JAMC 分析方法在化学杂志》上 2090 - 8873 2090 - 8865 Hindawi出版公司 245415年 10.1155 / 2012/245415 245415年 研究文章 LC-MS-MS测量尿肌酐和肌酐标准化技术的应用可替宁在吸烟者的24小时尿 侯 宏伟 1 熊 魏 1 张 仙桃 1 首歌 Dongkui 2 唐 过分瘦长的 1 胡 清远 1 Esteve-Romero 约瑟 1 中国国家烟草质量监督测试中心 郑州450001 中国 2 部门的泌尿学 郑州大学第一附属医院 郑州450052 中国 zzu.edu.cn 2012年 11 11 2012年 2012年 14 02 2012年 29日 08年 2012年 31日 08年 2012年 2012年 版权©2012宏伟侯et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

一个简单的和敏感的高效液相chromatography-tandem质谱(HPLC-ESI-MS-MS)方法的开发和验证在人尿中肌酐的量化。分析进行一个安捷伦Zorbax Eclipse XDB-C18列( 2。1 × 150年 3.5毫米, μ米)。水的流动相为0.1%甲酸和甲酸0.1%乙腈(50/50,v / v)。线性校正曲线得到的浓度范围1 - 2000.0 ng / mL,量化的下限0.99 ng / mL。内部和interday精度(RSD)值低于3%。该方法成功地应用于生物等效性研究在中国吸烟者和非吸烟者肌酐。24小时尿液和可替宁的总可替宁:肌酐比率也呈正相关(皮尔森 R = 0.942 , P < 0.0001 )。然而,可替宁:肌酐比率之间存在着显著的差异在吸烟组个体的差异。24小时尿可替宁更适合表达相关性与焦油可替宁:肌酐比率。

 1。介绍

有超过5000种化学物质在香烟烟雾 1]。暴露于香烟烟雾中与许多有关不良生理效应( 2]。尼古丁是一种化学物质存在于山香烟烟草的重量的1%左右。尼古丁是烟草的主要活性成分,也是导致烟瘾或依赖的主要因素(生产 3]。可替宁,尼古丁代谢的主要降解产物,一直是一个重要识别特定的生物标志物来评估香烟烟雾暴露( 4]。

尿液标本通常采用生物监测因为尿液收集非侵入性,提出了最小的参与者和研究者传染病风险。连续和完整的24小时尿液收集产生更精确的结果,因为现货尿液采样可能无法提供一个有效的概述整个毒物暴露概要文件( 5]。尿液样本的完整性和完整性是必不可少的暴露评估研究,并没有遵守协议集合是一个基本的问题研究员。因为肌酐在相对恒定速率随着尿液排出通过肾小球滤过,它的测量是评估样本的完整性和完整性( 6, 7]。此外,尿肌酐比率中常用格式规范化分析物量化样本浓度( 8, 9]。正常化过程包括感兴趣的分析物的浓度除以肌酐浓度获得同样的尿液样本,结果报告为目标分析物的浓度每毫克分子肌酐。最近,作为一个标准化的基础上,尿肌酐是用来考虑多种外源性物质的排泄与吸烟有关,从可替宁mercapturic酸( 10]。

有许多论文对肌酐的测定在人类体液,包括Jaffe方法( 11, 12),酶的方法( 13)、流动注射分析( 14),高效液相色谱法( 15- - - - - - 22),毛细管电泳( 23- - - - - - 25),区电泳( 26),气相色谱分析-质谱法( 27),或液相色谱结合质谱(LC-MS-MS) [ 28- - - - - - 30.]。最近测定肌酐、delta-aminolevulinate和酪氨酸在生物体液直接注入LC-MS-MS,执行和同位素稀释串联质谱用于评估血清中肌酐测定的准确性,等离子体,等离子体或鼠标 28, 29日, 31日- - - - - - 33]。Huškova et al。 34)开发了一个快速的方法分析尿肌酐的固相萃取MS-MS。虽然耗时的固相萃取用于样本准备,串联质谱不能消除所有的选择性干扰在尿液。另一个修改LC-MS-MS方法引入公园等人被允许直接分析在24 h尿肌酐与甲醇(稀释后 30.]。然而,分析物从列筛选了0.59分钟,离不开水溶解尿蛋白和大分子(保留时间< 1分钟C18柱)。尿肌酐的排泄人类一直在医院的常规测试。方法根据颜色反应和酶反应缺乏选择性的限制。轮询调度结果显示相当大的和不满意不同实验室和方法( 35]。

为了消除干扰不同乐器的尿肌酐和使用尿肌酐正常吸烟相关的生物标志物在人类生物体液、敏感和选择性LC-MS-MS方法确定尿肌酐是开发和验证酶比色测定。该方法应用于尿吸烟者和非吸烟者的样本。数据应用于调整可替宁的价值观和进行探索改进是否发生在和谐与焦油烟草暴露联系起来。

 2。实验 2.1。化学药品和试剂

乙腈、甲酸和甲醇从TEDIA公司得到Inc .(哦,美国)。高效液相色谱法的溶剂都是分数。肌酐从美国得到Pharmacopeial公约(罗克维尔市,医学博士,美国)。Creatinine-d3(N-methyl-d3;纯度:98%;同位素纯度:99%,多伦多的研究化学品公司,多伦多,加拿大)被用来作为内部标准(是)。

 2.2。股票的解决方案的准备、校准标准和质量控制样品

肌酐和creatinine-d的主要股票的解决方案3准备的标准和质量控制(QC)样品,分别是由称重。主要股票的解决方案(0.21和0.1毫克/毫升)的肌酐和creatinine-d3分别准备水和储存在−80°C被认为是稳定三个月(数据未显示)。适当稀释在水产生100年股票的解决方案工作,1000和10000 ng / mL肌酸酐的制备校准曲线。校准器(1、2、5、10、20、50、200、500和2000 ng / mL)被添加不同的整除刚做好的工作储备溶液的分析物和creatinine-d 25 ng / mL3水。质量控制样品肌酐在三种不同浓度(200,和400 ng / mL)也准备与人类尿液。

 2.3。样品制备

冷冻尿液样本解冻室温和混合暂停任何解决沉淀。一个10 μL甲酸加入1毫升整除的人类尿液样本,搅拌,在10000转离心10分钟。混合物过滤是0.22 μm polyethersulfone膜和5 μL尿液整除被转移到一个琥珀色的容量瓶,用水总量的10毫升后与100年飙升 μL (creatinine-d3内部标准溶液(1 μg / mL)。一个5 μL整除LC-MS-MS注射对列。另一个整除的尿液样本用于酶比色分析。

日立的酶比色法进行模块化自动分析仪(罗氏)。酶的酶促降解方法基于肌酐creatininase及其反应产物,creatinase和肌氨酸氧化酶。H2O2氧化产生的肌氨酸spectrophotometrically决定。

 2.4。仪器分析

所有样品进行了分析使用安捷伦1200液相色谱仪(美国安捷伦科技,威尔明顿DE)加上一个API 4000三重四质谱仪配备TurboIonSpray来源(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。应急服务国际公司在正离子模式下执行(ionspray电压4500 V)与氮喷洒(气体1),加热器(气体2),窗帘,气体和碰撞。气流参数优化(喷雾器40 psi,加热器40 psi和窗帘气体30 psi)通过连续流动注射而流动相引入电离源,享年200岁 μL / min。declustering势(73 V),入口潜在(10 eV),碰撞能量(V) 29日,和细胞退出的可能性(8 V)被集成优化肌酐圈套泵以恒定流量的10 μL / min。涡轮离子喷雾温度设定在480°C。定量分析了在多反应监测(MRM)模式下的停留时间100毫秒。

一个安捷伦Zorbax Eclipse XDB-C18列(2.1×150毫米,3.5 μ米粒子大小、安捷伦科技、美国德威尔明顿)是200年使用流量 μ在环境温度L / min。权力平等主义的分离进行了50%的溶剂(水)0.1%的甲酸和50%溶剂B(0.1%甲酸乙腈)。0.45溶剂被过滤 μ膜和在使用前由真空脱气。整除(5 μL)的标准或稀释尿液样本包含内部标准被注入到LC-MS-MS系统。仪器是计算机运行应用生物系统公司的分析师1.5版本软件。

酶比色法进行根据先前发表的方法( 36]。

分析了总尿中可替宁吸烟者和非吸烟者根据先前发表的LC-MS-MS方法( 37]。

 2.5。验证实验

一些性能参数进行了测试验证该方法根据食品和药物管理局(FDA)分析方法指南。这些都是线性校准的情节,拟合优度线性回归模型校准的情节,特异性、选择性、解冻稳定、复苏,基体效应和精度。

 2.6。尿液样本

郑州大学伦理委员会批准的研究。246年24小尿样本82吸烟者在三个独立的57天,空白24小尿不吸烟者得到样品在基线从正在进行的研究(尿液标志物相关吸烟暴露)在郑州大学临床药理研究所。知情同意和/或同意了所有的科目。

 3所示。结果与讨论 3.1。优化的色谱条件

在最初的方法开发和验证过程中,几种不同的LC列和相关溶剂系统评估的最佳色谱分离分析物从背景干扰。可怜的峰形状观察大多数列上,除了那些XDB C18柱。初始流动相被选为水和methonol (v / v),而可怜的峰形状也被观察到。为了获得良好的峰形状和分离,溶剂(0.1%乙酸铵在水中)和溶剂B(0.1%甲酸methonal)被选为流动相。

 3.2。质量色谱图和检测条件

女士的检测参数进行了优化使用注射泵的流量10 μL / min。肌酐的ESI质谱如图 1。应急服务国际公司的条件下,质子化了的分子([ 米 + H ]+)的肌酐和creatinine-d3观察为基础的山峰 米 / z 114年和117年,分别。Collision-induced离解的化合物产生的一个主要碎片离子 米 / z 86年对肌酐和 米 / z 89年creatinine-d3分别对应的中性损失有限公司[M + H-CO]+。与此同时,碎片离子[M + H-CO]+可能产生的另一个主要产品离子 米 / z 44肌酐和 米 / z 47对creatinine-d3(图 1)。为每个分析物,两个离子转变成对使用多个反应模式下(MRM)。这些离子对114/86和114/44肌酐为creatinine-d确认和量化和117/473。

肌酐与产品的质量ESI串联质谱离子扫描( 米 / z 114)。

 3.3。特异性和选择性

没有明显的干扰峰内源性化合物的保留时间观察到的肌酐和creatinine-d3。肌酐和creatinine-d的保留时间3分别为1.4和1.3分钟。总色谱运行时间是12分钟。一个典型的MRM creatinine-d的色谱图3和肌酸酐在水中溶解了(a1), (a2)和(a3)在图 2。稀释尿液样本中发现化合物((b1)、(b2)和(b3)在图 2)。

(一)色谱图和creatinine-d肌酐的标准3,黏着在水(总离子(上),肌酐标准(中间),和creatinine-d3(底部))。(b)色谱图的肌酐和creatinine-d32000倍稀释尿液样本(总离子(上),肌酐标准(中间),和creatinine-d3(底部))。

 3.4。解冻的稳定性

尿液矩阵进行了解冻/再冰冻周期在每个验证实验,积累等6个周期的验证。六个验证实验的平均值肌酐的浓度 10.09 ± 0.31 更易/ L(简历= 2.1%)。类似规模的CVs是interday CVs,表明快速解冻冷冻水不影响尿液的分析物的浓度。

 3.5。基体效应和稀释的影响

尿液成分的影响分析物的离子化,决心通过比较postextracted尿液的反应标准质量控制样品( n = 6 )与整洁的样品分析物的反应当量浓度。在相同浓度的分析物和基体效应决定恢复实验。

Zinellu et al。 24)和Waterval et al。 33)报道,与固相萃取预处理的尿液尿肌酐不是一个必要的一步测量,简单的稀释尿液没有预处理提供了肌酐高选择性。在此帐户,一个简单的稀释水和甲醇在本研究应用。如图 3,用水稀释尿液样本可以清楚色谱肌酐。尿液稀释用水的信噪比高于甲醇的狭窄的肌酐色谱peek、低噪音。肌酐很容易就发现在所有的尿标本,也可以更好地分析尿液样本稀释2000倍时在我们的分析。此外,应用稀释尿液样本LC-MS-MS可以减少基体效应的影响,从而让更多的样品前处理清洗。

总离子色谱的尿样()稀释水和甲醇。

 3.6。复苏,校准曲线,检测的局限性(LOD)和量化(定量限),和精度

分析得到恢复率飙升不抽烟池尿样和三个浓度的肌酐(50,200,和400 ng / mL)。复苏范围从98.6到106.0% ( n = 6 )(表 1)。

恢复的方法,以稀释尿液样本(2000倍)。

添加(ng / mL) 检测(ng / mL) 恢复( n = 6 ,%)
0 223.25 - - - - - -
50 276.00 105.5
200年 435.25 106.0
400年 617.75 98.6

肌酐的峰面积比值是构造校正曲线绘制和肌酐浓度。使用创建的校准曲线肌酐溶解在水中是线性的( y = 0.0106 x + 0.00615 , r = 0.9995 在分析范围从1到2000 ng / mL。

LOD和定量限确定基于集成的仪器响应函数的分析师1.5软件(应用生物系统公司)。这些计算是基于信号/噪声比3和10 LOD和定量限。相应的浓度计算比率的内部标准面积的校准曲线。肌酐溶解在水中的LOD和定量限分别为0.30和0.99 ng / mL。

盘中精度(RSD)的方法建立了复制分析( n = 10 )的样品含有低,中等和高肌酐的浓度。interday精度(RSD)建立了复制相同的样品分析的10天。盘中、interday精度决定分别为1.0 -1.8%和1.5 -2.9%,分别为(表 2)。内部,interday结果表明该方法是可靠的。

方法的精度与稀释尿液样本(2000倍)。

盘中( n = 10 ) Interdays ( n = 8 )
意思是(ng / mL) 相对标准偏差(%) 意思是(ng / mL) 相对标准偏差(%)
335.2 1.0 336.43 2。9
578.4 1.6 575.29 2。0
933.0 1.8 931.29 1.5
3.7。比较的方法

发表的高效液相色谱方法,注入的样品中蛋白质的存在会导致修改的列有偏见的分析结果。因此,广泛的样本清理包括液-液(L-L)提取和SPE需要低样品基体效应和良好的高效液相色谱法分离为目标化合物。然而,固相萃取并不是一个必要步骤,尿肌酐测量和简单的稀释尿液样本没有预处理提供了肌酐高选择性( 38]。在这个实验中,使用一个简单的用水稀释后酸沉淀、离心、过滤。肌酐的浓度可能是决定和矩阵的效果可能是非凡的光与水稀释2000倍后。与出版LCMS / MS方法相比,新方法需要较少的样本(5 μL相比50 μL尿液)的下限检测(0.3 ng / mL相比22.8 ng / mL ( 38),1 ng / mL ( 30.),6 ng / mL ( 29日),3.7 ng / mL ( 28])。此外,检测下限的,这种方法可以用来测量肌酸酐浓度低至1 ng / mL。

检查的有效性LC-MS-MS, 28日24小尿标本(16吸烟者和不吸烟者12日)测量使用LC-MS-MS用一个简单的一步稀释和酶比色法(酶比色法对细节见表 1在补充材料可用doi: 10.1155 / 2012/245415)为同一组尿液样本。肌酐值测量的比色和LC-MS-MS方法(皮尔森呈正相关 R = 0.984 , R 2 = 0.968 , P < 0.0001 ,图 4)(补充材料)的原始数据见表1。然而,LC-MS-MS利用低检测极限和高选择性而酶比色法。此外,它可以减少干扰。数据从相同的仪器能提供更准确和稳定的结果肌酐标准化技术。

比较人类的尿液肌酐衡量LC-MS-MS和酶比色方法( n = 28 )。实线显示线性适合行: = 1.058 x - - - - - - 141.486 , R 2 = 0.966 , P < 0.0001 。

 3.8。肌酐的规范化技术在吸烟者的尿液可替宁

可替宁的主要代谢物尼古丁,是最合适的参数来评估烟草暴露和吸烟状况相比,由于其较高的稳定性和半衰期尼古丁( 9, 39]。在24小尿尿肌酐和可替宁含量测定样品( n = 246年 )从82年开始吸烟者和24小尿样本( n = 57 从57不吸烟者(LC-MS-MS方法测定可替宁见补充材料)。

正常化过程包括可替宁的浓度除以肌酐浓度获得相同的尿液样本,结果被表示为每毫克分子可替宁肌酐的浓度。肌酐规范化和nonnormalized可替宁总在24小尿可替宁的价值观和相关性和可替宁肌酐比率为评估。标准化可替宁的值与nonnormalized浓度(皮尔森在统计上显著相关 R = 0.858 , P < 0.0001 )。总在24小尿和可替宁肌酐比率也可替宁(皮尔森呈正相关 R = 0.942 , P < 0.0001 )(原始数据见表2 - 5在补充药物)。

24小时尿液可替宁的评估暴露于外源性物质被认为是“黄金标准”,这可能代表了最佳信息尿可替宁排泄。24小时尿可替宁呈正相关,焦油如图 5(一个)(表 3)。调整可替宁值进行探索改进是否发生在焦油的一致性,结果被显示在图 5 (b)(表 3)。很明显,对应的气泡图 5(一个)集中更多在图吗 5 (b),除了8 mg: 10毫克。没有使用提高一致性,除了8 mg: 10毫克(0.716和0.722)。原因可能是年龄和性别对肌酸酐生产的影响。

24小时尿可替宁的相关性与焦油未经调整和调整。

变量 r
8 mg: 10毫克 8 mg: 13毫克 10毫克:13毫克
24小时可替宁浓度 0.716 0.808 0.822
可替宁肌酐比率 0.722 0.765 0.791

24小时尿可替宁的散射矩阵图未经调整的调整(a)和(b)从吸烟者8毫克,10毫克,13毫克焦油产量香烟。

 4所示。结论

开发了一个简单的和具体的方法由LC-MS-MS尿肌酐的测定。样品制备只涉及离心和过滤稀释尿液,这不仅使样品处理量也降低肌酐高背景噪声和尿盐浓度。此外,尿肌酐比率格式用来标准化可替宁浓度。

标准化可替宁的值在统计上显著相关,总可替宁在24小尿和可替宁肌酐比率也呈正相关。跨吸烟组因为可替宁:肌酐比值变化显著不同的个体,24 h-urinary可替宁更适合表达相关性与焦油可替宁:肌酐比率。

 确认

这项工作是由中国国家自然科学基金(没有。21277174)。作者要感谢副高钠临床药理研究所的教授(中国郑州大学医学院)提供24小尿的吸烟者和样品空白尿液样本不吸烟者。

 Layten戴维斯 D。 尼尔森 m . T。 烟草:生产、化学和技术 1999年 布莱克韦尔科学 Repace j·L。 劳里说 a . H。 室内空气污染、烟草烟雾和公共卫生 科学 1980年 208年 4443年 464年 472年 2 - s2.0 - 0018907712 波诺维奇 n . L。 吸烟和尼古丁成瘾的药物方面 《新英格兰医学杂志》上 1988年 319年 20. 1318年 1330年 2 - s2.0 - 0024215844 贾维斯 m·J。 应用生化摄入标记被动吸烟测量和风险评估 突变的研究 1989年 222年 2 101年 110年 2 - s2.0 - 0024540806 Waikar 美国年代。 Sabbisetti 诉。 Bonventre j . V。 尿液标志物正常化肌酐在肾小球滤过率的变化 肾脏国际 2010年 78年 5 486年 494年 2 - s2.0 - 77955655750 10.1038 / ki.2010.165 谢弗 p。 kreatin的排泄和kreatinine在健康和疾病 美国生理学杂志》上 1908年 10 1 10 克努森 N。 克里斯琴森 E。 Brandt-Christensen M。 尼加德 B。 Perrild H。 年龄和sex-adjusted碘/肌酐比值。流行病学调查的新标准?评价三种不同的估计基于休闲的碘排泄尿液样本和比较24 h值 欧洲临床营养学杂志》上 2000年 54 4 361年 363年 2 - s2.0 - 0034037904 10.1038 / sj.ejcn.1600935 鲍尔斯 l D。 黄 e . T。 动能血清肌酐化验。二世。一个关键的评估和审核 临床化学 1980年 26 5 555年 561年 2 - s2.0 - 0018999198 波诺维奇 n . L。 龙骑士达因 k . M。 邓普西 D。 余 l 雅各 P。 尼古丁的剂量估计低剂量辐射后使用血浆和尿液中尼古丁代谢产物 癌症流行病学生物标记与预防》上 2010年 19 5 1160年 1166年 2 - s2.0 - 77952078223 10.1158 / 1055 - 9965. - epi - 09 - 1303 天堂 d . L。 摩根 w·T。 西尔斯 美国B。 理查森 j . D。 伯德 g D。 奥格登 m·W。 肌酐和比重正常化技术对异型生物质生物标志物在吸烟者的现货,24 h尿 制药和生物医学分析杂志》上 2006年 40 4 928年 942年 2 - s2.0 - 32944469912 10.1016 / j.jpba.2005.08.008 杰夫 M。 在normalen Ueber窝Niederschlag welchen Pikrinsaure低质粗支亚麻纱erzeugt des Kreatinins和超级neue反应 Zeitschrift毛皮physiologische化学 1886年 10 5 299年 308年 Bonsnes r·W。 Taussky H . H。 贾菲的比色测定肌酐的反应 《生物化学》杂志上 1945年 158年 3 581年 591年 雅可布 r·M。 拉姆斯登 j . H。 泰勒 j . A。 诈骗 E。 干扰物对动能的影响Jaffe反应和酶比色检测血清肌酐浓度测定在猫、牛、狗和马 加拿大兽医研究杂志》上 1991年 55 2 150年 154年 2 - s2.0 - 0026350189 姚 T。 小手川大助 K。 同时流动注射分析的肌酐和血清中肌酸结合使用16路开关阀,一些特定的反应堆和高度选择性的过氧化氢酶电极 分析Chimica学报 2002年 462年 2 283年 291年 2 - s2.0 - 0036644635 10.1016 / s0003 - 2670 (02) 00343 - 4 帕特尔 c·P。 乔治 r . C。 液相色谱测定血清中肌酐和尿液 分析化学 1981年 53 4 734年 735年 2 - s2.0 - 0019557155 Tsikas D。 狼 一个。 Frolich j . C。 简化的尿和循环肌酐的高效液相色谱方法 临床化学 2004年 50 1 201年 203年 2 - s2.0 - 1642574218 10.1373 / clinchem.2003.024141 Hewavitharana 答:K。 布鲁斯 h·L。 同时液相色谱测定肌酐和假牛尿和pH值在分析样本的影响 农业与食品化学杂志》上 2003年 51 17 4861年 4865年 2 - s2.0 - 0042562092 10.1021 / jf030095z 珍 j·F。 萧 s . L。 刘 k . H。 同时测定尿液中尿酸、肌酐的环保无溶剂的高效液相色谱测定方法 Talanta 2002年 58 4 711年 717年 2 - s2.0 - 0037120744 10.1016 / s0039 - 9140 (02) 00377 - 6 Marsilio R。 达尔中保 R。 佐丹奴 G。 墙 l 蒙提 G。 Ros M。 Bacelle l Plebani M。 Dussini N。 Zacchello G。 快速测定血清中肌酐、尿离子对高效液相色谱法 国际临床与实验室研究》杂志上 1999年 29日 3 103年 109年 2 - s2.0 - 6544275962 10.1007 / s005990050072 贾 l 高 J。 陈 X。 胡 G。 王 Y。 王 X。 壮族 Z。 在人尿中肌酐的测定与光电二极管阵列检测毛细管区带电泳 液相色谱及相关技术杂志》上 1998年 21 7 965年 977年 2 - s2.0 - 0031776829 卡特林 d . H。 Starcevic B。 尿肌酐的测定的高效液相色谱方法 杂志的液相色谱 1991年 14 12 2399年 2408年 2 - s2.0 - 0025893374 Paroni R。 Arcelloni C。 费尔莫 我。 Bonini p。 测定血清中肌酐和尿液快速液相色谱测定方法 临床化学 1990年 36 6 830年 836年 2 - s2.0 - 0025313570 史 h·L。 马 y Q。 马 y F。 一个简单、快捷的方法来确定和量化尿肌酐 分析Chimica学报 1995年 312年 1 79年 83年 2 - s2.0 - 0029135077 10.1016 / 0003 - 2670 (95)00208 - h Zinellu 一个。 Sotgia 年代。 Zinellu E。 Chessa R。 Deiana l Carru C。 分析的同时测定guanidinoacetic酸,肌酸酐和肌酸在毛细管电泳UV-detection血浆和尿液 分离科学杂志》 2006年 29日 5 704年 708年 2 - s2.0 - 33645741612 10.1002 / jssc.200500428 Ruiz-Jimenez J。 Mata-Granados j . M。 德卡斯特罗 m·d·L。 在线自动SPE-CE耦合生物标记测定尿液 电泳 2007年 28 5 789年 798年 2 - s2.0 - 33947112811 10.1002 / elps.200600340 •加蒂 R。 Lazzarotto V。 de Palo c . B。 快速尿肌酐测定毛细管区带电泳 电泳 1999年 20. 14 2917年 2921年 韦尔奇 m·J。 科恩 一个。 赫兹 h·S。 Ng k·J。 谢弗 R。 Van Der Lijn P。 白色的 诉E。 由同位素稀释质谱法测定血清肌酐作为候选人的方法 分析化学 1986年 58 8 1681年 1685年 2 - s2.0 - 0022750054 Felitsyn n·M。 亨德森 g . N。 詹姆斯 m . O。 Stacpoole p W。 液体chromatography-tandem质谱法同时测定的方法 δ阿拉巴马州、酪氨酸和肌酐在生物液体 我们共同Chimica学报 2004年 350年 1 - 2 219年 230年 2 - s2.0 - 7644237493 10.1016 / j.cccn.2004.08.009 高桥 N。 两两 G。 李 F。 李 Y。 Swenberg j . A。 串联质谱的测量在小鼠血浆和尿肌酐测定肾小球滤过率 肾脏国际 2007年 71年 3 266年 271年 2 - s2.0 - 33846467320 10.1038 / sj.ki.5002033 公园 e·K。 渡边 T。 哇 美国J。 辛克物流 m B。 吊床 b D。 在24小时尿肌酐测量液体chromatography-tandem质谱分析 农业与食品化学杂志》上 2008年 56 2 333年 336年 2 - s2.0 - 38949218363 10.1021 / jf072433s 劳森 N。 朗 T。 布劳顿 一个。 普林斯罗 P。 特纳 C。 Marenah C。 肌酐化验:时间行动? 《临床生物化学 2002年 39 6 599年 602年 2 - s2.0 - 0036845473 10.1258 / 000456302760413397 斯托克斯 P。 奥康纳 G。 发展高精度的液相色谱-光谱法测定方法测定血清中肌酐 色谱法B杂志 2003年 794年 1 125年 136年 2 - s2.0 - 0042347707 10.1016 / s1570 - 0232 (03) 00424 - 0 Waterval w·a . H。 同时测定肌酸,在血浆和尿肌酐和guanidinoacetate稳定同位素稀释UPLC-MS /女士 《华尔街日报》的遗传性代谢疾病 2008年 31日 284便士 Huškova R。 Chrastina P。 亚当 T。 Schneiderka P。 测定尿中肌酐的串联质谱分析 我们共同Chimica学报 2004年 350年 1 - 2 99年 106年 2 - s2.0 - 7644230962 10.1016 / j.cccn.2004.07.007 Tsikas D。 狼 一个。 Mitschke 一个。 Gutzki F.-M。 将 W。 贝德 M。 gc - ms测定肌酐在人类生物液体pentafluorobenzyl导数在临床研究和生物监测:实验室内部比较与Jaffe尿液,高效液相色谱法和酶化验 色谱法B杂志 2010年 878年 27 2582年 2592年 2 - s2.0 - 77956875677 10.1016 / j.jchromb.2010.04.025 古德 w·G。 霍夫曼 g . E。 Hubbuch 一个。 多中心的评价酶使用颜色敏感试剂肌酐测定方法 临床化学和临床生物化学杂志》上 1986年 24 11 889年 902年 2 - s2.0 - 0023038304 风扇 Z。 谢 F。 夏 Q。 王 年代。 丁 l 刘 H。 同时测定尼古丁及其九LC-MS-MS人类尿液代谢物 色层法 2008年 68年 7 - 8 623年 627年 2 - s2.0 - 53549131695 10.1365 / s10337 - 008 - 0729 - 9 Huškova R。 Chrastina P。 亚当 T。 Schneiderka P。 测定尿中肌酐的串联质谱分析 我们共同Chimica学报 2004年 350年 1 - 2 99年 106年 2 - s2.0 - 7644230962 10.1016 / j.cccn.2004.07.007 彼得森 g . O。 雷特 c, E。 Chatkin j . M。 Thiesen f . V。 可替宁作为烟草暴露的生物标志物:开发的高效液相色谱法和比较矩阵 分离科学杂志》 2010年 33 4 - 5 516年 521年 2 - s2.0 - 77749336342 10.1002 / jssc.200900575