IJPSgydF4y2Ba 国际高分子科学杂志》上gydF4y2Ba 1687 - 9430gydF4y2Ba 1687 - 9422gydF4y2Ba HindawigydF4y2Ba 10.1155 / 2017/4915185gydF4y2Ba 4915185gydF4y2Ba 研究文章gydF4y2Ba Lignin-Carbohydrate复合物基于球面Biocarriers:制备、表征和生物相容性gydF4y2Ba 赵gydF4y2Ba HoukuangydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 李gydF4y2Ba 金陵gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 王gydF4y2Ba 彭gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 曾gydF4y2Ba ShaoqionggydF4y2Ba 1gydF4y2Ba http://orcid.org/0000 - 0001 - 7849 - 8046gydF4y2Ba 谢gydF4y2Ba 伊敏gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 田gydF4y2Ba (gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 纸浆与造纸工程研究所gydF4y2Ba 湖北科技大学gydF4y2Ba 武汉430068gydF4y2Ba 中国gydF4y2Ba hbut.edu.cngydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 湖北省重点实验室为轻工业的绿色材料gydF4y2Ba 湖北科技大学gydF4y2Ba 武汉430068gydF4y2Ba 中国gydF4y2Ba hbut.edu.cngydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 13gydF4y2Ba 12gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 15gydF4y2Ba 09年gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 22gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 30.gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 13gydF4y2Ba 12gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 版权©2017 Houkuan赵等。gydF4y2Ba 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。gydF4y2Ba

球形biocarriers准备了lignin-carbohydrate复合物分离银杏(gydF4y2Ba 银杏叶gydF4y2Bal .)木质部。的比表面积和平均孔径biocarriers 17.15米gydF4y2Ba2gydF4y2BaggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别和21.59纳米。运营商在溶液中稳定pH值4.0 ~ 9.5。傅里叶变换红外(ir)光谱表明,球形载体木质素和多糖组成的,一个典型的lignin-carbohydrate复杂(LCC)结构。半乳糖的内容、木质素和总糖3.30%,23.9%,和64.62%,分别使球形biocarriers与肝细胞有良好的体力和兼容。这是使用扫描电子显微镜(SEM),观察肝细胞坚持球形biocarriers在文化。细胞计数表明,肝细胞的增殖的实验组明显高于对照组。白蛋白分泌(铝青铜)值与人类肝细胞葡萄糖消耗增加了51.7%和38.6%,分别到第四天biocarriers栽培。结果表明,银杏LCC非常不会引起排斥的,显示了使用承诺作为生物材料在人类肝细胞的文化。gydF4y2Ba

 中国国家自然科学基金gydF4y2Ba 31370574gydF4y2Ba 31300494gydF4y2Ba 湖北省重点实验室为轻工业的绿色材料gydF4y2Ba Q20131402gydF4y2Ba 1。介绍gydF4y2Ba

木质素是一种最丰富的天然产品绘制王国,形成通过酚氧化耦合过程(gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba]。木质素大分子dehydrogenative聚合形成的三个monolignols:gydF4y2Ba pgydF4y2Ba -coumaryl、松柏和sinapyl醇(gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba]。一些半纤维素的细胞壁木质化的植物与木质素形成lignin-carbohydrate复合物(LCC) (gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba]。随着分析技术的发展,更多的信息已经在文献中报道描述LCC的结构和性能,特别是lignin-carbohydrate连杆(LC债券)gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba]。如图gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba(Galacto)葡甘露聚糖是最常见的一个软木半纤维素,这被认为是与木质素通过化学键(半个gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba]。这是一个分支杂多糖组成的两个葡萄糖)异构体,gydF4y2Ba βgydF4y2Ba-D-glucopyranose和gydF4y2Ba βgydF4y2Ba-D-mannopyranose,半乳糖单位,是肝细胞的生物活性。最近,LCC作为生物材料吸引了注意力。许多研究人员发现,lignin-carbohydrate复合物是一个很好的天然可降解材料(gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba]。此外,LCC包含疏水刚性木质素阻塞和亲水性灵活的多糖,使lignin-carbohydrate复合物amphipathy良好,生物相容性和机械强度gydF4y2Ba 12gydF4y2Ba]。LCC的木质素和碳水化合物块共聚物不仅对生物材料有一个理想的结构,但也与动物细胞有良好的兼容性gydF4y2Ba 13gydF4y2Ba]。刚性木质素块可以形成lignin-protein复合物与膜结合蛋白在动物细胞,使细胞生长(gydF4y2Ba 14gydF4y2Ba]。此外,灵活的多糖块包含2 - 5%半乳糖体有能力识别肝细胞由于asialoglycoprotein受体的存在(ASGPR)半乳糖作为特定粘合剂配体的肝细胞(gydF4y2Ba 15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba 19gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba)。Galactosylated基质是有用的生物材料制备的支架为肝细胞的培养,因为他们的特定的相互作用与细胞表面的半乳糖基ASGPR [gydF4y2Ba 20.gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

(Galacto)葡甘露聚糖在软木半纤维素与木质素根连杆(R = H或polylignol;L = polylignol)。gydF4y2Ba

绑定的LCC材料肝细胞。gydF4y2Ba

在文献中描述木质素作为一种生物材料,有两种意见已争论多年。一些研究人员认为,尽管木质素有巨大的力量,它的疏水性可能影响动物细胞粘附在lignin-based biocarriers。其他研究人员表明木质素有许多具有生理活性的官能团,如甲氧基、酚羟基、醇羟基、羧基、羰基,可以促进动物细胞的正常代谢。最近,Erakovic等人研究了改性木质素支架的生物相容性材料和证明了木质素碎片在lignin-carbohydrate复合物不仅有很大的力量,但也有良好的生物相容性gydF4y2Ba 21gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba 23gydF4y2Ba]。此外,钟等。gydF4y2Ba 24gydF4y2Ba和公园等。gydF4y2Ba 25gydF4y2Ba]表明,支架固定,半乳糖保留更多的肝细胞比那些被修改的或固定的支架与半乳糖,由于特定的肝细胞之间的相互作用和半乳糖根。杨et al。gydF4y2Ba 26gydF4y2Ba和王et al。gydF4y2Ba 27gydF4y2Ba]研究了水凝胶的能力准备galactosylated丙烯酸酯(GAC)和聚(N-isopropylacrylamide) (NIPAAm)支架增殖肝细胞和维护白蛋白和尿素合成的功能。他们发现肝细胞发生细胞粘附和增殖的主要表面的水凝胶,这表明掺入含半乳糖的广汽单位可以刺激细胞吸附和增长,相比与传统PNIPAAm水凝胶。在我们之前的研究中,吴等人报道,水凝胶由人工LCC,也就是说,脱氢聚合物——(设计马力)半乳糖复杂,具有良好的生物相容性与人类肝细胞(gydF4y2Ba 28gydF4y2Ba]。然而,自然LCC与肝细胞的生物相容性仍在接受调查。gydF4y2Ba

为了理解的可能性自然LCC的应用在组织工程领域,LCC是孤立的从银杏木材(gydF4y2Ba 银杏叶gydF4y2Bal .)的裸子植物。球形生物运营商准备使用液态氮冷冻干燥方法。球形biocarriers相对大的比表面积可以为细胞培养提供更多的增长领域gydF4y2Ba 在体外gydF4y2Ba。肝细胞难以扩散在单层文化和很容易被胰蛋白酶消化和可能解决使用球形biocarriers [gydF4y2Ba 29日gydF4y2Ba]。在这个工作中,傅里叶变换红外光谱(ir)、光学显微镜、精度高的表面积,孔径分析仪用来描述球形biocarriers的结构和形态。biocarriers被用于人类肝细胞的文化。观察肝细胞的生长在biocarriers使用一个倒置生物显微镜和扫描电子显微镜(SEM)。细胞的代谢活动,包括白蛋白分泌和葡萄糖的消耗,也决定。gydF4y2Ba

 2。材料和方法gydF4y2Ba 2.1。材料gydF4y2Ba

银杏树从武汉植物园。人类肝细胞(L-02)是由Pricells公司(武汉,中国)。gydF4y2Ba

 2.2。制备银杏LCCgydF4y2Ba

银杏木材餐(40 -网)提取使用苯/乙醇(2/1,V / V),后跟一个热水治疗7天,然后在真空干燥。extractives-free木机进一步为72 h与水冷振动球磨机。银杏LCC是然后使用Bjorkman提取和纯化方法(gydF4y2Ba 30.gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

 2.3。后处理的LCCgydF4y2Ba

LCC进一步处理热水在50°C,从而消除水溶性分数将导致LCC-based球形biocarriers肿胀。银杏LCC和蒸馏水放入一个锥形烧瓶。混合搅拌在50°C 8 h,然后过滤。不溶于水的LCC分数是通过冷冻干燥,收益率:21.7%。gydF4y2Ba

 2.4。制备LCC-Based球形BiocarriersgydF4y2Ba

银杏LCC-based球形biocarriers使用冻干方法得到,如图gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba。首先,1克水不溶性银杏LCC溶解在5毫升90% (V / V)乙酸在磁搅拌。其次,解决方案是使用1毫升注射器放入液氮。第三,得到球形biocarriers干燥冷冻珠子使用冷冻干燥机(美国Labconco 195)。球形biocarriers的形态学特点是使用光学显微镜和扫描电镜。gydF4y2Ba

制备LCC-based球形biocarriers。gydF4y2Ba

 2.5。傅立叶变换红外光谱gydF4y2Ba

KBr丸准备从1毫克predried KBr研磨样品和60毫克。光谱被记录在4000厘米的范围gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba-400厘米gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba使用傅立叶变换红外光谱仪(热费希尔6700,美国)。gydF4y2Ba

 2.6。组成的球形Biocarriers材料gydF4y2Ba

Three-milligram球形biocarrier样品在室温下使用3毫升72%硫酸水解为60分钟。硫酸是然后用蒸馏水稀释至4%,样品水解45分钟在一次满121°C。混合1 g4玻璃过滤器过滤。滤液是用来检测样品的糖成分HPLC(20,日本岛津公司)配备Aminex hpx - 87 p列在85°C使用水作为洗脱液速度0.6毫升的分钟gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。不溶于水的部分是用来确定酸不溶木质素(gydF4y2Ba 31日gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.6.1。球形Biocarriers的扫描电镜观察gydF4y2Ba

球形biocarriers穿上硅片,喷金离子在真空。表面和横截面的形态结构是使用地产- 6390 lv SEM观察。gydF4y2Ba

 2.6.2。直径的球形BiocarriersgydF4y2Ba

样本检查使用立体显微镜(日本奥林巴斯SZX16)配备一个规模。的平均直径球形biocarriers计算。gydF4y2Ba

 2.6.3。为特定的表面球形Biocarriers测定预处理gydF4y2Ba

一个空的管是称重和标记为gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 。球形biocarriers放入空管和治疗在120°C 4.5 h。干球biocarriers在冷却槽冷却到25°C。管包含biocarriers称重和标记为gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 。的价值gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba -gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 球形biocarriers的重量。gydF4y2Ba

 2.6.4。测定比表面积gydF4y2Ba

氮吸附法(gydF4y2Ba 32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba 33gydF4y2Ba)是用于确定特定的表面使用BELSORP-mini II型精度高的表面积和孔隙大小分析仪(Ankersmid、荷兰)。Brunauer-Emmett-Teller(打赌)比表面测定是基于气体在固体表面的吸附特征。此外,对应于定义的压力,平衡吸附是明确的。平衡吸附确定相当于样品的比表面积。公式来计算这些gydF4y2Ba (1)gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba ggydF4y2Ba =gydF4y2Ba 4.36gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba VgydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba PgydF4y2Ba VgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba PgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba PgydF4y2Ba =gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba VgydF4y2Ba 米gydF4y2Ba ∙gydF4y2Ba CgydF4y2Ba +gydF4y2Ba CgydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba VgydF4y2Ba 米gydF4y2Ba ∙gydF4y2Ba CgydF4y2Ba ∙gydF4y2Ba PgydF4y2Ba PgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba Sg是样品的比表面积(mgydF4y2Ba2gydF4y2BaggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba);gydF4y2Ba VgydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 饱和氮分子单层吸附(mL);gydF4y2Ba VgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 是样品的实际吸附(mL);gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 样品的重量(克);gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 常数相关样品的吸附能力;gydF4y2Ba PgydF4y2Ba 吸附剂分压;gydF4y2Ba PgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 吸附剂饱和蒸汽压。gydF4y2Ba

 2.6.5。孔隙大小的决心gydF4y2Ba

孔隙大小也决定使用BELSORP-mini II型精度高的表面积和孔隙大小分析仪(Ankersmid、荷兰)。气体吸附法被用来确定孔隙大小。这种方法是基于毛细凝聚和体积等效替换。相应的比例gydF4y2Ba PgydF4y2Ba /gydF4y2Ba PgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ,有一个临界半径,家乡。临界半径计算使用开尔文方程如下:gydF4y2Ba (2)gydF4y2Ba RgydF4y2Ba kgydF4y2Ba =gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 0.414gydF4y2Ba 日志gydF4y2Ba ⁡gydF4y2Ba PgydF4y2Ba /gydF4y2Ba PgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba

2.6.6。球形Biocarriers的尺寸稳定gydF4y2Ba

5毫克的球形biocarriers悬浮在5毫升的缓冲溶液在不同pH值(醋酸缓冲pH值4 ~ 5、磷酸缓冲pH值6.8 ~ 7.4,和碳酸氢钠缓冲pH值9.5)。球形biocarriers的大小和形态在不同的缓冲溶液测定使用立体显微镜(日本奥林巴斯SZX16)配备规模后15天。gydF4y2Ba

 2.7。文化的人类肝细胞gydF4y2Ba

人类肝细胞(L-02),从Pricells公司(武汉,中国),获得与磷酸盐缓冲剂冲洗。肝细胞接种到12-well文化板块的密度3×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。球形biocarriers然后在120°C消毒4 h。这些被添加到井2.5毫克毫升的浓度gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。肝细胞的球形biocarriers孵化在37°C, 5%的公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,100%的相对湿度。所使用的培养基是rpmi - 1640补充20%的边后卫,1%青霉素,链霉素的解决方案。人类肝细胞的粘附到球形biocarriers观察日常使用XDS-1倒置生物显微镜。浮在表面的游离收集日常检测细胞的代谢活动。gydF4y2Ba

2.7.1。细胞数量计数gydF4y2Ba

在1 ~ 5天的文化液体媒体每天收集。与磷酸缓冲细胞被洗两次,其次是0.25%胰蛋白酶1 ~ 2分钟。媒体含有胰蛋白酶被丢弃。然后添加了新媒体终止消化。细胞不再坚持但细胞悬液。二百毫升的悬浮液体被与相同体积的0.4%台盼蓝染色法和混合解决方案。一些染色的细胞放在血液细胞计数板。染色细胞的数量是计算使用显微镜。gydF4y2Ba

 2.7.2。由扫描电镜观察细胞粘附的载体gydF4y2Ba

在细胞培养的第3天,有些球biocarriers被移除。球形biocarriers固定使用2.5%戊二醛(GA) 12 h在4°C。球形biocarriers被进一步使用0.1%锇酸固定30分钟。球形biocarriers洗后使用磷酸盐缓冲剂,梯度脱水进行了使用乙醇浓度为30%,50%,70%,80%,90%,100%。干球biocarriers被安排到硅片,喷金离子在真空。肝细胞坚持球形biocarriers使用地产- 6390 lv SEM观察。gydF4y2Ba

 2.7.3。检测代谢活动gydF4y2Ba

白蛋白分泌的数量决定使用工具的方法根据指令数量A028(由南京建成生物工程研究所提供,中国)。简单地说,10gydF4y2Ba μgydF4y2BaL蒸馏水,标准的白蛋白,浮在表面的游离是添加到试管中。添加2.5毫升溴甲酚绿缓冲区后,样品被动摇。反应进行了10分钟后在室温下,吸收值在628 nm监控使用紫外可见分光光度计(日本岛津公司2550年,日本)。gydF4y2Ba (3)gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba lgydF4y2Ba BgydF4y2Ba ggydF4y2Ba /gydF4y2Ba lgydF4y2Ba =gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 其中铝青铜是内容(g LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba白蛋白);gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 样品的吸光度值标准管,管,和对照组,分别。gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba (g LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)的浓度标准。gydF4y2Ba

由肝细胞葡萄糖消耗的数量决定使用工具的方法根据指令数量CAT361500(由南京建成生物工程研究所提供,中国)。在试管中,10gydF4y2Ba μgydF4y2BaL蒸馏水,标准的葡萄糖,浮在表面的游离是补充道。后的1毫升的解决方案包含磷酸盐缓冲剂(pH值7.0),更易与酚10.6 LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba70年,aminoantipyrine更易与LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,样品被动摇。反应进行了15分钟后在37°C,吸收值使用紫外可见分光光度计测定在505海里。gydF4y2Ba (4)gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba ogydF4y2Ba lgydF4y2Ba /gydF4y2Ba lgydF4y2Ba =gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 在哪里gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 是内容(更易与LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)的葡萄糖。gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 的吸光度值标准管和样品管,分别。gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba (g LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)的浓度标准。gydF4y2Ba

 3所示。结果与讨论gydF4y2Ba 3.1。傅立叶变换红外光谱分析gydF4y2Ba

的峰值3419.2厘米gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba被分配到银杏LCC的羟基,如图gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba。切断伸展的强烈吸收1035.6厘米gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba表明多糖的存在(gydF4y2Ba 34gydF4y2Ba]。峰值为1510厘米gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba和1423.2厘米gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba与芳香结构的振动在木质素(半个gydF4y2Ba 35gydF4y2Ba]。傅立叶变换红外光谱分析证实,球形biocarriers有典型的LCC结构由木质素和多糖。刚性疏水性木质素和灵活的亲水多糖片段给了球形biocarriers amphipathy属性和高强度好,自然医学材料的基本要求。gydF4y2Ba

LCC-based球形biocarriers的傅立叶变换红外光谱。gydF4y2Ba

 3.2。成分分析gydF4y2Ba

半乳糖可以被一个受体在肝细胞和肝细胞的生理活动(高gydF4y2Ba 36gydF4y2Ba]。半乳糖是用来提高选择性biocarriers和肝细胞之间的相互作用。如表所示gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba,LCC高分子半乳糖单元的内容是3.30%。木质素和总糖的内容分别为25.5%和64.62%,分别,这给了球形biocarriers好体力(gydF4y2Ba 37gydF4y2Ba]。结果表明,球形biocarriers适合用作biocarriers人类肝细胞。gydF4y2Ba

成分银杏LCC-based biocarrier。gydF4y2Ba

作文gydF4y2Ba 木质素gydF4y2Ba 葡萄糖gydF4y2Ba 木糖gydF4y2Ba 半乳糖gydF4y2Ba 阿拉伯糖gydF4y2Ba 甘露糖gydF4y2Ba 总糖gydF4y2Ba
含量%gydF4y2Ba 25.5gydF4y2Ba 22.30gydF4y2Ba 10.93gydF4y2Ba 3.30gydF4y2Ba 6.15gydF4y2Ba 21.94gydF4y2Ba 64.62gydF4y2Ba
3.3。从银杏LCC形态学的球形BiocarriersgydF4y2Ba

球形biocarriers准备与银杏LCC多孔材料由光学显微镜和SEM观测到的。如图gydF4y2Ba 5(一个)gydF4y2Ba球形biocarrier是浅灰色。球形的形态学biocarriers证明了LCC颗粒多孔,适合细胞培养条件下biocarriers如图gydF4y2Ba 5 (b)gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

通过立体显微镜形态学观察(a)和扫描电镜(b)的球形biocarriers从银杏LCC的准备。gydF4y2Ba

 3.4。直径的确定和稳定性gydF4y2Ba

作为生物材料,大直径biocarriers将减少的比表面积,而小直径会增加biocarriers的密度。都可能会影响细胞的生长。因此biocarriers必须在适当的直径范围为特定细胞。在这项研究中,干燥和潮湿的直径的球形biocarriers -2.1 1.8 -2.0毫米和1.9毫米,分别。有一些干和湿球biocarriers之间的区别。结果表明,球形biocarriers稳定的直径范围内,适合细胞培养。稳定的球形biocarriers决心在高浓度的球形biocarriers悬浮在pH值4 - 5的弱酸性,中性溶液pH值7.4,碱性溶液的pH值9.5。在图gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba,这是发现球形biocarriers保持完整的直径和风格在暂停后15天。这是发现球形biocarriers稳定性好,适合种植在不同的pH值。gydF4y2Ba

球形的形态学biocarriers之前15天之后(a)和(b)悬浮在pH值7.4。gydF4y2Ba

 3.5。比表面积和平均孔径球面BiocarriersgydF4y2Ba

的比表面积和平均孔径球面biocarriers使用高精度表面测试仪测量。选择曲线如图gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba。的gydF4y2Ba VgydF4y2Ba 米gydF4y2Ba 使用线性斜率和截距值可以计算出图gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba。根据(gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba)和开尔文方程(gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba)、比表面积和平均孔径球面biocarriers计算是17.15米gydF4y2Ba2gydF4y2BaggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别和21.59纳米。结果表明,球形biocarriers有高的比表面积。因此,球形biocarriers可以为细胞的生长提供足够的表面,增加细胞密度。的单层细胞经历了胰蛋白酶消化过程,可以减少损害细胞的细胞很容易从媒介,与传统的单层细胞培养相比,因为3 d使用球形biocarriers文化结构。gydF4y2Ba

赌球biocarriers的吸附等温式。gydF4y2Ba

 3.6。肝细胞的细胞生长和代谢活动坚持球形BiocarriersgydF4y2Ba

在biocarriers的存在,人类肝细胞(L-02)静态培养。如图gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba,发现大多数肝细胞坚持球形biocarriers,表明LCC是无毒的,不会引起排斥的,适用于肝细胞文化。利用细胞计数,细胞生长条件实验和对照组悬挂在1到5天观察图gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba。培养细胞的实验和对照组在第一次3天增长缓慢。第四天,细胞的增殖率增加,这是更大的实验组比对照组。gydF4y2Ba

一个倒置显微镜图像(a)和SEM图像(b)的人类肝细胞球形biocarriers L-02培养。gydF4y2Ba

肝细胞生长的细胞计数球形biocarriers (A)和控制介质(B)。gydF4y2Ba

在图gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba,发现白蛋白分泌的内容(铝青铜)肝细胞培养在多孔biocarriers也显著大于对照组(没有biocarriers)。第四天培养铝青铜值达到10.45 g d的最高水平gydF4y2Ba−1gydF4y2BaLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,而对照组有高价值的6.89 g dgydF4y2Ba−1gydF4y2BaLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。因此,铝青铜的示例使用biocarriers与控制相比增加了51.7%。如图gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba肝细胞的葡萄糖消耗显著增加使用biocarriers相比,控制实验。在第四天的培养,葡萄糖消耗达到最大值14.0更易与dgydF4y2Ba−1gydF4y2BaLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,最高价值是10.1更易与dgydF4y2Ba−1gydF4y2BaLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在对照组。这表明,样品使用的葡萄糖消耗价值biocarriers与控制相比提高了38.6%。这些结果表明,使用银杏biocarriers LCC与人类肝细胞的生物相容性。LCC是一种很有前途的生物聚合物,可用于组织工程文化的创建肝肝细胞器官。gydF4y2Ba

白蛋白分泌人类肝细胞培养在biocarriers传统媒体(A)和(B)。gydF4y2Ba

葡萄糖的消耗人类肝细胞培养biocarriers传统媒体(A)和(B)。gydF4y2Ba

 4所示。结论gydF4y2Ba

球形运营商准备使用lignin-carbohydrate复合物从杨树木材与液氮冷冻干燥方法。发现运营商在水溶液稳定。比表面积和平均孔径是17.154米gydF4y2Ba2gydF4y2BaggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别和21.59纳米。比表面分析和扫描电镜结果表明,球形运营商准备从银杏LCC可以提供大量细胞生长的平台。gydF4y2Ba

傅立叶变换红外光谱分析表明木质素和多糖组成的球形载体。球形biocarriers有典型的LCC结构。化学分析表明,半乳糖的内容,木质素,和总糖3.30%,23.90%,和64.62%,分别给予良好的体力和兼容性的biocarriers肝细胞。gydF4y2Ba

细胞计数表明,细胞比对照组增加更快。也发现,白蛋白分泌(铝青铜)值和人类肝细胞葡萄糖消耗提高了51.7%和38.6%,分别,当biocarriers栽培。结果表明,银杏LCC非常生物相容性材料和显示承诺作为生物材料在人类肝细胞的文化。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者宣称他们没有利益冲突在这个工作。gydF4y2Ba

 确认gydF4y2Ba

作者感谢中国国家自然科学基金委的支持(补贴。31370574也没有。31300494)和绿色材料湖北省重点实验室轻工业(Q20131402)。作者感谢李教授薛峰说他的帮助biocarriers的准备。gydF4y2Ba

 SakagamigydF4y2Ba H。gydF4y2Ba KushidagydF4y2Ba T。gydF4y2Ba OizumigydF4y2Ba T。gydF4y2Ba lignin-carbohydrate复杂分布在植物王国及其功能替代医学gydF4y2Ba 药理学和治疗gydF4y2Ba 2010年gydF4y2Ba 128年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 91年gydF4y2Ba 105年gydF4y2Ba 10.1016 / j.pharmthera.2010.05.004gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 79955001813gydF4y2Ba 刘易斯gydF4y2Ba n G。gydF4y2Ba 山本gydF4y2Ba E。gydF4y2Ba 木质素:发生、生物起源和生物降解gydF4y2Ba 植物生物学的年度审查gydF4y2Ba 1990年gydF4y2Ba 41gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 455年gydF4y2Ba 496年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0025697831gydF4y2Ba 10.1146 / annurev.pp.41.060190.002323gydF4y2Ba AzumagydF4y2Ba 我。gydF4y2Ba 哲男gydF4y2Ba K。gydF4y2Ba 从各种来源Lignin-carbohydrate复合物gydF4y2Ba 方法酶学gydF4y2Ba 1988年gydF4y2Ba 161年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 12gydF4y2Ba 18gydF4y2Ba 10.1016 / 0076 - 6879 (88)61004 - 4gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0008879708gydF4y2Ba 辛格gydF4y2Ba R。gydF4y2Ba 辛格gydF4y2Ba 年代。gydF4y2Ba TrimukhegydF4y2Ba k·D。gydF4y2Ba PandaregydF4y2Ba k V。gydF4y2Ba BastawadegydF4y2Ba k B。gydF4y2Ba GokhalegydF4y2Ba d . V。gydF4y2Ba VarmagydF4y2Ba a·J。gydF4y2Ba 从甘蔗蔗渣Lignin-carbohydrate复合物:制备、纯化和表征gydF4y2Ba 碳水化合物聚合物gydF4y2Ba 2005年gydF4y2Ba 62年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 57gydF4y2Ba 66年gydF4y2Ba 10.1016 / j.carbpol.2005.07.011gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 26044449407gydF4y2Ba 元gydF4y2Ba 蔡博富。gydF4y2Ba 太阳gydF4y2Ba S.-N。gydF4y2Ba 徐gydF4y2Ba F。gydF4y2Ba 太阳gydF4y2Ba R.-C。gydF4y2Ba 木质素结构的表征和lignin-carbohydrate复杂(LCC)联系的定量13 c和2 d HSQC核磁共振光谱学gydF4y2Ba 农业与食品化学杂志》上gydF4y2Ba 2011年gydF4y2Ba 59gydF4y2Ba 19gydF4y2Ba 10604年gydF4y2Ba 10614年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 80053473940gydF4y2Ba 10.1021 / jf2031549gydF4y2Ba 杜gydF4y2Ba X。gydF4y2Ba Perez-BoadagydF4y2Ba M。gydF4y2Ba 费尔南德斯gydF4y2Ba C。gydF4y2Ba RencoretgydF4y2Ba J。gydF4y2Ba 德尔里奥gydF4y2Ba j . C。gydF4y2Ba Jimenez-BarberogydF4y2Ba J。gydF4y2Ba 李gydF4y2Ba J。gydF4y2Ba 古铁雷斯gydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba 马丁内斯gydF4y2Ba a . T。gydF4y2Ba 分析lignin-carbohydrate和lignin-lignin联系xylan-lignin水解酶处理后,glucomannan-lignin并从云杉木材glucan-lignin复合物gydF4y2Ba 足底gydF4y2Ba 2014年gydF4y2Ba 239年gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 1079年gydF4y2Ba 1090年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 84921437885gydF4y2Ba 10.1007 / s00425 - 014 - 2037 - ygydF4y2Ba SipponengydF4y2Ba m . H。gydF4y2Ba 拉皮埃尔gydF4y2Ba C。gydF4y2Ba MechingydF4y2Ba V。gydF4y2Ba BaumbergergydF4y2Ba 年代。gydF4y2Ba 隔离结构不同lignin-carbohydrate分数从玉米茎连续碱提取和内切葡聚糖酶治疗gydF4y2Ba 生物资源技术gydF4y2Ba 2013年gydF4y2Ba 133年gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 522年gydF4y2Ba 528年gydF4y2Ba 10.1016 / j.biortech.2013.01.175gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 84874539233gydF4y2Ba 谢gydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba YasudagydF4y2Ba 年代。gydF4y2Ba 吴gydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 刘gydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 分析lignin-carbohydrate复合物结构的特定的13 c示踪法gydF4y2Ba 木材科学杂志》gydF4y2Ba 2000年gydF4y2Ba 46gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 130年gydF4y2Ba 136年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0034092338gydF4y2Ba 10.1007 / BF00777359gydF4y2Ba 加尼姆gydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba 舒勒gydF4y2Ba m . L。gydF4y2Ba 描述灌注反应堆利用哺乳动物细胞的微载体珠gydF4y2Ba 生物技术进展gydF4y2Ba 2000年gydF4y2Ba 16gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba 471年gydF4y2Ba 479年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0034041009gydF4y2Ba 10.1021 / bp000047ogydF4y2Ba SakagamigydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 桥本gydF4y2Ba K。gydF4y2Ba 铃木gydF4y2Ba F。gydF4y2Ba 的微笑gydF4y2Ba T。gydF4y2Ba SatohgydF4y2Ba K。gydF4y2Ba 伊藤gydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 波多野gydF4y2Ba T。gydF4y2Ba 隆gydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba 藤泽gydF4y2Ba 机票的。gydF4y2Ba 分子要求lignin-carbohydrate复合物的表达独特的生物活性gydF4y2Ba 植物化学gydF4y2Ba 2005年gydF4y2Ba 66年gydF4y2Ba 17gydF4y2Ba 2108年gydF4y2Ba 2120年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 24344491560gydF4y2Ba 10.1016 / j.phytochem.2005.05.013gydF4y2Ba SakagamigydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 【gydF4y2Ba M。gydF4y2Ba 提斯gydF4y2Ba M . M。gydF4y2Ba 桥本gydF4y2Ba K。gydF4y2Ba SatohgydF4y2Ba K。gydF4y2Ba KanamotogydF4y2Ba T。gydF4y2Ba TerakubogydF4y2Ba 年代。gydF4y2Ba 中岛美嘉gydF4y2Ba H。gydF4y2Ba HaishimagydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba MaedagydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba 樱井gydF4y2Ba K。gydF4y2Ba 抗艾滋病毒和免疫调节活动的可可质量lignin-carbohydrate复杂gydF4y2Ba 在活的有机体内gydF4y2Ba 2011年gydF4y2Ba 25gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 229年gydF4y2Ba 236年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 79954997207gydF4y2Ba 钟gydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 沃什伯恩gydF4y2Ba n R。gydF4y2Ba lignin-based化学材料gydF4y2Ba 绿色材料gydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba 137年gydF4y2Ba 160年gydF4y2Ba 10.1680 / gmat.12.00009gydF4y2Ba 李gydF4y2Ba J.-B。gydF4y2Ba 山gydF4y2Ba C。gydF4y2Ba 哈亚希gydF4y2Ba K。gydF4y2Ba 哈亚希gydF4y2Ba T。gydF4y2Ba 抗病毒和immunostimulating lignin-carbohydrate-protein复合物的影响从Pimpinella anisumgydF4y2Ba 生物科学、生物技术和生物化学gydF4y2Ba 2011年gydF4y2Ba 75年gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba 459年gydF4y2Ba 465年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 79953794027gydF4y2Ba 10.1271 / bbb.100645gydF4y2Ba ZahedifargydF4y2Ba M。gydF4y2Ba 卡斯特罗gydF4y2Ba f . B。gydF4y2Ba ØrskovgydF4y2Ba e·R。gydF4y2Ba 影响水解木质素protein-lignin复合物的形成和蛋白质的瘤胃微生物降解gydF4y2Ba 动物饲料的科学和技术gydF4y2Ba 2002年gydF4y2Ba 95年gydF4y2Ba 1 - 2gydF4y2Ba 83年gydF4y2Ba 92年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0037074156gydF4y2Ba 10.1016 / s0377 - 8401 (01) 00305 - 4gydF4y2Ba 赵gydF4y2Ba c。gydF4y2Ba 小林gydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba 武井gydF4y2Ba R。gydF4y2Ba 石原gydF4y2Ba T。gydF4y2Ba MaruyamagydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba AkaikegydF4y2Ba T。gydF4y2Ba 受体介导细胞调制器交付使用聚合物纳米颗粒涂上carbohydrate-carrying肝细胞gydF4y2Ba 生物材料gydF4y2Ba 2001年gydF4y2Ba 22gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 45gydF4y2Ba 51gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0035239002gydF4y2Ba 10.1016 / s0142 - 9612 (00) 00143 - 5gydF4y2Ba 搜索引擎优化gydF4y2Ba c·S。gydF4y2Ba 公园gydF4y2Ba 美国J。gydF4y2Ba 金gydF4y2Ba 即K。gydF4y2Ba 金gydF4y2Ba s . H。gydF4y2Ba HoshibacgydF4y2Ba t·H。gydF4y2Ba Galactose-carrying聚合物作为肝组织工程的细胞外基质gydF4y2Ba 生物材料gydF4y2Ba 2006年gydF4y2Ba 27gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 576年gydF4y2Ba 585年gydF4y2Ba 10.1016 / j.biomaterials.2005.06.008gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 26844525463gydF4y2Ba 杨gydF4y2Ba J。gydF4y2Ba 赵gydF4y2Ba c。gydF4y2Ba AkaikegydF4y2Ba T。gydF4y2Ba Galactosylated海藻酸作为肝细胞的支架截留gydF4y2Ba 生物材料gydF4y2Ba 2002年gydF4y2Ba 23gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 471年gydF4y2Ba 479年gydF4y2Ba 10.1016 / s0142 - 9612 (01) 00129 - 6gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0036131696gydF4y2Ba RoopangydF4y2Ba s M。gydF4y2Ba 概述天然可再生bio-polymer木质素对纳米和生物技术的应用程序gydF4y2Ba 国际期刊的生物大分子gydF4y2Ba 2017年gydF4y2Ba 103年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 508年gydF4y2Ba 514年gydF4y2Ba 10.1016 / j.ijbiomac.2017.05.103gydF4y2Ba 你gydF4y2Ba T.-T。gydF4y2Ba 张gydF4y2Ba L.-M。gydF4y2Ba 周gydF4y2Ba 研究。gydF4y2Ba 徐gydF4y2Ba F。gydF4y2Ba lignin-carbohydrate复杂结构说明(LCC)准备和木质素Arundo donax绝壁gydF4y2Ba 工业作物和产品gydF4y2Ba 2015年gydF4y2Ba 71年gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 65年gydF4y2Ba 74年gydF4y2Ba 10.1016 / j.indcrop.2015.03.070gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 84926429618gydF4y2Ba 格芬gydF4y2Ba 我。gydF4y2Ba 这位gydF4y2Ba M。gydF4y2Ba Asialoglycoprotein受体gydF4y2Ba 细胞学的国际评论gydF4y2Ba 1993年gydF4y2Ba 137年gydF4y2Ba 137 bgydF4y2Ba 181年gydF4y2Ba 219年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0026967509gydF4y2Ba ErakovicgydF4y2Ba 年代。gydF4y2Ba VeljovicgydF4y2Ba D。gydF4y2Ba 迪乌夫gydF4y2Ba p . N。gydF4y2Ba StevanovicgydF4y2Ba T。gydF4y2Ba MitricgydF4y2Ba M。gydF4y2Ba 电泳沉积biocomposite木质素/羟磷灰石涂层钛gydF4y2Ba 国际化学反应堆工程杂志》上gydF4y2Ba 2009年gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 113年gydF4y2Ba 130年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 73849143104gydF4y2Ba 曼苏尔gydF4y2Ba h·S。gydF4y2Ba 曼苏尔gydF4y2Ba 答:答:P。gydF4y2Ba BicallhogydF4y2Ba s . M . c . M。gydF4y2Ba Lignin-hydroxyapatite /磷酸三钙biocomposites: SEM / EDX和红外光谱表征gydF4y2Ba 主要工程材料gydF4y2Ba 2005年gydF4y2Ba 284 - 286gydF4y2Ba 745年gydF4y2Ba 748年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 34249046693gydF4y2Ba /www.scientific.net/kem.284 10.4028 - 286.745gydF4y2Ba Mastoby马丁内斯gydF4y2Ba M。gydF4y2Ba 安德里亚·帕切科gydF4y2Ba B。gydF4y2Ba 玛琳·巴尔加斯gydF4y2Ba V。gydF4y2Ba 组织学评价的生物相容性和bioconduction hydroxyapatite-lignin化合物插入兔子的胫骨gydF4y2Ba 航空杂志上MVZ科尔多瓦gydF4y2Ba 2009年gydF4y2Ba 14gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 1624年gydF4y2Ba 1632年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 77953862316gydF4y2Ba 钟gydF4y2Ba t·W。gydF4y2Ba 杨gydF4y2Ba J。gydF4y2Ba AkaikegydF4y2Ba T。gydF4y2Ba 赵gydF4y2Ba k . 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