,751.4626,605.4065,473.3609, √ Gypenoside XLIX ∆
25 6.26 C53H90年O22 1123.5693 1077.6210 945.5375,783.4875 √ 人参皂苷Rc ( 30.]
26 6.28 C41H70年O13 815.4929 769.4709 637.4373,619.4420,475.3855 √ 20 (S) -Notoginsenoside R2 ∆
27 6.33 C41H70年O13 815.4812 769.4928 637.4339,475.3815 √ Notoginsenoside R2 / F3 / F5 ( 28]
28 6.40 C63年H106年O30. 1341.5354 1209.6248,1077.5825,945.5411,783.4882,621.4359,459.3843 √ Notoginsenoside问 ( 28]
29日 6.41 C48H76年O19 955.4913 793.4395,569.3852 √ 人参皂苷rRo ( 31日]
30. 6.42 C53H90年O22 1123.5911 1077.5951 945.5395,783.4940,621.4150,459.3434 √ 人参皂苷而已 ( 28]
31日 6.44 C53H90年O22 1123.5911 1077.5911 945.5429,783.4907,459.3839 √ 人参皂苷Rb3 ( 28]
32 6.46 C42H72年O13 829.5134 783.5062 637.4319,619.4190,475.3806 √ 20 (S)人参皂苷Rg2 ( 30.]
33 6.50 C41H70年O13 815.4929 769.4709 637.4373,619.4420,475.3855 ∗ 20 (R) -Notoginsenoside R2 ∆
34 6.56 C36H62年O9 683.4399 637.4317 475.3788 ∗ 20 (S)人参皂苷Rh1/20 (R)人参皂苷Rh1 ( 28]
35 6.56 C42H72年O13 829.4958 783.4899 637.4317,475.3788 √ 20 (R)人参皂苷Rg2 ( 30.]
36 6.59 C56H94年O24 1195.6116 1149.6077 1107.5959,945.5424,783.4896,637.4297,475.3786 √ Yesanchinoside F ( 32]
37 6.85 C48H82年O18 991.5511 945.5786 783.4921,621.4363,459.3667 √ 人参皂苷Rd ( 28]
38 6.98 C51HOne hundred.O30. 1237.6125 1191.6177 1029.5610,915.5285,637.4301,475.3689 ∗ 未知的
39 7.21 C52H86年O21 943.5059 897.5676 765.4807,751.4272,681.4173,619.3864,487.3429 √ Gypenoside一 ∆
40 7.26 C55H92年O23 1165.6019 1119.5986 783.4898,621.4372,459.3844 √ 人参皂苷平日 ( 28]
41 7.44 C27H30.O11 575.3054 529.1713 1105.6187,1059.6130,367.1176 ∗ Icariside我
42 7.49 C47H80年O17 961.5392 915.5334 783.4893,621.4371 ∗ Notoginsenoside Fe / gynosaponin I / vinaginsenoside R16 / R17 ( 28]
43 7.61 C60H116年O36 1457.7361 1411.7128 1265.6560,1133.6172,987.5623,841.4951,475.3750 ∗ 未知的
44 7.62 C48H82年O18 991.5460 945.5498 799.4841,637.4338,619.4188,475.3750 ∗ 未知的
45 7.63 C51H86年O21 1033.6028 987.5575 945.5498,927.5349,841.4951 √ Pseudoginsenoside Rc1 ( 28]
46 7.81 C55H92年O23 1165.6125 1119.6310 1077.5851,1059.5736,945.5401,927.5275,765.4456,621.3965,459.2525 √ 人参皂苷Rs1 ( 28]
47 7.82 C27H30.O10 513.1867 366.1149,351.0916,323.0886,151.0092,132.0236 ∗ Baohuoside我 ∆
48 7.82 C50H98年O29日 1207.6355 1161.6063 1175.6207,1161.6063 ∗ 未知的
49 7.85 C41H70年O14 831.4783 785.4698 653.4258 ∗ Notoginsenoside Rw2 ( 33]
50 7.89 C54H86年O24 1163.6464 1117.6188 1057.5961,971.5587,929.5478 ∗ Hemsloside G2 /人参皂苷ROA ( 34]
51 8.05 C42H70年O12 811.4849 765.4782 619.4163,457.2605 ∗ 人参皂苷Rg6 ∆
52 8.14 C52H104年O30. 1253.6549 1207.6088 1207.6088,1075.5676,943.5283 ∗ 未知的
53 8.16 C42H72年O13 829.4985 783.4911 637.4318,475.3790 √ 人参皂苷Fc ( 28]
54 8.17 C51H86年O21 1033.5596 987.5541 945.5425 - 927.5313,783.4911,765.4796,621.4370,459.3835 √ Quinquenoside三世 ( 28]
55 8.18 C42H72年O14 845.4895 799.4831 637.4308,619.4199,475.3775 ∗ 同分异构体(22) ( 28]
56 8.42 C48H82年O16 959.5573 913.5543 767.4940,621.4166,475.3465,146.9997 ∗ Gynosaponin二世 ( 35]
57 8.50 C56H94年O24 1149.6082 1107.7029,945.5416,927.5334,783.4859,765.3539,621.4349,459.3838 √ Quinquenoside R1 ( 28]
58 8.72 C42H72年O13 829.4963 783.4920 767.4591,621.4376,459.3846 √ 20 (S)人参皂苷Rg3 ( 23]
59 8.77 C42H72年O13 829.4974 783.4915 765.4796,621.4368,459.3842 √ 同分异构体(58) ( 23]
60 8.86 C42H72年O13 829.5020 783.4990 621.4348,459.3762,161.0500 √ 20 (R)人参皂苷Rg3 ( 23]
61年 9.39 C36H62年O9 683.4375 637.4319 475.3790 ∗ 20 (S)人参皂苷Rh1/20 (R)人参皂苷Rh1 ( 28]
62年 9.54 C47H80年O18 977.4802 931.5010 799.4818,769.4988,751.4977,637.3975 ∗ 同分异构体(9) ( 28]
63年 9.59 C49H80年O18 1001.5699 955.5613 913.5525,767.4947 ∗ Gylongiposide我 ( 36]
64年 9.60 C47H80年O17 961.5573 915.5556 783.4860,621.4335,459.3809 ∗ Notoginsenoside Fe / gynosaponin I / vinaginsenoside R16 / R17 ( 28]
65年 10.22 C42H70年O12 811.4861 765.4803 619.4220,603.4269,457.2275 ∗ 人参皂苷Rg6 ( 28]
66年 10.26 C42H72年O13 829.4875 783.4943 621.4368,459.3837 √ 人参皂苷F2 ( 28]
67年 10.36 C42H70年O12 811.4857 765.4805 619.4229,603.4269,457.2340 ∗ 人参皂苷F4 ( 28]
68年 10.38 C42H70年O12 811.4849 765.4792 603.3373 ∗ 人参皂苷Rg5 ( 28]
69年 10.40 C42H70年O12 811.4850 765.4794 603.3384,483.2727 ∗ 人参皂苷Rk1 ( 28]
70年 15.05 C47H80年O17 961.6223 915.5983 978.5970,783.5145,621.3875,459.3448 √ Notoginsenoside Fe / gynosaponin I / vinaginsenoside R16 / R17 ( 28]

缩写:Rt,保留时间;CMP,猕猴等离子体;Ref。引用。√:复合检测; ∗ :复合不检测。同分异构体(N°。):数字在括号表示峰值对应异构体;∆:数据符合标准物质。

确定等离子体组件,药物血浆和空白血浆的女士数据比较使用MarkerLynx模块MassLynx (V4.1)软件。

UPLC / ESI-Q-TOF MS数据的PCA成绩的药物血浆和空白血浆被显示在图 4。从得分图表可以看出,药物血浆和空白血浆的分数差距显著彼此的第一主成分得分显示显著差异的两组数据,表明两组重要的化学成分的差异。

分情节从主成分分析(PCA)的等离子体和空白血浆的药物。

年代图(S-plot) OPLS-DA UPLC / ESI-Q-TOF MS数据的药物血浆和空白血浆如图 5。S-plot中的每个点代表一个数据信号,横向坐标代表的贡献程度,纵坐标代表着信誉,坐标轴的正方向代表了信号的药物组比空白组。信号在S-plot中选择符合以下标准: X> 0.001和 Y> 0.8。

S-plot从正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等离子体和空白血浆的药物。

36个化合物被发现和结构鉴定(表 1)。的MS / MS谱和碎片通路在等离子体吸收组件图所示 6- - - - - - 9。

质谱和notoginsenoside R1的裂解途径。

质谱和人参皂苷的裂解途径Rb1。

质谱的裂解途径gypenoside XLIX。

质谱和gypenoside的裂解途径。

峰9 (Rt 4.61分钟)生产(mh)−离子在 米/ z931.5317和[M + HCOO]−离子在 米/ z977.5385表明C47H80O18分子式。其MS / MS数据显示特征碎片形成的 米/ z如图799.4850和637.4321 6。这表明一个xylosyl组的损失一个糖基组紧随其后。这种化合物的大规模分裂行为表明notoginsenoside R1,这证实了比较文学( 26]。

峰23 (RT 6.11分钟)生产(mh)- - - - - -离子在 m / z1107.6023表明分子式是C54H92年O23。MS / MS数据 m / z945.5431(图 7)表明一个糖苷集团和损失 m / z783.4896建议一个糖苷集团损失。此外,MS / MS数据显示另一个糖苷两组的损失,所示 m / z621.4235和 m / z459.3650,分别。这种化合物的大规模分裂行为表明它可以确定为人参皂苷Rb1所证实的报告数据比较。

峰值24 (Rt 6.21分钟)产生显著(mh)−离子在 米/ z1045.7167和[M + HCOO]−离子在 米/ z1091.5645。分子式(C52H86年O21)可以推导出通过元素组成。特征碎片形成的 米/ z913.5291,751.4626,605.4065,473.3609,符合标准的化合物。因此,峰值24被确认为gypenoside XLIX,及其裂解途径如图 8。

39 (RT 7.21分钟)峰值产生(mh)−离子在 m / z897.5676和[M + HCOO]−离子在 m / z943.5059表明分子式是C46H74年O17所示。特征碎片形成的 m / z765.4807、751.4272、681.4173、619.3864和487.3429。的片段 m / z765.4807和751.4272显示的损失一个xylosyl组和一个rhamnosyl集团分别;的特征碎片 m / z681.4173表示双方的损失。峰的分裂通路39如图 9。

 3.3。吸收组件的药理作用

阿尔茨海默病的病理特征主要包括老年斑(SP)的沉积形成的 β淀粉样蛋白( β)在神经元以及神经原纤维缠结形成的hyperphosphorylationτ蛋白在神经元,neufibrillary缠结(非功能性测试)和神经元损失( 17]。过度沉积的 β可以诱导氧化应激;导致自由基的过度积累;导致《脂质过氧化损伤,蛋白质、DNA和RNA ( 37];并导致神经元凋亡[ 38]。因此,一个 β全身的氧化应激在AD的发病机制中发挥着至关重要的作用 38, 39]。神经炎症也是广告的病理特征之一( 40),是一个重要的中介 β全身的神经元死亡和另一个至关重要的因素在广告的诱导病理除了氧化应激( 41]。有越来越多的证据表明,A β全身炎症反应是一个重要组成部分 β神经毒性( 42]。PC12细胞大鼠肾上腺嗜铬细胞的克隆细胞系。他们是神经性的,有典型的神经内分泌细胞特征。被广泛应用于研究神经元分化、离子通道、受体和发射机分泌。他们也是最常见的一种细胞系为研究神经毒性,是有用的 在体外细胞模型( 43]。因此,活性片段 β23-35被用在这个实验诱导PC12细胞建立神经元损伤模型。

治疗后, β25 - 35,PC12细胞模型对照组明显破坏了细胞的可行性模型对照组明显下降(与空白对照组相比, p < 0.05 )。与模型对照组相比,阳性对照药物加兰他敏和小檗碱能够明显保护PC12细胞的损害 β25 - 35( p < 0.05 )。人参皂苷Rb1,人参皂苷而已,人参皂苷Rd,人参皂苷,notoginsenoside Fa, notoginsenoside R1, R2 notoginsenoside, gypenoside A, gypenoside XLIX对PC12细胞损伤有明显保护作用 β25 - 35( p < 0.05 )如图 10。表 1显示,36个化合物的YZG猕猴猴等离子体被吸收;然而,只有14这些化合物用于药理实验的神经保护效应。其他化合物吸收猕猴猴等离子体将分居或购买的药效学筛选神经保护效应。活性成分在图 10将进一步验证在斑马鱼和小鼠模型。

检查组件的保护作用在PC12治疗 β25 - 35。样本如下:1、空白对照组;2,模型对照组;3,YZG组;4、氢溴酸加兰他敏组;5,盐酸小檗碱组;6,人参皂苷Rb1组;7,人参皂苷工程师组;8日,人参皂苷Rb3组;9日,人参皂苷Rc组; 10, ginsenoside Rd group; 11, ginsenoside Re group; 12, ginsenoside Rf group; 13, ginsenoside Rg1 group; 14, ginsenoside Rg2 group; 15, notoginsenoside Fa group; 16, notoginsenoside R1 group; 17, notoginsenoside R2 group; 18, gypenoside A group; and 19, gypenoside XLIX group.

 4所示。讨论

YZG是一个包含六个中药健康食品。我们最近在动物实验表明YZG改善记忆障碍,YZG可以保护PC12蛋白诱导的损害 β25 - 35( 12- - - - - - 15]。这六个草药的相关影响YZG也被报道。皂苷含量可以减少淀粉样蛋白的形成 β蛋白质( β通过抑制) β- - - γ分泌酶活动或通过激活nonamyloidogenic通路,抑制乙酰胆碱酯酶活性和诱导神经毒性,减少活性氧的生成和神经炎症反应 β( 44, 45]。 田七可以调节的表达AD-related circRNAs达到治疗效果的广告( 46]。皂甙可以显著提高在大鼠学习能力和记忆LPS-induced大脑功能障碍( 47]。Icariin阻止淀粉样beta-induced通过PI3K / Akt通路PC-12细胞凋亡( 48),提高突触可塑性通过BDNF / TrkB / Akt通路[ 49]。 Oxyphylla成分可以改善空间记忆性能和表达下调的表情吗 β分泌酶和积累 β1-42在大脑组织中( 50]。的根皮 桑属阿尔巴,以及它孤立的化合物,显示了强大的疼痛,BChE和BACE1-inhibitory活动( 51]。然而,YZG的活性成分尚不清楚。

虽然中药包含复杂的化学成分,只能吸收进入血液的化合物可以产生影响。中医主要是口服药物,其活性物质必须通过血液运输到行动的目标产生影响。因此,血清中包含的组件后,政府的直接的物质是中药 在活的有机体内。猕猴是灵长类动物,类似于人类遗传学和病理生理学;因此,他们是一个有用的临床前模型( 17, 18]。因此,我们使用这个模型来评估YZG。和血清药物化学方法被用来分析和识别组件包含在口服后血清YZG猕猴。

在这项研究中,共有63种化合物测定使用UPLC /从YZG ESI-Q-TOF女士方法;他们中的大多数是皂甙 人参和 田七的主要组件,这表明YZG皂苷发挥了药用作用。然后,我们分析和识别原型组件猕猴血清的猴子YZG口服后,发现35原型组件。我们分析了一些代表性的乳沟规则组件。这表明这些化合物是YZG的可能的活性成分。为了研究这些化合物是否真的有效,我们使用体外实验来验证和购买14商用化合物做细胞实验;结果表明,9个有明显的药理作用,这在一定程度上证明,组件吸收进入血液确实YZG的活性成分,为我们以后的实验提供了基础。然而,因为其他吸收组件是具有挑战性的,我们没有验证所有吸收组件在这项研究中,这是这个实验的不足,后续研究将找到一种方法来解决这个问题。

 5。结论

快速、灵敏和方便UPLC / ESI-Q-TOF女士同时定性分析的方法建立了YZG的化学成分和等离子体的吸收组件猕猴猴。YZG发现了七十种化合物,其中63种化合物是确定包括60皂甙,2黄酮,1甲基酯。 在活的有机体内研究显示33皂甙,1黄酮和1甲基酯的等离子体在猕猴身上。使用的PC12细胞损伤模型 β25 - 35评估吸收组件的神经保护效应。结果表明,9个化合物有保护作用:人参皂苷Rb1,人参皂苷而已,人参皂苷,人参皂苷,notoginsenoside Fa, notoginsenoside R1, R2 notoginsenoside, gypenoside A, gypenoside XLIX。大部分的这些活性成分是皂甙。

 缩写 YZG:

演变中颗粒

 中医:

中国传统医学

 UPLC / ESI-Q-TOF女士:

Ultraperformance液相色谱/电喷雾四极杆飞行时间质谱分析

 广告:

阿尔茨海默病

 主成分分析:

主成分分析

 OPLS-DA:

正交偏最小二乘分析的歧视

 DMSO溶液:

二甲亚砜

 SP:

老年斑

 一个 β:

β淀粉样蛋白

 非功能性测试:

神经原纤维缠结。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 作者的贡献

Erwei,剑锋秦、魏魏的贡献同样这项工作。

 确认

这项研究是由广西科学研究与技术发展项目(批准号。GKG1355004-11, 15-140-31, 17-259-20, 2017 ad19024和AD17195025)。作者感谢LetPub ( http://www.letpub.com)的语言帮助在准备这个手稿。

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