JAMC 分析方法在化学杂志》上 2090 - 8873 2090 - 8865 Hindawi出版公司 804504年 10.1155 / 2013/804504 804504年 研究文章 在活的有机体内抗氧化活性的诺丽果汁Deacetylasperulosidic酸 马 De-Lu 1 陈 梅 2 苏 陈X。 3 西 布雷特·J。 3 杨 剑 1 药理学分工 天津医科大学 天津300070 中国 tijmu.edu.cn 2 质量控制 塔希提岛的诺丽果汁饮料有限公司 房间12 f 789号 Zhaojiabang路 上海200032 中国 tahitian-miracle.com 3 研究和开发 Morinda Inc .) 737年东1180年南 美国叉 但84003年 美国 morinda.com 2013年 24 11 2013年 2013年 10 09年 2013年 15 10 2013年 2013年 版权©2013马De-Lu et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

Deacetylasperulosidic酸(DAA)是一个主要的植物化学成分组成的 Morinda citrifolia(诺丽果汁)水果。诺丽果汁汁已经证明了抗氧化活性 在活的有机体内在人体试验。评估的作用DAA抗氧化活性,Wistar鼠喂养0(对照组),15日30或60毫克/公斤体重/天7天。后来,血清丙二醛含量和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶测定并比较组间的活动。剂量依赖性降低丙二醛明显以及超氧化物歧化酶活动的增加存在剂量依赖的相关性。DAA摄取血清谷胱甘肽过氧化物酶活性没有影响。这些结果表明,DAA有助于抗氧化活性的诺丽果汁汁通过增加超氧化物歧化酶活性。与DAA剂量增加,丙二醛浓度下降,尽管缺乏谷胱甘肽peroxidase-inducing活动,也表明DAA可能增加过氧化氢酶活性。之前报道,诺丽果汁汁增加过氧化氢酶活性 在活的有机体内但需要更多的研究来证实DAA对过氧化氢酶的影响。即便如此,目前发现做解释可能的作用机制的抗氧化特性的诺丽果汁汁中探测到人体临床试验。

 1。介绍

Morinda citrifolia通常被称为诺丽果汁,一棵小树被用作食品和药品的传统来源在整个热带地区( 1, 2]。各种潜在的健康益处已经报道了诺丽果汁( 3]。这些包括免疫调节( 4, 5)和抗氧化活性 在体外和 在活的有机体内( 6- - - - - - 8]。诺丽果汁汁被发现的抗氧化活性增加耐力运动员( 9]。在人类临床试验涉及重吸烟者,食用诺丽果汁汁导致降低血浆超氧化物阴离子自由基的浓度(SAR)和脂质氢过氧化物 10]。此外,食用诺丽果汁汁也减少了脂质水平peroxidation-derived淋巴细胞DNA加合物的重度吸烟者( 11]。

在活的有机体内研究表明诺丽果汁汁增加超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)酶活性 12]。超氧化物阴离子自由基(SAR)是一个主要的细胞活性氧生成,可能通过酶和非酶的过程或可能来自外生的来源,包括香烟( 13]。SOD催化歧化作用的SAR过氧化氢和氧( 14]。GPx能够减少免费过氧化氢水( 15]。GPx也减少脂质氢过氧化物,以及防止自由基攻击细胞膜中多不饱和脂肪酸( 16]。因此,诺丽果汁汁的影响这两个酶可能至少有两个主要的抗氧化剂的作用机理通过它保护淋巴细胞DNA和降低血浆浓度的烟草烟雾诱发自由基和过氧化物。

诺丽果汁的水果的化学研究表明,环烯醚萜苷是主要的植物化学的成分,与deacetylasperulosidic酸(DAA)组成环烯醚萜苷的大部分内容( 17]。DAA anticlastogenic活动,抑制诱导中国仓鼠卵巢细胞和小鼠染色体畸变( 18]。DAA据报道,抑制肿瘤坏死因子-α的释放从培养小鼠腹腔巨噬细胞和抑制低密度脂蛋白氧化 19, 20.]。DAA也阻止4-nitroquinoline 1-oxide (4 nqo)诱导的DNA损伤 在体外( 21]。4 nqo暴露会导致过氧化物的形成,过氧化氢,和羟基自由基,导致生产大量8-hydroxydeoxyguanosine、DNA氧化的产物在哺乳动物和细菌细胞 22, 23]。DAA治疗减少4 nqo基因毒性98.96%,表明环烯醚萜苷负责诺丽果汁汁在吸烟者的DNA保护作用。

与抗氧化活性的诺丽果汁汁和其主要的潜在生物活性的植物化学成分组成部分,当前研究调查DAA SOD、GPx活动的作用 在活的有机体内。

 2。材料和方法 2.1。测试材料

Deacetylasperulosidic酸(DAA)获得了从成都Biopurify植物化学物质有限公司(中国成都)。DAA的纯度为98%,和身份证实了高效液相色谱法( 24]。DAA MeOH-H溶解2O(1: 1)浓度为0.2毫克/毫升。分离的标准进行HC-C18列(25厘米×4.6毫米;5 μm,安捷伦科技,圣克拉拉、钙、美国)水域2690分离模块(水公司,米尔福德,妈,美国),发现水域2489 UV / Vis探测器在235海里。DAA筛选了在0.8毫升/分钟的流量与两个移动阶段:MeCN (a)和(B) 0.1%的甲酸H2O (v / v)。洗脱梯度与100% B 5分钟,35分钟30%和70% B, B 12分钟95%和5%,然后用100% B . 8分钟的保留时间和吸光度光谱比较反对的DAA标准。

 2.2。动物和治疗

在这项研究中,40 Wistar鼠(男性和女性,180 - 200 g)得到的实验动物中心,军事医学科学院(北京),没有批准。scxk -军- 2009 - 003。照顾动物和实验程序符合伦理和制度动物福利天津医科大学的指导方针。适应后,老鼠被随机分为4组,每组10(5男5女)。每组提供饲料和水 随意。DAA溶解在盐水,每只动物填喂法为7天1毫升/ 200克体重(bw)的四种治疗方法之一,根据小组任务。生理盐水治疗(控制),DAA 15毫克/公斤bw(低剂量),DAA 30毫克/公斤bw(中剂量),和DAA 60毫克/公斤(高剂量)。个体动物体重和投料记录在天1,4,7。第八天,老鼠麻醉和0.5毫升血液从轨道窦中删除。全血在3000转离心10分钟在低速离心机(模型bfx5 - 320, Baiyang离心机厂,Liulizhuang,河北,中国)。结果血清化验留存。

 2.3。抗氧化酶活性测定和丙二醛测定

使用一个商业生物测定设备(南京建成生物工程研究所,中国),提高血清SOD活性是化验。超氧化物歧化酶活性测定利用水溶性染料的生产(WST-1甲瓒)从四唑盐(WST-1)的SAR ( 25]。磷酸盐反应混合物,黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶孵化在37°C的样本,空白,SOD标准和WST-1。反应,生成SAR从黄嘌呤和氧气。SOD催化SAR的歧化作用,从而减少用于氧化WST-1 WST-1甲瓒。样本结果相比对SOD标准曲线后吸光度是阅读在450 nm标(时代微型板块分光光度计、BioTek Winooski, VT,美国)。SOD活性是由计算WST-1甲瓒抑制率和表达在U /毫升。

GPx活动与商用血清样本还确定生物测定设备(南京建成生物工程研究所,中国)。GPx活性测定通过确定降低血清中谷胱甘肽。吸光度样品、空白和标准在412 nm标(时代微型板块分光光度计、BioTek Winooski, VT,美国)。酶活性被表示为U /毫升。

丙二醛(MDA)浓度化验商业生物测定设备(南京建成生物工程研究所,中国)。MDA根据常见的比色法检测样品的反应和1,3,3,3 tetra-ethoxypropane标准与硫代巴比土酸95°C水浴40分钟。每个样品的吸光度和标准为532 nm(时代微型板块分光光度计、BioTek Winooski, VT,美国)。结果测定标准曲线和表达为nmol /毫升。

 2.4。统计分析

基本总结统计(意思是,范围,和标准偏差)计算。组间差异与学生的测量 t 以及,巴特利特的方差齐性检验。

 3所示。结果与讨论

重量和采食量率不同群体比较表 1和 2。所有组经历了适当的体重增加7天期间( 26),没有任何组织之间的区别。没有社会团体内部的变化意味着采食量。没有投料组天1和4之间的区别。低,中剂量组在7天饲料摄入量略低于对照组,但这些都是在健康Wistar鼠(预期的数量 27]。没有显著差异之间的采食量控制和高剂量组。

意味着(±标准差)重量(g) /动物。

DAA剂量(毫克/公斤) 第一天 第四天 第七天
0 189年 ± 10.4 208年 ± 21.2 220年 ± 27.5
15 189年 ± 8.26 207年 ± 15.7 218年 ± 22.2
30. 189年 ± 11.4 207年 ± 20.7 217年 ± 24.8
60 190年 ± 8.97 207年 ± 17.5 218年 ± 24.0

意思是(±标准差)采食量(g) /动物。

DAA剂量(毫克/公斤) 第一天 第四天 第七天
0 21.9 ± 5.49 20.6 ± 5.62 21.8 ± 4.18
15 19.1 ± 3.49 19.8 ± 2.64 18.3 ± 2.65 *
30. 21.8 ± 5.86 21.6 ± 5.12 18.3 ± 2.41 *
60 20.0 ± 4.66 19.1 ± 2.27 18.7 ± 2.40

* P < 0.05 相比对照组7天但在预期的采食量。

DAA摄入量的影响在MDA浓度和抗氧化酶活动总结表 3。同时意味着低剂量组血清MDA含量低于对照组,差异并不显著。然而,有一个趋势,降低血清MDA含量增加DAA剂量。中、高剂量组的血清MDA明显低于那些在控制。近似百分比减少意味着血清MDA的中、高剂量组,分别为22.6%和19.7相比,对照组。

意味着(±标准差)血清MDA含量和抗氧化酶的活性。

DAA剂量(毫克/公斤) MDA(nmol /毫升) 草皮(U /毫升) GPx(U /毫升)
0 5.54 ± 0.77 115年 ± 10.1 995年 ± 148年
15 4.96 ± 1.43 126年 ± 17.3 1007年 ± 169年
30. 4.45 ± 1.15 * 128年 ± 15.2 * 983年 ± 167年
60 4.43 ± 0.79 * * 130年 ± 8.83 * * 986年 ± 101年

* P < 0.05 , * * P < 0.01 与对照组相比。

意味着血清SOD活性与DAA倾向于增加剂量。而SOD活性在低剂量组比几乎是10%控制,只是略微的显著差异( P = 0.098 )。另一方面,SOD活动观察中、高剂量组均明显大于对照组。中、高剂量动物经历,分别平均增加11.3 ( P < 0.05 )和13.0% ( P < 0.01 )血清中SOD活性。与SOD、GPx活动不会受到DAA摄入的剂量评估。

当摄入DAA具有明显的抗氧化活性。DAA在SOD活性的影响有助于解释至少有一个机制诺丽果汁汁降低等离子体SAR在重度吸烟者。SAR对MDA的最终形成的活性羟基自由基形成通过过渡金属离子的还原SAR或退化产生的过氧亚硝基反应之间的SAR和一氧化氮 28]。因此,特区歧化作用的增加H2O2和氧气会降低MDA的形成可用的数量。这表明一种DAA减少脂质过氧化反应,以降低MDA含量,增加SOD活性。这是进一步证明观察DNA保护作用的诺丽果汁汁在重度吸烟者,因为MDA与DNA碱基反应容易形成脂质peroxidation-derived DNA加合物( 11, 29日]。

本研究的一个非常有趣的观察DAA无力GPx活性增加。增加SOD活性下降导致SAR浓度。但SOD活性的结果是增加了H2O2。H2O2反过来,会导致氧化损伤,如果不进一步代谢成活性化合物。提高H2O2被发现通过脂质过氧化(MDA浓度增加 30.]。但MDA降低在我们的研究中,尽管GPx活性不受影响。因此,另一个途径必须参与的控制H2O2的水平。过氧化氢酶是另一种抗氧化剂酶促进降解的H2O2成水和氧气 31日]。因此,它可能是过氧化氢酶活性增加了DAA。这可能是进一步得到事实的支持 Morinda citrifolia叶子包含DAA [ 17lymphoma-bearing老鼠)和过氧化氢酶活性增加美联储的原油 m . citrifolia叶提取物( 32]。此外,水提物的 m . citrifolia叶片过氧化氢酶活性增加hyperlipidemic老鼠( 33]。其他环烯醚萜苷也被报道提高过氧化氢酶活性( 34),这是一个与这类相关的生物活性化合物。

这个实验的结果表明,DAA施加抗氧化剂通过增加SOD活性的影响。这种效应可能是负责任的,至少在某种程度上,诺丽果汁汁抗氧化特性的人体试验和演示 在活的有机体内。的 在体外抗氧化活性的DAA 4 nqo也可能通过SOD激活介导,如所涉及的微生物表达这种酶( 35]。然而,DAA似乎并不增加GPx活动本身,至少在本研究的条件。正如前面所讨论的那样,诺丽果汁汁GPx活性增加 在活的有机体内。尽管DAA诺丽果汁的主要成分果汁,水果还包含其他几个在小环烯醚萜苷浓度( 17, 36, 37]。马钱子苷、环烯醚萜结构类似于epi-dihydrocornin在诺丽果汁的水果、GPx表达增加大鼠系膜细胞已经接触到先进的糖化终端产品( 38]。所以,很可能另一个环烯醚萜化合物在诺丽果汁,除了DAA,负责GPx活性增加。也有可能,一些植物化学的成分之间的相互作用导致血清GPx增加。

 4所示。结论

的 在活的有机体内抗氧化活性的DAA已经证明通过口服Wistar鼠7天。趋势明显,存在剂量依赖的相关性显著降低血清MDA和SOD活性增加的一篇在30和60毫克/公斤体重。然而,DAA没有增加血清GPx活性。由于血清MDA拒绝增加剂量,可能DAA引发过氧化氢酶活性。然而,需要进一步的研究来证实这一点。动物体重、采食量,连同以前的DAA毒性试验中,不提供任何毒性的迹象。当前研究的结果表明,DAA负责,至少部分的抗氧化活动中观察到人体试验。虽然可能DAA对SOD活性的影响可以解释诺丽果汁汁重度吸烟者的影响,结果还表明,诺丽果汁汁对GPx活性的影响 在活的有机体内与DAA无关。诱导GPx可能是因为另一个环烯醚萜苷或植物化学的成分的组合。

 承认

这项研究由Morinda Inc .财务支持,制造商诺丽果汁汁。

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